豹皮樟总黄酮对大鼠佐剂性关节炎的作用及部分机制研究

目的研究豹皮樟总黄酮(total flavonoids of Litseacoreana Leve,TFLC)对佐剂性关节炎的治疗作用及其机制。方法采用福氏完全佐剂诱导大鼠佐剂性关节炎(adjuvant-induced arthritis,AA)模型,观察TFLC的抗炎作用;放免法测定AA大鼠腹腔巨噬细胞(peritoneal macrophages,PMΦ)中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)的含量;MTT法检测AA大鼠脾淋巴细胞增殖反应;HE染色法观察AA大鼠膝关节病理组织学变化;免疫组化法观察AA大鼠膝关节滑膜细胞中基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinases,MMP-9)蛋白表达情况。结果TFLC(50、100、200mg.kg-1)对AA大鼠的原发性、继发性炎症具有明显的抑制作用,降低多发性关节炎评分;TFLC(50、100、200mg.kg-1)可提高AA大鼠低下的脾淋巴细胞增殖反应;TFLC(50、100、200mg.kg-1)有效降低AA大鼠PMΦ产生的TNF-α、IL-6水平;TFLC(50、100、200mg.kg-1)改善AA大鼠膝关节病理损伤;TFLC(50、100、200mg.kg-1)能明显降低AA大鼠膝关节滑膜细胞中MMP-9的蛋白表达。结论TFLC(50、100、200mg.kg-1)对AA大鼠具有明显的治疗作用,抗炎机制可能与调节免疫功能、减少细胞因子的生成以及抑制基质金属蛋白酶的蛋白表达有关。     

国产白细胞介素-1受体阻滞剂对胶原性关节炎大鼠淋巴细胞及巨噬细胞功能的影响

目的:观察国产白细胞介素-1受体阻滞剂(IL-1ra)对大鼠胶原性关节炎(CIA)的影响.方法:鸡Ⅱ型胶原诱导大鼠CIA模型,关节评分法观察关节炎的发生情况;3H-TdR掺入法检测T细胞、B细胞增殖反应;采用小鼠淋巴细胞增殖法检测IL-1活性;放免法检测大鼠腹腔巨噬细胞(PMΦ)培养上清液肿瘤坏死因子(TNF)和前列腺素E2(PGE2)的含量.结果:CIA大鼠在致炎后d10,出现关节红肿,刀豆蛋白(ConA)或脂多糖(LPS)诱导的T和B淋巴细胞增殖反应增强;PMΦ产生IL-1,TNF-α,PGE2的水平升高.IL-1ra(7.5,30,120mg·kg-1·d-1)和阳性对照组(anakinra 120mg·kg-1·d-1)sc,连续7d,均能减轻CIA大鼠关节局部炎症,降低关节评分;IL-1ra(30,120mg·kg-1·d-1)能明显降低CIA大鼠过高的T淋巴细胞增殖反应,IL-1ra (7.5,30,120mg·kg-1·d-1)能明显降低CIA大鼠B淋巴细胞增殖反应;降低CIA大鼠PMΦ产生过高的IL-1,TNF-α及PGE2水平.结论:IL-1ra对CIA大鼠淋巴细胞和巨噬细胞的增殖反应具有抑制作用.     

橙皮苷对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用及机制

目的研究橙皮苷(hesperidin,HDN)对佐剂性关节炎(AA)大鼠的治疗作用及部分机制。方法用弗氏完全佐剂(FCA)诱导大鼠AA模型;足容积法测量继发侧足肿胀度;MTT法检测刀豆蛋白(ConA)和脂多糖(LPS)诱导的脾淋巴细胞增殖反应;放免法测定脾淋巴细胞产生IL-2的水平以及腹腔巨噬细胞(PMΦ)IL-1,IL-6和TNF-α的水平;酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定PMΦ产生IL-10的水平。结果致炎后d12,大鼠继发性关节炎出现,同时灌胃给予不同剂量的HDN(40、80、160mg·kg-1),连续12d,从致炎后d20开始,HDN(80、160mg·kg-1)对AA大鼠继发性炎症有明显抑制作用;HDN各剂量可不同程度地纠正AA大鼠低下的脾淋巴细胞增殖反应和脾细胞IL-2的产生,降低AA大鼠PMΦ产生过高的IL-1,IL-6和TNF-α,同时上调AA大鼠PMΦ低下的IL-10水平。结论HDN对AA大鼠继发性炎症具有治疗作用,其作用机制可能与调节机体异常的免疫功能和维持细胞因子网络平衡有关。     

