卵巢癌抗独特型微抗体疫苗诱导BALB/c小鼠体内抗肿瘤免疫应答的实验研究

背景与目的：6B11抗独特型微抗体由模拟人卵巢癌抗原的抗独特型单链抗体(6B11ScFv)融合人IgG1铰链区和CH3区所构成,它具有6811ScFv和人1gGFc的双重免疫学活性。本研究观察6811抗独特型微抗体在BALB／c小鼠体内诱导抗肿瘤免疫反应情况,探讨其作为卵巢癌疫苗的可能性。方法：用卵巢癌6B11抗独特型微抗体免疫BALB／c小鼠。采用间接ELISA、竞争抑制实验和流式细胞术检测免疫鼠血清。结果：6B11抗独特型微抗体免疫小鼠后,在不用佐剂的情况下可诱导小鼠产生较高的Ab3,末次免疫后30天仍持续在较高的水平。分别在末次免疫后4天、14天、24天和30天可刺激小鼠脾脏淋巴细胞CD4^ T细胞和CD8^ T细胞明显升高。结论：6811抗独特型微抗体可诱导机体产生特异体液免疫和细胞免疫反应,这为抗独特型微抗体疫苗的临床应用提供了一定的实验依据。     

B细胞淋巴瘤的抗独特型免疫治疗

 引言随着对肿瘤免疫机制的不断了解 ,肿瘤的免疫治疗逐渐成为人们研究的热点。寻找能够有效激发机体免疫反应的肿瘤特异性抗原是进行免疫治疗的关键。B细胞淋巴瘤在此方面有着特殊的优势 ,表达于B细胞表面的免疫球蛋白 (Ig)可变区的独特型(idiotype ,Id)可作为肿瘤特异性抗原 ,诱导产生抗独特型抗体和 /或激活T细胞介导的细胞免疫 ,从而用于免疫治疗。本文将对B淋巴瘤的抗独特型免疫治疗作一简要综述。1　B细胞淋巴瘤的免疫学特点大多数B细胞肿瘤都是单个克隆的B细胞恶性扩张所致。肿瘤细胞表面表达的Ig分子的可变区具有其独特的构象 ,称为独特型 ,他们既可作为抗原识别受体 ,同时也可作为抗原被其特异性抗体识别。Ig编码基因的重排和体细胞突变决定了Ig具有多样性 ,使其成为每个B细胞克隆特有的标志。因此当发生某个B细胞克隆恶变后异常增生 ,其独特型就可作为肿瘤特异性抗原 ,通过诱导产生抗独特型的抗体和 /或激活T细胞介导的细胞免疫有可能达到治疗效果。以往对独特型的研究重点主要在其互补决定区 (complementaritydeterminingre gions ,CDR区 ) ,近年来 ,许多研究表明框架区(f...     

非小细胞肺癌病人源性NOD/SCID小鼠和BALB/c裸鼠移植瘤模型的建立及比较

目的：构建人非小细胞肺癌的NOD/SCID小鼠和BALB/c裸鼠移植瘤模型,并探讨移植瘤成瘤性与小鼠品系间的关系,为后续建立优良的动物模型奠定基础。方法：取手术切除获得的23例非小细胞肺癌组织,1 h内移植于NOD/SCID小鼠或BALB/c裸鼠皮下,观察移植瘤成瘤情况,测量移植瘤体积,绘制生长曲线图,计算成瘤率、成瘤潜伏时间和成瘤时间,分析并比较移植成瘤组和未成瘤组所对应患者的相关临床病理指标,并取移植成瘤组和所对应患者的组织标本进行病理学分析。结果：NOD/SCID小鼠皮下移植瘤模型成瘤率（55.6%）,BALB/c裸鼠皮下移植瘤模型（20%）,两者间差异无统计学意义（P > 0.05）,但前者的成瘤潜伏时间和成瘤时间均短于后者（P < 0.05）。患者相关临床病理指标中鳞癌、TNM分期和淋巴结转移情况与移植瘤成瘤建模无明显相关（P=0.109、0.153、0.077）,NOD/SCID小鼠和BALB/c裸鼠皮下移植瘤模型均能保持病人肺癌肿瘤组织的形态学特征。结论：成功构建了NOD/SCID小鼠和BALB/c裸鼠皮下移植瘤模型,NOD/SCID小鼠更适宜用于肺癌病人源性皮下移植瘤模型的建立,非小细胞肺癌移植瘤模型的建立为进行体外抗肿瘤药物的筛选提供了良好的研究工具。     

