鼻咽癌耐药细胞株14-3-3σ表达研究

目的研究14-3-3σ基因在鼻咽癌细胞株HNE1和耐顺铂鼻咽癌细胞株HNE1-DDP的表达情况,以了解14-3-3σ基因与耐药的关系。方法采用蛋白印迹法(western blotting,WB)检测HNE1-DDP细胞与HNE1细胞14-3-3σ的表达,并采用荧光定量RT-PCR(quantitative RT-PCR,q RT-PCR)检测14-3-3σ基因的mRNA表达水平。结果 14-3-3σ蛋白和其mRNA在HNE1-DDP细胞株中表达明显下降。结论 14-3-3σ下调可能与鼻咽癌耐药相关,其在耐药细胞株中表达下调的机制有待进一步的研究。     

14-3-3σ影响肿瘤发生发展和治疗的细胞及分子机制

14-3-3σ是14-3-3蛋白家族的重要成员之一,在多种肿瘤中低表达。作为肿瘤抑制蛋白,14-3-3σ的低表达或活性降低可致癌细胞的过度增殖和凋亡不足,进而促进肿瘤的发生发展、侵袭、转移,甚至影响肿瘤的预后和疗效。本文主要综述和总结14-3-3σ与肿瘤临床生物学特性的关系、肿瘤细胞和患者癌组织14-3-3σ蛋白表达异常的原因、14-3-3σ对肿瘤细胞增殖和凋亡及其信号转导的影响,旨在揭示14-3-3σ的抑癌作用及细胞和分子机制,为临床肿瘤诊疗提供新的药物靶点和肿瘤标志物。     

14-3-3σ基因影响人低分化鼻咽癌细胞CNE-2的信号通路

目的探讨14-3-3σ对鼻咽癌CNE-2细胞的信号通路的影响。方法通过反相蛋白质阵列检测14-3-3σ转染鼻咽癌CNE-2细胞前后特定蛋白质表达量的变化。结果 10种蛋白的表达量在14-3-3σ转染CNE-2细胞的前后发生了大于15%的变化,分别是Akt与pAkt(S473),mTOR与pmTOR,ERK2,p-p38,pSTAT3(Y705)与pSTAT3(S727)及Rb与p-Rb。结论 14-3-3σ在鼻咽癌CNE-2细胞中所起的作用可涉及4条信号通路,分别是Akt通路、MAPK通路、JAK-STAT通路及RbE2f通路。     

人14-3-3σ基因启动子荧光素酶报告基因载体的构建及其转录活性分析

目的构建人14-3-3σ基因启动子的荧光素酶报告基因载体,探讨该启动子的转录活性。方法运用UCSC软件对人14-3-3σ基因5′端2000bp进行启动子特征分析和转录因子结合位点分析。克隆14-3-3σ基因5′端5个不同长度的启动子片段,与荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic重组,获得5个不同长度的14-3-3σ启动子萤光素酶报告基因载体,分别转染HeLa细胞,通过双荧光素酶活性分析实验进行转录活性分析。将转录因子AP-2α的过表达质粒pCMV-Myc/AP-2α分别与以上不同长度的14-3-3σ启动子萤光素酶报告基因载体共转染HeLa细胞,通过双荧光素酶活性分析实验检测AP-2α对14-3-3σ启动子转录活性的影响。结果序列分析发现人14-3-3σ启动子基因5′端1349bp的区域内存在多个潜在的AP-2α结合位点,成功构建了5个不同长度的14-3-3σ启动子报告基因载体。双荧光素酶活性分析显示5个启动子片段均有转录活性,AP-2α可增强14-3-3σ启动子转录活性。结论成功构建了14-3-3σ启动子的报告基因载体,为进一步研究AP-2α对14-3-3σ的调控奠定了基础。     

14-3-3蛋白各亚型mRNA在子宫腺肌病的表达及意义

目的:研究14-3-3蛋白各亚型mRNA在子宫腺肌病的表达,探讨14-3-3蛋白与子宫腺肌病发生发展的关系。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测14-3-3蛋白各亚型mRNA在子宫腺肌病在位子宫内膜、异位子宫内膜及正常子宫内膜的表达情况。结果:14-3-3θ、ε、ζmRNA在子宫腺肌病在位或/和异位内膜表达较正常子宫内膜上调。结论:14-3-3θ、ε、ζmRNA表达异常可能与子宫腺肌病的发生发展有关。     

