空肠弯曲菌外膜蛋白SDS-PAGE应用于流行病学调查的研究

用SDS-PAGE分析不同来源41株空肠弯曲菌外膜蛋白特征,根据外膜蛋白图谱蛋白带带到组合情况及主带迁移率可将其各分为7个和9个类型.对人源和鸡等动物源菌株外膜蛋白类型的比较,提示鸡等动物是儿童空肠弯曲菌感染的传染源。对腹泻患儿和健康携带者菌株外膜蛋白类型的比较,提示空肠弯曲菌的致病性可能与其外膜蛋白特征有关.用此方法,作者分析了一起幼儿园空肠弯曲菌感染的流行病学关系,结果表明该感染呈散发多源性;人-人传播对空肠弯曲菌感染具有意义.     

Guillain-Barré综合征患者空肠弯曲菌的主要外膜蛋白基因的分子分型(英文)

目的 :研究空肠弯曲菌 (Cj)的主要外膜蛋白 (momp)基因的分子分型。方法 :采用PCR方法对 163株空肠弯曲菌的主要外膜蛋白基因进行扩增 ,用HindⅢ ,HaeⅢ ,MboⅡ和HhaⅠ四种内切酶消化后进行电泳分析 ,并与热稳定性血清型 (HS)和鞭毛蛋白A基因 (flagellinAgene ,falA)分型方法相比较。结果 :共观察到 8种不同的主要外膜蛋白的限制性片段长度多态性的基因型 ,其中主要外膜蛋白基因 3 (momp 3 )占 61%。Guillain Barr啨综合征(GBS)和腹泻患者所有 3 4株HS 19:Cj(fla) 1菌株均属同一个单一基因型 ,即主要外膜蛋白基因 1(momp 1)。结论 :HS 19:Cj(fla) 1:momp 1菌株是空肠弯曲菌的一个特殊类型 ,与HS 19相关的GBS可能是阐明GBS发病机制最好的模型。     

Guillain—Barre‘综合征患者空肠弯曲菌的主要外膜蛋白基因的 …

目的：研究空肠弯曲菌（Ｃｊ）的主要外膜蛋白（ｍｏｍｐ）基因的分子分型。方法：采用ＰＣＲ方法对１６３株空肠弯曲菌的主要外膜蛋白进行扩增，用ＨｉｎｄⅢ，ＨａｅⅢ，ＭｂｏⅡ和ＨｈａＩ四种内切酶消化后进行电脉分析，并与热稳定性血清型（ＨＳ）和鞭毛蛋白Ａ基因（ｆｌａｇｅｌｌｉｎ Ａ ｇｅｎｅ，ｆａｌ Ａ）分型方法相比较。结果：共观察到８种不同的主要外膜蛋白的限制性片段多态性的基因型，其中主要外膜蛋白基因－３     

空肠弯曲菌外膜蛋白福氏佐剂疫苗免疫小鼠后的抗体应答

目的 探讨空肠弯曲菌甘氨酸提取物28～31 kd外膜蛋白福氏佐剂疫苗免疫小鼠后的抗体应答效果.方法 将30只BALB/c小鼠随机分为5组,每组6只,采用空肠弯曲菌甘氨酸提取物28～31 kd外膜蛋白以不同剂量疫苗组,分别在第0、7、14、21、28天,通过背部及腹部皮下多点注射免疫小鼠;空白组、对照组分别采用0.4 mL生理盐水(NS)、0.4 mL福氏完全佐剂.在末次免疫10 d(即第38天),分别应用双向免疫琼脂扩散试验法、试管凝集法检测血清特异性抗体效价, ELISA检测血清和肠液中的特异性IgG、IgA、.结果 末次免疫10 d后,各疫苗组中,双向免疫琼脂扩散试验法、试管凝集法检测血清特异性抗体效价分别达到1:4～1:16和1:320～1:1 280,ELISA法检测血清、肠液中IgG、IgA、的水平与空白组、对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05);空白组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 空肠弯曲菌甘氨酸提取物28～31 kd外膜蛋白佐剂疫苗能够诱导BALB/c小鼠较好的体液免疫应答和高水平的肠液抗体,将为空肠弯曲菌亚单位疫苗的深入研究奠定重要的实验依据.     