B细胞非霍奇金淋巴瘤小鼠模型的建立

背景与目的：近年来非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin’slymphoma,NHL）发病率呈上升趋势,其中侵袭性NHL占了很大的比例,然而传统化疗方案提高NHL疗效的空间有限。本研究旨在建立淋巴瘤小鼠模型,为探讨治疗NHL新方案并研究其药物作用机制提供动物模型。方法：应用人弥漫大B细胞NHL细胞株SU-DHL-4及人Burkitt淋巴瘤细胞株Daudi,经尾静脉注射人SCID小鼠体内．探索建立淋巴瘤小鼠模型的条件及特点。Daudi淋巴瘤小鼠分为对照组及美罗华治疗组．观察小鼠的发病情况及生存时间。结果：SU-DHL-4淋巴瘤小鼠在中位时间39．5d后开始发病,主要表现为精神萎靡、消瘦、竖毛、活动迟缓,于小鼠腹腔、尾部或后肢部位出现肿块,未发现肝脏、脾脏、骨髓等脏器出现淋巴瘤细胞浸润。Daudi淋巴瘤小鼠于中位时间30．5d发病,出现双后肢瘫痪,于瘫痪后9．5d左右死亡。Daudi淋巴瘤小鼠的脏器大多受淋巴瘤细胞的累及,骨髓中出现大量Daudi细胞浸润。美罗华治疗使小鼠骨髓中的Daudi细胞呈现明显的凋亡形态。对照组Daudi淋巴瘤小鼠的中位瘫痪时间及生存时间分别为30．5d及40d,美罗华治疗组的小鼠分别为52．5d及76．5d,美罗华治疗组小鼠的中位瘫痪时间及生存时间显著延长（P〈0．05）。结论：应用SU—DHL-4细胞及Daudi细胞均可以成功建立B细胞NHL小鼠模型。     

抗独特型抗体在B淋巴瘤治疗上的应用

恶性肿瘤是原先已停止分化的细胞元规律、无节制增殖的结果。因此,在每个肿瘤患者,其所有的肿瘤细胞均可表现出同样的表面形态。基于这种认识,如能检出只表达于肿瘤细胞上的抗原,就能以它为靶子对肿瘤进行特异性治疗。     

苯和甲醛对BALB/c小鼠的联合遗传毒性

目的：以苯和甲醛对BALB/c小鼠进行联合染毒,探讨苯和甲醛对BALB/c小鼠联合染毒可能导致的亚急性毒性和遗传毒性。方法：选用BALB/c小鼠,设苯组（50mg/kg,溶于玉米油）、甲醛组（2mg/kg,溶于生理盐水）、苯和甲醛联合染毒组（苯50mg/kg,甲醛2mg/kg）及溶剂对照组（玉米油和生理盐水对照组）,各组给小鼠行腹腔注射受试物,每日1次,连续染毒30d后继续饲养30d。实验中定期监测观察小鼠一般情况、外周血血象、网织红细胞微核率和淋巴细胞彗星率,染毒结束后30d处死动物,行组织病理学检测和骨髓镜检。结果：苯_甲醛联合染毒组小鼠体质量降低,且染毒结束后,体质量持续降低,但与对照组比较差异无统计学意义;苯和苯_甲醛联合染毒组小鼠外周血红细胞数显著降低（P〈0.05）,染毒结束30d后血液学指标恢复正常。苯-甲醛联合染毒组小鼠染毒后外周血网织红细胞微核率和彗星率显著升高（P〈0.05）,两者具有协同作用,且染毒结束30d后仍高于对照组（P〈0.05）。结论：苯和甲醛的亚急性联合染毒可致BABL/c小鼠外周血细胞的协同遗传毒性作用,此种作用具有持续性。     