复方黄芪提取物对细菌脂多糖诱导大鼠腹腔巨噬细胞分泌TNFα、NO及IL-1的影响

目的研究复方黄芪提取物(CAE)对细菌脂多糖诱导大鼠腹腔巨噬细胞(PMΦs)释放肿瘤坏死因子((TNFα)、白细胞介素-1(IL-1)及一氧化氮(NO)的影响。方法10 mg/L LPS体外诱导大鼠PMΦs分泌TNFα、IL-1与NO等因子,采用小鼠成纤维细胞瘤株(L929)杀伤法检测TNFα的含量、小鼠胸腺细胞增殖法检测IL-1的活性、G riess法检测NO的水平。结果CAE(11.3~90 mg.L-1)能显著抑制LPS激活的巨噬细胞对TNFα、IL-1与NO的分泌。结论CAE抑制巨噬细胞的分泌功能可能是其保肝作用的机制之一。     

肿瘤坏死因子-α对胶原性关节炎大鼠滑膜细胞功能的影响及白芍总苷的作用*

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对胶原性关节炎(CIA)大鼠滑膜细胞功能的影响及白芍总苷的作用。方法:制备大鼠CIA模型,并分离培养正常大鼠和CIA大鼠关节成纤维样滑膜细胞(FLS)。考察TNF-α在0.02～20μg.L-1浓度时对培养的正常大鼠FLS和CIA大鼠FLS的增殖反应和FLS分泌前列腺素E2(PGE2)、环磷酸腺苷(cAMP)和白介素1β(IL-1β)的影响,选择TNF-α的最佳刺激浓度。观察不同浓度(15.625～250 mg.L-1)的白芍总苷在TNF-α的最佳刺激浓度时对CIA大鼠FLS的增殖反应和FLS分泌PGE2,cAMP和IL-1β的影响。用MTT法检测FLS的增殖反应,放射免疫测定法检测PGE2,cAMP和IL-1β的水平。结果:TNF-α在20μg.L-1的浓度时均显著抑制正常大鼠FLS和CIA大鼠FLS分泌cAMP,显著促进PGE2和IL-1β的分泌,故选20μg.L-1为TNF-α的最佳刺激浓度。TGP能显著抑制20μg.L-1TNF-α对CIA大鼠FLS的促增殖反应,明显上调降低的cAMP水平,明显下调升高的PGE2和IL-1β水平,且具有一定的浓度依赖性。结论:TNF-α可以促进CIA大鼠FLS的增殖,降低cAMP,升高PGE2和IL-1β。TGP则能明显逆转TNF-α对FLS的影响。     

来氟米特对佐剂性关节炎大鼠腹腔巨噬细胞IL—1，IL—6和TNF—α产生的动态影响

目的:探讨来氟米特(leflunomide,LEF)对佐剂性关节炎大鼠腹腔巨噬细胞IL-1,IL-6和 TNF-α分泌的影响及其抗炎、抗类风湿的可能作用机制.方法:大鼠足跖皮下注射Freund完全佐剂诱导关节炎模型;LEF灌胃后分次获取腹腔巨噬细胞,其培养上清液中IL-1,IL-6和TNF-α活性采用ELISA法或生物法测定.结果:佐剂性关节炎大鼠腹腔巨噬细胞IL-1,IL-6和TNF-α分泌较正常对照组明显升高;LEF对由 LPS诱导产生的 IL-1和 TNF-α有明显的抑制作用,作用产生快;LEF(10,25 mg/kg)在应用21天后对IL-6的分泌也有明显抑制作用.结论:来氟米特具有抑制佐剂性关节炎大鼠腹腔巨噬细胞 IL-1,IL-6和 TNF-α分泌水平的作用.     

