超声介导靶向微泡联合紫杉醇对卵巢癌细胞线粒体膜电位的影响

目的探讨超声介导LHRHa靶向微泡联合紫杉醇对人卵巢癌细胞株A2780/DDP线粒体膜电位的影响。方法采用生物素-链霉亲和素法合成LHRHa靶向微泡。将对数生长期的A2780/DDP细胞随机分为对照组、紫杉醇组、紫杉醇+超声组、普通微泡+紫杉醇+超声组、LHRHa靶向微泡组和LHRHa靶向微泡+紫杉醇+超声组。采用MTT法检测细胞增殖抑制率,激光共聚焦检测细胞线粒体膜电位变化。结果LHRHa靶向微泡+紫杉醇+超声组对细胞增殖抑制作用最明显,24h、48h和72h抑制率分别为(35.39±2.12)%、(66.90±2.15)%、(69.53±2.85)%,明显高于其他处理组(P均<0.05)。与对照组相比,除LHRHa靶向微泡组外,各处理组细胞线粒体膜电位均出现不同程度的降低,LHRHa靶向微泡+紫杉醇+超声组线粒体膜电位明显低于其他组(P均<0.05)。结论超声介导LHRHa微泡联合紫杉醇能有效增加紫杉醇对人卵巢癌细胞株A2780/DDP的增殖抑制和线粒体膜电位的耗散。     

超声联合载药微泡对卵巢癌移植瘤的抑瘤作用及对P53,VEGF表达的影响

目的 探讨超声辐照载紫杉醇脂质微泡(paclitaxel-carrying liposome microbubbles,PLM)对裸鼠SKOV3卵巢癌移植瘤的抑瘤作用及其相关机制.方法 建立裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型,随机分成4组,比较各组的抑瘤率;用免疫组化法检测肿瘤组织中P53、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达,并进行半定量分析;用CD34染色标记血管内皮细胞,以微血管密度(microvessel density,MVD)作为定量检测指标.结果与其它实验组比较,PLM辐照组移植瘤质量增长抑制明显(P<0.01);P53,VEGF及MVD表达减低(P<0.01),VEGF表达与P53呈正相关(r=0.960,P<0.001).结论 超声辐照PLM可显著抑制SKOV3卵巢癌移植瘤的生长和发展,其机制可能是通过抑制P53抑癌基因的突变,下调了VEGF的合成与分泌,破坏并减少肿瘤血管再生,从而抑制肿瘤的生长.该方法的应用为卵巢癌提供了新的临床治疗途径.     

超声靶向微泡介导PEDF质粒转染小鼠肝癌的实验研究

目的探讨超声靶向微泡介导色素上皮源性因子(PEDF)质粒转染HepG2荷瘤裸鼠的治疗价值。方法建立裸鼠HepG2肝细胞肝癌模型,随机分为5组。Ⅰ组:对照组;Ⅱ:PEDF质粒组;Ⅲ组:PEDF质粒+微泡组;Ⅳ组:微泡+超声辐照组;Ⅴ组:PEDF质粒-微泡+超声辐照组。疗程结束后观察瘤结节的超声造影特征,计算抑瘤率,并检测瘤组织PEDF蛋白表达。应用SPSS软件分析各组间各参数的差异。结果疗程结束后,Ⅴ组瘤结节超声造影增强明显弱于Ⅰ组;Ⅳ组及Ⅴ组抑瘤率明显高于Ⅱ、Ⅲ组;Ⅴ组瘤组织PEDF蛋白表达高于其他各组。结论超声靶向微泡介导PEDF质粒有助于提高质粒转染率,抑制肿瘤血管生成及肿瘤生长,为肝细胞肝癌的治疗提供了一个新的途径。     