14-3-3β蛋白mRNA在宫颈癌及宫颈上皮内瘤样变的表达

目的:探讨14-3-3β蛋白在慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤样病变(CIN)、宫颈癌(CC)中的表达情况。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测14-3-3β蛋白mRNA在慢性宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宫颈癌的表达情况,采用图像分析软件处理数据,用系统统计软件SPSS 11.5进行统计分析。结果:14-3-3β蛋白mRNA在慢性宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宫颈癌的表达量分别为0.61±0.07、0.69±0.03、1.11±0.13、1.29±0.08、1.45±0.02;CC组、CINⅢ组、CINⅡ组与慢性宫颈炎组相比,表达明显上升,有显著性差异(P<0.01);CC组与CIN各组相比,表达上升,有显著性差异(P<0.01);CIN组间随着病变程度的增加,表达呈上调趋势,有差异(P<0.05);CINⅠ组与慢性宫颈炎组相比,表达无差异性(P>0.05)。结论:14-3-3βmRNA在CINⅡ、CINⅢ和宫颈癌中表达明显上调,有利于临床指导宫颈癌的早期诊断和治疗。     

MMP-13和TIMP-3在子宫肌瘤中的表达及意义

目的观察基质金属蛋白酶-13(MMP-13)和其抑制剂-3(TIMP-3)在子宫肌瘤组织中的表达情况,探讨MMP-13和TIMP-3与子宫肌瘤发生的关系与临床意义。方法采用免疫组织化学方法(S-P法)对57例子宫肌瘤患者进行MMP-13和TIMP-3蛋白表达的检测,并与45例子宫肌瘤瘤旁组织中MMP-13和TIMP-3表达比较。结果 MMP-13和TIMP-3蛋白在子宫肌瘤组织中多呈阳性表达,在子宫肌瘤瘤旁组织中多呈阴性表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MMP-13与TIMP-3在子宫肌瘤组织中异常表达,可能与子宫肌瘤的发生有关。     

猪带绦虫14-3-3.2原核表达系统的构建及其在猪带绦虫成虫和囊尾蚴中的表达

目的:建立猪带绦虫（Ts）14-3-3.2原核表达系统,并观察Ts14-3-3.2蛋白在Ts成虫和囊尾蚴中的表达情况。方法:在遵义医科大学寄生虫学教研室前期获得Ts14-3-3.2基因序列的基础上,采用基于PCR的精确合成（PAS）方法全基因合成Ts14-3-3.2基因,经限制性内切酶 NdeⅠ和 ...     

细粒棘球绦虫14-3-3zeta蛋白的生物信息学分析

目的应用生物信息学技术对细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)14-3-3zeta蛋白的结构和功能进行预测和分析,为进一步的实验研究提供依据。方法利用美国国家生物技术信息中心(NCBI,http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)和瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统(ExPASY,http://expasy.org/)提供的各种有关基因和蛋白序列、结构信息分析的工具,并结合其它生物信息学分析软件,对该蛋白质的结构和功能进行预测和分析。结果该基因全长为771 bp,编码256个氨基酸,其编码的蛋白相对分子量理论预测值和等电点分别是29.4 kDa和5.04。预测该蛋白无信号肽和跨膜区,二级结构含8个α-螺旋和12个β-折叠股,氨基酸序列中有9个潜在抗原表位。结论初步认识了细粒棘球绦虫14.3-3zeta蛋白的基本特征,为深入研究该蛋白的生物学功能奠定了基础。     

STAT3及下游基因CyclinD1在子宫肌瘤的表达和意义

目的:探讨STAT3及其下游基因CyclinD1在子宫肌瘤的表达和意义。方法:采用RT-PCR方法检测子宫肌瘤和同源正常子宫平滑肌组织中STAT3及其下游基因CyclinD1的表达,采用免疫组化方法检测子宫肌瘤和同源正常子宫平滑肌组织中磷酸化STAT3的表达。结果:STAT3mRNA在子宫肌瘤表达明显高于正常的子宫平滑肌组织,P<0.01;CyclinD1mRNA在子宫肌瘤的表达也相应升高。磷酸化STAT3在子宫肌瘤和同源正常子宫平滑肌的阳性表达率分别是77.8%和5.56%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:子宫肌瘤STAT3及CyclinD1表达增高,STAT3和CyclinD1在子宫肌瘤的发病中起了一定作用。     

Pim-3蛋白在急性白血病中的表达及意义

目的：探讨pim-3蛋白在急性白血病(AL)中的表达及意义。方法：采用免疫组化SP法检测30例急性髓细胞白血病(AML)和20例急性淋巴白血病(ALL)患者中pim-3蛋白的表达情况,同时选取15例非恶性血液病的患者作为对照,统计学分析各组间Pim-3蛋白的表达差异。结果：Pim-3蛋白在急性白血病患者中的表达阳性率显著低于非恶性血液病患者,但在急性髓细胞白血病患者中和急性淋巴白血病患者中无统计学差异;结论：Pim-3蛋白在急性白血病中的异常表达可能与白血病的发生、发展有关。     