BALB／C小鼠黑色素瘤肿瘤模型的建立及对荷瘤鼠的影响

目的建立小鼠不同部位黑色素瘤模型，为不同研究目的提供合适的动物肿瘤模型。方法接种B16小鼠黑色素瘤细胞于BALB／C小鼠足部、腹腔和尾静脉，建立移植瘤模型和肺部转移瘤模型。观察B16实体瘤的形态学特点，接种细胞数与肿瘤生成的关系，肿瘤生长对小鼠生存时间、血清肿瘤坏死因子（sTNF）和唾液酸（SA）的影响。结果足部接种5X10瘤细胞后10天，肿瘤进入对数生长，成瘤率近100％；腹腔接种瘤细胞数大于5000个／只，成瘤率与接种细胞数成正比；接种3X10细胞／只，10天后在小鼠腹壁和肠系膜可见散在黑色素瘤结节，荷瘤鼠sTNF和SA水平明显高于正常小鼠，且与肿瘤的大小和数量成正比，小鼠平均存活59天；尾静脉接种后3周，肺部可见大小不等转移瘤灶，两肺平均瘤灶数可达192.11士92。结论B16黑色素瘤细胞株在BALB／C小白鼠具有很高的成瘤率和转移特性，且较C57／B16小黑鼠模型具有方便、稳定和观察容易等优点，是一较理想的模型。     

BALB/c小鼠肝癌模型建立及其形态学特征分析

目的:建立BALB/c小鼠肝癌动物模型,并研究其超微结构的特点,为开展肝细胞癌相关实验研究奠定基础。方法:66只正常雄性成年BALB/c小鼠完全随机分为5组,即实验A、B、C、D组和对照组,实验组每组14只,对照组10只。采用二乙基亚硝胺(DEN)/四氯化碳(CCl4)/乙醇的联合诱导方式喂养实验组小鼠;于给药后第60、90、120和150天,分别取实验A、B、C和D组小鼠肝脏组织;于给药后第150天取对照组小鼠肝脏组织。观察小鼠肝脏病变的发生情况及其超微结构的改变,并利用RT-PCR检测病变肝脏组织不同时期小鼠甲胎蛋白(mAFP)的变化情况。结果:对小鼠肝脏组织行病理学检查发现,对照组肝脏未见异常,给药后第60天实验A组小鼠肝脏炎症发生率为64.28%(9/12),第90天实验B组小鼠肝脏轻度纤维化发生率为64.28%(9/12),第120天实验C组小鼠肝硬化发生率为71.43%(10/12),第150天实验D组小鼠肝脏肿瘤性病变发生率为64.28%(9/12);以上时间点各实验组小鼠肝脏病变发生率均明显高于对照组,P<0.05。mAFP阳性表达在给药60d后出现;第150天时透射电镜下观察到的形态特征符合肝癌。结论:利用化学致癌剂和肿瘤促进剂,成功建立了甲胎蛋白分泌型BALB/c小鼠肝癌动物模型,该方法诱导时间相对较短,病变过程和超微结构的改变均与人类肝癌发病特点类同,是研究肝癌发生发展的理想实验动物模型。     

