华支睾吸虫成虫CsRPEF基因的生物信息学分析

目的筛选华支睾吸虫的功能基因并进行相应的生物信息学分析。方法使用PCGENE软件、Antheprot-5软件、ExPASy在线分析工具、NCBI上的Blastx程序进行华支睾吸虫RNA聚合酶Ⅱ延长因子(CsRPEF)基因的生物信息学分析。结果获得了CsRPEF基因的序列特征,推测到了CsRPEF的同源蛋白并预测出CsRPEF编码蛋白的分子量、等电点、柔曲性、疏水性、功能性位点等二级结构特征。结论华支睾吸虫成虫CsRPEF基因是一新筛选的功能基因,CsRPEF蛋白是可能参与华支睾吸虫基因转录途径的重要因子。CsRPEF基因的生物信息学分析可为其进一步进行生物学功能的实验研究奠定基础。     

华支睾吸虫ATP合酶B亚基全长基因的生物信息学分析

目的从华支睾吸虫全长cDNA质粒文库中识别ATP合酶B亚基,利用生物信息学方法预测其结构和功能特征,用以指导实验研究。方法利用生物信息学网站的各种在线分析工具和Vector NT Isuite软件包,识别华支睾吸虫ATP合酶B亚基基因并预测编码蛋白质的各种结构与功能特征,并根据该基因构建种系分子进化树。结果Blastx分析该基因为全长基因,属于ATP合酶B亚基家族,其分子进化树与种系进化过程非常吻合。该基因全长1008bp,编码300个氨基酸,含有线粒体转运肽、两个跨膜区、一个核定位序列和多个磷酸化位点,具有较稳定的理化性质。结论ATP合酶B亚基是一个理想的真核种系进化的分子标志。华支睾吸虫ATP合酶B亚基具有线粒体和细胞核的双重定位序列,提示该蛋白可能在华支睾吸虫的能量代谢途径中发挥独特的调节作用。     

华支睾吸虫LAP2基因的生物信息学分析及克隆表达、组织定位

目的利用生物信息学方法分析华支睾吸虫LAP2全长基因的结构和功能,并将该基因克隆至原核表达载体进行表达、纯化,为进一步研究LAP2功能奠定基础。方法利用生物信息学相关软件,分析华支睾吸虫LAP2基因及其蛋白的结构、生物学和免疫学功能特征。针对LAP2的EST序列的编码区设计引物,从华支睾吸虫囊蚴cDNA质粒中扩增目的基因,克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,经PCR、双酶切及DNA测序鉴定的阳性克隆诱导目的蛋白表达、亲和层析纯化、免疫印迹鉴定及组化定位。结果华支睾吸虫LAP2基因全长为1761bp,其编码序列长度为1662bp,编码553个氨基酸,理论分子量是59696.5Da,与人的该基因氨基酸序列相似性为26.7%,一致性仅为15.4%。该基因在大肠杆菌中可被高效表达,纯化的重组蛋白能被感染华支睾吸虫的大鼠血清识别,免疫组化结果表明该重组蛋白定位于华支睾吸虫成虫的肠支及表膜。结论华支睾吸虫LAP2在大肠杆菌中呈高效的可溶性表达,具有良好的抗原活性,可能为华支睾吸虫成虫分泌排泄抗原的组份之一。     

华支睾吸虫的扫描电镜观察

本文应用扫描电镜对华支睾吸虫体表微细结构、感觉器的类型和分布等进行了观察。其中发现腹吸盘腔的底部有互相连接比较粗大的枝状物以及具纤毛的环状乳突和无纤毛的扁平乳突,这些都是过去文献未见报道过的。     

应用生物信息学方法筛选华支睾吸虫功能基因-Cde42样蛋白

目的 通过建立华支睾吸虫成虫cDNA文库，筛选其功能基因，以研制华支睾吸虫的药物靶标。方法 应用SMART方法构建华支睾吸虫成虫cDNA文库，进行大量EST测序，然后应用生物信息学方法分析EST序列。结果 从华支睾吸虫成虫cDNA文库中筛选出Cdc42样蛋白基因。结论 应用生物信息学方法从华支睾吸虫成虫cDNA文库中筛选出Cde42样蛋白基因。     

华支睾吸虫特异性抗原的筛选

华支睾吸虫特异性抗原的筛选田海生苏畅张耀娟（南京医科大学寄生虫学教研室，南京２１００２９）关键词华支睾吸虫；电泳；特异性抗原华支睾吸虫、血吸虫、肺吸虫、肝片形吸虫和姜片虫成虫间存在着共同抗原，并引起交叉反应，已为多年来中外学者的工作所证实［１～４］...     

