褪黑素对小鼠肝癌细胞凋亡及自然杀伤细胞活性的影响

目的 探讨褪黑素(MLT)在体内对H22肝癌细胞凋亡及免疫调节作用的影响及其机制。方法 应用免疫组织化学染色方法及原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法(TUNEL)对Bc1-2、Bax的表达及凋亡细胞进行检酗，MTT比色法检测脾细胞NK杀伤活性。结果 实验发现MLT治疗组、预防组及5-Fu组Bcl-2和Bax的表达及凋亡细胞数明显高于生理盐水组(P＜0．01)。Bax／Bcl-2比例在MLT预防组最大。NK杀伤活性在MLT治疗组、预防组较其它组明显增高(P＜0．05)。结论 MLT在体内有促进肿瘤细胞凋亡的作用，且可使NK杀伤活性增高，推测Bcl-2、Bax和机体的免疫系统参与了褪黑素的抗肿瘤作用。     

燃煤型氟中毒对大鼠睾丸生精细胞凋亡的影响

目的：观察燃煤型氟中毒对大鼠睾丸生精细胞凋亡的影响。方法：5月龄SD雄性大鼠18只,按体质量随机分为染氟组、染氟＋大豆组和对照组,各组大鼠自由饮用自来水（含氟〈0.5 mg/L）;各染氟组采用含氟量为69.33 mg/kg的煤烘玉米饲食,染氟＋大豆组的大豆重量比为20%,对照组采用含氟为9.37 mg/kg的常食玉米饲食,实验期间动物自由进食、进水;染氟第90天,处死大鼠,使用H-E染色法和TUNEL方法对大鼠睾丸切片进行染色,观察细胞凋亡情况,结果：染氟组生精细胞凋亡个数高于对照组[（278.17±25.47）个,（129±21.02）个,P〈0.05];染氟＋大豆组生精细胞凋亡个数高于对照组[（141.5±5.24）个,（129±21.02）个,P〈0.05];染氟＋大豆组生精细胞凋亡数低于染氟组[（141.5±5.24）个,（278.17±25.47）个],P〈0.05。结论：燃煤型氟中毒可造成大鼠生精细胞凋亡增加,增加营养后可有效减少氟中毒造成的生精细胞的凋亡。     

褪黑素对大鼠心肌缺血/再灌注后细胞凋亡的影响

目的　研究褪黑素 (MT)对大鼠心肌缺血 /再灌注后细胞凋亡及其相关基因bcl 2、bax蛋白表达的影响 ,以探讨其抗心肌缺血 /再灌注损伤的机制。方法　采用左冠状动脉前降支穿线结扎法制备心肌缺血 /再灌注模型 ,分别以缺口末端标记法 (TUNEL法 )及免疫组化法检测心肌细胞凋亡指数 (AI)及bcl 2、bax的蛋白表达的变化。结果　模型组心肌细胞凋亡指数 (AI)、bcl 2及bax蛋白阳性表达指数 (PEI)与假手术组比较均明显增加 ;MT干预后AI与bax蛋白阳性表达指数均下降 (2 1 96± 7 6 8下降至 12 17± 6 4 5 ,18 5 9± 5 6 8下降至 9 71± 2 82 ) ,而bcl 2蛋白阳性表达指数增高 (7 33± 2 0 5增高至 13 4 5± 2 76 )。结论　褪黑素可抑制缺血 /再灌注后心肌细胞凋亡、下调bax基因的蛋白表达与上调bcl 2基因的蛋白表达 ,从而抵抗缺血 /再灌注心肌损伤。     

几种细胞增殖活性研究方法的评估

为确立一种更能准确反映细胞增殖活性的方法,分别用免疫组化LSAB法和胶银染色法,对50例食管癌进行了PCNA和C-myc表达的半定量分析和AgNORs计数。结果PCNA标记百分率在不同程度分化的食管癌中差异显著(P<0.05),而C-myc和AgNORs计数在各级之间结果重叠。PCNA标记百分率是一个更能准确反映细胞增殖活性的良好指标。在肿瘤诊断中具有较高实用价值。     

