不同孕期铅暴露对大鼠妊娠结局及胎盘MMP-9、TIMP-1表达的影响

[目的]通过观察Wistar大鼠孕期不同时段铅暴露对妊娠结局及胎盘基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）的表达影响,评价孕早期、孕后期及孕全程铅暴露的毒性特点及毒性机制。[方法]108只Wistar大鼠随机分为4组,每组27只（雌雄为21）,用0.025%醋酸铅对各实验组的孕鼠通过自由饮服的方式染：：毒。实验A组：孕早期（1～10d）饮服0.025%醋酸铅,孕后期（11～20d）饮服蒸馏水;实验B组：孕早期（1～10d）饮服蒸馏水,孕后期（11～20d）饮服0.025%醋酸铅;实验C组：孕期全程（1～20d）饮服0.025%醋酸铅。根据大鼠孕期3周推算,足月进行麻醉剖腹取胎,观察胎盘及仔鼠体重、身长、尾长、仔鼠数等;同时采集腹腔静脉血,用原子吸收光谱仪测定各组大鼠孕末期血铅水平。免疫组化法测定胎盘滋养细胞MMP-9、TIMP-1的表达。[结果]实验组孕末期血铅水平与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0.01）。各组胎盘重量及仔鼠体重、身长、尾长差异也有统计学意义（P〈0.01）,其中实验C组最低,分别为（0.31±0.13）g、（2.08±0.88）g、（2.37±0.32）cm、（0.98±0.09）cm。血铅水平与胎盘重量呈负相关（r=-0.652,P〈0.01）。孕全程染铅组胎盘MMP-9表达下降,TIMP-1表达增强。[结论]孕期不同时段铅暴露导致不同的妊娠结局。孕全程染铅的孕末期血铅水平最高,对胎盘及仔鼠影响最大。胎盘MMP-9表达下降、TIMP-1表达增强可能是铅致胎盘损伤的病理机制之一。     

孕期不同阶段铅暴露对大鼠妊娠结局的影响

[目的]通过孕期不同时段铅暴露,探讨孕早期、孕后期及孕全程铅暴露对大鼠妊娠结局的影响.[方法]0.025%醋酸铅对实验组孕鼠染毒,用原子吸收光谱仪测定孕期不同时段低水平铅暴露后大鼠孕末期血铅水平,统计异常分娩情况,记录仔鼠数和仔鼠体重.[结果]铅暴露组大鼠异常妊娠率增高,但各组间差异无显著性（P＞0.05）.实验组孕鼠孕末期血铅水平均高于0.483umol/I,组间差异有非常显著性（P＜0.01）.实验组仔鼠体重减轻,各组间差异有非常显著性（P＜0.01）.[结论]胚胎期经胎盘“染铅”,是导致子代铅蓄积的重要原因.孕期不同时段铅暴露对仔鼠生长发育产生危害.     

Smad4在孕期不同阶段铅暴露大鼠胎盘中的表达

目的观察孕期不同阶段铅暴露对大鼠胎盘中信号蛋白Smad4表达的影响。方法将72只健康清洁级Wistar妊娠大鼠随机分为4组,分别为孕早期铅暴露组[孕早期(妊娠1～10 d)饮用0.25g/L乙酸铅溶液染毒,孕晚期(妊娠11～20 d)饮用蒸馏水],孕晚期铅暴露组(孕早期饮用蒸馏水,孕晚期饮用0.25g/L乙酸铅溶液染毒),孕全期铅暴露组[孕期全程(妊娠1～20 d)饮用0.25 g/L乙酸铅溶液染毒],对照(蒸馏水)组,每组18只。测定孕末期腹腔静脉血铅水平;足月剖宫取胎盘并称重,统计不同妊娠结局。并测定大鼠胎盘中Smad4的表达。结果剔除自然分娩与异常妊娠结局大鼠后,最终入组大鼠分别为:孕早期铅暴露组16只,孕晚期铅暴露组15只,孕全期铅暴露组15只,对照组17只。大鼠孕末期血铅水平由低至高依次为对照组<孕晚期铅暴露组<孕早期铅暴露组<孕全期铅暴露组,胎盘重量由高至低依次为对照组>孕早期铅暴露组>孕晚期铅暴露组>孕全期铅暴露组,任意两组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。大鼠胎盘重量与孕末期血铅水平呈显著负相关(r=-0.652,P<0.01)。与对照组比较,各实验组大鼠胎盘中Smad4的表达均升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与孕早期铅暴露组比较,孕晚期及孕全期铅暴露组大鼠胎盘中Smad4的表达均下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论铅暴露使得胎盘中Smad4的表达升高,早期铅暴露时Smad4的表达水平明显高于晚期铅暴露组及全程铅暴露组,血铅水平增高导致Smad4表达的异常可能是致胎盘损伤的毒性机制之一。     