低频超声辐照联合微泡抑制裸鼠人前列腺癌移植瘤的实验研究

目的 观察低频超声(20 kHz)辐照联合静脉注射微泡造影剂SonoVue对裸鼠人前列腺癌Du145移植瘤的抑瘤效应,并探讨其可能的抑瘤机制.方法 通过细胞移植和瘤块移植方法建立24只裸鼠人前列腺癌Du145移植瘤模型,随机分为超声微泡组、单纯超声组、单纯微泡组和对照组,每组6只.超声微泡组:尾静脉注射0.2 mL SonoVue的同时对瘤体行20 kHz超声辐照,辐照强度2 W/cm2,辐照2 min;单纯超声组:尾静脉持续缓慢推注生理盐水0.2 mL,同时超声辐照2 min;单纯微泡组:尾静脉持续缓慢推注SonoVue 0.2 mL同时行假照;对照组不做任何处理.各组均隔天治疗1次,共3次.治疗后测量瘤体大小,绘制瘤体生长曲线,计算抑瘤率.首次治疗后14 d剥离瘤体,通过光镜、电镜观察肿瘤组织病理改变.免疫组织化学法观察CD34阳性染色血管,计算肿瘤微血管密度(MVD),比较各组间MVD的差异.结果 24只裸鼠均成功植瘤.治疗后超声微泡组瘤体体积明显小于其他各组(P＜0.05),抑瘤率为62.70%.HE染色观察超声微泡组瘤体组织大部分损伤坏死,电镜下超声微泡组肿瘤内微血管的内皮细胞损伤,线粒体肿大,基底膜断裂.超声微泡组瘤体内CD34阳性染色微血管数减少,其MVD值显著低于其他各组(P＜0.05).结论 20 kHz低频超声辐照联合微泡造影剂SonoVue可有效抑制裸鼠人前列腺癌移植瘤的生长,其抑瘤机制是超声空化效应破坏肿瘤的微血管.     

超声微泡介导血管内皮生长因子反义寡核苷酸抑制裸鼠膀胱肿瘤

目的 探讨利用超声辐照微泡造影剂介导血管内皮生长因子(VEGF)-反义寡核苷酸(ASODN)对人膀胱癌裸鼠移植瘤的抑制效应. 方法 建立人膀胱癌裸鼠皮下移植瘤模型后,将24只成瘤裸鼠随机分为4组:UM+ASODN组每只裸鼠尾静脉注射微泡造影剂与VEGF-ASODN混合物,并对移植瘤体用超声波进行辐照;脂质体+ASODN组每只裸鼠尾静脉注射VEGF-ASODN与脂质体混合物;UM组每只裸鼠尾静脉注射微泡造影剂并以同样的条件进行体外超声辐照;单纯对照组每只裸鼠尾静脉注射生理盐水,各组处理每隔2 d进行一次,共计5次.观察裸鼠移植瘤生长情况,免疫组化SP法测Ki67、CD34、VEGF的表达,计算微血管密度、细胞增殖指数,TUNEL法测细胞凋亡指数. 结果 UM+ASODN组裸鼠皮下肿瘤生长速度较对照组明显减慢,肿瘤组织VEGF的表达及微血管密度较对照组降低(P＜0.05);与对照组相比,UM+ASODN组肿瘤细胞的凋亡增加(P＜0.01),而细胞增殖减少(P＜0.05). 结论 超声微泡介导的VEGF-ASODN转染能有效抑制膀胱癌裸鼠皮下移植瘤.     

超声定位辐照载药微泡治疗卵巢癌移植瘤的实验研究

目的观察超声定位辐照载紫杉醇脂质微泡（paclitaxel—carrying liposome microbubbles，PLM）介导药物释放的方法对裸鼠人卵巢癌移植瘤的抑制效应。 方法对荷瘤鼠进行分组处理，包括超声定位辐照PLM组、单纯静脉给药组、超声定位辐照脂质微泡组、单纯静脉输注PLM组和生理盐水对照组。处理结束后剖取瘤块测其体积、质量，计算抑瘤率；并用免疫组化法检测肿瘤组织血管内皮生长因子（VEGF）表达。 结果各组的肿瘤体积、抑瘤率及VEGF表达均有差异（P＜0．01）。超声定位辐照PLM组的肿瘤体积、质量最小，抑瘤率最大，VEGF表达量最低。 结论超声定位辐照PLM的方法能有效介导药物释放，具有较强的体内抑瘤效果，有望成为新的肿瘤化疗给药方式。     

超声靶向辐照载药微泡治疗小鼠H22肝癌的实验研究

目的 制备载10-羟基喜树碱(10-HCPT)脂质超声微泡(10-hydroxycamptothecine-loaded liposome microbubbles,HLM),并研究超声定位辐照载药微泡对H22移植瘤的生长抑制效应.方法 制备载10-HCPT的脂质微泡及空白脂质微泡,建立小鼠肝癌H22实体瘤模型,将荷瘤鼠随机分为A、B两大组,每组又分为HLM组、10-HCPT注射液组、空白脂质微泡组和生理盐水对照组,经小鼠尾静脉输入药物或微泡后立即以治疗超声辐照瘤体部位,连续治疗7 d.A组小鼠治疗结束后剥取瘤块称重.计算抑瘤率,并作病理切片分析肿瘤微血管密度(MVD)变化;从治疗当天起,描绘B组小鼠肿瘤生长曲线,并观察生存期.结果 HLM组抑瘤率明显高于其他各组,MVD较其他组低(P<0.05),该组小鼠生存天数较对照组明显延长(P<0.01),但与10-HCPT注射液组比较差异无统计学意义(P>0.05);空白微泡组各检测指标与对照组差异无统计学意义(P>0.05).结论 超声靶向破坏载药微泡可显著提高10-HCPT对H22移植瘤的生长抑制效应,并可增强10-HCPT对肿瘤血管生成的抑制作用,有望成为一种新的靶向抗肿瘤治疗手段.     

