备用根大鼠脊髓后角组织提取液对培养的鸡胚背根节神经突起生长的影响

应用组织培养方法，观察备用根大鼠手术侧和非手术侧脊髓后角组织提取液对鸡胚背根节神经突起生长的影响。结果显示：备用根大鼠手术侧脊髓后角组织提取液作用的背根节神经突起生长密度（１５５．２５±１４．２５）明显高于非手术侧提取液作用的背根节神经突起生长密度（８９．１４±９．６０）。提示部份去传入纤维支配的脊髓后角组织可能存在着促进神经突起生长的神经营养活性物质。     

吗啡备用根大鼠脊髓后角提液两种分子量组分的生物活性测定及其电泳分析

目的 探讨备用根大鼠手术侧和非手术侧脊髓后角组织〉１０ｋＤ和〈１０ｋＤ两种分子量组分提取液,对鸡胚背根节（ＤＲＧ）神经突起的促生长作用,以及应用吗啡后对此作用的影响。方法 应用超滤器制备提取液、组织培养和ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳等技术,分离和检测神经营养活性物质。结果 备用根大鼠手术侧脊髓后角提取液〉１０ｋＤ组分作用的ＤＲＧ神经突起的生长密度,比非手术侧〉１０ｋＤ组分,非手术侧〈１０ｋＤ组分和手术侧〈１０ｋＤ组分的生长密度明显增大。应用吗啡的备用根大鼠手术侧脊髓后角组织〉１０ｋＤ组分提取液作用的ＤＲＧ神经突起生长密度,又比备用根大鼠手术侧〉１０ｋＤ组分的大。经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳分析发现,两组动物手术侧和非手术侧〉１０ｋＤ组分样品的电泳图谱区带数目大致相同,但两组动物手术侧分子量约６７ｋＤ、３１ｋＤ和１     

备用根大鼠脊髓后角组织的两种分子量组分提取液对培养的鸡胚背根节神经元神经突起生长的影响

应用Ｃｅｎｔｒｉｃｏｎ－１０微浓缩器和组织培养方法，探讨备用根大鼠手术侧和非手术侧脊髓后角组织小于１０ｋＤ和大于１０ｋＤ两种分子量组分提取液对鸡胚背根节神经元的神经突起的促生长作用。结果显示：给予备用根大鼠手术侧脊髓后角组织大于１０ｋＤ组分的提取液时，背根节神经元的神经突起密度较非手术例小于１０ｋＤ组分、非手术侧大于１０ｋＤ组分和手术侧小于１０ｋＤ组分者密度明显增大．提示部分去传人纤维支配的脊髓后角组织大于１０ｋＤ组分的提取液，可能含有某些促进培养鸡胚背根节神经元神经突起生长的神经营养物质．     

吗啡备用根大鼠脊髓后角提取液两种分子量组分的生物活性测定及其电泳分析

目的　探讨备用根大鼠手术侧和非手术侧脊髓后角组织 >10 k D和 <10 k D两种分子量组分提取液 ,对鸡胚背根节 (DRG)神经突起的促生长作用 ,以及应用吗啡后对此作用的影响。　方法　应用超滤器制备提取液、组织培养和 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳等技术 ,分离和检测神经营养活性物质。　结果　备用根大鼠手术侧脊髓后角提取液 >10 k D组分作用的 DRG神经突起的生长密度 ,比非手术侧 >10 k D组分 ,非手术侧 <10 k D组分和手术侧 <10 k D组分的生长密度明显增大。应用吗啡的备用根大鼠手术侧脊髓后角组织 >10 k D组分提取液作用的 DRG神经突起生长密度 ,又比备用根大鼠手术侧 >10 k D组分的大。经 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析发现 ,两组动物手术侧和非手术侧 >10 k D组分样品的电泳图谱区带数目大致相同 ,但两组动物手术侧分子量约 6 7k D、31k D和 16 k D的 3条区带吸收峰面积百分比 ,较非手术侧的高。　结论　吗啡具有进一步增强去传入纤维支配的脊髓后角组织 >10 k D组分提取液促进 DRG神经突起的生长效应。两组动物手术侧 >10 k D组分提取液分子量约 6 7k D、31k D和16 k D3种蛋白质含量有增高的趋势 ,尤其是吗啡组动物手术侧约 6 7k D蛋白质含量增高的趋势更为明显     