不同孕期铅暴露对大鼠妊娠结局及胎盘MMP-9、TIMP-1表达的影响

通过观察Wistar大鼠孕期不同时段铅暴露对妊娠结局及胎盘基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）的表达影响,评价孕早期、孕后期及孕全程铅暴露的毒性特点及毒性机制。研究人员将108只Wistar大鼠随机分为4组,每组27只（雌：雄为2：1）,用0.025%醋酸铅对各实验组的孕鼠通过自由饮服的方式染毒。     

孕期不同阶段铅暴露对大鼠胎盘和仔鼠的影响

目的探讨孕期不同阶段铅暴露对大鼠胎盘和子代的影响。方法108只大鼠随机分为4组,于孕期不同阶段饮服0.025%醋酸铅。对照组孕期全程饮服蒸馏水;实验1组孕早期染毒,孕后期饮服蒸馏水;实验2组孕早期饮服蒸馏水,孕后期染毒;实验3组孕期全程染毒。孕末期腹腔静脉取血,原子吸收光谱法测定血铅,检测仔鼠数目、体重、身长和尾长。从大体、光镜和电镜等不同水平观察铅对大鼠胎盘结构的影响。结果实验组大鼠孕末期血铅水平均高于0.483μmol/L;孕期全程染毒组的胎盘重量[(0.31±0.13)g]和仔鼠的体重[(2.08±0.88)g]、身长[(2.37±0.32)cm]、尾长[(0.98±0.09)cm]均最低,与对照组比较,差异均有统计学意义。血铅水平与胎盘重量呈负相关,与仔重无相关性。实验组胎盘海绵带滋养叶巨细胞和空泡化细胞增多,迷路带及海绵带滋养细胞呈退行性改变,绒毛周围纤维蛋白沉积增多。胎盘超微结构显示胎盘滋养细胞周围微绒毛短小、稀疏,线粒体肿胀、数目减少,粗面内质网扩张,膜上核糖体数量减少。结论孕期不同阶段铅暴露可能对胎盘滋养细胞有损伤作用,从而妨碍胎盘的血液供应及母子间营养物质及氧气的交换,导致胎盘重量减低和仔鼠生长发育不良。     