青藤碱对胶原诱导性关节炎小鼠肿瘤坏死因子-α、白介素-17及核因子-κB的影响

目的 观察青藤碱(SIN)对胶原诱导性关节炎(CIA)小鼠关节炎指数(AI)评分、血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-17(IL-17)及滑膜核因子-κB(NF-κB)蛋白表达的影响.方法 将30只DBA/1小鼠用随机数字表法分为正常组、CIA组、SIN组3组,每组各10只,诱导CIA组与SIN组小鼠建立CIA模型,予青藤碱(SIN)药物干预SIN组,对三组分别进行AI评分,测定血清TNF-α、IL-17的水平及滑膜NF-κB蛋白的表达.结果 SIN组和CIA组TNF-α、IL-17的水平及滑膜NF-κB蛋白的表达均较正常组升高,且SIN组小鼠的AI评分较CIA组明显降低,血清TNF-α[(170.73±11.05)pg·mL-1比(347.97±13.45)pg·mL-1,F=1021.67,P<0.01]、IL-17[(470.30±122.02)pg·mL-1比(621.78±48.96)pg·mL-1,F=184.42,P<0.01]水平明显减少,滑膜NF-κB[(0.53±0.04)pg·mL-1比(0.84±0.04)pg·mL-1,F=804.05,P<0.01]蛋白的表达下调.结论 SIN能改善CIA小鼠关节肿胀,降低血清TNF-α、IL-17的分泌,这可能与其下调了滑膜NF-κB的表达有关.     

丙酮酸乙酯对胶原诱导性关节炎大鼠血清肿瘤坏死因子-α白细胞介素-17转化生长因子-β_1的影响

目的观察丙酮酸乙酯对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠血清肿瘤坏死因子(TNF)-α,白细胞介素(IL)-17和转化生长因子(TGF)-β1的影响,探讨其用于治疗类风湿关节炎的可能性。方法实验大鼠分为正常对照组、CIA对照组及丙酮酸乙酯治疗组,建立大鼠CIA动物模型,记录大鼠的一般情况,目测评分其关节炎指数,ELISA法检测血清TNF-α,IL-17和TGF-β1浓度。结果①丙酮酸乙酯治疗组大鼠平均体质量高于CIA对照组,关节炎指数低于CIA对照组(P<0.05);②丙酮酸乙酯治疗组大鼠血清TNF-α和IL-17水平较CIA对照组明显降低,TGF-β1水平明显升高(P<0.05)。结论丙酮酸乙酯能明显改善CIA大鼠的生存状态,减轻其关节肿胀,显著降低大鼠血清中TNF-α和IL-17水平,提高TGF-β1水平,有可能成为治疗类风湿关节炎的新药物。     

塞隆骨提取物对牛Ⅱ型胶原诱导的小鼠关节炎的治疗作用及机制研究

目的了解塞隆骨水提物(SLG-B)对胶原诱导的小鼠关节炎的治疗作用及治疗机制。方法利用牛Ⅱ型胶原诱导DBA/1小鼠类风湿性关节炎模型即CIA。SLG-B口服给药观察小鼠关节炎指数的变化情况,体外培养关节炎小鼠脾细胞及巨噬细胞,ELISA法测定IL-12、IL-2、IFN-γ、TNF-α几种细胞因子。RT-PCR测定SLG-B对关节炎小鼠巨噬细胞IL-1β、IL-6、iNOS mRNA表达的影响。结果SLG-B能明显的抑制牛Ⅱ型胶原诱导关节炎的发生,能够减轻关节炎的各种症状。SLG-B在加抗原和不加抗原的情况下都能够明显的抑制关节炎小鼠脾细胞的增殖同时发现SLG-B能够抑制IL-2、IFN-γ、L-12p40、TNF-α细胞因子的产生还能够抑制小鼠腹腔巨噬细胞IL-1、IL-6及iNOS mRNA的表达。这可能是SLG-B在小鼠关节炎中表现治疗效果的分子基础。结论SLG-B对小鼠关节炎有很好的治疗效果,其作用机制主要是通过抑制巨噬细胞及脾细胞产生炎性细胞因子和抑制炎性细胞因子mRNA的表达来达到治疗类风湿性关节炎的作用。     

