内皮素受体拮抗剂对肝硬化、门静脉高压大鼠内皮素受体mRNA表达的影响

内皮素(ET) 1是强力缩血管物质,在门静脉压力升高和维持中起重要作用[1] ,ET 1通过与其受体结合而发挥作用。ET受体至少可分为两种亚型,即ETA受体(ETRA)和ETB受体(ETRB) ,其中ETRB根据介导的舒张和收缩作用又分为ETRB1和ETRB2 [2 ] 。本实验旨在观察CCl4诱导的肝硬化、门静脉高压大鼠门静脉压力、肝组织ET受体mRNA表达的变化以及ETA受体拮抗剂(BQ 12 3 )、ETB受体拮抗剂(BQ 788)及两者联合应用对研究结果的影响。一、材料与方法1.实验对象:雄性SD大鼠,体重3 70～40 0 g ,参照文献[3 ]方法制备肝硬化、门静脉高压模型…     

大鼠肝硬化门静脉高压形成过程中内皮素A受体mRNA的表达

目的：观察Wistar大鼠肝硬化门静脉高压形成过程中内皮素A受体（ETA）mRNA在肝脏中的表达,探讨内皮素（ET）及其受体对肝硬化门静脉高压大鼠肝脏的调节机制。方法：CCL4法制备模型。实验共分4组：正常对照组（13只）、肝细胞变性坏死期组（20只）、肝细胞结节状增生期组（20只）、假小叶形成期组（18只）。应用mRNA原位杂交技术确定ETA的部位,从而发现ET在肝脏的作用位点,并对ETAmRNA进行定量分析。结果：Wistar大鼠肝硬化门静脉高压形成过程中,肝脏发生特征性病理改变：肝细胞变性坏死、结节状增生、假小叶形成;门静脉压力呈梯度性升高;外周及门静脉血浆ET水平随门静脉压力升高而降低;肝脏ETAmRNA表达增多,表达主要位于汇管区门静脉小静脉、肝小动脉血管壁,小静脉表达明显高于小动脉,表达水平随ET浓度的降低、门静脉压力的升高而增加。结论：大鼠肝硬化门静脉高压形成过程中外周及门静脉血浆ET水平进行性降低;肝脏微循环ETAmRNA表达量增加,呈现上调趋势;表达部位随肝硬化进展发生特征性变化。     

胆汁性肝硬化猪肝组织中内皮素受体及诱导型一氧化氮合酶mRNA表达的意义

目的　研究胆汁性肝硬化猪肝组织中内皮素受体 (ETAR、ETBR)及诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)mRNA的表达及其对肝脏血液循环的影响。方法　湖北白种猪 15头 ,其中实验组 10头 ,对照组 5头。监测门静脉压 (Pp)、门静脉血流量 (Qp)和平均动脉压 (MAP)的变化 ,用原位杂交方法检测肝组织中ETAR、ETBR及iNOSmRNA的表达水平。结果　术后 4周实验组Pp(14 .6±1.7)mmHg (1mmHg =0 .13 3kPa)、Qp(3 2 .3± 2 .8)ml·min-1·kg-1及MAP(80 .5± 2 .5 )mmHg显著高于对照组的 (8.1± 3 .6)mmHg、(14 .2± 3 .7)ml·min-1·kg-1和 (10 8.3± 6.5 )mmHg(P <0 .0 1)。实验组ETAR、ETBR及iNOSmRNA的表达水平分别为 0 .78± 0 .2 0、0 .90± 0 .2 3和 0 .75± 0 .13 ,均显著高于对照组 (分别为 0 .3 8± 0 .2 6、0 .2 4± 0 .15和 0 .3 2± 0 .11,P <0 .0 1)。结论　胆汁性肝硬化猪肝组织中ETAR、ETBR及iNOSmRNA表达水平的变化影响肝脏血液循环的调节。     