CPP-Id-DC疫苗对淋巴瘤荷瘤鼠的免疫治疗作用和对淋巴瘤细胞攻击的免疫保护效应

目的了解树突状细胞(DC)疫苗对淋巴瘤荷瘤鼠的免疫治疗作用及疫苗免疫对淋巴瘤细胞攻击的免疫保护效应。方法将小鼠淋巴瘤A20细胞接种BAL B/c小鼠,建立荷瘤鼠模型,分别接种Id-DC和CPP-Id-DC疫苗,观察荷瘤鼠肿瘤大小变化及生存时间。小鼠预先分别接种Id-DC和PP-Id-DC疫苗,然后以A20细胞攻击,观察其成瘤率及生存时间。均注射PBS作为对照。结果接种PBS的荷瘤鼠肿瘤生长快,中位生存时间为33.4 d;接种Id-DC的荷瘤鼠,个别小鼠肿瘤生长减慢,中位生存时间为40.4 d,与PBS对照组相比,差异无统计学意义;而接种CPP-Id-DC的荷瘤鼠肿瘤生长明显减慢,5只小鼠中,1只肿瘤停止生长,1只肿瘤逐渐缩小、消退,90 d内的中位生存时间为70.8 d,明显长于PBS对照组和Id-DC接种组(P<0.01)。以Id-DC预防接种的小鼠予A20细胞攻击后大部分成瘤(4/5),成瘤时间为7～12 d,较PBS对照组略延长,中位生存时间为44.8 d;CPP-Id-DC接种组小鼠60 d内均无肿瘤生长。结论CPP-Id负载的DC疫苗治疗B细胞淋巴瘤优于单纯Id负载的DC疫苗,可以提高抑瘤率和延长荷瘤鼠的生存时间,可在小鼠体内产生对A20淋巴瘤细胞攻击的免疫保护。     

Immunoglobulin Somatic Variation; Studies of Receptor Editing in a Human B Cell Lymphoma

In order to study mechanisms of immunoglobulin somatic variation in committed immunoglobulin (Ig) expressing B cells, we used the fluorescent activated cell sorter to isolate rare variants from a surface Ig positive (sIg⁺) diffuse large cell B lymphoma cell line (μλ⁺). These variants were either negative for sIg expression (sIg^-) or expressed sIg which differed from the original parental tumor cell line, both in idiotypes and Igλ isotypes (sIg⁺Id^-). In the following report we review the results from the studies of these variants. DNA analysis showed that all variants had new Igλ gene rearrangements, which had occurred either on a previously excluded allele, or on the productively rearranged allele of the parental cell line. The slg^- variants, which had undergone nonfunctional Igλ rearrangements on the expressed parental allele, and thereby deleted the productive rearrangement, continued to functionally rearrange the same allele and regenerated sIg expression. While the parental cell line expressed low levels of the recombination activating genes, RAG1 and RAG2, expression of these genes were considerably upregulated in both the immunoglobulin negative and the idiotypic variants. Somatic immunoglobulin V gene hypermutation did not contribute to the observed immunoglobulin somatic variation. These results demonstrate that, through differential expression of the RAG genes, sIg⁺ B cells are able to somatically alter their sIg receptors through secondary Igλ gene rearrangements. This mechanism may allow B cells with non-selectable, or auto-reactive, antigen receptors to alter these receptors (receptor editing). Ongoing Ig gene rearrangement may limit the usefulness of immunotherapeutic approaches directed at the antigen receptor in some diffuse large cell lymphomas.     

基于BALB/c小鼠的局部淋巴结试验用于皮肤致敏性评价的实验研究

目的：用BALB/c小鼠建立基于掺入溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）和酶联免疫吸附测定（ELISA）的小鼠局部淋巴结试验（LLNA）改良方法（LLNA：BrdU-ELISA）,并对该方法进行评价。方法：试验设溶剂对照组（丙酮/橄榄油、丙酮、二甲基亚砜或蒸馏水）,阳性对照组（25%己基肉桂醛）和受试物组（选择22种化学物和5种化妆品,配成1~3个不同浓度）,每组4只小鼠。每天上午9：00在小鼠双耳背部分别涂抹受试物25 μL,连续染毒3 d,第4天不作处理,第5天腹腔注射BrdU标记液0.5 mL。第6天称量耳廓质量,分离颌下淋巴结称取质量并制成单细胞悬液,用ELISA试剂盒测定淋巴细胞增殖。结果：50%己基肉桂醛、5%二氯化钴、10%乳酸、25%乳酸、50%乳酸和2号染发剂引起耳廓质量显著增加（P < 0.05或P < 0.01）,为刺激阳性,其他化学物和化妆品为刺激阴性;15种化学物（2,4-二硝基氯苯、丁子香酚、异丁子香酚、3-氨基苯酚、反式肉桂醛、己基肉桂醛、香叶醇、对苯二酚、水杨酸己酯、甲醛、戊二醛、六水硫酸镍、二氯化钴、重铬酸钾、乳酸）和2号染发剂为致敏阳性（SI>1.6）,其他化学物或化妆品为致敏阴性。该方法阳性预测率为93.3%,阴性预测率为100%,假阳性率为14.3%,假阴性率为0,灵敏度为100%,特异性为85.7%、准确度为95.2%。结论：LLNA：BrdU-ELISA方法用BALB/c小鼠可较好地评价化学物/化妆品的刺激性和致敏性,可在化妆品安全性评价中发挥重要作用。     