参地颗粒对系膜增生性肾小球肾炎大鼠单个核细胞凋亡及炎症紊乱的干预作用

目的 观察参地颗粒作用于系膜增生性肾小球肾炎（mesangial proliferative glomerulonephritis,MsPGN）大鼠后,外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMCs）的凋亡,B淋巴细胞瘤- 2（B- cell lymphoma- 2,Bcl- 2）蛋白、Fas蛋白的表达,单核细胞趋化蛋白- 1（monocyte chemotactic protein 1,MCP- 1）、转化生长因子- β1（transforming growth factor- β1,TGF- β1）水平的变化,探讨其作用机制。方法 从60只SD大鼠中随机抽取10只作为正常组,剩余50只均用于MsPGN模型复制,模型制作成功后,再分为模型组（11只）、缬沙坦组（10只）、参地颗粒组（10只）。各组大鼠在模型复制完成后第21天开始给药,缬沙坦组每日予缬沙坦溶液灌胃,参地颗粒组予参地颗粒溶液灌胃,模型组、正常组予生理盐水灌胃,连续干预12周。光学显微镜下观察各组大鼠病理损伤情况,实验室方法检测各组大鼠24 h尿蛋白（24- hour urinary protein,24hUPr）、PBMCs凋亡率、Bcl- 2蛋白、Fas蛋白表达水平及血清MCP- 1、TGF- β1水平。结果 治疗第8、12周参地颗粒组24hUPr水平较缬沙坦组显著降低（P<0.05）。与正常组比较,模型组大鼠PBMCs凋亡率、血清MCP- 1、TGF- β1水平升高（P<0.05）,Bcl- 2蛋白表达水平下降,Fas蛋白表达水平上升（P<0.05）;与模型组比较,缬沙坦组、参地颗粒组PBMCs凋亡率、MCP- 1、TGF- β1水平均降低（P<0.05）,Bcl- 2蛋白表达水平上升,Fas蛋白表达水平下降（P<0.05）;参地颗粒组PBMCs凋亡率、血清TGF- β1水平低于缬沙坦组（P<0.05）,Bcl- 2蛋白表达水平上升程度大于缬沙坦组（P<0.05）。参地颗粒组MsPGN大鼠肾脏系膜细胞增生被明显抑制。结论 参地颗粒可以减轻肾脏炎症反应,消减尿蛋白,改善MsPGN大鼠的肾脏病理损害,其机制可能是通过调节凋亡调控蛋白Bcl- 2、Fas蛋白表达水平,降低MsPGN大鼠PBMCs凋亡率,下调MCP- 1、TGF- β1的表达水平实现的。     

表没食子儿茶素没食子酸酯诱导肝癌细胞凋亡并伴随端粒酶活性下调

目的 :探讨表没食子儿茶素没食子酸酯 (EGCG)对肝癌细胞凋亡和端粒酶活性的影响。方法 :用MTT法测定EGCG的细胞毒 ,以荧光显微镜、流式细胞仪研究细胞凋亡 ,PCR -ELISA法测定细胞端粒酶活性。结果 :EGCG作用Bel- 74 0 2肝癌细胞后 ,荧光显微镜观察到细胞凋亡现象。在一定时间、一定剂量范围内 ,EGCG诱导细胞凋亡呈现浓度和时间依赖性 ,而端粒酶活性随EGCG诱导Bel - 74 0 2细胞凋亡的发生而逐渐降低。结论 :EGCG可通过下调端粒酶活性诱导BEL - 74 0 2细胞凋亡 ,这可能是茶叶有效成分抗肿瘤的重要机制之一。     

褪黑素对大鼠体温及活动度昼夜节律的影响

目的　了解外源性褪黑素对大鼠体温及活动度昼夜节律的影响及其可能的调节机制。方法　正常光照条件下,24h连续记录大鼠的体温及活动度的变化,以不同剂量褪黑素在不同的昼夜时间给药观察体温和活动度节律的变化。结果　大鼠的体温及活动度存在昼夜节律性,给药后昼夜节律性不消失;但体温振幅减小,中值降低。黑暗中期给药后,峰值位相显著延迟;活动度振幅增加,中值显著降低,峰值位相延迟。结论　外源性褪黑素不能使体温或活动度的昼夜节律消失,而只是改变昼夜节律的参数。褪黑素可分别调节体温和活动度的昼夜节律,但对活动度的调节作用更为明显。     