染铅大鼠胎盘MMP-9、TIMP-1表达与血铅水平的相关性

目的 观察孕期不同阶段铅暴露大鼠胎盘组织中基质金属蛋白酶-9和组织抑制因子-1的表达特征及其与孕末期血铅水平的相关性.方法 108只大鼠随机分为4组,于孕期不同阶段饮服0.025%醋酸铅.对照组孕期全程饮服蒸馏水;实验A组孕早期饮服醋酸铅,孕后期饮服蒸馏水;实验B组孕早期饮服蒸馏水,孕后期饮服醋酸铅;实验C组孕期全程饮服醋酸铅.孕末期腹腔静脉取血,用原子吸收光谱法测定血铅水平,用免疫组化法测定胎盘滋养层细胞中基质金属蛋白酶-9和组织抑制因子-1的表达.结果 ①对照组孕鼠孕末期平均血铅水平为0.04±0.01μmol/L,实验组孕鼠孕末期平均血铅水平均高于0.48μmol/L,以实验C组血铅水平最高;②基质金属蛋白酶-9和组织抑制因子-1在胎盘组织中的表达部位主要位于滋养层细胞胞质;③胎盘滋养层细胞基质金属蛋白酶-9的表达4组间总体比较差异有统计学意义(χ2=28.381,P<0.01),孕末期血铅水平轻度升高时基质金属蛋白酶-9表达阳性率增加,当血铅水平进一步升高后,基质金属蛋白酶-9表达阳性率反而下降,以血铅水平最高的实验C组阳性表达率最低,与对照组比较差异有统计学意义(χ 2=8.402,P<0.05);④胎盘滋养层细胞组织抑制因子-1的表达4组间总体比较差异有统计学意义(χ2=18.177,P<0.05),实验A、C组与对照组比较差异有统计学意义(χ2分别为10.688、8.720,均P<0.05),其表达强度随着孕末期血铅水平的增高而增强,呈剂量-效应关系.结论 孕鼠孕末期血铅水平与胎盘滋养层细胞基质金属蛋白酶-9和组织抑制因子-1的表达强度密切相关,以血铅水平最高的实验C组改变最为明显.血铅水平增高引起的基质金属蛋白酶-9和组织抑制因子-1表达失衡可能是铅致胎盘组织损伤的毒性机制之一.     

S100B蛋白在不同孕期铅暴露大鼠胎盘中的表达

目的观察S100B蛋白在孕期不同阶段铅暴露下大鼠胎盘中的表达特征。方法 108只大鼠随机分为4组,于孕期不同时期饮服0.025%醋酸铅溶液;原子吸收光谱法测定孕末期血铅水平;免疫组化法测定胎盘组织中S100B蛋白的表达。计量资料组间比较采用单因素方差分析,计数资料组间比较采用卡方检验。结果实验组血铅水平均高于0.483μmol/L,与对照组比较差异有统计学意义(F=12.10,P=0.000);S100B蛋白主要表达于大鼠胎盘细胞滋养层细胞、蜕膜细胞及血管壁细胞胞质中,实验组阳性表达率高于对照组(52.94%),且孕期全程铅暴露组(93.33%)高于孕早期(87.50%)和孕晚期铅暴露组(80.00%),差异有统计学意义(χ2=18.62,P=0.029)。结论 S100B蛋白的表达与孕期铅暴露大鼠血铅水平相关,推测其在铅致胎盘的损伤中起重要作用。     

孕期铅暴露大鼠胎盘血栓调节蛋白表达

目的观察孕期不同阶段铅暴露对大鼠胎盘血栓调节蛋白(thrombomodulin,TM)表达的影响,探讨铅胎盘毒性机制。方法 108只大鼠随机分为对照组与孕早、晚期和全程醋酸铅染毒组;对照组孕期饮服蒸馏水,醋酸铅染毒组于不同孕期给予0.025%醋酸铅染毒;原子吸收光谱法测定血铅;荧光定量PCR法测定TM mRNA表达;免疫组织化学方法测定TM蛋白表达。结果对照组胎盘组织中TM蛋白表达(吸光度A值)为(0.110±0.023),与对照组比较,孕早、晚期染毒组TM蛋白表达水平降低,孕全程染毒组升高,差异有统计学意义(P0.01);孕早、晚期和全程醋酸铅染毒组TM基因mRNA表达量分别为(0.819±0.117),(0.995±0.065)和(1.213±0.128),与对照组比较差异有统计学意义(P0.001)。结论孕期不同阶段铅暴露可影响TM蛋白和基因mRNA表达,TM表达异常可能是孕期铅暴露致胎盘损伤的重要机制之一。     

