均匀设计法研究射干中异黄酮成分联用抗炎效果

目的:研究射干有效成分白射干素(DI),鸢尾黄素(TE)和野鸢尾黄素(IRI)联用抗炎效果及各成分间的最佳配比剂量。方法:应用LPS诱导的RAW 264.7细胞建立细胞炎症反应模型。采用Griess试剂法测定NO释放量,利用均匀设计法研究3个单体联用对炎症模型的影响,得到主要作用成分和最佳配比剂量。结果:DI、TE和IRI联用对LPS刺激的RAW 264.7细胞模型NO生成的抑制作用强,最佳配比剂量为2.23 mg·kg~(-1),24.22 mg·kg~(-1)及1.41 mg·kg~(-1);主要作用成分为TE和IRI,DI对TE和IRI的抗炎效果有协同作用;验证性实验结果与实验拟合的结果无统计学意义。结论:均匀设计法可用于多药物联用的定量分析,但其结果需经实验确证。     

白术多糖对自体肝移植大鼠缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨白术多糖（atractylodes macrocephalaon polysaccharide,AMP）对自体肝移植大鼠肝脏缺血再灌注损伤（ischemia-reperfusion injury,IRI）的干预作用。 方法 SD大鼠随机分为假手术组、模型组和白术多糖组,采用大鼠自体肝移植诱导IRI模型。造模后,给药组分别灌服相应的受试药物,假手术组和模型组灌服等量的生理盐水。分别于术后1、6、24 h取血测定大鼠血清丙氨酸转氨基酶（ALT）、天门冬氨酸转氨基酶（AST）、总胆红素（TBIL）、直接胆红素（DBIL）含量;ELISA法测定大鼠血清丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）含量;取固定部位肝组织做病理组织学检查;免疫组化方法检测肝组织中NF-κB的表达。 结果 模型组NF-κB蛋白表达增强,白术多糖组与模型组比较明显减弱（P <0.05）;白术多糖能明显提高SOD的含量,并降低大鼠血清中ALT、AST、TBIL、DBIL及MDA含量;病理组织学检查结果显示白术多糖组肝脏淤血、肿胀程度明显轻于模型组;肝细胞变性坏死程度,汇管区炎症细胞浸润程度也明显轻于模型组。 结论 白术多糖可减轻自体肝移植大鼠肝脏IRI,其作用机制可能与其抑制NF-κB表达、干扰氧自由基对肝细胞膜的破坏,促进降酶及减轻形态学损伤有关。     

肥胖T2DM肝胃郁热证患者胰岛素分泌特点研究

目的:研究肥胖T2DM的主要证型肝胃郁热证患者的胰岛素分泌特点,为探讨肝胃郁热证的科学内涵做一粗浅尝试。方法:通过胰岛素耐量实验,将肥胖T2DM肝胃郁热患者与正常组和肥胖组比较,检测0点、30min1、20min免疫反应性胰岛素(IRI)、真胰岛素(TI)和胰岛素原(PI)。结果:同对照组相比,肥胖2型糖尿病肝胃郁热证患者胰岛素分泌低钝,延迟,早时相分泌远低于正常者;Homa-β细胞功能指数、胰岛素抵抗指数存在显著差异。结论:肥胖2型糖尿病肝胃郁热证患者胰岛素分泌的数量、质量及胰岛素分泌的时相性都存在明显的病理改变,证实胰岛β细胞功能减退及胰岛素抵抗双重因素导致该患者群血糖居高不下。同时本研究提示采用真胰岛素评估β细胞功能结果更真实。     

芦荟凝胶对大鼠缺血再灌注损伤肾脏的保护作用

目的观察大鼠肾脏缺血再灌注损伤(IRI)时芦荟凝胶对肾组织的保护作用。方法建立大鼠IRI模型;将实验动物分成IRI模型组、芦荟凝胶高、低剂量(300、100mg/kg)组及假手术组,分别采用酶速率法、酶终点法和比色法测定各组大量血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)水平及肾组织匀浆中丙二醛(MDA)水平,并对肾组织进行病理学比较。结果芦荟凝胶高剂量组和低剂量组在术后不同时间BUN、Cr水平均低于IRI组,且随时间的延长这种差异更为明显;不同组别大鼠肾组织局部MDA水平在不同时间内的差异亦有显著性,芦荟凝胶高剂量组和低剂量组MDA水平均呈较明显的下降趋势;组织病理切片显示,芦荟凝胶可明显改善肾小球、肾小管的充血、肿胀等现象。结论芦荟凝胶对大鼠肾IRI后肾组织具有一定的保护作用,该作用与药物剂量呈现正相关。     