空肠弯曲菌在两种培养基上外膜蛋白中的表达及其体液免疫应答比较

目的 探讨不同培养基来源的空肠弯曲菌28～31 kD外膜蛋白免疫小鼠后的体液免疫应答效果.方法 将66只BALB/c小鼠分别随机分为11组,每组6只,采用布氏血培养基、改良卵黄培养基培养来源的空肠弯曲菌甘氨酸提取28～31 kD外膜蛋白以不同剂量疫苗组(50、100、200μg/只,加入0.2mL福氏完全佐剂).分别在0、7、14、21和28d,通过背部皮下+腹部皮下多点注射免疫小鼠;空白组、对照组分别采用0.4mLNS、0.4mL福氏完全佐剂.在末次免疫后10d(即第38天),分别应用双向免疫琼脂扩散试验法、试管凝集法检测血清特异性抗体效价,采用ELISA技术分别检测小鼠血清和肠液中的特异性抗体IgG、IgA、分泌型IgA(slgA)的水平.结果 末次免疫后10d后,两种培养基来源的各免疫组中,双向免疫琼脂扩散试验法、试管凝集法检测血清特异性抗体效价分别达到1:4～1:16和1:320～1:1 280,间接ELISA法检测两种培养基来源血清、肠液中IgG、IgA、sIgA的水平与空白组、对照组差异均有显著性(P<0.05);两种培养基来源的同剂量纽的疫苗之间IgG、IgA、sIgA的水平差异没有显著性(P>0.05);空白组与对照组差异无显著性(P>0.05).结论 改良卵黄培养基来源的空肠弯曲菌甘氨酸提取物28～31 kD外膜蛋白能够诱导BALB/c小鼠较好的体液免疫应答和高水平的肠液sIgA抗体,与改良布氏血培养基相同,该培养基的选择和使用将为CJ亚单位疫苗、CJ检验、CJ食品卫生捡疫的深入研究奠定重要的实验依据.     

弯曲菌感染研究进展

近年来弯曲菌感染已引起临床上广泛重视,今将弯曲菌感染的研究进展综述如下。 1 弯曲菌感染与临床 1980年国际系统细菌委员会(ICSB)将弯曲菌分为空肠弯曲菌、结肠弯曲菌、胎儿弯曲菌(又可分为胎儿亚种和性亚种)、幽门弯曲菌和海鸥弯曲菌等。由于空肠、结肠     

空肠弯曲菌Pen:19 peblA基因序列分析及其真核表达重组质粒的构建

目的针对空肠弯曲菌基因组序列为一超变量序列,测序比较空肠弯曲菌Pen:2和Pen:19 peblA基因的同源性,以证实peblA基因的保守性.在此基础上,构建空肠弯曲菌Pen:19 peblA基因真核表达重组质粒.方法以含有Kpn Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切位点的同一对引物行PCR反应,获得空肠弯曲菌Pen:2、Pen:8、Pen:19和Pen:21peblA基因DNA片段,测序比较Pen:2和Pen:19 peblA基因的同源性.并选择与格林-巴利综合征最为相关的空肠弯曲菌Pen:19 peblA基因PCR产物为目的片段,插入到真核表达载体pcDNA3.1( ),以构建重组质粒.重组质粒经双酶切鉴定、PCR鉴定和测序确认后转染至COS-7细胞,RT-PCR方法检测其瞬时表达.对阳性克隆培养基上清中PEB1蛋白的表达用ELISA分析.结果测序证实空肠弯曲菌Pen:19 peblA基因序列与Pen:2 peblA基因序列一致.采用RT-PCR方法能够从重组质粒转染的COS-7细胞中扩增出与目的基因大小一致的DNA片段.ELISA分析表明PEB1蛋白在COS-7细胞上清中获得表达.结论空肠弯曲菌peblA基因具有良好保守性,以此成功构建的重组质粒能在COS-7细胞中表达,为空肠弯曲菌DNA疫苗的研究奠定了良好的基础.     