可溶性鸡Ⅱ型胶原对大鼠胶原性关节炎的免疫治疗作用

目的　考察可溶性鸡Ⅱ型胶原 (SCCⅡ )对大鼠胶原性关节炎 (CIA)的免疫治疗作用及机制。方法　检测CIA大鼠血清抗Ⅱ型胶原 (CⅡ )抗体、腹腔巨噬细胞 (PMΦ)与滑膜细胞产生白介素 1(IL 1)和肿瘤坏死因子α(TNFα)和SCCⅡ /刀豆球蛋白A(ConA)诱导 5个部位淋巴细胞的增殖反应 ,同时测量继发炎症反应和免疫器官系数。结果　ig 0 .0 3,0 .3和 3.0mg·kg- 1·d- 1SCCⅡ (d 14～ 2 2 ) ,明显减轻患鼠继发炎症 ,抑制针对SCCⅡ的皮肤迟发型超敏反应和PMΦ,滑膜细胞超常分泌IL 1和TNFα ,促进体重和免疫器官系数恢复 ,提升低下的淋巴细胞ConA反应 ,但不能降低血清抗CⅡ抗体水平 ,5个部位的淋巴细胞对SCCⅡ体外刺激也几无反应性。结论　SCCⅡ通过T细胞免疫耐受途径对大鼠CIA产生治疗作用。     

茶多酚对胶原性关节炎大鼠免疫调节作用研究

目的：研究茶多酚（tea polyphenols）对胶原性关节炎大鼠的免疫调节作用。方法采用Ⅱ型胶原加弗氏完全佐剂法建立类风湿性关节炎（collagen-induced arthritis,CIA）大鼠模型。记录大鼠体重,测量大鼠足趾容积,测量大鼠胸腺和脾脏指数,酶联免疫法（ELISA）检测大鼠血清促炎因子 IL-6、TNF-α水平。结果与模型组比较,茶多酚（200 mg·kg －1·d －1）可明显降低 CIA 大鼠足趾肿胀率（P ＜0．05）、胸腺和脾脏指数水平（P ＜0．05）,茶多酚治疗组大鼠血清促炎因子 IL-6、TNF-α水平明显低于模型组（P ＜0．05）。结论茶多酚对 CIA 大鼠有治疗作用,其作用机制可能与调节大鼠免疫系统功能有关。     

三七总皂苷对烫伤后核因子—κB及肿瘤坏死因子的影响

目的观察不同剂量的三七总皂苷对严重烫伤小鼠腹腔巨噬细胞内核因子-κB(NF-κB)活性及肿瘤坏死因子(TNF-α)mRNA的影响,阐明三七总皂苷对巨噬细胞分泌TNF-α影响的机制,探索体外运用该药的最佳剂量。方法以15%体表面积Ⅲ度烫伤小鼠为模型,收集腹腔巨噬细胞,电泳迁移率改变分析法测NF-κB的活性,反转录PCR测TNF-αmRNA的表达。结果烫伤后巨噬细胞内NF-κB活性与TNF-αmRNA的表达均显著升高,三七总皂苷在一定的浓度范围内呈剂量依赖性的抑制NF-κB活性与TNF-αmRNA的表达,以0.8mg*mL-1的剂量最明显,两者变化趋势相类似。结论三七总皂苷可能通过抑制NF-κB活性而降低TNF-αmRNA的表达。     