孕哺期铅暴露对雄性子代大鼠海马组织中沉默信息调节因子表达的影响

目的探讨大鼠孕期及哺乳期铅暴露对雄性仔鼠海马组织中沉默信息调节因子(silent information regulator1,SIRT1)表达的影响。方法将12只健康SPF级雌性SD孕鼠随机分为3组,分别为对照组(去离子水)、低剂量铅暴露组(0.5 g/L乙酸铅)和高剂量铅暴露组(2.0 g/L乙酸铅),每组4只。采取自由饮水的方式进行染毒,自妊娠第1天开始至仔鼠21 d断乳为止。在仔鼠断乳后,采用电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES)检测6只雄性仔鼠全血和海马组织中铅的含量,采用RT-PCR检测6只雄性仔鼠海马组织SIRT1 mRNA水平的变化,采用Western blot和免疫荧光组织化学法检测6只雄性仔鼠海马组织SIRT1蛋白水平的变化。结果孕哺期不同剂量铅暴露后,雄性仔鼠血铅和海马组织中铅含量均高于对照组,海马中SIRT1 mRNA和蛋白水平的表达均低于对照组,且高剂量铅暴露组仔鼠海马中SIRT1mRNA和蛋白水平低于低剂量组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论孕哺期铅暴露可下调仔鼠海马中SIRT1基因表达,从而可能影响海马神经元功能及仔鼠学习记忆能力。     

铅暴露对仔鼠海马中β淀粉样蛋白40表达影响

目的探讨母体铅染毒对子一代小鼠海马组织中β-淀粉样蛋白40(Aβ40)表达影响。方法雌性小鼠自妊娠第1 d开始经饮水染铅(0.3、1.0、3.0 g/L,对照组饮蒸馏水)至仔鼠出生后21 d,随机抽取各组21日龄仔鼠,分别测其血液和海马组织中铅含量,并采用western blot方法测定海马组织中Aβ40表达水平。结果孕哺期不同剂量铅暴露21 d后,仔鼠血铅、海马铅水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);western blot结果显示,中、高剂量铅暴露组仔鼠海马组织中Aβ40表达明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);相关分析显示,Aβ40蛋白表达与血铅、海马铅呈明显正相关(r=0.524、0.613,P=0.001)。结论母体铅暴露使铅在仔鼠体内蓄积,增强了仔鼠海马组织中Aβ40聚集。     

不同胎龄大鼠的组织铅分布

为研究不同胎龄胚胎／胎儿的组织铅分布规律,本研究用大鼠作动物模型,观察了４种染毒剂量下不同胎龄大鼠组织中的铅分布。将断乳２周的雌性Ｗｉｓｔａｒ大鼠１２０只,随机分为４组,分别饮含Ｐｂ２＋浓度为０、１０、５０和２００ｍｇ／Ｌ的饮水,１０周后与正常雄鼠交配,将各组孕鼠再随机分为４个亚组,于妊娠第１０、１４、１７、２０天时处死,测孕、胎鼠组织的铅含量。结果胎鼠脑铅含量随胎龄增长而增加,但脑铅浓度保持不变;胎鼠体铅含量随胎龄增长呈增加趋势,但胎龄１０天大鼠的体铅浓度高于１４天者。胎鼠体铅含量于妊娠后期较前期明显增加;胎鼠铅含量随胎龄的增加可能与妊娠后期胎鼠体内不断出现新的铅结合位点,特别是骨骼钙化有关。     

妊娠期铅暴露对新生仔鼠脑组织MDA、SOD的影响及金属硫蛋白的诱导

目的　探讨妊娠期铅暴露对新生仔鼠脑组织丙二醛 (MDA)、超氧化物歧化酶 (SOD)的影响及对金属硫蛋白 (MT)的诱导。方法　采用灌胃方式于C57小鼠孕第 0d至妊娠结束进行醋酸铅染毒 ,仔鼠出生后第 1d处死 ,取脑组织测定MDA含量及SOD活性 ,同时测定脑组织中MT的含量。结果　妊娠期铅暴露使新生仔鼠脑组织MDA及MT含量升高 ,SOD活性降低 ,均呈明显的剂量 效应关系 (P <0 0 1)。结论　铅的脑发育毒性与其引起脑组织脂质过氧化产物MDA增高及抗氧化酶SOD活性降低有关 ;金属铅可诱导发育中脑组织MT的产生 ,提示MT在体内铅的转运、代谢乃至解毒方面可能具有一定作用     