空肠,结肠弯曲菌感染

空肠/结肠弯曲菌主要引起人类急性肠炎,它已成为世界范围内腹泻的重要病原菌。本文报道了1988年1～10月在西德汉诺威地区对9845份肠道感染患者大便标本的弯曲菌检查,共分离出271株弯曲菌(2.8％)。对其中115株用马尿酸水解试验鉴定亚种,空肠弯曲菌为73株,结肠弯曲菌为42株,检出率仅次于沙门氏菌感染。发病年龄以21～30岁为主。儿童感染症状较重,主要症状为腹痛、腹泻及含有大量白细胞的粘液血便。用微量稀释法对100株空肠/结肠弯曲菌的抗生素药敏测定,结果是多数菌株对青霉素、半合成青霉素耐药,对红霉素、四环素,氯霉素均敏感。     

空肠弯曲菌和幽门弯曲菌感染

一、空肠弯曲菌空肠弯曲菌属弯曲菌属,近年来证实它可对人类致病,故受到重视,弯曲菌属从1984年分为三个种。即胎儿弯曲菌、唾液弯曲菌和粪弯曲菌。对人致病的主要为胎儿弯曲菌,胎儿弯曲菌又包括三个亚种,即胎儿亚种、肠道亚种、空肠亚种,空肠亚种是人类急性腹泻的主要病原菌之一,简称空肠弯曲菌。空肠弯曲菌和结肠弯曲菌均能引起肠炎,而生物学特性相似,故合称为空肠-结肠弯曲菌性肠     

空肠弯曲菌对离体肠上皮细胞的粘附试验

本文报导64株人源空肠弯曲菌与40株鸡源空肠弯曲菌对人胚肠上皮细胞和小鸡肠上皮细胞粘附试验结果,证明两种细胞都可做粘附试验的研究,无显著性差异(P>0.05),但人株与鸡株对人胚肠上皮细胞的粘附率,则人株显著高于鸡株,有非常显著性差异(P<0.01),提示空肠弯曲菌存在致病菌和非致病菌的差别,与上海医大卫生微生物教研室报告结果相似,这对研究空肠弯曲菌的流行病学,疾病防治有重要价值。本试验方法具有简便,快速,可靠的优点,目前国内未见报告。     

八株弯曲菌外膜蛋白的SDS—PAGE分析

The outer membrane proteins (OMPs) from 8 strains of Campylobacter, including 5 reference strains and 3 local strains, were isolated and examined by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). The results showed that the population distributions of molecular weight of OMPs from different species and sources were alike based on the Rank Sum Test analysis. The number of bands of major OMP was around 2-3, the molecular weight of which varied from 33-68 kd. Moreover, three C. jejuni local strains isolated from patients in China showed common characteristics of OMPs to the reference strains. It is suggested that the OMPs of Campylobacter are of a conservative and stable structure.     

不同培养基上空肠弯曲菌生长特性及外膜蛋白表达差异的初步研究

目的 探讨不同培养基对空肠弯曲菌(CJ)的生物学特性和外膜蛋白表达的影响.方法 采用改良布氏、改良布氏血、改良卵黄等3种培养基培养CJ,48 h后进行菌落观察、菌体观察、动力学试验、生物化学检验、间接荧光检测等初步确定生物学特性,比较3种培养基上CJ生长特性的差别.采用0.2 mol/L、pH 2.2甘氨酸-HCl缓冲液抽提CJ外膜蛋白,SDS-PAGE电泳后,灰度扫描观察比较不同培养基上CJ的28 000～31000外膜蛋白表达差异.结果 改良卵黄培养基上CJ的生长特性典型,并且其菌体形态较另外两种培养基粗壮,繁殖速度更为快速,改良卵黄培养基来源的CJ的28000～31 000外膜蛋白的表达较改良布氏血培养基丰富.结论 改良卵黄培养基培养CJ是一种生长特性典型、28000-31000外膜蛋白表达丰富的培养基,该培养基的选择和使用将为该类蛋白的CJ亚单位疫苗大规模制备、CJ的流行病学检验、食品安全卫生检验检疫奠定重要基础.

