三丁酸甘油酯对K562 白血病细胞的体外作用

目的观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂三丁酸甘油酯(tributyrin，TB)对K562白血病细胞增殖、凋亡的影响，并进一步探讨其作用机制。方法用细胞计数及台盼兰拒染法观察TB对K562细胞增殖及活力的影响，通过细胞形态观察、流式细胞术分析观察TB对K562细胞体外诱导凋亡的情况，RT—PCR技术分析p2l^WAFl表达的改变。结果(1)TB抑制：K562细胞的增殖。(2)TB诱导K562白血病细胞的凋亡，影响细胞周期的进程，使细胞周期阻滞于G2／M期。(3)在TB引起的K562细胞增殖抑制及凋亡过程中，p2l^WAFl表达增加。结论TB抑制K562白血病细胞的增殖并诱导凋亡，阻滞细胞周期进程于G2／M期，p2l^WAFl在此过程中发挥作用。     

三氧化二砷增强STI571对K562细胞的细胞毒作用

目的 探讨STI571联合三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)对慢性粒细胞白血病(CML)细胞增殖和凋亡的影响。方法 通过细胞增殖和活力检测、形态学观察、细胞凋亡率和细胞周期检测等方法观察STI571和ATO对CML细胞系K562细胞的增殖抑制与诱导凋亡效应。结果 STI571和ATO均可抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡,并使细胞阻滞于G2／M期;当两药物联合运用时,明显增强对K562细胞增殖的抑制作用,细胞凋亡也较两药单用组明显增高。结论 ATO能增强STI571对K562细胞的细胞毒效应和诱导凋亡作用。     

姜黄素衍生物对K562细胞酪氨酸激酶活性的影响

目的研究姜黄素（Cur）衍生物对K562细胞酪氨酸酶激活性的影响,从中筛选酪氨酸激酶（PTKs）抑制剂。方法以PGT[聚谷氨酸钠∶酪氨酸（4∶1）]为激酶反应底物包被96孔酶标板,以磷酸化酪氨酸特异性单克隆抗体为第一抗体,应用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测反应体系中加入的K562细胞裂解液PTKs对反应底物PGT的酪氨酸残基磷酸化的程度,以此测定K562细胞裂解液中的PTKs活性。在此反应体系中加入不同浓度的Cur衍生物,观察对PTKs活性的影响。结果对Cur衍生物进行筛选,得到4种PTKs抑制剂,分别为Cur衍生物FM0815、FM0817、FM0822及FM0824。4个Cur衍生物对PTKs活性的抑制均明显强于Cur,且呈量效、时效关系。结论 Cur衍生物FM0815、FM0817、FM0822及FM0824具有显著的PTKs活性抑制作用。     

OD-PTD融合蛋白对K562细胞的作用

目的研究OD-PTD融合蛋白对K562细胞的作用。方法应用细胞计数的方法研究OD-PTD融合蛋白对K562细胞的生长曲线的影响;用MTT研究OD-PTD融合蛋白对K562细胞的细胞毒作用;用流式细胞仪技术研究OD-PTD融合蛋白对K562细胞周期的影响。结果OD-PTD融合蛋白能显著抑制细胞的生长（P〈0.01）;并且对K562细胞具有明显的细胞毒作用（P〈0.01）。OD-PTD融合蛋白作用于K562细胞后,细胞周期变化明显,细胞从G0/G1期到S期发生明显阻滞（P〈0.05）。结论OD-PTD融合蛋白对K562细胞有明显的抑制作用,为进一步探讨慢性粒细胞白血病新的治疗手段提供了实验依据。     

PTK787对K562细胞增殖及细胞周期作用的影响*

目的:观察酪氨酸激酶抑制剂PTK787对K562细胞增殖、细胞周期的作用,探讨PTK787抗急性髓系白血病的作用机制.方法:应用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)观察不同浓度PTK787在不同时间对K562细胞增殖作用的影响;用流式细胞仪检测浓度PTK787对K562细胞周期的抑制作用.结果:随着PTK787浓度增加与作用时间延长,K562细胞的增殖抑制率逐渐升高.同一时间不同浓度组之间比较,或者同一浓度不同时间组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05),其中PTK787作用48 h,以浓度320μmol/L对细胞抑制率最强.随着PTK787浓度增加,G1期细胞比例逐渐升高,S期细胞比例逐渐下降,各组间比较差异有统计学意义(P<0.05).结论:PTK787可以抑制K562增殖,阻止K562细胞由G1期向S期转化,从而达到抗白血病的作用.     