备用根大鼠脊髓后角组织神经营养活性物质的分离纯化和生物活性鉴定

<正> 本实验采用凝胶过滤层析法和高效液相色谱技术,分离纯化备用根大鼠部分去传入侧的脊髓后角组织中的神经营养活性物质.1.生物活性检测方法的建立:切除大鼠一侧背根和背根节(DRG),仅保留L-4背根为备用根.术后动物存活5天.分别切取L1-L6节段手术侧和非手术侧脊髓后角组织,制备含手术侧和非手术侧提取液的培养液.用此液分别培养鸡胚DRG,48小时后手术侧组DRG神经突起密度明显大于对照组和非手术侧组,提示去传入纤维支配的脊髓后角组织存在着促神经突起生长的神经营养活性物质.又采用改良的悬滴培养法,发现手术侧脊髓后角组织能支持鸡胚DRG神经元的存活,而且具有促进神经突起生长的作用.2.备用根大鼠脊髓后角组织神经营养活性物质的分离与纯化,部分背根切除术后5天处死动物,切取手术侧脊髓L1-L6节段后角组织,匀浆、离心后,取上清液经Superdex prep grade G-75凝胶过滤层析,呈现Ⅰ、Ⅱ二个洗脱峰,将各洗脱峰浪加入培养基,Ⅰ峰洗脱液表现有神经营养作用.将Ⅰ洗脱峰进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,银染后呈现多条明显的蛋白区带,去传入脊髓后角组织呈现神经营养活性的物质是在40-78KD之间.将Ⅰ峰洗脱液浓缩,进行高效液相色谱(HPLC)分析,得到4个不同的洗脱峰(a、b、c、d峰).将各洗脱峰液配制成不同浓度的     

备用根大鼠脊髓后角组织神经营养活性物质的分离纯化和生 …

目的 进一步分离纯化备用根大鼠部分去传入纤维支配（手术侧）的脊髓后角组织提取液，以获得某种营养活性物质。方法 用Ｓｕｐｅｒｄｅｘ Ｇ－７５ ｐｒｅｐ ｇｒａｄｅ凝胶层析、高效液相色谱（ＨＰＬＣ）层析和细胞培养等技术分离和检测神经营养活性物质。结果 手术侧脊髓后角组织提取液经Ｓｕｐｅｒｄｅｘ Ｇ－７５ ｐｒｅｐ ｇｒａｄｅ凝胶层析和ＨＰＬＣ层析后，得到的Ａ峰洗脱液具有促进体外培养鸡胚背根节（ＤＲＧ     

吗啡备用根大鼠脊髓组织神经营养活性物质的分离纯化和生物活性测定

目的　分离纯化吗啡备用根大鼠脊髓组织提取液 ,以期获得某些神经营养活性物质。　方法　应用SephacrylS 2 0 0HR凝胶层析、高效液相色谱 (HPLC)和组织培养等技术分离和检测神经营养活性物质。　结果　备用根大鼠脊髓组织提取液能够促进体外培养的鸡胚背根节 (DRG)神经突起的生长 ;吗啡作用的大鼠脊髓组织提取液也具有同样的作用 ,但备用根大鼠和吗啡作用的大鼠脊髓组织提取液在促神经突起生长作用方面并没有明显的差异。吗啡备用根大鼠脊髓组织提取液具有明显的神经营养活性作用。吗啡备用根大鼠脊髓组织提取液的SephacrylS 2 0 0HR凝胶层析Ⅱ峰洗脱液和Ⅳ峰洗脱液能够促进DRG神经突起的生长。经SDS PAGE分析 ,Ⅱ峰洗脱液呈现 1条分子量约为 6 5kD的蛋白质主带 ,Ⅳ峰洗脱液的蛋白质成分较为复杂。应用HPLC对凝胶层析Ⅳ峰洗脱液作进一步的分离 ,发现HPLCA峰洗脱液能够促进DRG神经突起的生长。经SDS PAGE显示 ,A峰洗脱液的两条蛋白质主带分子量分别为 30kD和 18kD。　结论　吗啡备用根大鼠脊髓组织提取液中具有神经营养活性作用的物质可能是分子量约为 6 5kD、30kD和 18kD蛋白质     

