氯化金法浸染运动终板的改进

氯化金法浸染运动终板的改进高杰，田应（沈阳市中国医科大学脑研究所１１０００１）显示神经末梢的方法很多，大致可分为银浸法，氯化金浸染法和美兰超生体染色等三类。我们体会氯化金浸染法对显示运动终板的整体构造效果较佳。具体的操作步骤如下；１．取新鲜眼球外肌或...     

大鼠脊髓半横断损伤对脊髓versican、 CD44表达的影响

目的:观察大鼠脊髓半横断损伤(HSCI)对硫酸软骨素蛋白多糖versican及CD44在脊髓中表达的影响,为进一步探索脊髓损伤后的再生修复机制提供实验依据.方法:成年SD大鼠随机分为假手术对照组和HSCI 3、 7和14d组.建立成年大鼠HSCI(胸9～10)模型.取损伤位点头尾段胸9、胸10节段制作冷冻切片,用免疫组织化学ABC法和图像分析技术检测脊髓内versican和CD44的表达.结果:Versican阳性产物主要分布于细胞外基质中,腹角神经元和胶质细胞的胞质中也有分布;CD44阳性产物主要分布于细胞外基质及腹角神经元和胶质细胞的胞质中.损伤后脊髓内versican表达较对照组明显增加,CD44表达也较对照组明显增加.结论:HSCI后versican与CD44表达都增加,两者可能相互作用共同参与损伤后轴突生长被抑制这一过程.     

大鼠脊髓半横断损伤后脊髓神经细胞凋亡与caspase-3的表达

为研究损伤脊髓神经细胞凋亡和相联系的caspase-3的表达,用原位末端标记法(TUNEL)检测了成年大鼠胸脊髓(T9)半横断损伤(hSCI)后脊髓神经细胞的凋亡变化,并用免疫组织化学染色方法观察了caspase-3的表达。结果显示:hSCI后6h损伤侧脊髓腹角即出现较多的TUNEL阳性神经细胞,并持续至5周。损伤脊髓的吻侧段于手术后4d达高峰,尾侧段脊髓于伤后1d达高峰。与假手术组相比,在所有观察的时间点TUNEL阳性神经细胞的数量在损伤侧均有明显增加。caspase-3免疫组化染色显示,与假手术组相比,伤后6h损伤侧脊髓腹角caspase-3表达也明显增加,并持续至5周。以上结果提示hSCI后,脊髓可出现神经细胞凋亡,且此凋亡的发生可能与caspase-3的表达有关。     

大鼠脊髓半横断损伤后硫酸软骨素蛋白多糖Versican的变化

目的观察大鼠脊髓半横断损伤(hSCI)位点头尾段硫酸软骨素蛋白多糖Versican的表达变化,探讨其与脊髓损伤修复的关系。方法20只成年健康SD大鼠随机分为假手术对照组和脊髓半横断损伤3d、7d和14d组。建立成年SD大鼠脊髓半横断(T9～T10)模型。取损伤位点头尾段T9、T10节段制作冰冻切片,运用Versican抗血清进行免疫组化ABC法染色。分别观察并计数各组前角中Versican阳性细胞数,采用计算机图像分析技术测量免疫阳性产物的平均光密度(A)值。结果Versican阳性产物主要分布于细胞外基质中,前角神经元和胶质细胞的胞浆中也有分布;损伤后前角中Versican阳性神经元和胶质细胞数较对照组明显减少(P<0.05),免疫阳性产物平均A值较对照组明显增加(P<0.05)。结论脊髓半横断损伤后,表达增加的Versican很可能参与损伤后轴突生长被抑制的过程。     

嗅鞘细胞移植对脊髓半横断损伤大鼠后肢运动功能的影响

目的观察嗅鞘细胞移植物对脊髓半横断损伤大鼠后肢运动功能的影响。方法30只雌性成年SD大鼠制成脊髓半横断损伤模型,并随机分成5组立即进行移植,A组移植纯化的嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)悬液,B组移植纯化的OECs培养上清液,C组移植未纯化的OECs,D组移植未纯化的OECs培养上清液,E组移植DMEM/F12培养液,术后6 w内进行BBB评分和IP实验,用单因素方差分析进行统计学分析。结果A组的BBB评分在3w后较其它组高,差异有统计学意义(P<0.05),A组的IP实验结果在4 w后较其它组高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论纯化培养嗅鞘细胞移植能促进脊髓半横断损伤大鼠后肢运动功能恢复。     

