肺心病病人外周血血小板活化状况的研究

目的研究肺心病血小板活化与外周血的关系。方法应用单克隆抗体法并在流式细胞仪上对血小板活化因子CD62P、P10进行检测,同时跟踪检测病人血气和呼吸功能,以了解它们之间关系。结果肺心病病人血小板异常活化,与对照组比较有显著差异(P<0.01)。血小板活化程度与PaO2、呼吸功能呈显著负相关。结论血小板异常活化能加重肺心病病情,应用抑制血小板活化药物和适当抗凝可能有利于肺心病疗效的提高。     

慢性肺心病急性发作期血小板功能异常临床意义的研究

目的 测定慢性肺心病急性发作期和缓解期血小板功能变化，探讨其临床意义。方法 采用流式细胞仪（FcM）检测肺心病患者血小板表面血小板膜糖蛋白CD62p和PAC-1表达。结果 肺心病急性发作组CD62P和PAC-1荧光强度明显高于正常对照组（P〈0．001）；缓解期组CD62P和PAC-1荧光强度明显较急性发作组明显降低（P〈0．01），但仍高于正常对照组（P〈0．01）。结论 肺心病患者存在血小板功能异常，其血小板活化在肺心病急性发作的机制中可能起重要作用，监测其指标对肺心病急性发作的诊断和治疗有一定临床意义。     

老年慢性肺心病急性加重期血小板活化率与PH的关系

目的探讨老年慢性肺心病急性加重期患者血小板活化分子标记物膜糖蛋白PAC-1、GMP-140的变化及其与PH（肺动脉高压）的关系。方法用三色全血流式细胞术测定42例老年慢性肺心病急性加重期患者及42例缓解期患者外周血中血小板PAC-1、GMP-140的表达水平,并与30例老年健康对照者及30例非老年健康对照者比较。用超声心动图检测慢性肺心病患者肺动脉收缩压。结果老年慢性肺心病急性加重期组PAC-1、GMP-140的表达均明显高于缓解期组、老年健康对照组及非老年健康对照组（均P〈0．001）,并与肺动脉收缩压呈正相关。老年缓解期组。PAC-1、GMP-140阳性表达率高于老年健康对照组（P〈0．05）及非老年健康对照组（均P〈0．001）,老年健康对照组PAC-1、GMP-140阳性表达率亦高于非老年健康对照组（P〈0．05）。老年慢性肺心病急性加重期组患者PAC-1的变化与GMP-140之间有显著的正相关（r=0.77;P〈0．001）。结论老年慢性肺心病急性加重期患者血小板明显活化,其活化程度与PH关系密切。     

老年慢性肺心病患者GPⅡb／Ⅲa和P—selectin的变化及意义

摘要：目的探讨老年慢性肺心病患者血小板活化标志物GPⅡb／Ⅲa、p-selectin的变化及其与Pa02、PaC02的关系。方法用三色全血流式细胞术测定36例老年慢性肺心痛患者外周血中血小板GPⅡb／Ⅲa、P—selectin的表达水平,检测患者动脉血氧分压、二氧化碳分压,并与28例老年健康对照者及28例非老年健康对照者比较。结果老年慢性肺心病GPⅡb／Ⅲa、P-selectin均明显高于老年健康对照组及非老年健康对照组（均P〈0．001）。且与动脉血氧分压呈负相关、与动脉血二氧化碳分压呈正相关。老年健康对照组GPⅡb／Ⅲa、P—selectin阳性表达率亦高于非老年健康对照组（均P〈0．05）。结论老年慢性肺心病患者血小板明显活化,其活化程度与PaO2、PaCO2关系密切。     

原发性血小板增多症患者血小板功能指标的变化及其与血小板数量关系的研究

目的1．观察原发性血小板增多症（primary thrombocytosis,PT）患者血小板功能指标CD62P、PAC-1、TXB2、6-keto-PGF1α及TXB2／6-keto—PGF1α比值的变化。2．观察PT患者血小板功能指标与血小板数量的相关性。3．探讨可能导致P,r患者血栓发生的机制。方法1．流式细胞仪（FCM）测定血小板表面的CD62P,PAC-1水平。2．ELISA方法测定血浆血栓素A2（TXA2）代谢产物TXB2和前列环素（PGI2）代谢产物6-keto—PGF1α水平。3．观察和比较各组血小板功能的变化及其与血小板数量变化的关系。结果1．阿患者血小板功能指标均高于正常组,P〈0．01。2．胛患者血小板功能指标变化与血小板数量相关性分析结果提示：PT患者各项血小板功能指标与血小板数目之间不存在相关性,P〉0．05。结论阴患者除血小板数量显著增多外,其血小板各项功能指标亦有明显异常。研究结果表明：PT患者发生血栓的危险因素除与其血小板数目异常增多有关外,还与血小板功能异常活化（血小板活化指标CD62P、PAC-1异常增高）及血浆TXB2、6-keto-PGF1α平衡失调（TXB2／6-keto—PGF1α比值异常增高）有关。而明患者血小板功能指标与其血小板数量之间不存在相关性,故治疗原发性血小板增多症除按常规治疗予以降低血小板数量外,还应同时注意对血小板功能的干预治疗。     