顺铂对离体培养小鼠耳蜗毛细胞的损伤及凋亡作用

目的建立新生昆明小鼠离体顺铂耳毒性模型,研究顺铂对离体培养小鼠耳蜗毛细胞的损伤及凋亡作用。方法分离生后3d的昆明小鼠耳蜗基底膜,在含有1%牛血清白蛋白的DMEM/F12培养基中进行培养。采用异硫氰酸四甲基罗丹明标记的鬼笔环肽荧光染色方法观察不同浓度顺铂对小鼠耳蜗毛细胞的损伤,同时应用Hoechst 33258染色技术检测耳蜗毛细胞的凋亡。结果不同浓度顺铂均可使小鼠耳蜗毛细胞发生凋亡的形态学变化。顺铂浓度为4mg·L-1时,耳蜗毛细胞缺失率和凋亡率明显增大,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。随着顺铂浓度的增高(8～64mg·L-1),耳蜗毛细胞缺失率和凋亡率亦显著增大,呈现明显的量效关系(P<0.01)。结论应用新生昆明小鼠能建立可靠的离体顺铂耳毒性模型;顺铂可导致耳蜗毛细胞凋亡,提示凋亡可能是顺铂耳毒性机制之一。     

芹菜素对大鼠生精细胞凋亡作用的影响

目的研究芹菜素对大鼠生精细胞凋亡的影响。方法应用percoll不连续密度梯度分离培养大鼠睾丸生精细胞,应用流式细胞术观察芹菜素对生精细胞凋亡的影响。结果芹菜素作用于大鼠生精细胞,FCM分析显示芹菜素能促进生精细胞凋亡,并呈剂量依赖方式。结论芹菜素能呈剂量依赖式促进睾丸生精细胞凋亡。     

生髓育麟汤对少精子症患者血清生殖激素和生精细胞调亡的研究

目的：观察生髓育麟汤对少精子症患者血清生殖激素以及生精细胞凋亡的影响。方法：将90例患者随机分为两组,治疗组口服生髓育麟汤,对照组口服枸橼酸氯米芬治疗,观察两组治疗前后精液质量及血清生殖激素、生精细胞凋亡的变化情况。结果：治疗24周后两组精液质量各参数均有改善,差异有统计学意义（P〈0.05）;治疗组优于对照组。治疗后两组FSH、LH、T水平均有所上升,与治疗前对比差异有统计学意义（P〈0.05）;治疗后两组生精细胞凋亡率均有所下降,差异有统计学意义（P〈0.05）,治疗组较对照组更为显著。结论：生髓育麟汤能调节生殖内分泌功能,抑制生精细胞凋亡,促进生精细胞和精子的发育成熟从而改善少精子症患者的精液质量。     

褪黑素对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用

目的利用大鼠肝脏热缺血再灌注(I/R)损伤模型,研究褪黑素(MT)对再灌注损伤肝脏的保护作用。方法用无损伤血管夹阻断部分肝脏血流,建立大鼠肝热缺血再灌注损伤模型;用缺口末端标记法(TUNEL法)检测肝细胞凋亡指数(AI);心脏采血,测定血浆ALT和AST的变化。结果模型组肝细胞AI升高,血浆ALT和AST升高(P<0.05),用褪黑素干预组肝细胞AI和血浆ALT和AST较模型组下降(P<0.05)。结论褪黑素可以抑制缺血再灌注损伤后肝细胞的凋亡,减轻肝脏的损伤。     

输精管结扎对大鼠睾丸生精细胞凋亡的影响

为探讨输精管结扎对睾丸曲细精管生精细胞凋亡程度的影响，应用流式细胞仪和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记（ＴＵＮＥＬ）技术，检测大鼠输精管结扎和假手术后２～１２周睾丸生精细胞的凋亡情况。结果：流式细胞仪检测发现结扎组的亚单倍体峰增高，亚单倍体细胞百分率升高；ＴＵＮＥＬ法则显示结扎后总的生精细胞凋亡数较假手术后明显增加（Ｐ＜０．００１）。结扎后不同时间组与同期假手术组比较，２周、６周、１０周组精原细胞和初级精母细胞凋亡数前者均高于后者（Ｐ均＜０．０５），１２周组精原细胞凋亡数前者高于后者（Ｐ＜０．０５）。结果表明输精管结扎会导致生精细胞凋亡增加。     

原发性胆囊癌nm23表达与细胞增殖活性的关系

目的 :探讨 nm2 3表达与胆囊肿瘤良恶性、分化程度、浸润能力、淋巴结转移、预后及细胞增殖活性的关系。方法 :5 6例原发性胆囊癌石蜡包埋标本 ,免疫组化 S- P法检测。结果 :nm2 3在原发性胆囊癌表达的阳性率 ,无论是高、中、低分化均显著高于胆囊良性病变 (P <0 .0 1) ;与分化程度、浸润程度、淋巴结转移亦有明显关系。生存期分析表明 :nm 2 3表达阳性者生存期长 (P <0 .0 5 )。 nm 2 3表达阴性组 PCNA明显高于阳性组 (P <0 .0 1)。结论 :nm 2 3是反映原发性胆囊癌生物学特性良好的标志物 ,与 PCNA互补可做为判断胆囊良恶性、恶性程度、淋巴结转移及预后的客观指标。     