Abstract：

Objective To evaluate the biological characteristics of Campylobacter Jejuni (CJ) cultured on different culture media and their expression abundance of outer membrane proteins (OMPs). Methods CJ was cultured on the improved Bull's medium yolk agar, improved Bull's blood agar or improved Bull's agar for 48 h. The biological characteristics of the bacteria, including the colony feature, morphology, motility, biochemistry, and results of indirect fluorescence test were observed and compared. OMP of the cultured CJ was extracted using 0.2 mol/L and glycine-hydrochloride buffered solution (pH 2.2) and identified by SDS-PAGE to compare the expression abundance of the OMPs with molecular weight of 28-31 kD. Results CJ exhibited typical biological characteristics with larger cell body and more rapid growth on improved Bull's medium yolk agar than those on improved Bull's blood agar and improved Bull's agar. The bacteria grown on improved Bull's medium yolk agar showed also greater expression abundance of the OMPs with molecule mass between 28 kD and 31 kD. Conclusion Improved Bull's medium yolk agar allows rapid growth of CJ with typical biological characteristics and enhanced expression of the OMPs with molecular weight of 28 -31 kD, and can be widely used in CJ subunit vaccine development, CJ epidemiological survey, CJ food safety examination, and CJ quarantine.     

2011年广州市脑膜炎奈瑟菌分离株的分子特征分析

目的对2011年广州市分离的6株脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis,N.meningitidis)进行分子特征分析。方法提取菌株基因组DNA,通过DNA序列测定分析外膜蛋白(outer membranes proteins,OMPs)编码基因porA、fetA可变区型别;通过多位点序列分型(multi-locus sequence typing,MLST),采用Splits Tree在线软件分析进化关系,研究其分子特征。结果 6株菌株的OMPs编码基因porA、fetA可变区型别均不相同;MLST分型显示其分属5个不同的序列型(Sequence Type,ST),其中2株B群菌株序列型为ST-5615,1株C群菌株序列型为ST-5542,1株血清不能分群菌株序列型为ST-2146,分离自健康带菌者和密切接触者的2株W135群菌株的序列型不同,其中密切接触者为高致病性的ST-11型,而健康带菌者为新发现的ST-9133型。结论广州市N.meningitidis的基因型具有多样性特点,本研究为完善我市N.meningitidis分型数据、研发新疫苗及免疫规划措施的制订提供参考。     

深圳市腹泻患者、禽源和牛源空肠弯曲菌的脉冲场凝胶电泳分析

目的 对深圳市禽源、牛源空肠弯曲菌进行脉冲场凝胶电泳,与相同时期和地区腹泻患者分离的空肠弯曲菌比较,寻找空肠弯曲菌传播的证据。方法 对深圳市2016年3—11月分离的不同来源空肠弯曲菌进行复苏、鉴定和脉冲场凝胶电泳,应用BioNumerics软件进行聚类分析。结果 共收集到空肠弯曲菌126株,其中腹泻患者来源22株、禽源44株、牛源60株。除3株不能分型外,其他123株菌成功获得PFGE图谱。不同来源空肠弯曲菌呈现不同的基因特征：人源菌株PFGE带型高度多态化,未发现集中型别;P1是禽源空肠弯曲菌的主要型别;牛源菌株呈现多型别分布,主要型别有C1~C6。综合分析发现,有3个型别（T1、T2和T3）同时包含患者和禽牛来源的菌株。T1型别有12株菌,分别来自患者（3株）、禽类（6株）和牛（3株）,T2型别包含5株菌,来自患者（1株）、禽类（2株）和牛（2株）;T3型别包含7株菌,仅来自患者（1株）和牛（6株）。结论 本研究发现3个空肠弯曲菌型别（T1,T2和T3）同时包含腹泻患者和禽牛来源菌株,为空肠弯曲菌的溯源提供证据。T1可能是深圳市空肠弯曲菌的主要流行型别,在腹泻患者、禽源、牛源菌株中均有分布。     