吗啡对备用根大鼠脊髓后角组织提取液促进神经突起生长的影响

为探讨吗啡促进备用根大鼠背根节神经元发出的初级传入纤维在脊髓内侧支出芽和突触重建的机制,将成年的大鼠分为吗啡备用根组(6只)和备用根对照组(6只)。前组动物在施行备用根模型手术的前、后给予吗啡注射,后组动物除没有使用吗啡外,其余处理与前组相同。切除两组动物脊髓左侧L_1～L_3、L_5、L-6背根和背根节,保留L_4背根(作为备用根)。于手术后第5d分别取出两组动物腰段手术侧和非手术侧脊髓后角组织块,按     

备用根大鼠脊髓后角提取液中神经营养活性组分的分离及生物活性测定

制作备用根大鼠脊髓后角提取液，取其分子量大于10kD的组分进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，发现手术侧和非手术侧的电泳区带数目大致相同，但手术侧样品的第四条蛋白质区带扫描的吸收峰面积百分比大于非手术侧样品的第四条区带，两者在量上可能有差别。将手术侧样品经交联葡聚精G-75凝胶层析，得到两个洗脱峰．第一峰洗脱液有促进体外培养的背根节神经元存活及其突起生长的作用，其电泳分析显示4条主带，分子量在40～80kD之间．实验结果提示部分去传入纤维支配的脊髓后角组织含有神经营养活性物质，该物质的分子量约在40～78kD之间．     

备用根大鼠脊髓后角组织神经营养活性物质的分离纯化和生物活性测定

<正> 我室新近的研究发现,部分去传入纤维支配的脊髓后角组织提取液含有神经营养活性组份,其分子量约在40KD～78KD之间,但不清楚是那种分子量的蛋白质具有神经营养活性作用.为了寻找这种物质,本研究应用Superdex G-75prep grad凝胶层析、高效液相色谱(HPLC)层析和细胞培养等技术和方法,进一步分离纯化备用根大鼠部分去传入纤维支配(手术侧)的脊髓后角组织提取液,以期获得某种神经营养活性物质.用SD雄性大鼠100只,切除其一侧L_1-L_3、L_5和L_6背根,仅保留L_4背根(此动物为备用根模型大鼠),术后5天处死动物.分别切取L1_～L_6节段的手术侧和非手术侧脊髓后角组织,制备成提取液、凝胶层析洗脱液和PHLC层拆洗脱液.结果发现,手术侧脊髓后角组织提取液具有神经营养活性作用,将该提取液经Superdex G-75prep grade凝胶层析和PHLC层析后,得到的A峰洗脱液具有促进体外培养鸡胚背根节(DRG)分离神经元存活及其神经突起生长的神经营养活性作用.经SDS-聚丙烯酸胺凝胶电泳(PAGE)显示,A峰洗脱液呈现一条分子量约为60kD的蛋白质主带.结合生物活性检测结果,我们推测分子     