超声靶向微泡破坏联合聚乙烯亚胺增强裸鼠移植瘤基因输送的初步研究

目的 探讨超声靶向微泡破坏(UTMD)联合聚乙烯亚胺(PEI)增强裸鼠Hela细胞(人宫颈癌)移植瘤基因输送的可行性和应用价值.方法 分别将2种质粒DNA[红色荧光蛋白质粒(RFP)和荧光素酶质粒(pCMV-LUC)]与PEI以不同氮/磷酸盐比(N/P比)混合,利用凝胶阻滞实验对PEI/DNA复合物进行分析.经荷瘤裸鼠尾静脉分别注入PBS、质粒、质粒+Sono Vue微泡、PEI/DNA复合物+Sono Vue微泡,仅对一侧肿瘤行超声辐照(3 MHz、2 W/cm2、2 min、20%占空比),另一侧肿瘤作为对照,并对该转染方法 的靶向性进行分析.超声辐照3 d后处死动物,行RFP表达观察、荧光素酶活性检测和组织学检查.结果 琼脂糖凝胶电泳显示PEI可有效地缩合质粒DNA.与裸质粒组比较,UTMD(超声辐照+Sono Vue微泡)能明显提高RFP转染率.与非辐照对照侧比较,UTMD的运用使RFP表达明显增强,荧光素酶活性增加了14倍(P＜0.01).UTMD联合PEI可显著增强基因转染,受辐照移植瘤的荧光素酶活性增加了10倍(P＜0.01);与非联合PEI时比较,荧光素酶表达增加了111倍(P＜0.01).无论有否超声照射,裸鼠其他器官组织中均无明显的基因表达(P＞0.05),且未观察到明显的组织损伤.结论 UTMD联合PEI可显著增强报告基因在肿瘤组织的靶向传输和转染,是一种很有前景、新型而安全的体内基因输送方法.     

超声微泡靶向增强RNA干扰质粒转染对移植瘤微血管形成和细胞凋亡的影响

目的 通过超声微泡靶向破坏的方法,选择Survivin作为靶点对短发夹状RNA干扰质粒(pSIREN/S3)进行转染,探讨其对裸鼠移植瘤微血管形成和细胞凋亡的影响.方法 将荷瘤裸鼠分为对照组、超声辐照诱导质粒组及超声微泡靶向破坏诱导质粒组,对组织样本行组织学检查,测定微血管密度(MVD),以末端脱氧核苷酸转移酶标记法(TUNEL)定量检测分析荷瘤裸鼠模型肿瘤组织的凋亡指数(AI).结果 超声微泡靶向破坏诱导质粒组的MVD明显减少,AI明显升高,与对照组及超声辐照诱导质粒组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 超声微泡靶向破坏联合pSIREN/S3质粒敲除Survivin,能使肿瘤组织中血管生成减少,明显诱导细胞凋亡,为恶性肿瘤基因治疗领域的一个新方法.     

超声微泡靶向破坏介导HSV-TK/GCV抑制BALB/c-nu小鼠卵巢癌的实验研究

目的 探讨超声微泡靶向破坏介导下HSV-TK基因联合更昔洛韦对裸鼠卵巢癌的杀伤效应.方法 挑选成功种植卵巢癌细胞且状态良好的雌性BALB/c-nu小鼠40只,随机分为4组:A组,HSV-TK+超声微泡(MBs)+超声辐射(US)组;B组,HSV-TK+超声辐射(US)组;C组,HSV-TK组;D组,磷酸盐缓冲液(PBS)组.分别利用Western-Blot和real time RT-PCR检测各组瘤体组织内TK蛋白和mRNA的表达,TUNEL法检测不同组的肿瘤细胞凋亡,并比较各组之间的肿瘤生长状况及裸鼠生存时间.结果 A组TK蛋白、mRNA表达及肿瘤细胞凋亡率高于其他各组(P＜0.05),平均肿瘤体积A组显著低于其他各组(P＜0.05),但生存时间上A组同其他各组之间差异并无统计学意义.结论 超声微泡靶向破坏介导HSV-TK联合更昔洛韦可促进裸鼠卵巢癌细胞的凋亡,并抑制肿瘤生长速度,但短期观察并不能延长裸鼠生存时间.