上海地区腹泻患儿空肠弯曲菌血清学分型

空肠弯曲菌在国内已被证实是人类腹泻的重要致病菌。最近,我们使用加拿大Lior的空肠弯曲菌血清学分型系统,采用快速玻片凝集技术对我院腹泻患儿粪便中分离出的54份空肠弯曲菌标本进行了血清学分型。44份菌株能为我们使用的抗血清进行血清学分型,其余10份分别出现了不凝集、与两种以上单价抗血清或仅和多价抗血清发生凝集。我们的结果提示Lior血清型4、1和9菌株可能是上海地区主要的流行株。     

气相色谱法鉴别人胃内螺杆菌和弯曲菌

目的：鉴别人胃内各种螺杆菌和弯曲菌。方法：采用微需氧培养法从人胃窦部大弯侧粘膜培养螺杆菌和弯曲菌。通过全细胞脂肪酸气相色谱法检测脂肪酸含量。结果：培养出35株螺杆菌和弯曲菌,经常规鉴定为幽门螺杆菌30株。人胃螺旋菌2株、空肠弯曲菌3株;经全细胞脂肪酸气相色谱法检测,最后确定为幽门螺杆菌32株、空肠弯曲菌多伊尔亚种2株、吃得开液弯曲菌1株。结论：人胃内存在多种螺杆菌和弯曲菌,气相色谱法是鉴别这些细菌的有效方法之一。     

22株空肠弯曲菌抗生素敏感性和质粒的初步研究

从腹泻病人的粪便标本中分离出22株空肠弯曲菌,进行药物敏性测定和质粒检测。结果显示:22株菌对红霉素、氯霉素、卡那霉i素、链霉素、庆大霉素和新霉素敏感,而其中有17株耐氨苄青霉素,3株耐四环素,没有耐三种以上抗生素的菌株。22株菌仅6株检出质粒,被检出质粒DNA的分子量是1.6、2.2.6、2.7、4.8、12.3、?和38Md。3株耐四环素菌株,均检出一个38Md的质粒。     

The Expression of VacA in BCF of Helicobacter Pylori and Its Relationship to Vacuolated Effect

Summary: The vacuolated effect of Helicobacter (H. Pylori) and its relationship to vacuolated cyto toxin antigen (VacA) were investigated by the method of cytotoxic test and SDS-pobyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). Of the 62 clinical isolates, the broth culture filter (BCF) of 43 strains causecl the Vero cell intracytoplasmically vacuolated. H. Pylori strains were divided into H. Pylori (Toxin ) group with vacuolated effect and H. Pylori (Toxin-) group without vacuolated effect. The analysis of the BCF of H. Pylori (Toxin ) and that of H. Pylori (Toxin-) was studied by SDS-PAGE and Scan reader. A kind of protein with 87 ku molecular weight was recognized in the BCF of 30.23 % (13/43) H. Pylori (Toxin ) strains but in none of that of H. Pylori (Toxin-) strains, the difference was statistically significant (P＜0. 05). There was a significant and concordant relation ship between OD of the protein band with 87 ku molecular weight and titer of vacuolated activity of H. Pylori(Toxin ) (r=0. 67 and P＜0. 05 by linear regression analysis). H. Pylori strains were di-vided into H. Pylori (Toxin ) group with vacuolated effect and H. Pylori (Toxin-) group without vacuolated effect. The vacuolated effect of H. Pylori (Toxin ) was caused by the protein with 87 ku molecular weight (VacA).