A novel rapid-onset high-penetrance plasmacytoma mouse model driven by deregulation of cMYC cooperating with KRAS12V in BALB/c mice

Our goal is to develop a rapid and scalable system for functionally evaluating deregulated genes in multiple myeloma (MM). Here, we forcibly expressed human cMYC and KRAS12V in mouse T2 B cells (IgM⁺B220⁺CD38⁺IgD⁺) using retroviral transduction and transplanted these cells into lethally irradiated recipient mice. Recipients developed plasmacytomas with short onset (70 days) and high penetrance, whereas neither cMYC nor KRAS12V alone induced disease in recipient mice. Tumor cell morphology and cell surface biomarkers (CD138⁺B220⁻IgM⁻GFP⁺) indicate a plasma cell neoplasm. Gene set enrichment analysis further confirms that the tumor cells have a plasma cell gene expression signature. Plasmacytoma cells infiltrated multiple loci in the bone marrow, spleen and liver; secreted immunoglobulins; and caused glomerular damage. Our findings therefore demonstrate that deregulated expression of cMYC with KRAS12V in T2 B cells rapidly generates a plasma cell disease in mice, suggesting utility of this model both to elucidate molecular pathogenesis and to validate novel targeted therapies.     

In vitro Transformation of BALB/c 3T3 Cells by 1,1,2,2-Tetrachloroethane

1,1,2,2-Tetrachloroethane (1,1,2,2-TTCE) was shown to be capable of inducing in vitro transformation of BALB/c 3T3 cells (clone A-31) either in the presence or in the absence of S9 activating system using an amplification-transformation (level-II) assay by reseeding confluent cells from each treatment and allowing additional rounds of cell replication. In the absence of metabolic activation, the highest assayed dose (1000 μg/ml), exerting the highest toxicity, was the only transforming dose. Lower doses of 1,1,2,2-TTCE were capable of transforming BALB/c cells in the presence of S9 activating system, the dose of 500 μg/ml exerting the highest transforming activity. The number and size of transformed foci recognized in the level-II plates were a function of the number of cells reseeded in the amplification assay. Foci obtained in the presence of S9 activating systems were larger in size, more deeply basophilic, and exhibited denser multilayering of constituent cells than foci recognized in the absence of exogenous metabolic activation.     

应用X线照射后的Balb／c小鼠制备白血病模型的方法学研究

目的：探索用SPF级Balb／c小鼠经x线照射后,尾静脉注射转染GFP及NeoR基因的K562细胞株以制备白血病模型的方法。方法：实验组小鼠分别经x线照射2Gy和3Gy,24小时后取对数生长期的K562（GFP＋／Neo＋）细胞尾静脉注射2×10 6个／只。对照组不予特殊处理。结果：实验组在接种5—7天时发病,分别于30、24天内全部死亡;生存天数显著短于对照组（P〈0．01）。体重较对照组显著下降（p〈0．05）。小鼠的白血病发病率为100％,无自发缓解。随照射剂量的增加,小鼠的存活时间缩短,且外周血及骨髓中自血病细胞所占比例增加。流式细胞仪测定及PCR方法也证实了GFP＋细胞和NeoR基因在外周血、骨髓、肝、脾中的存在。结论：Balb／c小鼠经照射后从尾静脉注射K562细胞株可以获得白血病模型。     