GDM大鼠胎盘脂联素基因表达水平与胎鼠出生体重的关系

目的:探讨妊娠期糖尿病大鼠胎盘脂联素与胎鼠出生体重的关系。方法:育龄雌性SD大鼠受孕后随机分为正常妊娠组、妊娠期糖尿病组、共轭亚油酸治疗组。腹腔内注射45mg/kg链尿佐菌素,建立妊娠期糖尿病大鼠模型。注射药物3天后用共轭亚油酸3.0g/(kg·d)灌胃至孕19天,建立共轭亚油酸治疗组大鼠模型。孕19天后解剖大鼠,计数胚胎存活数并测量胎鼠体重。采用葡萄糖氧化酶法测定血糖;采用放射免疫法测定血清胰岛素;采用ELISA试剂盒检测大鼠血清脂联素和胎盘组织脂联素浓度;采用RT-PCR技术检测脂肪组织脂联素和过氧化物增殖物激活受体γmRNA的表达和胎盘组织脂联素mRNA的表达,并进行半定量分析。结果:①共轭亚油酸可降低妊娠期糖尿病大鼠血糖和胰岛素水平,增加脂肪组织中过氧化物增殖物激活受体-γmRNA、脂联素mRNA的表达和胎盘组织中脂联素mRNA的表达水平,相应地,妊娠期糖尿病大鼠血清中和胎盘组织中脂联素的浓度也升高。②3组大鼠的胚胎存活数无统计学差异。③胎盘脂联素mRNA表达水平与胎鼠出生体重呈显著负相关关系。结论:①共轭亚油酸可降低妊娠期糖尿病大鼠血糖水平,并改善血糖升高后刺激胰岛素大量分泌的状态,改善胰岛素抵抗。②共轭亚油酸可通过激活过氧化物增殖物激活受体γ来提高妊娠期糖尿病大鼠脂联素水平。③胎盘组织有脂联素基因的表达,妊娠期糖尿病病理状态可影响脂联素基因在胎盘的表达水平,共轭亚油酸可上调脂联素mRNA的表达水平,并且胎盘组织中脂联素浓度升高。④妊娠期糖尿病病理状态对胚胎存活数影响不大,但胎鼠出生体重增加。⑤胎盘来源的脂联素可能参与了胎儿生长发育的调节。     

饮酒法建立胎儿酒精中毒综合征大鼠模型

目的使用饮酒法建立胎儿酒精中毒综合征大鼠模型,评估动物模型的形态学变化。方法性成熟雌性大鼠在孕前饲以酒精溶液,受孕后分组,饮酒组在孕期G9-G12饲以20%(v/v)酒精溶液,对照组在孕期一直使用普通饮水饲养。评估各组胚胎和新生鼠的形态学变化。结果饮酒组新生大鼠的头部长度,头身全长,体重,双睑间距和睑裂长度均较对照组明显下降,G20期胚胎畸形的例数也明显增加。结论使用饮酒法建立的胎儿酒精中毒综合征大鼠模型表现符合酒精胚胎发育毒性损害的形态学改变。     

围产期铅暴露对新生大鼠血铅含量的影响

目的　了解铅通过母体对生长发育期仔代血铅的影响。方法　对不同浓度低水平铅暴露后的大鼠仔代的血铅进行测定。结果　铅可由母体经胎盘和乳汁传递给仔代。结论　胚胎期和哺乳期经胎盘和乳汁“染铅” ,是导致子代铅蓄积的重要原因。     