肝硬化大鼠肝脏内皮素受体基因的表达与门静脉压力的关系

目的　研究四氯化碳诱导的肝硬化大鼠肝脏内皮素(endothelin, ET)受体基因的表达,并探讨其与门静脉压力的关系。方法　采用逆转录多聚酶链反应(RT PCR)测定大鼠肝组织 ETA受体和ETB受体mRNA的表达水平, 并测量门静脉压力。结果　肝硬化大鼠肝组织 ETA受体(0 4245±0 0612 vs 0 2792±0 1115,P<0 05) 和 ETB受体(0 5984±0 1047 vs 0 2938±0 1399,P< 0 05) mRNA 的表达均较对照组均显著升高;肝硬化大鼠门静脉压力较正常大鼠明显升高(16 08±2 19 vs8 25±2 56 cmH2O,P<0 05),并且ETA受体mRNA的表达与门静脉压力显著正相关(r=0 8074,P<0 05)。结论　四氯化碳诱导的肝硬化大鼠肝组织ET受体 mRNA的表达显著升高,并且 ETA受体 mRNA的表达与门静脉压力显著正相关, 表明 ET受体的高表达在门静脉高压症的发病机制中起重要作用。     

肝硬化大鼠肝组织生长抑素受体亚型mRNA表达的研究

目的 研究在大鼠肝硬化门静脉高压症形成过程中，肝组织生长抑素５种受体亚型ｍＲＮＡ的表达变化。方法 将大鼠３０只随机分为对照组，急性坏死组和肝硬化组。提取样本肝组织总ＲＮＡ，进行逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）后，琼脂糖凝胶电泳条带经过计算机图像分析处理，检测大鼠生长抑素受体亚型ｍＲＮＡ的表达。结果 正常肝组织中ｒＳＳＴＲ４ ｒＳＳＴＲ１，ｒＳＳＴＲ５的ｍＲＮＡ表达量均明显高于ｒＳＳＴＲ３，ｒＳ     

慢性缺氧对大鼠肾组织内皮素-1及其受体mRNA的作用

缺氧可不同程度地影响人体正常的生理功能。有研究报道急性缺氧可引起肾脏血管收缩 ,肾功能减退 ,ET系统对此起重要作用[1] 。但慢性缺氧对肾功能的影响 ,以及ET起什么样作用尚不清楚 ,为此 ,本文建立了慢性缺氧大鼠模型 ,进行观察研究。材料与方法1　实验动物及模型复制　雄性SD大鼠 (温州医学院实验动物中心提供 ) 2 0只 ,体重 180～ 2 2 0g ,适应性饲养1周 ,然后随机分为两组。 (1)正常对照组 ,10只 ,作为正常氧浓度下的对照 ;(2 )缺氧组 ,10只 ,置于低压氧舱内 ,舱内充氮气 ,(室内温度 15℃～ 2 0℃ ,相对湿度 5 0 %～ 70 % )饲养 ,…     

复方中药对肝硬化大鼠肝组织内皮素-1mRNA表达的影响

目的　研究复方中药对肝硬化大鼠血浆及肝组织内皮素 1(endothelin 1,ET 1)和肝组织ET 1mRNA表达的影响。方法　采用放射免疫法测定血浆和肝组织ET 1水平 ,逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)测定大鼠肝组织ET 1mRNA表达水平。结果　模型组血浆 (171 99± 2 7 86pg/ml)和肝组织ET 1(80 4 8± 2 1 4 5 pg/ml)较对照组 (114 33± 17 34pg/ml,5 3 2 5± 13 6 4pg/ml,P <0 0 5 )均显著升高 ,肝组织ET 1mRNA表达也较对照组 (0 4 6 74± 0 10 4 5vs.0 14 13± 0 0 2 97,P <0 0 5 )显著升高。治疗组血浆ET 1(12 9 80± 13 15 pg/ml)和肝组织ET 1mRNA表达 (0 30 4 0±0 0 813)均显著低于模型组 (171 99± 2 7 86 pg/ml,0 4 6 74± 0 10 4 5 ,P <0 0 5 )。而治疗组肝组织ET 1(77 36± 18 2 7pg/ml)与模型组 (80 4 8± 2 1 4 5 pg/ml)相比无显著差异。 结论　复方中药能显著降低肝硬化大鼠肝组织ET 1mRNA的表达及血浆ET 1水平。     