实验性关节炎大鼠滑膜组织核因子-κB基质金属蛋白酶-9表达相关性分析

目的观察核因子κB(NF-κB)、基质金属蛋白酶(MMP)-9在实验性关节炎(CIA)和对照组大鼠滑膜组织中不同时间点的表达差异及其血浆中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β的含量变化,探讨这些细胞因子在CIA发病中的作用机制,为类风湿关节炎(RA)今后的治疗提供理论依椐。方法将42只雄性Wistar大鼠随机分为模型组和对照组,通过免疫组织化学的方法检测各组大鼠不同时期滑膜组织NF-κB、MMP-9的表达水平,用放射免疫法(RIA)测定TNF-α、IL-1β的血浆含量,同时观察其发病时间与关节炎指数(AI)积分、病理评分及上述细胞因子之间的关系。结果随着CIA大鼠发病时间延长,AI和病理评分逐渐增加,NF-κB、MMP-9表达水平和TNF-α、IL-1β血浆含量也随之增加。CIA大鼠这些细胞因子的测定值都显著高于对照组(P<0.01),AI、病理评分与NF-κB、MMP-9呈正相关关系(P<0.05);CIA大鼠滑膜组织NF-κB、MMP-9表达水平之间呈正相关(P<0.05),而且它们的表达水平与IL-1β、TNF-α血浆含量之间亦呈正相关(P<0.05)。结论通过与TNF-α和IL-1β相互作用,滑膜组织中NF-κB、MMP-9的表达之间可能互相影响、互相促进,形成正反馈式的损坏机制,在CIA大鼠病情进展中起着重要作用,可能是RA发生发展以及骨质侵蚀的关键因子。     

大鼠胶原诱导关节炎模型的建立及评价

目的建立Ⅱ型胶原诱导关节炎（CIA）大鼠模型及评价方法。方法大鼠皮内注射鸡Ⅱ型胶原（CⅡ）与完全弗氏佐剂及不完全弗氏佐剂建立模型,监测动物体重、后足容积、关节炎指数（AI）以及热刺激缩足反射潜伏期（PWTL）和机械痛阈（MWT）,免疫后第四十二天行影像学检查并取材进行组织病理学检查;酶联免疫吸附法（ELISA）检测动物血清抗CⅡ抗体、IL-1β及TNF-α水平。结果 CIA大鼠体重增长缓慢,后足红肿明显,后足容积显著高于对照组,AI呈上升趋势,后足PWTL及MWT均显著降低,影像学检查发现关节腔狭窄,关节结构模糊,组织病理学检查可观察到明显炎症细胞浸润、关节结构的破坏及滑膜增生,ELISA结果显示CIA大鼠血清抗CⅡ抗体、IL-1β及TNF-α水平显著升高。结论本文成功建立了CIA大鼠模型及模型评价方法。     

Celastrol attenuates collagen-induced arthritis via inhibiting oxidative stress in rats

The present work aimed to investigate the anti-rheumatism effect and the mechanism of celastrol in collagen-induced arthritis (CIA) rats. The CIA model was established in male Wistar rats by intradermal injection of bovine collagen-II in complete Freund's adjuvant (CFA) at the base of tail. The rats received oral administration of celastrol for 28 days. A variety of indicators, including paw swelling and arthritis scores, were measured for anti-rheumatism effect. Celastrol treatment attenuated paw swelling and arthritis scores in CIA rats. Celastrol improved the spleen and thymus indexes in CIA rats. The increased levels of inflammatory cytokines, such as tumor necrosis factor (TNF)-α, interleukin (IL)-1β, IL-6, and interferon (IFN)-γ, were abolished by celastrol treatment. In addition, the weakened superoxide dismutase (SOD) activity, the increased levels of malondialdehyde (MDA), and superoxide anions, and enhanced NADPH oxidase (Nox) activity were all reversed by celastrol treatment. Nox4 overexpression reversed the attenuating effects of celastrol on paw swelling and arthritis scores in CIA rats. The celastrol-induced improvement in spleen and thymus indexes in CIA rats was inhibited by Nox4 overexpression. Nox4 overexpression reversed the abolishing effects of celastrol on the increases of TNF-α, IL-1β, IL-6, and IFN-γ levels in the serum of CIA rats. These results demonstrated that celastrol improved rheumatism in arthritis via inhibiting oxidative stress.     