小分子酪氨酸激酶抑制剂AG-490对人慢性髓系白血病急变细胞株K562细胞增殖凋亡的影响

目的探讨酪氨酸激酶抑制剂AG-490对人慢性髓系白血病急变细胞株K562细胞的增殖及凋亡的影响。方法采用MTT法观察AG-490在体外对人慢性髓系白血病急变细胞株K562细胞增殖的影响,光学显微镜下观察AG-490对K562细胞形态的变化,流式细胞术检测AG-490对K562细胞凋亡及细胞周期的影响,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及实时荧光定量PCR技术检测AG-490作用后K562细胞bcr/abl融合基因及凋亡相关基因c-myc mRNA的表达水平。结果 AG-490可明显抑制K562细胞的增殖,并随药物作用时间的延长和浓度的增加,抑制作用越明显（P〈0.05）;AG-490可使细胞周期阻滞于G1期,促使其凋亡（P〈0.05）。AG-490作用于K562细胞48 h后bcr/abl融合基因的表达无明显改变（P〉0.05）,而c-myc的表达水平明显降低（P〈0.05）。结论 AG-490可能通过阻断JAK2信号通路而下调c-myc的表达,使K562细胞阻滞于G1期,从而抑制K562细胞增殖,促使其凋亡。     

姜黄素与STI571联合及序贯给药对K562细胞增殖的影响

目的 研究姜黄素(Cur)与STI571联合应用对慢性粒细胞白血病(CML)细胞株K562增殖的影响,探索两药序贯给药的不同效果. 方法 锥虫蓝排染计数计算K562细胞增殖抑制率;显微镜下观察Cur与STI571联合应用对K562细胞的细胞毒作用;锥虫蓝排染法检测药物序贯给药的不同效果;金氏公式评价两药的协同效果. 结果 Cur与STI571单独作用均抑制K562细胞的增殖,二者联合应用呈协同作用(Q＞1.15);显微镜下可见0.4 μmol/L STI571与 5 μmol/L Cur联合应用对K562细胞毒作用强于单独应用;先给予STI571作用24 h,再给予Cur作用24 h,对K562细胞的抑制呈协同作用(Q＞1.15),而先给予Cur作用24 h,再给予STI571作用24 h,则呈单独相加或拮抗作用(Q＜1.15). 结论 Cur与不同浓度的STI571(0.1～0.4 μmol/L)联合应用可协同抑制K562细胞增殖;联合应用STI571和Cur时,先给予STI571再给予Cur比先给予Cur再给予STI571协同效果好.     

三氧化二砷诱导表达带3蛋白膜段结构域K562细胞凋亡作用的研究

目的 探讨三氧化二砷诱导表达带3蛋白膜段结构域K562细胞凋亡的作用。方法 将纯化的表达载体pYDl—mdb3转染K562细胞，Western Blot检定有带3蛋白膜段结构域的表达；通过光学显微镜、DNA电泳和线粒体膜电位的测定，观察三氧化二砷对表达带3蛋白膜段结构域的K562细胞凋亡的影响。结果 表达带3蛋白膜段结构域的K562细胞的上述凋亡特征均比未表达带3蛋白的K562细胞明显。结论 表达带3蛋白膜段结构域的K562细胞对三氧化二砷更敏感。     

姜黄素联合STI571对K562细胞的作用及其对组蛋白去乙酰化酶8的影响

目的研究姜黄素单用及联合STI571对K562细胞增殖与凋亡的影响,及其对组蛋白去乙酰化酶8(histonedeacetylase 8,HDAC8)的作用,探讨其克服STI571耐药的可能机制。方法四唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖活性;Annexin-ⅤFITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡;SABC法检测细胞HDAC8的表达。结果①姜黄素和STI571分别以时间和浓度依赖的方式抑制K562细胞增殖,其36 h的IC50分别为(22.23±2.15)μmol/L和(0.21±0.03)μmol/L,而联用后对K562细胞增殖的抑制作用更为显著。STI571 0.2μmol/L与姜黄素15、30μmol/L联用36 h后的增殖抑制率分别为(72.59±2.81)%和(88.93±1.58)%。②联用姜黄素与STI571能显著增强其诱导K562细胞凋亡的能力。STI571 0.2μmol/L与姜黄素10、30μmol/L联合作用18 h后的凋亡率分别为(15.44±2.92)%和(28.16±3.22)%。③姜黄素能明显抑制K562细胞HDAC8的表达。结论姜黄素与STI571联合能明显增强其抑制K562细胞增殖、诱导凋亡的能力;抑制HDAC8的活性可能是其机制之一。     