华支睾吸虫RPEF基因的克隆与序列分析

目的:构建华支睾吸虫成虫RNA聚合酶Ⅱ延长因子(RPEF)基因PET重组质粒，分析其编码序列。方法:根据RPEF基因已知序列设计一对引物，用PCR技术从华支睾吸虫质粒库模板中扩增RPEF基因片段；将目的基因PCR产物和空质粒PET30a( )同时用BamH Ⅰ和Sal Ⅰ限制性内切酶双酶切，纯化回收后建立连接反应并转化大肠杆菌BL21。将构建的重组质粒PET30a( )-RPEF经双酶切、PCR、测序鉴定后证明获得正确的重组克隆。结果：成功构建出RPEF基因原核重组质粒PET30a( )-RPEF。序列分析表明，RPEF蛋白与鼠类RNA polymerase Ⅱ延长因子具有很高的同源性。结论：RPEF基因在华支睾吸虫基因表达调控机制中可能起重要作用。RPEF基因重组表达载体PET．30a( )-RPEF的成功构建可为更深入地分析其基因功能、肝吸虫病药物靶标的筛选奠定基础。     

华支睾吸虫感染情况调查

目的 :分析肝吸虫的感染情况 ,为肝吸虫的防治提供依据。方法 :皮试法、直接涂片便检法。结果 :皮试法阳性率为 5 6.87% ,男女无显著性差异 ;便检法感染率为 68% ,男女感染率无显著性差异。结论 :吃生鱼是引起该地肝吸虫感染的主要原因 ,今后要加强肝吸虫病的宣传与治疗 ,改善不良饮食习惯     

华支睾吸虫SPE16.9基因克隆和序列分析

目的 通过筛选cDNA文库识别华支睾吸虫新基因,为进一步研究其功能及其应用奠定基础。方法 对华支睾吸虫cDNA文库进行筛选,通过Blastn程序进行序列比对,识别华支睾吸虫新基因,并应用软件程序对其进行分析。结果 筛选到一个475bp的核酸序列,编码153aa,理论分子量为16．9kDa,理论等电点（pI）为6．19,疏水氨基酸（AILFWV）占36％,带电荷氨基酸（RKHYCDE）占30％,极性氨基酸（NCQSTY）占28％．酸性氨基酸（DE）和碱性氨基酸（KR）各占9％。经BLAST分析,该蛋白属于ML域（MD-2-related lipid-reeognition）家族．是一个新的分泌蛋白基因。结论 发现华支睾吸虫分泌蛋白基因,可能有作为诊断候选抗原的价值。     

华支睾吸虫乳酸脱氢酶(CsLDH)基因的识别及其结构与功能分析

目的分析华支睾吸虫乳酸脱氢酶基因及其编码蛋白的结构和特性,用于指导其生物学功能的实验研究。方法利用多种生物信息在线分析工具和分析软件包,从华支睾吸虫全长cDNA质粒文库的表达序列标签(EST)中识别乳酸脱氢酶(CsLDH)基因,预测该基因编码蛋白质的理化特性、氨基酸修饰位点、功能域、亚细胞定位、拓扑结构、二级结构、三维结构及酶学特性和免疫学特性等。结果该基因全长1224bp,编码区为79～1062,编码328aa,理论分子量为35633Mr,等电点为8.13,半衰期长,理化性质稳定,含有多个潜在的磷酸化和酯酰化位点。预测该蛋白有3个跨膜区,其拓扑结构为N端在膜内侧、C端在膜外侧。有两个主要的线性抗原表位aa10～aa20和aa94～aa102,后者位于膜外,与日本血吸虫LDH相应表位完全一致,与人和小鼠LDH相应表位仅有1个氨基酸差异。该表位中Arg102是酶催化中心的关键氨基酸之一,模拟三维结构显示组成催化中心的另外两个关键氨基酸残基Asp162和His189的空间位置也靠近该表位,酶的催化中心贯穿膜内外。结论推测华支睾吸虫乳酸脱氢酶不仅负责将糖酵解产生的丙酮酸转化为乳酸,而且还能将乳酸直接排出体外;可作为筛选水溶性抗华支睾吸虫药物的靶标;可介导特异性抗体对虫体的ADCC作用和补体的杀伤作用,以及对酶活性的抑制作用,是一个重要的疫苗侯选抗原。     

肇庆地区淡水鱼感染华支睾吸虫囊蚴情况调查

目的了解目前肇庆地区常见食用淡水鱼感染华支睾吸虫囊蚴的情况。方法从肇庆所辖的四会市和端州区两地采集鲩鱼和鳙鱼样本,用胃蛋白酶消化法检查鱼肉中的华支睾吸虫囊蚴。结果共检查鲩鱼328尾,其华支睾吸虫的平均感染率约为48.78%,阳性鱼平均感染度约为4.66。共检查鳙鱼331尾,其华支睾吸虫的平均感染率约为37.46%,阳性鱼平均感染度约为2.94。结论肇庆地区的淡水鱼中存在一定程度的华支睾吸虫感染,其中鲩鱼的感染情况较鳙鱼严重。     

华枝睾吸虫铁蛋白分子生物学特性的研究(英文)