应用X线照射后的Balb/c小鼠制备白血病模型的方法学研究

目的:探索用SPF级Balb/c小鼠经X线照射后,尾静脉注射转染GFP及NeoR基因的K562细胞株以制备白血病模型的方法。方法:实验组小鼠分别经X线照射2Gy和3Gy,24小时后取对数生长期的K562(GFP+/Neo+)细胞尾静脉注射2×106个/只。对照组不予特殊处理。结果:实验组在接种5-7天时发病,分别于30、24天内全部死亡;生存天数显著短于对照组(P<0.01)。体重较对照组显著下降(P<0.05)。小鼠的白血病发病率为100%,无自发缓解。随照射剂量的增加,小鼠的存活时间缩短,且外周血及骨髓中白血病细胞所占比例增加。流式细胞仪测定及PCR方法也证实了GFP+细胞和NeoR基因在外周血、骨髓、肝、脾中的存在。结论:Balb/c小鼠经照射后从尾静脉注射K562细胞株可以获得白血病模型。     

蒿甲醚对不同病期小鼠结直肠癌抑瘤效果的实验研究

目的:探讨蒿甲醚(Artemether)对不同病期BALB/c小鼠CT-26结直肠癌的抑瘤作用。方法:BALB/c小鼠皮下接种CT-26结直肠癌细胞(4×105个)。96只小鼠,雌、雄各半,随机分为两个大组,分为中期组(接种5天后)和晚期组(接种10天后);每个大组再随机分为6小组,每组8只,分别为低剂量(33.3mg/kg)、中剂量(50mg/kg)、高剂量(66.6mg/kg)和中剂量(50mg/kg)加铁剂(1.5mg/kg)组、阳性对照组(顺铂5mg/kg)、空白对照组(等体积生理盐水)。结果:中期组口服蒿甲醚高、中、低剂量和中剂量加铁剂对BALB/c小鼠CT-26结直肠癌均有明显的抑制作用,抑瘤率分别为52.0%、51.4%、42.3%和53.5%;晚期组口服蒿甲醚高、中、低剂量和中剂量加铁剂对BALB/c小鼠CT-26结直肠癌亦有明显的抑制作用,抑瘤率分别为35.8%、33.5%、38.2%和44.7%,中剂量单药抑瘤率最低;中、晚期各对应组之间比较有显著差异(P<0.05)。结论:在一定剂量范围内,口服蒿甲醚对小鼠不同病期的CT-26结直肠癌均有明显的抑制作用,中期组强于晚期;蒿甲醚与顺铂相比,具有较小的毒副作用;与铁剂合用具有一定的协同作用,使抑瘤率增加。     

The norepinephrine-driven metastasis development of PC-3 human prostate cancer cells in BALB/c nude mice is inhibited by beta-blockers

The development of metastases is a decisive step in the course of a cancer disease. The detection of metastases in cancer patients is correlated with a poor prognosis, and over 90% of all deaths from cancer are not due to the primary tumor, which often can be successfully treated, but are due to the metastases. Tumor cell migration, a prerequisite for metastasis development, is not merely genetically determined, but is distinctly regulated by signal substances of the environment including chemokines and neurotransmitters. We have shown previously that the migration of breast, prostate, and colon carcinoma cells is enhanced by the stress-related neurotransmitter norepinephrine in vitro, and that this effect can be inhibited by the beta-blocker propranolol. We now provide for the first time evidence for the in vivo relevance of this neurotransmitter-driven regulation using PC-3 prostate carcinoma cells. The development of lumbar lymph node metastases in athymic BALB/c nude mice increased with the application of norepinephrine via microosmotic pumps, while propranolol inhibited this effect. However, the growth of the primary tumor was not affected by either treatment. Additionally, experiments using human tissue microarrays showed that 70-90 percent of breast, colon, and prostate carcinoma tissues express the relevant beta2-adrenoceptor. Thus, our work contributes to the understanding of the basic cellular mechanisms of metastasis development, and furthermore delivers a rationale for the chemopreventive use of clinically established beta-blockers for the inhibition of metastases.