丹参酮ⅡA对白血病 K562 细胞的体外诱导凋亡作用研究

目的研究丹参酮ⅡA对人急性白血病 K562 细胞的诱导凋亡作用及其作用机制。方法以不同浓度的丹参酮ⅡA (10～50 μmol/L) 作用于体外培养的 K562 细胞 24、48、72 h,应用 MTT 法检测细胞生长抑制率,流式细胞术 (FCM) 检测细胞凋亡率,并对 50 μmol/L 的药物作用不同时间后亚 G1 期细胞进行检测。应用免疫印迹法 (Western blotting) 检测 Caspase-3 及其裂解底物多聚 ADP-核糖聚合酶 (PARP) 的表达水平,并对凋亡调节蛋白 Fas、Bax、Bcl-2、Bak、Bid 的表达水平进行检测。结果20 μmol/L 以上的丹参酮ⅡA可显著抑制 K562 细胞的生长、诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系;FCM 检测结果表明 50 μmol/L 丹参酮ⅡA 作用不同时间后,亚 G1 期细胞 (凋亡细胞) 逐渐增多。20 μmol/L 以上的丹参酮ⅡA 作用 48 h 后 Caspase-3 逐渐被活化出现 17 000 的亚单位,Caspase-3 的作用底物 PARP 被活化裂解出现 89 000 的亚单位片段,而且 Caspase-3 的激活以及 PARP 的裂解可被 Caspase-3 的特异性抑制剂 z-DEVD-FMK 所阻断,促凋亡蛋白 Fas 以及 Bax 的表达水平明显升高,而凋亡抑制蛋白 Bcl-2 及其他促凋亡蛋白 Bak 和 Bid 的表达水平则无明显变化。结论丹参酮ⅡA可以通过诱导白血病 K562 细胞凋亡而发挥体外抗白血病作用,上调促凋亡蛋白 Fas 和 Bax 的表达水平及激活 Caspase-3 可能是丹参酮ⅡA诱导白血病 K562 细胞发生凋亡的重要作用机制之一。     

酪氨酸激酶抑制剂STI571对K562细胞生长和凋亡的影响

目的:探讨酪氨酸激酶(TPK)抑制剂STI571对K562细胞生长和凋亡的影响. 方法:取对数生长期K562细胞,分4组培养.Ⅰ组不加任何药物,Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组分别加0.5 μmol/L、1 μmol/L和2 μmol/L 的STI571,继续培养5 d.每d行细胞计数,台盼蓝拒染法检测细胞活力,连测5 d.培养36 h时,取细胞,双缩脲法检测细胞蛋白含量,采取蛋白免疫印迹法进行Procaspase-3及Bcl-xL检测.结果:Ⅱ组、Ⅲ组细胞数低于同-时间段Ⅰ组细胞数(P＜0.05),但高于Ⅳ组细胞数(P＜0.05).与Ⅰ组比较,Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组Procaspase-3和Bcl-xL蛋白表达降低(P＜0.01);与Ⅱ组和Ⅲ组比,Ⅳ组2者表达量更低(P＜0.01).结论:STI571通过下调Bcl-xL,激活Procaspase-3,诱导K562细胞凋亡,从而抑制K562细胞的生长.     

小檗碱对K562细胞生长的抑制作用

目的探讨小檗碱对Ｋ５６２细胞生长的抑制作用及对阿霉素（ＡＤＭ）耐药株Ｋ５６２／ＡＤＭ的影响。方法细胞抑制率和细胞生长曲线测定采用台盼蓝排染法，克隆形成实验采用半固体培养基培养，镜下计数。结果Ｋ５６２细胞经小檗碱处理后生长明显受抑，呈作用时间和剂量依赖性，ＩＣ５０为２７．２（２４ｈ），４．６９（４８ｈ），１．２２（７２ｈ）ｍｇ／Ｌ。细胞增殖速度显著降低，２０ｍｇ／Ｌ达完全抑制。克隆原细胞存活曲线呈指数型，可超过２个指数杀灭。小檗碱对Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞有较强耐药性。结论小檗碱对Ｋ５６２细胞生长具有明显抑制作用，提示其可能作为抗肿瘤药。     

Effects of POH in Combination with STI571 on the Proliferation and Apoptosis of K562 Cells

Sofar ,the 2 phenylaminopyrimidineSTI5 71isthemostsuccessfulofthemolecularlydesignedATPcompetitorsfromNovartisPharma (Basel,Switzer land) ,whichspecificallyinhibitsAbltyrosinekinaseatmicromolarconcentrations .InhibitionoftheBcr Ablkinaseactivitybythiscom…     