目的华枝睾吸虫铁蛋白的表达,定位和酶特性的进行研究。方法华枝睾吸虫表达序列标志(EST)基因文库中选择克隆,作序列测定及基因分析。经酶切并重组到pRSET质粒,在E.coli BL21[DE3]pLysS菌株中表达和提纯重组蛋白,并用于鼠抗CsFtn重组蛋白免疫血清制备及亚铁氧化酶活性。结果华枝睾吸虫铁蛋白cDNA(CsFtn),具565个核苷酸,编码166个氨基酸。CsFtn核苷酸序列中含一环颈结构类似序列,与铁离子调控序列(iron-responsive element)相似。CsFtn多肽序列与其它吸虫铁蛋白有较高的序列同一性。通过基因亲远关系分析,和多种血吸虫铁蛋白的轻链位于同一簇。CsFtn重组蛋白和马铁蛋白比较,同样具有亚铁氧化酶活性,呈现铁吸收转化能力。免疫组化分析表明,CsFtn重组蛋白定位于肝吸虫成虫卵黄滤泡和虫卵内。结论CsFtn为肝吸虫卵黄铁蛋白的基因。     

华支睾吸虫乙醛脱氢酶基因的克隆、表达和序列分析

[目的]通过筛选华支睾吸虫成虫cDNA质粒文库,发现并识别新基因,将发现的新基因编码区克隆到原核表达质粒pGEX-4T-1并表达出融合蛋白.[方法]用文库通用引物对华支睾吸虫cDNA质粒文库进行PCR扩增,对产物为500 bp以上的质粒测序,结果在NCBI和ExPasy网站上进行序列分析,并应用ORFfind、ClustalW、NCBI Conserved Dom ain Search等程序对其进行开放阅读框(ORF)、进化树及结构域分析.根据载体多克隆位点及新基因ORF设计引物,PCR扩增,产物克隆到目的载体上.筛选并鉴定出阳性克隆,对鉴定过的重组体进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE电泳鉴定.[结果]发现CsALDH基因,完整阅读框含1467个碱基,编码489个氨基酸,理论相对分子质量Mr≈52.564×103,理论pI为5.43.序列分析表明,CsALDH基因编码的氨基酸序列与其它物种有较高的同源性,CsALDH与爪蛙属乙醛脱氢酶的同源性为59%,具有乙醛脱氢酶保守功能域.构建的重组原核表达质粒经鉴定与目标基因相符.电泳显示表达产物在Mr≈78×103处有一条特异性条带.[结论]发现华支睾吸虫磷酸甘油醛脱氢酶基因,成功构建重组原核表达质粒并表达出融合蛋白.     

华支睾吸虫病137例临床分析

目的 探讨华支睾吸虫病在临床上有效的诊断与治疗方法。方法对137例经临床诊断为华支睾吸虫病患者进行流行病学个案调查及回顾性分析。结果137例华支睾吸虫病患者中有食鱼生史占96．35％;无鱼生史占3．65％。其中49例为胆囊炎、胆结石、胆息肉等肝胆管疾病,需要手术治疗,在手术中均发现华支睾吸虫成虫;88例实验诊断及B超辅助检查诊断为华支睾吸虫病,经及时治疗后痊愈。结论应提高华支睾吸虫病的认识,减少误诊漏诊,在并发症出现前尽早治疗效果最为理想。     

肇庆市华支睾吸虫病中间宿主感染情况及流行因素调查

目的了解肇庆市华支睾吸虫（肝吸虫）中间宿主感染的情况及流行因素,阻断和控制肝吸虫病在我市的传播流行。方法流行因素现场调查;淡水螺类采用解剖压片法;淡水鱼采用人工消化法;猫、狗、猪采用动物肝脏胆囊解剖法。结果肇庆市家常淡水鱼中的鲩鱼、鳙鱼、鲤鱼等3种鱼检出华支睾吸虫囊蚴,其中感染率最高的是鲩鱼为20.0%,各种鱼类总感染率为6.67%。阳性鱼主要集中在端州、高要和鼎湖等地。第一中间宿主淡水螺及保虫宿主均没检出阳性。结论鼎湖区、高要市是肇庆市肝吸虫病传播流行的源头,也是我市肝吸虫病防控的重点所在。     

广州市2006-2010年华支睾吸虫及土源性线虫感染状况分析

目的了解近年广州市人群华支睾吸虫及土源性线虫感染现状,评估防治效果,为制定防治策略提供依据。方法根据监测方案,2006-2010年对全市12个区、县级市采用分层整群抽样法进行人群调查,采用改良加藤氏厚涂片法粪检虫卵。结果共粪检11477人,总感染率为9.1%,其中华支睾吸虫感染率为7.46%。2009年人群的感染率为24.39%。地区分布中番禺区总感染率最高为34.48%,其次为南沙区和黄埔区;增城、南沙等农村土源性线虫仍有一定的感染率,各区县之间的感染率差异具有统计学意义(P<0.01)。结论华支睾吸虫感染率维持在较高水平,土源性线虫感染率下降较明显,应采取有效的综合防治措施,降低人群寄生虫感染率。