植块联合培养法探讨备用背根猫脊髓背核组织对鸡胚背根节神经突起生长的影响

５只单侧备用背根猫，于术后第５ｄ分别切取手术侧、非手术侧脊髓Ｌ_３节段背核组织植块，与Ｈａｍｂｕｒｇｅｒ３５期鸡胚背根节（ＤＲＧ）进行植块联合悬滴培养，以单独ＤＲＧ培养作为参照。于培养２４ｈ、４８ｈ观察ＤＲＧ神经突起的生长情况并测量其长度。结果发现：１．所有ＤＲＧ从培养２４ｈ到４８ｈ其神经突起都有明显增长；２：同一观察时间内，参照组与对照组（ＤＲＧ与非手术侧背核植块联合培养组）神经突起的生长状况较为相似，神经突起少而短，从ＤＲＧ迁移出的细胞多。而实验组（ＤＲＧ与手术侧背核植块联合培养组）神经突起多且长，从ＤＲＧ迁移出的细胞少；３：在分别求出每批培养物的实验组、对照组ＤＲＧ神经突起平均长度与参照组者的比值及５批培养物的平均比值后，发现两个观测时间实验组的平均比值都明显大于对照组者。本研究结果提示，猫脊髓在部分腰骶背根切除后，背核组织的促神经突起生长作用增强。     

部分背根切断对备用DRG神经元和胶质细胞NGF表达上调的影响

本研究目的在于探讨部分背根切断后备用背根节(DRG)中各类细胞NGF及其mRNA的量变状况。将成年雄猫10只分为正常组、单侧部分背根切断后7天组等2组,每组5只。实验组切除一侧L1～L5,L7～S2 DRG,保留L6 DRG为备用根。取正常组一侧和术后7天组手术侧的L6 DRG制成20μm厚冰冻纵切片,分别用NGF抗体及其cRNA探针进行免疫组织化学及原位杂交反应。观察NGF及其mRNA在DRG各类细胞的分布,测定NGF及其mRNA的光密度值以反映其相对含量。结果表明,在正常组,L6DRG中仅存在少量的NGF及其mRNA阳性神经元,此外,一些胶质细胞也呈阳性反应。在手术组,各类神经元及胶质细胞内NGF及其mRNA的光密度值较正常者显著升高(P<0.05)。结论:部分背根切断导致备用DRG神经元和非神经元表达NGF增多,提示NGF可能有利于促进备用背根生芽。     

备用背根猫脊髓Ⅱ板层组织对鸡胚背根节神经突起生长的影响

用１０只存活５ｄ的单侧后肢备用根猫（切除Ｌ１～Ｌ５、Ｌ７～Ｓ２背根节，保留Ｌ６背根），取手术侧（实验组）和非手术侧（对照组）脊髓Ⅱ板层组织块及提取液分别与Ｈａｍｂｕｒｇｅｒ３５期鸡胚背根节进行悬滴培养，并以不加植块的背根节培养作参照。比较各组在同一观测时间的差异．结果：（１）各组背根节从培养２４ｈ到４８ｈ，其神经突起均明显增长；（２）同一观测时间内，对照组与参照组的神经突起少而短，从背根节迁出的细胞较多，而实验组神经突起多且长，迁出的细胞较少；（３）在两个观测时间，植块与提取液培养的实验组背根节神经突起平均长度均显著长于对照组者，而对照组与参照组背根节神经突起长度的差异无显著性．表明部分腰骶背根切除猫，其脊髓Ⅱ板层及其提取液的促神经突起生长活性增强．     

猫后根初级传入纤维终未在后索核内的超微结构及其突触联系

用顺行溃变方法对猫后索核内后根初级传入纤维终末的超微结构和突触联系进行了研究.在切断C4～T1和 L4～S1脊神经后根3～4天后,电镜下发现后索核内有三种溃变终末,出现最多的是电子致密型溃变,此外,也观察到了少量的神经微丝型溃变和电子透明型溃变.溃变的初级传入终末多数较大,含有圆形突触小泡.溃变初级传入终末作为突触前成分主要与后索核内的树突形成轴-树突触,而轴-体突触和轴-轴突触较少.此外,还观察到溃变轴突终末参与形成突触复合体.     