MK-801对吗啡戒断大鼠中枢NMDA1A受体mRNA表达的影响

近年来,有研究发现N-甲基-D-天门冬酸（NM-DA）受体和胞内第二信使都参与了吗啡耐受的形成,联合应用阿片类药物和非竞争性NMDA受体拮抗剂MK-801能减缓和／或翻转多种动物对阿片耐受和依赖的形成。有学者用放射性配基和免疫组化法研究发现MK-801抑制吗啡耐受大鼠脊髓NMDA受体数量的增加。提示MK-801抗吗啡耐受依赖的机制与改变NMDA受体数量有关。本研究拟通过观察MK-801对吗啡戒断大鼠脊髓和脑干NMDA1A受体mRNA表达的影响,探讨吗啡戒断时MK-801与NMDA受体表达的关系,为阐明MK-801减轻吗啡耐受和戒断反应的机制提供实验依据。     

苯丙酸诺龙对烧伤大鼠肝细胞白蛋白mRNA和雄激素受体表达的影响

目的　研究苯丙酸诺龙对烧伤大鼠肝细胞白蛋白影响的分子机制。　方法　将健康成年 Wistar大鼠 32只 (雌雄各半 )随机分成实验组和对照组各 16只 ,制成烫伤大鼠模型。采用随机对照设计 ,应用苯丙酸诺龙治疗大鼠 2 0 %体表面积深 度烫伤 ,分别于伤后第 4、7、14和 2 1天处死大鼠 ,留取肝组织 ,RNA一步法提取肝细胞总 RNA,逆转录 -聚合酶链反应 (RT- PCR)一步法扩增检测白蛋白 m RNA表达水平 ,免疫组织化学 Envision法显示检测肝细胞雄激素受体表达水平。　结果　实验组肝细胞白蛋白 m RNA和雄激素受体表达水平明显增高 ,在各时间点均明显高于同期对照组(P<0 .0 5 ) ,伤后第 7和 14天为快速增长时期 (P<0 .0 5 ) ,白蛋白 m RNA表达上调与雄激素受体表达上调有相关关系(r=0 .936 ,P<0 .0 5 )。　结论　苯丙酸诺龙能有效上调肝细胞白蛋白 m RNA和雄激素受体的表达水平 ,促进蛋白质合成 ,有利于逆转负氮平衡及创面愈合。     

肝硬化形成过程中大鼠肝组织组织胺1、2受体mRNA表达的变化

目的研究肝硬化形成过程中大鼠肝组织组织胺1受体（H1R）和组织胺2受体（H2R）mRNA表达的变化。方法用内对照逆转录定量聚合酶链反应（RT-PCR）对经四氯化碳诱导的肝硬化形成过程中2周、4周、6周、8周（各12只）和对照组大鼠（12只）肝组织H1R和H2R的mRNA表达进行研究。结果H1R的mRNA水平：对照组（2．308±0．202）显著高于肝硬化形成过程中的2周（0．756±0．130）、4周（O．999±0．207）、6周（1．127±0．217）、8周（1．564±0．130）（P＜0．01），肝硬化各组间差异有显著性（P＜0．05）。H2R的mRNA水平：对照组（0．851±0．208）显著高于肝硬化形成过程中的2周（0．263±0．104）、4周（0．244±0．092）、6周（0．225±0．047）、8周（0．243±0．062）（P＜0．01），肝硬化形成过程各组间差异无显著性（P＞0．05）。结论大鼠肝组织以H1RmRNA的表达为主，肝硬化形成过程中肝细胞上的H1R和H2RmRNA的表达明显减少。     

肝硬化大鼠肝组织中组织胺H2受体基因的mRNA表达

目的探讨肝硬化大鼠肝组织中组织胺Ｈ２受体基因的ｍＲＮＡ表达情况。方法逆转录聚合酶链反应方法从Ｗｉｓｔａｒ大鼠脑组织中合成Ｈ２受体的ｃＤＮＡ片段，克隆入载体中测序。用同位素标记ｃＤＮＡ片段后用于Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交。采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交法检测了１０例肝硬化Ｗｉｓｔａｒ大鼠及１０例正常对照组大鼠肝组织的Ｈ２受体ｍＲＮＡ。结果正常及肝硬化大鼠肝组织中均有Ｈ２受体的ｍＲＮＡ表达，且肝硬化组的表达量显著低于正常对照组。结论肝硬化时肝组织Ｈ２受体基因的转录减少是造成肝硬化时Ｈ２受体蛋白减少的重要原因，在门静脉高压症的形成和维持中起重要作用。     