血CD41、CD62P与2型糖尿病患者颈动脉内膜中层厚度的关系

众所周知，胰岛素抵抗、高胰岛素血症、脂代谢异常是导致糖尿病患者动脉粥样硬化的危险因素，近年有报道，胰岛素抵抗、脂代谢异常使血小板活化程度增加，在动脉粥样硬化的形成中具有重要的作用。本研究采用流式细胞仪检测糖尿病患者活化血小板标志物αⅡb整合素（CD41）和P-选择素（CD62P），用超声测量颈动脉内膜中层厚度，探讨血CD41、CD62P与糖尿病动脉硬化发生发展的关系。     

45例溃疡性结肠炎治疗前后血小板活化功能比较

目的 观察综合治疗对UC病人血小板活化功能的影响.方法 治疗前后测定血小板活化衍生物血栓素A2(TXA2)的含量及血小板的粘附率与最大聚集率. 结果总有效率为95.5%.治疗后各项检测指标显著降低(P <0.05).结论 血小板活化功能异常在溃疡性结肠炎发病过程中起重要作用,综合治疗可改善血小板活化功能,对溃疡性结肠炎有良好疗效.     

血小板膜糖蛋白Ⅰa C807T基因多态性与脑梗死急性期血小板功能的关系

目的探讨血小板膜糖蛋白（GP）Ⅰa C807T基因多态性与脑梗死急性期血小板功能的关系.方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法,检测147例脑梗死病人及120名正常对照者（对照组）的GPⅠa C807T基因型;体外应用Ⅰ型胶原诱导,比浊法检测血小板聚集;采用流式细胞仪测定外周血活化血小板分子标记物颗粒蛋白（GMP）CD62p、CD63表达.结果脑梗死组GPⅠa T等位基因频率高于对照组,差异有统计学意义（χ2=3.85,P〈0.05）.对照组与脑梗死组T等位基因携带者加入胶原90 s时血小板聚集率较CC基因型者显著增高（t=7.4～9.9, P〈0.05）,而两者最大血小板聚集率无显著性差异（t=1.19～1.30, P〉0.05）.脑梗死组T等位基因携带者CD62p、CD63阳性率明显高于CC基因型者（t=10.3～17.8,P〈0.05）.结论血小板膜GPⅠa T807等位基因可能是脑梗死的遗传危险因素,血小板功能增强可能是T等位基因促进脑梗死发病的机制之一.     

急性脑梗死血瘀证与活化血小板、胰岛素抵抗的相关性研究

目的研究活化血小板、胰岛素抵抗与急性脑梗死血瘀证的关系。方法应用CT/MRI、流式细胞仪对30例急行脑梗死患者和30例健康人进行检测与对比分析。30例急性脑梗死患者中血瘀证13例,非血瘀证17例。结果与对照组比较,脑梗死组活化血小板（CD62p、CD63）、空腹血糖（FPG）、空腹胰岛素（FINS）、胰岛素敏感指数（ISI）存在统计学差异（P〈0.05或P〈0.01）。直线相关分析表明：CD62p与ISI呈明显正相关（r=0.443,P〈0.05）。脑梗死血瘀证组FPG、FINS、ISI、CD62p、CD63水平较对照组、脑梗死非血瘀证组明显升高,差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。结论急性脑梗死血瘀证患者存在着明显血小板活化及胰岛素抵抗的异常,CD62p、CD63、胰岛素敏感指数可能是血瘀证微观辨证的指标之一。     

受体酪氨酸激酶Axl调控糖蛋白Ⅵ介导的血小板活化

目的研究生长静止特异性基因6的受体Axl对胶原蛋白受体糖蛋白Ⅵ介导的血小板活化的调控作用。方法利用Axl基因敲除小鼠和糖蛋白Ⅵ特异性刺激剂,在体外分别研究血小板的聚集和铺展功能,并应用流式细胞术检测血小板的颗粒释放和整合素αⅡbβ3的活化。结果与野生型小鼠相比,Axl基因敲除小鼠的血小板聚集和铺展功能受到明显抑制;流式细胞术检测结果表明,Axl敲除的血小板的颗粒释放标记物CD62P的表达明显降低（P〈0.05）,整合素αⅡbβ3的活化同样受到明显抑制（P〈0.05）。结论生长静止特异性基因6的受体Axl在糖蛋白Ⅵ介导的血小板活化中发挥重要的调控作用。     