脊髓半横断损伤后trkB基因表达的变化

脊髓损伤后期trkB的变化及作用仍不清楚,本实验建立脊髓半横断损伤模型（hSCI）,术后14天取损伤脊髓用定量PCR测定trkB表达水平。结果显示,与假手术组比较,损伤脊髓trkB mRNA水平明显下调。推测trkB减少可能是不利于修复的因素之一,值得重视。     

皮质脊髓束半横断损伤模型大鼠皮质脊髓束的超微结构改变

背景：有关皮质脊髓束受损后损伤附近及远处超微结构的整体变化的报道甚少。 目的：观察大鼠皮质脊髓束半横断损伤后皮质脊髓束超微结构的变化。 方法：选择性切割SD大鼠延髓左侧锥体,建立皮质脊髓束半横断损伤模型,于造模后4,14,28 d取受损皮质脊髓束,制备电镜标本。 结果与结论：透射电镜观察发现受损皮质脊髓束髓鞘和轴索发生肿胀,形态不规则。随着时间的延长,溃变进行性加重,受损皮质脊髓束主要表现为髓鞘破坏、溶解及轴索脱髓鞘病变、胞浆浓缩、细胞器增多及空泡样变性。脊髓颈、胸、腰段受损皮质脊髓束的溃变比损伤部位严重。     

脊髓半横断猕猴的护理

脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）是脊柱骨折的严重并发症。有效的动物模型是脊髓损伤修复研究的基础。以往的研究都是建立在啮齿类动物上的,而人类神经系统生理结构及修复能力与啮齿类动物有很大不同。建立猴脊髓半横断（hemi-sected SCI,hSCI）和全横断（transected SCI,tSCI）脊髓损伤模型,更深入地研究脊髓损伤修复机理,为临床提供治疗脊髓损伤提供新的策略。动物模型建立之后,正确的护理是实验成功的必要环节,常常决定了实验的成败。为提高非人灵长类动物在脊髓损伤与修复研究中的成活率,本对实践中猴脊髓半横断损伤模型有效的护理经验进行了总结。     

大鼠脊髓全横断损伤后脊髓caspase-3的表达变化

目的观察大鼠脊髓全横断(SCT)后横断端细胞凋亡及caspase-3 mRNA、蛋白的表达变化并探讨其意义。方法SD大鼠90只,手术组(SCT组)动物选择在T10节段全横断脊髓,假手术组除不横断外其余步骤相同。TUNEL法检测脊髓横断端凋亡情况,免疫组织化学、RT-PCR、Western blot技术检测不同时间点caspase-3 mRNA、蛋白表达变化。结果SCT后横断端脊髓灰质白质均检测到凋亡细胞,caspase-3在损伤周围组织呈阳性,RT-PCR、Western blot显示1d组基因及蛋白均明显上调,3d、7d、14d、21d组mRNA逐渐下降,且3d组依然高于假手术组;3d、7d、14d组蛋白逐渐下降而21d组又略有回升,且3d、21d组依然高于假手术组。结论SCT后凋亡主要在早期出现,随时间进展呈逐渐下降趋势。     

大鼠脊髓半横断损伤后大脑皮质初级运动区caspase-3的表达

目的探讨大鼠脊髓半横断损伤（hSCI）后大脑皮质初级运动区（M1）神经细胞的凋亡情况。方法成年健康Wistar大鼠T8-9脊髓左侧半横断术后，用RT-PCR和免疫组织化学法检测各个时间点caspase-3mRNA的表达量以及阳性细胞的分布。结果手术组中左、右两侧M1区的caspase-3mRNA表达量与假手术组比较，在6h即显著上升，1d达到高峰，3d、7d、14d组下降，而在21d又略有上升；6h组M1区表达量右侧明显高于左侧。免疫组织化学显示阳性细胞主要集中在M1的多形细胞层、锥体层。结论大鼠脊髓半横断损伤后M1细胞凋亡在早期最为剧烈，不仅导致支配损伤侧的M1区细胞凋亡，同样也导致支配未损伤侧脊髓的M1区神经细胞凋亡。     