细胞凋亡与系膜增生性肾病的关系及其中医药研究进展

目的：论述细胞凋亡与系膜增生性肾病的关系,并对近年来关于中医药在该领域的研究成果及进展作一综述,为临床和科研工作提供较为全面的参考依据。方法：通过中国知网、万方数据库及EndNote查询国内外最新相关报道,并针对性收集及处理。结果：近年来关于细胞凋亡与系膜增生性肾病关系的研究报道较多,而中医药在该领域的研究颇有成效,并已成为了新的关注点。结论：细胞凋亡与系膜增生性肾病的发病及预后密切相关,中医药通过促进细胞凋亡治疗系膜增生性肾病疗效显著。     

诱导小鼠同种异体反应性T细胞凋亡

通过FasL-Fas途径诱导小鼠同种异体反应性T细胞(alloreactive T cells,ARTC)凋亡,为减轻异基因骨髓移植(allo-BMT)后的移植物抗宿主病(GVHD)探索新的手段.采用磁性细胞分离系统(MACS)分离BALB/c小鼠(H-2d)干细胞抗原(Sca)-1+早期造血细胞(early hematopoietic cells,EHC),然后与经丝裂霉素C去增殖的能产生高滴度表达mFasL假病毒的逆转录病毒包装细胞(PA31 7)共培养,进行mFasL cDNA基因转移;用含干细胞因子(SCF)、白细胞介素-3(IL-3)和白细胞介素-6(IL-6)的完全培养基培养1周后,借助PCR、RT-PCR、FCM技术检测外源mFasLcDNA在扩增的造血细胞(HC)中的整合与表达效率;或与异基因BAC小鼠(H-2dxb)脾细胞进行单向混合淋巴细胞培养(OWMLC),6 d后用Annexin V/PI标记和FCM检测BAC脾细胞凋亡.结果显示用MACS法成功分离出BALE/c小鼠Sca-l+EHC(1×105个/只),纯度为(89.0±6.1)%;经逆转录病毒法对它进行外源mFasLcD-NA转染并扩增1周后,细胞总数达2×106个/只;基因组DNA PCR和RT-PCR证实HC整合有mFasL cDNA和Neor基因,并表达外源基因mRNA;FCM发现mFasL+HC占(43.9±5.6)%,而用表达NeOr的假病毒转染HC,其FasL阳性率仅为(2.7±1.3)%(P＜0.01);高表达mFasL的HC与异基因BAC小鼠脾细胞进行OWMLC 6 d后,(51.9±4.7)%细胞发生凋亡,而低表达mFasL HC与BAC脾细胞共培养,其凋亡率为(19.6±4.3)%(P＜0.01).提示体外反应中,转染外源mFasL cDNA并高表达mFasL的HC可诱导小鼠同种异体反应性T细胞凋亡.     

睾丸复位固定术对大鼠隐睾Bcl-2表达及生精细胞凋亡的影响

目的研究实验性大鼠隐睾复位固定术对Bcl-2表达及生精细胞凋亡的影响。方法24只雄性SD大鼠建立左侧隐睾模型,右侧睾丸切断引带后还纳入阴囊作为假手术组;模型建立7天后实施左侧隐睾复位固定术,隐睾复位固定术前、术后第24天及48天分别处死大鼠8只,采用免疫组织化学检测各组睾丸Bcl-2表达的变化,运用TUNEL法检测各组睾丸生精细胞凋亡。 结果隐睾内生精细胞凋亡增加,复位固定术能降低生精细胞凋亡,增强睾丸内Bcl-2表达。假手术组凋亡指数(4.86%±0.27%)与复位固定术后48天组(5.59%±0.67%）比较差异无显著性（P＞0.05),但均低于复位固定术后24天组(14.48%±0.70%）及复位固定术前的隐睾组(29.45%±1.19%）（P＜0.05);Bcl-2表达在假手术组、复位固定术后24天组及复位固定术后48天组之间比较差异无显著性（P＞0.05),但均明显高于隐睾组（P＜0.05)。结论睾丸复位固定术能通过促进隐睾内Bcl-2表达来抑制生精细胞凋亡。     