慢性肺心病病人红细胞免疫功能及血清补体变化

目的　探讨慢性肺心病病人红细胞免疫功能及血清补体变化。②方法　应用免疫黏附花环法和免疫单扩散法 ,对 43例慢性肺心病病人和 41例健康人红细胞免疫功能及血清补体进行检测。③结果　慢性肺心病病人红细胞C3b受体及免疫复合物花环率显著低于正常对照组 (t=11.40 15 ,9.5 0 72 ,P <0 .0 0 5 ) ,补体C5,CINH,BF显著高于正常对照组 (t=2 .45 72～ 5 .6 433,P <0 .0 5 ,0 .0 1) ,补体C1q,C3 ,C4 ,C9与正常对照组比较无显著差异 (t=0 .875 4～ 1.930 0 ,P >0 .0 5 )。慢性肺心病病人红细胞免疫功能改变与低氧有关 (t=3.0 370 ,4.46 32 ,P <0 .0 0 5 )。④结论　红细胞免疫功能及补体改变对慢性肺心病的病理生理过程有一定影响。     

CD154反义RNA诱导Jurkat细胞的凋亡

目的 探讨CD154反义RNA诱导Jurkat细胞凋亡的作用。方法 应用RT－PCR扩增人CD154膜外段基因，以及T－A克隆技术和亚克隆技术构建CD154反义RNA的真核表达载体，并将其转染入Jurkat细胞中。应用电镜及流式细胞仪（FCM）检测观察Jurkat细胞的凋亡指标。结果 电镜观察CD154反义RNA转染的Jurkat细胞内可见凋亡小体，并且FCM检测显示一明显的凋亡峰。结论 CD154反义RNA可诱导Jurkat细胞凋亡。     

CD44v6、ki-67在宫颈癌的表达及临床意义

目的：探讨CD44v6、Ki-67在宫颈癌中的表达情况及其临床意义。方法：应用免疫组织化学SP法检测63例宫颈癌和正常宫颈组织中CD44v6、Ki-67的表达情况并分析其与有关的临床病理因素间的关系。结果：CD44v6的着色部位主要在细胞膜和细胞质;而Ki067主要在胞核。CD44v6在正常宫颈上皮、宫颈原位癌和宫颈浸润癌性表达率显著升高（P＜0．01）。CD44v6阳性表达与宫颈癌的盆腔淋巴结转移、脉管浸润和Ki－67的表达情况有关（P＜0．05）;而与临床分期、分化程度、组织学类型、间质浸润和癌灶大小无关（P＞0．05）。有淋巴结转移、脉管浸润和Ki-67过表达者CD44v6的阳性表达率显著高于无淋巴结转移、脉管浸润和ki－67低表达者。结论：CD44v6的阳性表达可能在宫颈癌的发生发展、淋巴结转移、脉管浸润和癌细胞增殖过程中起着重要的作用,但非唯一决定因素。CD44v6的检测对于了解宫颈癌的生物学行为和判断宫颈癌患者的预后有一定的实用价值。     

人外周血树突细胞的分离与提纯

目的 从人外周血中分离、培养及鉴定树突细胞（ＤＣ）。方法 从正常人外周血分离获得单个核细胞,培养２小时后,取会细胞,在无血清培养基中加入不同的细胞在子,于２的第１,６,８天对形态,表型和功能分擀行测定,并在光镜、电镜下观察ＤＣ的纯度与得率。结果 体外培养６～８天可获得高纯度大量的ＤＣ,较高表达ＨＬＡ ＤＲ、ＣＤ４０、ＣＤ８３和ＣＤ８６,能强烈激发同种慢体Ｔ淋巴细胞增殖。结论 上述方法可以从人外周血     

五种多药耐药性基因在正常人体组织的表达

目的：观察五种多药耐药性（MDR）基因在正常人体组织中的表达。方法：采用二重RT-PCR法及免疫组织化学SP法，分别从mRNA和蛋白质表达水平检测（90例，共15种）正常人体组织中5种MDR基因的表达。结果：五种MDR基因在人体不同器官和组织中均有表达。同时表达5种MDR基因的器官和组织有肝脏、肺脏、肾脏、食管、结肠、小肠、胰腺、甲状腺、前列腺及胎盘。皮肤组织中未发现LRP基因表达（0/5）。乳腺和卵巢组织未发现MRP基因表达（0/5）。不同MDR基因在各种组织中的表达存在差别。结论：正常情况下，五种MDR基因的mRNA和蛋白质在人体组织中广泛表达，以在肝脏、肺脏、肾脏、结肠、小肠和胰腺组织中表达较强。     