备用背根猫脊髓背核组织提取液对鸡胚背根节神经突起生长的影响

应用Liu和Chambers创立的备用背根模型,切除成年雄猫(5只)一侧的L_1～L_5、L_7～S_2背根节,保留L_6背根为备用背根,术后动物存活5d。分别制备脊髓T_(12)～L_3节段手术侧(实验组)、非手术侧(对照组)背核组织及其条件培养液。以Hanks平衡盐溶液的条件培养液作为参照组。用实验组、对照组以及参照组条件培养液对Hamburger 35期Leghorn鸡胚腰段背根部进行悬滴法培养,每只动物进行一批实验。于培养24h,48h观察测量各个背根节神经突起的平均长度。在各组背根节从培养24h到48h神经突起明显增长的基础上,求出每批培养物实验组、对照组背根节平均突起长度与参照组平均突起长度的比值以及5批培养物之平均比值。比较实验组、对照组平均比值在同一观测时间内的差异,发现两个观测时间实验组平均比值都明显大于对照组者。结果提示,猫脊髓经部分去后肢背根传入后,背核组织提取液促进神经突起生长的作用增强。     

胶质细胞源性神经营养因子在成年大鼠背根节分布的免疫组织化学研究

目的　观察胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)在成年大鼠背根节中的分布。　方法　用 GDNF多克隆抗体免疫组织化学 ABC法及图像分析方法。　结果　 GDNF免疫反应主要存在于背根节的小神经细胞中 ,背根节的大神经细胞呈弱阳性反应 ,与背根节相连的感觉神经纤维呈免疫反应性。　结论　 GDNF在背根节感觉神经元和神经纤维中有一定量的分布。     

部分背根切断对备用背根节NT-3表达的影响

目的　探讨部分去背根后备用背根节 (L6 )各类细胞NT 3及其mRNA的含量变化。　方法　对成年雄性猫行单侧部分背根切断术 (切除一侧L1 ～L5,L7～S2 DRG ,保留L6 为备用根 )。取正常组一侧和术后 3d及 7d组手术侧的L6 DRG制作 2 0 μm厚冰冻切片 ,分别用NT 3抗体及NT 3cRNA探针行免疫组织化学及原位杂交染色。观察NT 3及其mRNA在DRG各类细胞的分布 ,测定NT 3及其mRNA在神经元和卫星细胞的光密度值 ,所得数据用q检验进行统计分析。　结果　部分去背根后 ,各时相备用背根节大神经元内NT 3的光密度值较正常者进行性减少 ,(P <0 0 5 ) ,而NT 3mRNA的光密度值术后 3d减少 ,7d回升至近正常者水平。比较之 ,小神经元和卫星细胞NT 3及其mRNA的光密度值进行性增多 (P <0 0 5 )。　结论　部分背根切断对备用背根节各类细胞NT 3表达的影响不同 ,其功能意义可能与NT 3参与脊髓Ⅱ板层可塑性有关     

大鼠腰神经根受压后背根神经节和脊髓后角含生长抑素mRNA阳性神经元的变化

目的探讨大鼠腰神经根受压后背根神经节和脊髓后角含生长抑素mRNA阳性神经元的变化.方法选用12只Wistar大鼠,随机分为实验组和正常组,实验组用硅胶管压迫右L4脊神经后根,采用原位杂交法结合图像分析进行研究.结果大鼠腰神经根受压4周后,实验组背根神经节和脊髓后角内生长抑素mRNA阳性神经元神经元的数量和平均面积明显增多,与正常组相比均有显著性差异.神经元以中、小型神经元为主.结论大鼠腰神经根受压后可使背根神经节和脊髓后角内神经元生长抑素mRNA的表达上调,提示生长抑素可能与根性腰腿痛的发生有关.     

背根神经节分节格式的形成和体节再分节

把分散的鹌鹑体节板细胞移植到鸡的体节板区。移植后１７ｈ，在移植区形成大小不等、排列杂乱的ＤＣ体节。有些体节靠近神经管，有些较靠外侧。移植后２９～３２ｈ，靠近神经管的ＤＣ体节向中壁破裂，外迁的间充质细胞在生肌节与神经管和脊索之间，形成生骨节（即原位生骨节）。每个生骨节再分为前后两半，位于外侧的ＤＣ体节，在移植后３３～３８ｈ，其侧壁或外侧壁破裂。外迁的间充质细胞在生肌节的外侧或生肌节之间，数量、大小和