肝硬化性门肺高压患者肝移植术中体、肺循环血液动力学的变化

目的分析肝硬化性门肺高压患者肝移植术中体、肺循环血液动力学的变化。方法8例肝硬化性门肺高压患者[平均肺动脉压（MPAP）大于25mmHg]为门肺高压组,年龄50．63岁,体重45—80kg,8例肝硬化未合并门肺高压患者为对照组,年龄32．65岁,体重52—78kg。两组心功能Ⅰ或Ⅱ级,ASAⅡ-Ⅳ级,均接受改良背驮式肝移植术,观察术中体、肺循环血液动力学的变化。结果与对照组比较。门肺高压组术前MPAP、肺循环阻力指数（PVm）升高（P〈0．05）。与术前相比,无肝期两组心脏指数（CI）、MPAP、肺动脉楔压（PAWP）和中心静脉压（CVP）降低,体循环阻力指数（SVRI）升高;新肝期MPAP、CI、CVP升高。门肺高压组新肝期PVRI变化幅度高于对照组（P〈0．05）。结论肝硬化性门肺高压患者新肝期肺动脉压力和肺血管阻力增加更明显。     

加速康复措施对肝硬化门静脉高压患者外科治疗预后影响的研究

目的：探讨肝硬化门静脉高压手术治疗安全性及减少术后并发症、加快康复的有效方法。方法：根据前瞻性和随机性原则,将肝硬化门静脉高压患者46例分为加速康复组（26例）与传统治疗组（20例）。加速康复组运用加速康复外科理念,观察2组患者术后并发症发生率、重要脏器功能恢复及术后康复时间。结果：加速康复组与传统治疗组比较,胃肠功能恢复较快（P〈0.01）,血浆用量和平均营养费用较少（P〈0.01）,住院时间缩短（P=0.039）,总并发症减少（P=0.001）;术后8 d血清前白蛋白和转铁蛋白已恢复到术前水平,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：充分掌握肝硬化门静脉高压病理生理特点,运用加速康复措施,可有效减少手术并发症的发生,加速术后康复。加速康复措施对肝硬化门静脉高压术后患者是一种安全、有效、合理的治疗措施。     

门静脉灌注80%乙醇建立猪肝硬化门静脉高压模型

目的探讨门静脉灌注80%乙醇建立猪肝硬化门静脉高压动物模型的可行性。方法选取健康贵州小型香猪13只,随机分为3组:实验1组(5只)、2组(5只)及对照组(3只),实验1、2组门静脉分别灌注80%乙醇5ml及10ml,对照组灌注生理盐水10ml,对所有实验猪于灌注前、灌注后即刻、灌注后6周行直接门静脉造影测量门静脉压力及直径;灌注前及灌注后6h内、术后1~6周行肝组织活检;灌注前及灌注后6周分别行增强CT;灌注后6周解剖所有实验猪,对肝脏各叶标本进行组织学检查。结果实验1组及对照组实验猪灌注前、后门静脉直径及压力的差异无统计学意义(P均0.05)。实验2组灌注后即刻、灌注后6周与灌注前比较,门静脉直径及压力的差异均有统计学意义(P均0.05)。实验1、2组灌注后所有实验猪均形成肝纤维化,灌注后6周实验1组2只、实验2组5只纤维化METAVIR评分达4级。结论经门静脉灌注80%乙醇更适宜构建肝硬化门静脉高压动物模型。     

胃癌合并肝硬化门静脉高压症的治疗

目的 总结胃癌合并肝硬化门静脉高压症患者手术及围手术期的处理经验.方法 对2000年1月至2009年6月收治的35例胃癌合并肝硬化门静脉高压症患者行手术治疗的资料进行回顾性分析.结果 本组术中无死亡.术后发生腹水19例,吻合口漏1例,吻合口出血2例,创面渗血2例,腹腔感染17例(其中合并霉菌感染4例),切口感染、乳糜漏各1例,术后并发症发生率为71%.住院期间死亡4例,其中急性肝功能衰竭所致多器官功能障碍综合征2例,死亡率为11%.结论 完善的术前评估,正确的围手术期处理,用"损伤控制"理念指导手术,实行个体化手术方案,重视预防性断流术,才能减少胃癌合并肝硬化门静脉高压症患者的病死率和并发症的发生率.     