牛磺酸对人胚大脑神经细胞14-3-2蛋白的影响

采用人胚大脑神经细胞体外无血清原代分离培养方法,对牛磺酸在人脑神经细胞分化成熟过程中的作用进行了研究。结果发现,牛磺酸对神经细胞14-3-2蛋白的合成具有明显的促进作用,表现为实验组与对照组神经细胞14-3-2蛋白的出现分别于细胞培养后的第15天和第20天。而且实验组神经细胞的14-3-2蛋白的含量呈直线增长趋势。提示,牛磺酸在人脑神经细胞的分化成熟过程中发挥着重要的作用。     

子宫肌瘤组织中TGF-β3、VEGF、IGF-IR的表达及临床意义

目的探讨转化生长因子-β3(TGF-β3)、血管内皮生长因子(VEGF)及胰岛素样生长因子Ⅰ受体(IGF-IR)在子宫肌瘤组织中的表达及临床意义。方法选取2015年6月-2017年1月在武汉商职医院就诊且确诊为子宫平滑肌瘤行全子宫切除术的患者54例(增生期34例,分泌期20例)为研究对象,采用免疫组化SP法分别检测子宫肌瘤组织及邻近正常子宫肌组织中TGF-β3、VEGF及IGF-IR的表达水平。比较子宫肌瘤组织与邻近正常子宫肌组织,不同时期子宫肌瘤组织TGF-β3、VEGF及IGF-IR的阳性表达率。结果子宫肌瘤组织TGF-β3、VEGF、IGF-IR的阳性表达率均显著高于邻近正常子宫肌组织,差异有统计学意义(P<0.05)。分泌期子宫肌瘤平滑肌细胞胞浆中TGF-β3、VEGF及IGF-IR染色加深,阳性表达率高于增生期子宫肌瘤组织,但差异无统计学意义(P>0.05)。子宫肌瘤组织中TGF-β3、VEGF、IGF-IR表达的阳性率相互间呈正相关关系(均P<0.05)。结论 TGF-β3、VEGF及IGF-IR在子宫肌瘤组织中呈高表达,三者与子宫肌瘤的发生发展均具有紧密的联系。     

MLC及MLCK在子宫肌瘤组织中的表达及意义

目的:探讨MLC及MLCK在子宫肌瘤发病机制中的作用。方法:采用免疫组化、RT-PCR及Western blot方法检测30例子宫肌瘤及其附近正常平滑肌组织中MLC、MLCK及p-MLCK的表达。结果:免疫组化检测MLC、MLCK及p-MLCK在子宫肌瘤组织中阳性表达水平均高于平滑肌组织,差异有统计学意义(P<0.01)。RT-PCR显示MLC及MLCK mRNA在子宫肌瘤组织中表达上调,差异有统计学意义(P<0.01)。经Western blot检测MLC、MLCK及p-MLCK蛋白含量在子宫肌瘤组织中显著高于平滑肌组织,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:MLC及MLCK在平滑肌及肌瘤组织中表达异常,提示二者可能参与了子宫肌瘤的发生与发展,推测其可能与细胞收缩异常相关。     

微小核糖核酸-223在宫颈癌中的表达及意义

目的 探讨微小核糖核酸-223(miR-223)在宫颈癌患者中的表达及其临床意义。方法 选取45例宫颈癌患者的宫颈癌组织为宫颈癌组,癌旁组织为对照组。采用实时荧光定量PCR技术检测miR-223的表达水平,用SPSS 22.0软件对结果进行统计学分析。结果 宫颈癌组miR-223的表达量(1.848±0.630)显著高于对照组(1.027±0.359),差异有统计学意义(t=-7.591,P<0.05)。miR-223在Ⅲ～Ⅳ期患者的表达水平(2.370±0.341)显著高于Ⅰ～Ⅱ期患者的表达水平(1.301±0.311),低分化患者的表达水平(2.346±0.444)显著高于中分化和高分化患者的表达水平(1.598±0.560),有淋巴结转移患者的表达水平(2.125±0.567)显著高于无淋巴结转移组的表达水平(1.530±0.554),差异均有统计学意义(t=10.971、-4.508、3.558,均P<0.05)。miR-223对宫颈癌诊断的曲线下面积为0.825,具有较高的诊断效能。Kaplan-Meier生存曲线表明,与高表达组相比,miR-223低表达组患者的...     