大鼠脊髓切断术后神经纤维残留量与运动功能恢复的关系

目的：观察成年大鼠下胸段脊髓切断术后是否出现神经纤维残留,以及神经纤维残留与后肢运动功能恢复的关系。方法：B以12只成年大鼠,以尖刀片沿椎管骨壁模切下胸段脊髓,术后定期观察截瘫后肢运动功能恢复情况,8周处死动物,灌注后取损伤部位及其上下节段脊髓,矢状冰冻切片,抗神经丝抗体免疫组织化学染色,光镜下观察有无残留神经 纤维,计算机技术重症脊髓横断面,确定残留纤维的部位及其所占脊髓横断面的比例,并分析残留纤维数量与后肢运动功能恢复程度的相关性。结果：42％动物出现程度不等的后肢运动功能恢复,其脊髓横切处腹侧或腹外侧有数量不等的神经丝免疫反应残留纤维,并与后肢运动功能的恢复呈正相关关系。结论：以尖刀处横切片大鼠脊髓的常用方法,易造成脊髓神经纤维的残留,少量残留纤维即可引起后肢运动功能相当程度恢复,因此,在评价脊髓损伤后的功能恢复时,必须首先确定损伤是否完全。     

神经干细胞移植对大鼠全横断性脊髓损伤修复的影响

我们先前探讨了移植的神经干细胞在大鼠半横断损伤脊髓内存活及分化的情况 ,结果表明神经干细胞在损伤脊髓内可以存活、迁移并分化为神经元和星型胶质细胞。在此基础上 ,本研究应用神经干细胞移植 ,观察其对大鼠全横断性脊髓损伤后结构与功能的影响。取ＳＤ新生大鼠海马 ,剪碎后 ,用胰酶消化 ,制成细胞悬液 ,用含Ｂ2 7和ｂＦＧＦ的ＤＭＥＭ Ｆ12培养液进行培养。神经干细胞在无血清培养基中呈悬浮生长 ,5～ 6ｄ形成克隆球 ,7～ 9ｄ后进行传代。经体外免疫组织化学检测 ,培养的细胞呈Ｎｅｓｔｉｎ染色阳性反应 ,表明它们是神经干细胞。本研究…     

大鼠脊髓半横断损伤对脊神经节P物质表达的影响

目的探讨脊髓半横断损伤对脊神经节P物质(SP)表达的影响。方法选取成年SD大鼠30只,随机分为5组,每组6只;实验组为4组,正常对照组为1组。实验组:脊髓右侧行半横断损伤,术后3、7、14和28d于各时间点分别取出损伤区手术侧脊神经节,石蜡切片后行免疫组织化学染色,结合图像分析技术观察SP在脊神经节内含量的变化。对照组不做任何处理,7d后检测同上。结果术后3d脊神经节内SP的阳性神经元数、阳性细胞百分率较对照组明显增多,7d组较3d组呈下降趋势,14d进一步下降,28d组SP的阳性神经元数、阳性细胞百分率逐渐回升,但仍低于正常对照组。结论脊髓半横断损伤可导致脊神经节SP表达改变,提示SP作为一种感觉神经的传导物质,可能在脊髓半横断损伤过程中发挥作用。     

大鼠脊髓全横断损伤模型的建立

目前用于脊髓全横断的动物模型,常遗有部分未损脊髓组织,局部脊髓损伤范围很大,尤其是破坏了的血运扩大了继发性变性,造成了复杂的局部病理变化,致使难以分析治疗性脊髓伤区内移植的疗效。因此迫切需要一种还原论式的脊髓横断模型,本实验设计了一种切割辅以吸除的方法,可以在局部造成平均约0.6mm的清洁横断区,同时保存脊髓腹、背动脉及脊髓背静脉的大鼠脊髓横断模型,并用H.E.染色法、神经丝(NF)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的免疫组织化学方法及生物素化的葡萄糖胺(BDA)的追踪方法检验损伤区及其两侧脊髓的组织反应。     

骨髓基质细胞移植对大鼠全横断性脊髓损伤修复的影响

我们先前探讨了移植的骨髓基质细胞在正常大鼠脊髓内的存活、迁移及分化的情况,结果表明,骨髓基质细胞可在正常脊髓内存活、迁移并向神经元及胶质细胞分化。在此基础上,本研究应用骨髓基质细胞移植,观察其对大鼠全横断性脊髓损伤后结构与功能的影响。制备大鼠脊髓全横断模型,手术9d后移植细胞,移植前收集细胞,DMEM清洗,加入     

脊髓半横断损伤后p53基因表达的变化

脊髓损伤亚急性期p53的表达变化仍不清楚,本实验建立脊髓半横断损伤（hSCI）大鼠模型,用定量PCR探讨脊髓p53基因水平变化,结果发现,术后14天,损伤脊髓p53基因表达明显下调。提示p53参与了hSCI损伤修复过程,值得重视。     