缺锌对增殖期大鼠生长板软骨细胞凋亡的影响

目的 探讨锌缺乏对增殖期大鼠肋生长板软骨细胞(RGC)凋亡的影响,为阐明锌对骨骼生长发育影响的机制提供科学依据.方法 体外培养Wistar大鼠RGC,用0,5,10及20μmol/L的锌螯合剂N-N-N′-N′-4(2-吡啶甲基)乙二胺(TPEN)分别处理细胞12 h.采用流式双染试剂盒研究早期凋亡和晚期凋亡细胞百分比.以5μmol/L TPEN作用6,12,24 h,利用免疫组化技术检测细胞中凋亡诱导因子(AIF)的定位表达,并利用Western blot和实时定量PCR(real-time PCR)检测其表达水平的变化.结果 随着TPEN浓度的增高,RGC细胞凋亡率也逐渐增加,各组早期凋亡和晚期凋亡细胞百分比增大,AIF的表达水平也逐渐升高.免疫组化染色结果显示在TPEN作用6 h后,AIF已从线粒体迁出,12 h及24 h后,大部分AIF已从线粒体迁至细胞核.结论 锌缺乏可以诱导RGC细胞凋亡,在凋亡的过程中AIF发挥着关键作用.     

葡萄籽提取物原花青素对大鼠实验性隐睾生精细胞凋亡的影响

目的:探讨葡萄籽提取物原花青素对隐睾生精细胞凋亡的影响,为临床治疗某些特发性男性不育症药物的开发研究提供实验依据.方法:将雄性健康SD大鼠40只随机分为隐睾+原花青素(高、中、低剂量)组、隐睾+生理盐水组、假手术组5组,每组8只大鼠,每天定时定量灌胃3次,7天后断颈处死大鼠,双侧睾丸称湿重并取手术侧睾丸HE染色观察组织...     

褪黑素对胰腺癌小鼠NK细胞杀伤活性的影响

目的探讨褪黑素（MT）对Balb/c小鼠胰腺癌皮下移植瘤的治疗作用及对其自然杀伤（NK）细胞活性的影响。方法在Balb/c小鼠皮下接种胰腺癌SW1990细胞建立荷瘤鼠模型,每组分别用生理盐水、MT低剂量（10mg·㎏-1·d-1）、MT高剂量（20mg·㎏-1·d-1）干预,定期测量肿瘤大小,绘制肿瘤生长曲线,称瘤质量,并用MTT法检测小鼠脾脏（NK）细胞活性。结果与对照组肿瘤体积[（1.476±0.075）cm3]比较,MT低剂量组[（0.998±0.112）cm3]、MT高剂量组[（0.756±0.128）cm3]肿瘤体积显著减小（P〈0.01）,并且MT高剂量组肿瘤体积明显小于低剂量组（P〈0.05）。与对照组肿瘤质量[（1.537±0.106]）g]比较,MT低剂量组[（0.898±0.125]）g]、MT高剂量组[（0.636±0.081）g]瘤质量显著减轻（P〈0.01）,并且MT高剂量组瘤质量明显轻于低剂量组（P〈0.05）。与对照组NK细胞的杀伤活性[（18.07±1.23）%]相比,MT低剂量组[（44.27±3.19）%]、MT高剂量组[（45.16±3.20）%]NK细胞的杀伤活性显著增强（P〈0.01）,MT低剂量组与MT高剂量组之间无明显差异（P〉0.05）。结论 MT能抑制小鼠皮下移植性胰腺癌的生长,增强荷瘤鼠的免疫功能。     

Antitumor Activity of Dichloromethane Extract from Salvia plebeia and Induction of Apoptosis on K562 Cells

Objective To study the antitumor activity of extract from Salvia plebeia and investigate whether the extract induce apoptosis of K562 cells. Methods The aqueous, petroleum ether, dichloromethane (CH2Cl2), ethyl acetate, and butanol extracts were prepared from the aerial parts of S. plebeia. Taking fluorouracil as reference, the cytotoxic activities of these extracts on HeLa, A549, SGC-7901, HCT-116, K562, LoVo, DU-145, and HepG2 cells were evaluated. To clarify the apoptosis of K562 cells induced by CH2Cl2 extract, the methods of Hoechst 33258 staining, flow cytometry assay, and DNA ladder assay were investigated. Results The CH2Cl2 extract showed the most potent cytotoxic effect against K562 cells, with an IC50 < 15 μg/mL for 3 d treatment. The characteristic apoptotic symptoms such as DNA fragmentation and chromatin condensation were also observed in the K562 cells. Conclusion The CH2Cl2 extract from S. plebeia may inhibit the cancer cell proliferation by inducing cell apoptosis.