miR-338-3p在乳腺癌组织中的表达意义

目的 检测乳腺癌组织中miR-338-3p的表达量,以探明其与乳腺癌之间的相关性。方法 荧光定量PCR检测58例乳腺癌、癌旁组织和62例乳腺纤维瘤患者组织中miR-338-3p的表达水平,SPSS软件分析其与乳腺癌临床病理参数的相关性;Kaplan-Meier法分析miR-338-3p与乳腺癌预后的关系。结果 乳腺癌患者组织中miR-338-3p表达量(0.59±0.10)明显低于癌旁组织(0.93±0.09)和乳腺纤维瘤(1.02±0.12)患者(P均<0.01);癌组织中miR-338-3p表达量与患者的分期、淋巴结转移和分级呈明显的负相关性;低表达乳腺癌组患者术后总体生存率明显低于高表达组,差异均有统计学意义(χ²=4.773,P=0.029)。结论 乳腺癌组织中miR-338-3p显著低表达,且低表达者分期更晚、分化程度更低、淋巴结转移率更高,且患者总体生存率也更低。     

子宫肌瘤中TSP-1和IGF-Ⅱ蛋白的表达及其意义

目的:观察子宫肌瘤中TSP-1、IGF-Ⅱ蛋白的表达情况,以探讨TSP-1、IGF-Ⅱ蛋白表达在子宫肌瘤发生、发展中的作用。方法:应用免疫组化SP法分别检测子宫肌瘤组织以及邻近子宫肌瘤的正常平滑肌组织中TSP-1、IGF-Ⅱ蛋白表达的情况。结果:①TSP-1在子宫肌瘤组织和正常平滑肌组织中都有表达,但子宫肌瘤组织中TSP-1表达量明显低于正常子宫肌层组织,差异有统计学意义(t=24.44,P<0.05);②IGF-Ⅱ在子宫肌瘤组织和正常子宫肌层组织都有表达,但子宫肌瘤组织中IGF-Ⅱ表达明显高于正常子宫肌层组织,差异有统计学意义(t=33.46,P<0.05)。结论:子宫肌瘤的发展途径可能与TSP-1表达的下调和IGF-Ⅱ表达的上调促进肿瘤新生血管的形成,促进细胞的分裂增殖有关。     

血管内皮生长因子及胎盘蛋白-14在子宫内膜异位症诊断中的价值及临床意义

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)及胎盘蛋白-14(PP-14)在子宫内膜异位症诊断中的价值及临床意义。方法分析在医院接受治疗的36例子宫内膜异位症患者的临床资料并列为观察组,同时选取41例在医院进行健康检查的正常妇女作为对照组,检测两组妇女血清VEGF、PP-14水平,并分析子宫内膜异位症患者的VEGF与PP-14的相关性。结果观察组患者血清VEGF、PP-14水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。III+IV期EM患者血清VEGF、PP-14水平明显高于I+II期EM患者,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组患者VEGF与PP-14呈现显著正相关(r=0.642,P<0.01);PP-14诊断特异性高于VEGF(χ2=4.126,P<0.05),二者在诊断敏感性水平上差异无统计学意义(χ2=0.563,P>0.05)。结论 VEGF、PP-14可作为子宫内膜异位症患者诊断的敏感性指标,其表达水平与子宫内膜异位症严重程度有关,均具有一定的临床诊断价值。     

β-连环蛋白、轴蛋白在卵巢上皮细胞癌组织中的表达及意义

目的:观察β-连环蛋白(β-catenin)和轴蛋白(Axin)在卵巢上皮细胞癌组织中的表达与肿瘤的生长、转移和浸润的关系,以指导临床诊断和治疗.方法:选取该院妇产科卵巢上皮细胞肿瘤患者50例,采用免疫组织化学方法SP法检测β-catenin及Axin的表达情况.结果:组织分化级别越高,临床分期越早的卵巢上皮细胞癌患者β-catenin阳性率越低,Axin阳性率越高,差异有统计学意义(P＜0.05).β-catenin和Axin的表达与卵巢上皮细胞癌的组织分型没有关系.良性组织中β-catenin表达明显低于癌组织,Axin的表达阳性率明显高于癌组织.β-catenin和Axin在卵巢上皮细胞癌组织中的表达呈负相关性,差异有统计学意义(rs=-0.447,P＜0.05).结论:β-catenin和Axin的表达与卵巢上皮细胞癌组织的发生、发展、转移和浸润有一定的相关性,β-catenin可以理解为一种癌基因,对于癌组织的发生和转移有着促进作用,而Axin是一种保护基因,对于癌组织的发生和转移有着抑制作用.