大鼠脊髓半横断损伤后Versican及其受体CD44的表达变化

目的探讨大鼠脊髓半横断(hemisected spinal cord injury,hSCI)损伤后14d硫酸软骨素蛋白多糖Versi-can及其受体CD44的表达变化。方法10只成年SD大鼠随机分为正常对照组和术后14d组。建立成年SD大鼠脊髓半横断(T9~T10)模型。14d后取损伤位点头尾段T9、T10节段制作冰冻切片,运用Versican、CD44抗血清进行免疫组化ABC法染色。分别观察并计数脊髓腹角和Ⅰ、Ⅱ板层内Versican、CD44的免疫反应阳性细胞数。结果Ver-sican主要分布于正常大鼠脊髓腹角,CD44主要分布于正常大鼠脊髓Ⅰ、Ⅱ板层和腹角。损伤后14d腹角Versican阳性细胞数较正常组明显下降(P<0.05),Ⅰ、Ⅱ板层和腹角的CD44阳性细胞数也较正常组明显下降(P<0.05)。而手术组损伤侧与未损伤侧Versican和CD44表达水平均无明显差异(P>0.05)。结论大鼠脊髓半横断损伤14d后Versican、CD44表达均明显下降,提示脊髓半横断损伤对脊髓灰质内细胞表达Versican、CD44有影响。     

内皮素受体拮抗剂对大鼠脊髓损伤脊髓诱发电位和运动功能的影响

本文观察了非选择性内皮素受体拮抗剂ＰＤ14 5 0 6 5对脊髓损伤后早期运动诱发电位和运动功能的影响。1　材料和方法1 1　实验动物 :ＳＤ大鼠 2 4只 ,体重 2 2 0± 10ｇ ,雌雄不限。随机分为治疗组和对照组 ,每组 12只。用 10 %水合氯醛腹腔内 (30 0ｍｇ ｋｇ)麻醉后 ,蛛网膜下腔置入ＰＥ - 10管 ,深度至Ｔ1 0 。固定ＰＥ管后 ,暴露Ｔ7 Ｔ1 2 椎板并咬除Ｔ1 1 椎板 ,暴露Ｔ1 1脊髓 ,以 30ｇ重量压迫 5ｍｉｎ ,造成脊髓中度损伤。治疗组在伤前 15ｍｉｎ经ＰＥ管给予ＰＤ14 5 0 6 5 (5ｇ Ｌ) 15 μＬ ,对照组同时给予生理盐水 15 μＬ。1 2　…     

神经营养素高亲和力受体在脊髓损伤大鼠运动神经末梢的分布

为了探讨脊髓损伤对运动神经末梢中神经营养素受体TrkA、TrkB和TrkC分布密度的影响,本实验采用改良的Allen氏重击法损伤成年SD大鼠T12节段脊髓,应用免疫组织化学方法分别观察T12脊髓损伤4、12、48 h后,下肢肌肉中运动神经末梢内TrkA、TrkB和TrkC受体样免疫反应强度的变化。结果显示:大鼠脊髓T12段损伤48 h后运动终板处即有TrkA、TrkB和TrkC受体样免疫反应产物分布,其中以TrkA免疫反应最强。而正常成年大鼠下肢肌肉中未见其免疫阳性反应产物。本研究结果提示脊髓损伤可刺激运动神经元表达神经营养素受体,并将受体输送至运动终板处的神经末梢,以摄取靶源性神经营养素。本结果为临床上肌肉注射外源性神经营养素治疗脊髓损伤提供了形态学资料。     

脊髓半横断损伤后大鼠皮神经元细胞骨架蛋白基因表达的变化

目的 探讨神经再生过程中细胞骨架蛋白的作用机制,了解中枢和外周神经系统神经元应答神经损伤和再生的差异。方法 用原位分子杂交方法观察了大鼠T10－11脊髓半横断损伤后1、3、5、7、10、14、21、28、56d皮层感觉运动区皮层神经元中α－管蛋白和3个神经丝蛋白亚基mRNA的表达变化。结果 脊髓半横断损伤后损伤侧皮层感觉运动区皮层神经元中α-管蛋白、神经丝－L、－M、－H mRNA表达明显下调。α－管蛋白mRNA表达水平在损伤后1d降低,而神经丝亚基mRNA表达水平直到下一个时间点（损伤后3d）才下调,至损伤后56d均无恢复趋势。结论 皮层神经元损伤后α－管蛋白mRNA的表达被抑制,提示皮层神经元和外周神经元应答损伤的信号不同。