云南红药对类风湿性关节炎模型大鼠足肿胀的抑制作用及对大鼠血清中致炎因子水平的影响

目的：研究云南红药对类风湿性关节炎模型大鼠足肿胀的抑制作用以及对大鼠血清IL-1β和TNF-α含量的影响,并探讨其作用机制。方法：将60只SD大鼠随机分成空白组、模型组、阳性对照组以及云南红药高、中、低剂量组。除空白组外,用Ⅱ型胶原蛋白诱导其余各组大鼠建立类风湿性关节炎模型。阳性对照组灌胃给予地塞米松磷酸钠2 mg.kg-1,云南红药高、中、低剂量组分别灌胃给予云南红药0.4、0.2和0.1 g.kg-1,空白组、模型组灌胃给予生理盐水0.01 mL.g-1,所有大鼠均为每日给药1次,连续28天。记录各组大鼠右后足肿胀程度变化情况,并于第28天处死大鼠,检测其血清IL-1β和TNF-α的含量。结果：模型组大鼠在注射Ⅱ型胶原蛋白后的第15天,云南红药高、中、低3个剂量组的大鼠分别在注射Ⅱ型胶原蛋白后的第22、20、18天右足肿胀率达100%;与模型组相比,云南红药高、中剂量在给药16天后即能显著抑制大鼠足肿胀（P〈0.05）,而云南红药低剂量组在给药24天后才产生显著抑制作用（P〈0.05）;云南红药高、中剂量组大鼠的血清IL-1β和TNF-α的含量明显低于模型组（P〈0.01）,模型组大鼠血清中IL-1β和TNF-α的含量分别为152.34 ng.L-1和31.76μg.L-1,高剂量组分别为69.64 ng.L-1和15.37μg.L-1,中剂量组分别为82.21 ng.L-1和19.44μg.L-1。结论：云南红药能够有效阻止类风湿性关节炎的发生、发展,其作用机制可能与下调致炎因子IL-1β和TNF-α的水平有关。     

苦参素对佐剂性关节炎大鼠的治疗作用

目的研究苦参素(OM)对大鼠佐剂型关节炎(AA)的影响,并探讨部分作用机制。方法弗氏完全佐剂(FCA)诱导AA大鼠模型,检测大鼠足爪肿胀度、多发性关节炎指数(AI),HE染色观察关节病理学改变,放免法检测血清IL-1β、TNF-α水平。结果 OM(60、120 mg.kg-1)剂量组能明显抑制AA大鼠继发性足肿胀,改善膝关节的病理学病变,使AA大鼠血清IL-1β、TNF-α水平显著下降。结论 OM对AA大鼠有治疗作用,调节体内细胞因子IL-1β、TNF-α的水平可能是其治疗AA的作用机制之一。     

甲氨蝶呤对炎性细胞因子及丝裂原活化蛋白激酶信号通路的影响

目的：探讨甲氨蝶呤（methotrexate,MTX）对类风湿关节炎（RA）发病起重要作用的炎性细胞因子IL-1β和TNF-α的作用及其可能的机制.方法：用Ⅱ型胶原建立类风湿关节炎（CIA）动物模型,以MTX（0.2 mg/kg/W）进行处理,6周后处死大鼠,取血清进行IL-1β和TNF-α检测;分离大鼠膝关节取关节滑膜细胞（FLS）进行培养、鉴定,检测脂多糖（LPS）诱导的FLS培养上清中IL-1β和TNF-α的含量,并观察MTX对FLS分泌IL-1β和TNF-α的影响;在FLS的培养中加入不同剂量的MTX,用Westen Blot方法检测FLS中ERK蛋白及磷酸化蛋白的表达.结果：关节炎指数评分、关节肿胀度测定及关节病理显示造模成功,分离关节滑膜细胞经流式细胞仪检测FLS的血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）的表达为85.5％.造模后,CIA大鼠血清IL-1β和TNF-α明显增加,与空白对照组比较有统计学差异（P＜0.05）,MTX能有效减少CIA大鼠血清中IL-1β和TNF-α的含量（P＜0.05）,但未能恢复至正常水平.MTX能抑制LPS诱导的CIA大鼠关节FLS分泌IL-1β和TNF-α.Western Blot检测显示,不同浓度的MTX对CIA大鼠FLS中ERK蛋白的表达与模型对照组相比无统计学差异（P＞0.05）.CIA大鼠FLS中p-ERK蛋白的表达明显高于空白对照组（P＜0.01）,MTX干预后,低剂量组对p-ERK蛋白表达无明显影响,而中、高剂量组可降低p-ERK蛋白的表达（P＜0.05）.结论：MTX既有免疫抑制作用,同时还通过抑制炎性细胞因子IL-1β和TNF-α而具有抗炎作用,其机制可能部分与其抑制MAPK信号通路中的ERK蛋白磷酸化有关.