大鼠肝癌发生过程中c-myc mRNA的表达及乌司他丁对其的影响

目的　观察大鼠诱癌过程中c mycmRNA的动态演变规律以及乌司他丁对其表达的影响。方法　将SD大鼠 12 0只分为正常组、诱癌组和干预组。利用诱癌剂 3 甲基 2 甲氨基偶氮苯 (DAB)喂养SD大鼠来制作肝癌模型。各组于肝癌开始造模后 2、4、6、8、10、12、14、16、18、2 0、2 2、2 4周分别活杀取肝叶标本 ,采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR )技术检测c mycmRNA的表达。结果　c myc基因在正常大鼠肝组织内呈阳性表达 ,从肝脏染毒开始即升高。在癌变期 (14～2 4周 ) ,c mycmRNA的表达量亦逐渐增高 (5 .69± 1.3 5 )～ (8.16± 2 .18)。乌司他丁的干预不能抑制c mycmRNA的表达量的升高 ,但能推迟其表达量的升高的时间。 结论　c myc作为一种致癌基因可能是肝癌的启动基因和维持基因 ,其表达量也是一种肝细胞癌的恶性程度和进展期的标志基因。乌司他丁在一定程度上可抑制肝损伤和肝细胞癌的发生 ,但不能抑制c myc基因的表达。     

肝硬化出血患者血内皮素动态变化及乌司他丁疗效观察

目的探讨门静脉高压症出血患者血内皮素(ET)变化及意义。方法66例门静脉高压症出血患者随机分为2组:Ⅰ组(n=32)为一般治疗组,Ⅱ组(n=34)为乌司他丁(UTI)治疗组,检测Ⅰ、Ⅱ组出血后1、2、4、7、10、14d血ET变化,并检测1、7、14d的肝功能。另选门静脉高压症未出血患者(n=20),检测血ET,作为对照组。结果出血后7、14d,Ⅰ、Ⅱ组总胆红素(TBIL)、谷丙转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)均呈先升高后下降,但于出血后14dⅡ组较Ⅰ组下降快(P<0.05;P<0.01;P<0.05)。Ⅰ、Ⅱ组出血后1d血ET浓度较对照组显著升高(P<0.01),随后逐步下降。Ⅱ组ET下降较Ⅰ组快,于出血后2d(P<0.05)、4d(P<0.01)、7d(P<0.05),差异有统计学意义。出血后1dⅠ、Ⅱ组ET浓度与总胆红素(TBIL)呈正相关(r=0.734,P<0.01);Ⅰ、Ⅱ组血ET下降指数与TBIL增高指数呈负相关(r=-0.486,P<0.05)。结论门脉高压症大出血后ET升高对肝功能的损害有重要作用,应用UTI治疗可抑制TBIL、ALT、AST、ET等的升高。     

iNOS基因治疗肝硬化门静脉高压症的实验研究

目的探讨iNOS基因治疗肝硬化门静脉高压症(PHT)的效果。方法用脂质体介导真核表达质粒peDNA,／iNOS体外转染肝窦内皮细胞(SEC),检测其转染效率及基因的表达。用CCl4腹腔内注射方法建立肝内型PHT大鼠模型,观察脂质体-pcDNA3/iNOS、脂质体-pcDNA3空质粒、Tris缓冲液门静脉注射治疗后肝内iNOS表达、NO产量及门静脉压力的变化差异。结果真核表达质粒peDNA,／iNOS能有效地转染SEC并表达相应的基因产物;与对照组比较,基因治疗组大鼠肝内iNOS表达和NO产量明显增加,门静脉压力显著降低。结论iNOS基因治疗能增加肝内iNOS的表达,使肝内NO产量增加,肝窦舒张,从而降低肝内阻力和门静脉压力。