孕期苯并(a)芘暴露对仔鼠肝细胞凋亡相关蛋白表达水平的影响

目的探讨孕期不同剂量苯并(a)芘暴露对仔鼠肝脏凋亡相关蛋白Bcl-xl和Bax表达水平的影响。方法将雌雄大鼠合笼后雌性SD大鼠见阴栓确定为受孕,以检出日为孕期第0 d。将孕鼠随机分为4组,每组8只,分为对照组(玉米油)和苯并(a)芘处理组(0.75 mg/kg、1.5 mg/kg和3 mg/kg)。从妊娠第3 d开始经灌胃苯并(a)芘直到妊娠第17 d结束,分别在孕0、4、7、14、19 d称孕鼠体重。待其自然分娩后24 h内测量仔鼠的体重、身长及尾长,然后取仔鼠肝脏,采用Western blot方法检测仔鼠肝脏中Bcl-xl和Bax蛋白的表达水平。结果随着孕期苯并(a)芘暴露水平的增加,新生仔鼠体重、身长、尾长等生长发育指标均有一定程度的下降,但未达到显著性差异(P>0.05)。Western blot结果显示,与对照组相比,中、高剂量染毒组仔鼠肝脏的Bcl-xl蛋白表达均明显下降,Bax蛋白表达均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论本研究建立了一种低水平的苯并(a)芘暴露模型,随着孕期苯并(a)芘染毒剂量的增加,新生仔鼠肝脏的凋亡相关蛋白Bcl-xl/Bax比值下降,提示细胞凋亡可能是参与孕期苯并(a)芘暴露导致新生仔鼠肝脏毒性作用的机制之一。     

MMP-9及TIMP-1在妊娠高血压综合征患者母胎界面的表达及意义

目的:研究基质金属蛋白酶(m atrix m etalloprote inases,MMP)-9及其组织抑制物(tissue inh ib itor of m etallo-prote inases,TIMP)-1在妊娠高血压综合征(妊高征)患者胎盘组织的表达情况及其与妊高征发病的关系。方法:采用免疫组织化学SP法检测48例妊高征(轻度10例、中重度38例)胎盘组织中MMP-9及TIMP-1的表达情况;同时做HE染色观察妊高征时胎盘的病理改变。结果:MMP-9、TIMP-1主要表达于滋养细胞、绒毛间质血管壁及蜕膜组织中。轻度妊高征MMP-9呈阳性表达,TIMP-1蛋白呈强阳性表达;中、重度妊高征MMP-9和TIMP-1蛋白均呈弱阳性表达,分别与正常妊娠和轻度妊高征相比表达均减弱,差异有极显著性(P<0.01)。中重度妊高征时胎盘组织绒毛数及间质血管数减少,出现典型的纤维素样坏死。结论:母胎界面MMP-9/TIMP-1表达异常与妊高征发病及胎盘病理改变的发生发展有关。     

Evaluation of Developmental Toxicity of Amitraz in Sprague-Dawley Rats

This study investigated the potential adverse effects of amitraz on the initiation and maintenance of pregnancy in Sprague-Dawley rats as well as its effects on embryo–fetal development after maternal exposure during the entire pregnancy period. Amitraz was administered to pregnant rats by gavage from days 1 to 19 of gestation at dose levels of 0, 3, 10, and 30 mg/kg/day. All dams underwent a caesarean section on day 20 of gestation and their fetuses were examined for any external, visceral, and skeletal abnormalities. At 30 mg/kg, maternal toxicity manifested as an increase in the incidence of abnormal clinical signs and a lower body weight gain and food intake. Developmental toxicity included an increase in the fetal death rate, a decrease in the litter size, and a reduction in the fetal body weight. In addition, there was an increase in the incidence of fetal external, visceral, and skeletal abnormalities. At 10 mg/kg, maternal toxicity observed included a decrease in the body weight gain and a decrease in food intake. In addition, minimal developmental toxicity, including a decrease in the fetal body weight, an increase in the visceral and skeletal aberrations, and a delay in fetal ossification. There were no signs of either maternal toxicity or developmental toxicity at 3 mg/kg. These results show that amitraz administered during the entire pregnancy period in rats is embryotoxic and teratogenic at the maternally toxic dose (i.e., 30 mg/kg/day) and is minimally embryotoxic at a minimally maternally toxic dose (i.e., 10 mg/kg/day). Under these experimental conditions, the no-observed-adverse-effect level of amitraz for both dams and embryo-fetal development is estimated to be 3 mg/kg/day.