STI571 诱导K562细胞耐药机制的实验研究

目的体外建立对STI571耐药的K562细胞系(简写为K562-R),并对其耐药机制进行初步分析。方法用药物浓度逐步递增的方法培养野生型K562细胞(简写为K562-W)。绘制K562-R生长曲线,MTT法检测STI571、阿霉素(adriamycin,ADR)和三尖杉酯碱(harringtonine,HT)对K562-R的细胞毒作用,Ho-echst33342染色检测STI571对K562-R诱导凋亡作用。流式细胞术检测K562-R的MDR-1表达情况;基因测序检测K562-R的Abl激酶ATP结合区点突变情况;间期荧光原位杂交(interphasal fluorescence in situ hybridization,I-FISH)检测Bcr/Abl融合基因扩增情况。结果生长曲线绘制结果表明K562-R在0.5μmol/L的STI571环境中可呈指数增长;MTT法检测STI571对K562-W和K562-R的半数抑制浓度(50% inhibiting concentration,IC50)分别为(1.64±0.13)μmol/L和(3.32±0.05)μmol/L,K562-R的耐药倍数为(2.04±0.16)倍,而ADR和HT对两种细胞毒性作用均呈剂量依赖性反应,耐药前后差异无显著性(P值分别为0.472和0.108);Hoechst33342细胞凋亡试验表明STI571对K562-W诱导凋亡作用呈剂量依赖性,对K562-R作用减弱。流式细胞术检测K562-R和K562-W的MDR-1表达率分别为2.68%和1.39%(P<0.001),基因测序表明两种细胞Abl激酶ATP结合区序列完全一致;I-FISH检测初步观察K562-R的Bcr/Abl融合信号拷贝数增多(P<0.001)。结论体外成功建立STI571耐药的K562细胞系,其耐药机制可能与Bcr/Abl融合基因扩增有关。     

肝素对人髓性白血病细胞系K562生长的影响

目的：探讨肝素对髓性白血病细胞系K562增殖及凋亡的影响。方法：采用细胞直接计数法和MTT法检测肝素对K562细胞增殖的影响，应用流式细胞术和Hoechst 33342荧光染色法检测肝素对长春新碱诱导的K562细胞凋亡的影响。结果：5—200U／ml的肝素既不促进也不抑制K562细胞的增殖，且能抑制长春新碱诱导的K562细胞凋亡。抑制长春新碱诱导的K562细胞凋亡作用，并与肝素呈量效关系。结论：肝素对K562细胞增殖无影响，但具有抑制长春新碱诱导的K562细胞凋亡的作用。     

亚砷酸和STI571单用及联用对K562细胞增殖和凋亡的影响

目的研究亚砷酸(As2O3)、STI571单用及联用对K562细胞增殖和凋亡的影响,为As2O3和STI571联合应用于临床提供理论依据.方法细胞增殖采用细胞生长及活力测定;细胞凋亡采用细胞形态、Annexin-V/PI双染实验、DNA的PI染色及DNA电泳等方法测定.结果在As2O3和(或)STI571作用下K562细胞生长受抑伴随活力下降,流式细胞仪检测出凋亡细胞百分率呈时间剂量依赖关系,基因组DNA电泳出现““梯““状条带.结论 As2O3和STI571均有抑制K562细胞增殖和诱导该细胞凋亡的作用,两药联用效果更佳.     

黄芩素对人白血病K562细胞增殖及凋亡的影响

目的:观察黄芩素对人白血病细胞K562生长的抑制作用及对细胞凋亡率的影响。方法:体外培养K562细胞,将对数生长期K562细胞数调整到1×105/m l,将黄芩素加入各实验孔,将黄芩素的终浓度调整为25.0,50.0,100.0,200.0,400.0μg/m l,每个浓度设4个复孔,分别培养细胞48 h和72 h,采用MTT比色法观察黄芩素对K562细胞的生长抑制作用。将对数生长期K562细胞数调整为1×107/m l,加入黄芩素50.0,100.0,200.0μg/m l作用48 h后,收集细胞用流式细胞仪进行检测,并计算凋亡细胞百分数。结果:黄芩素对人白血病K562细胞增殖有抑制作用,且呈剂量依赖性和时间依赖性。黄芩素50.0,100.0,200.0μg/m l诱导K562细胞凋亡,有明显的凋亡峰(AP峰)出现。结论:黄芩素对人白血病细胞K562的增殖有抑制作用,其机制可能与促进K562细胞的凋亡有关。