一磺酸基酞菁锌和四磺酸基酞菁锌的分离及在水溶液中的 …

目的 分离一磺酸基酞菁锌（ＺｎＰｃＳ）和四磺酸基酞菁锌（ＺｎＰｃＳ４）,并研究这两种配合物在水溶液中伏安行为。方法 采用高效液色谱分离纯化ＺｎＰｃＳ和ＺｎＰｃＳ４,应用三电极系统测定其在水溶液中伏安曲线,测定ＺｎＰｃＳ４在不同ｐＨ值下和红光照射下的循环伏安曲线。结果 在水溶液中（ｐＨ７．０）,这两种配合物均呈现二个不可逆的单电子还原电流峰,峰Ⅰ的峰电位（Ｅｐ）是＋０．１８Ｖ,峰Ⅱ的峰位置（Ｅｐ）－     

人转铁蛋白-甲氨喋呤结合物对人肝细胞、人肝癌细胞体外细胞毒的作用特点

目的 了解人转铁蛋白（Tf）与甲氨喋呤（MTX）结合物（Tf-MTX)对人肝细胞和人肝癌细胞体外细胞毒的特点。方法 采用氧化葡聚糖（Dex)T－40作为中介,联结Tf与MTX制备人转铁蛋白－甲氨喋呤结合物（Tf-MTX),用四甲偶氮唑蓝法与比较结合物对人肝细胞L－02及人肝癌细胞Bel7404的体外杀伤强度。结果 体外细胞毒试验显示,Tf－MTX对人肝细胞L－02作用48h的TC50是对人肝癌细胞Bel7404的3．36倍,而TX对上述细胞作用1h的IC50是Tf-MTX的3．22倍。结论 Tf-MTX对肿瘤 细胞Bel7404的杀伤作用有选择性。     

一氧化氮对人肝癌细胞SMMC-7721和HepG2生长增殖的影响

目的：应用两株人肝癌细胞（SMMC-7721和HepG2）为实验模型，以硝普钠（SNP）为NNO供体，探讨NO对人肝癌细胞生长增殖的影响。方法：应用MTT、荧光染色技术和电子显微技术、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术定性和定量地检测SMMC-7721和HepG2细胞凋亡情况。结果：NO供体SNP能抑制人肝癌细胞SMMC-7721和HepG2的生长增殖，并诱导其凋亡，在一定范围内呈时间-剂量依赖关系，同时也引起细胞坏死；SMMC-7721细胞对NO作用的敏感性较HepG2高。结论：NO可抑制人肝癌细胞生长增殖，诱导细胞凋亡，并引起死亡，且两株细胞对其敏感性不同。     

胰岛素对NIH3T3细胞生长和Ras-MAPK信号途径的影响

目的 探讨胰岛素激活的Ras-MAPK信号途径对鼠成纤维细胞（NIH3T3细胞）生长的影响。方法 藉四唑蓝比色法（MTT法）和蛋白免疫印迹试验分别观察胰岛素对NIH3T3细胞生长和胞内丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）活性的影响。结果 胰岛素对NIH3T3细胞的促增殖作用呈时间和浓度依赖性，10mU/ml胰岛素对NIH3T3细胞的促增殖作用效果最佳，对NIH3T3细胞作用的EC50是0.2mU/ml(48h);0.14mU/ml(72h)。MAPK在10mU/ml胰岛素刺激1min后即出现酪氨酸磷酸化，10min达到高峰。胰岛素作用10min，MAPK酪氨酸磷酸化程度随浓度增高（0.1,1.0,10mU/ml)而递增。结论 胰岛素对NIH3T3细胞促增殖作用与激活Ras-MAPK信号途径相关。     

幽门螺杆菌CagA蛋白肽段的基因克隆、表达及抗原性检测

目的 克隆幽门螺杆菌CagA蛋白肽段的基因，确定CagA蛋白与相应抗体亲和力最强的肽段。方法 根据幽门螺杆菌cagA全基因序列以DNAMAN软件设计5对引物，采用PCR方法扩增出5条门螺杆菌cagA基因片段。将PCR扩增产物插入原核表达载体pGEX－3X并转化至大脉杆菌Top10中，形成5种重组质粒。经PCR、双酶切和测序鉴定后，以异丙硫半乳糖苷（IPTG）诱导其表达CagA蛋白肽段。包涵体经8mol/L尿素初步纯化后，运用ELISA方法检测其抗原性并确定相应抗体亲和力量强的CagA蛋白肽段。结果 5条cagA基因片段在大肠杆菌中都得到了表达，表达的蛋白均具有强弱不等的抗原性，其中66kD的蛋白肽段与抗CagA抗体亲和力最强。结论 66kD的蛋白肽段与抗CagA抗体亲和力最强。