中医药对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制的实验研究进展及思考

缺血再灌注损伤（IRI）是指组织缺血再灌注后,由于活性氧产生、中性粒细胞活化等导致炎症、细胞凋亡和损伤的过程,且再灌注后加重组织细胞的代谢障碍和结构破坏,使组织损害进一步加重。人体多种组织都存在IRI现象,     

脂糖舒对Ⅱ型糖尿病大鼠生化指标的影响

目的 :探讨脂糖舒抗Ⅱ型糖尿病的作用。方法 :采用链脲佐菌素制作Ⅱ型糖尿病大鼠模型 ,分别用生理盐水、二甲双胍、格列齐特和不同剂量的脂糖舒灌胃9周(每日1次) ,并取健康大鼠作正常对照 ,测定各组大鼠空腹血浆中胰岛素(Ins)、葡萄糖(Glu)、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(NEFA)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL_C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL_C)含量 ,以及测定肝糖原含量 ,计算体重指数(BMI)、胰岛素抵抗指数(IRI)、胰岛素敏感指数(ISI)。结果 :二甲双胍、格列齐特和两实验剂量的脂糖舒均显著降低模型大鼠的BMI、IRI以及血浆中Ins,Glu ,TG ,NEFA ,TC和LDL_C含量 ,并升高ISI及HDL_C和肝糖原含量。其中 ,高剂量(2g/kg)脂糖舒降低糖尿病模型大鼠BMI,IRI及血浆Ins,Glu,TG ,NEFA和LDL_C及升高肝糖原含量的作用优于格列齐特(P<0.05～0.01) ,降低NEFA和升高肝糖原含量的作用优于二甲双胍(P<0.01) ,对其余生化指标的影响分别与格列齐特和二甲双胍作用相当(P>0.05)。脂糖舒大、小剂量组间降低IRI和升高ISI作用呈量效正相关。结论 :脂糖舒对Ⅱ型糖尿病有明显的疗效     

20(S)-原人参二醇对肝星状细胞凋亡及激活的作用

目的研究20(S)-原人参二醇皂苷元对肝星状细胞凋亡及激活的作用。方法利用体外培养的HSC细胞,通过台盼蓝染色、MTT法、Hoechst33258细胞核染色、DNA Ladder以及Western Blot和荧光定量PCR等方法检测细胞凋亡,利用肝纤维化大鼠模型研究肝纤维化及HSC细胞激活,同时利用TAA诱导的肝纤维化模型研究PPD对肝纤维化抑制作用和HSC细胞激活的影响。结果 PPD可诱导HSC细胞凋亡同时也抑制肝星状细胞的激活。结论 PPD具有较明显的抗肝纤维化的作用,可作为肝纤维化治疗新的的潜在药物。     

白芍总甙对大鼠肝纤维化形成中肝窦内皮细胞的作用及血清TNF-α的表达研究

目的:研究肝纤维化形成中白芍总甙对肝窦内皮细胞血管化的逆转作用及血清,INF-α的表达.方法:用双抗体夹心法测定法分别检测肝硬化血清中TNF-α水平.结果:各组大鼠肝脏超微结构结果示,治疗组在术后3周无明显肝窦细胞血管化,对照组在术后第三周明显出现肝窦细胞血管化;血清TNF-α明显降低,并与对照组差异有显著性(P＜0.05),对照组在术后第2周和第3周均明显升高,且第3周升高更明显(P＜0.05)).结论:白芍总甙能延缓肝纤维化形成,TNF-α水平与肝纤维化程度密切相关,并可反映肝脏损害的程度.     

肝巨噬细胞调控肝星状细胞活化影响肝纤维化的研究进展＊

肝纤维化是慢性肝病中一种可逆性的损伤修复反应，以肝组织内细胞外基质过度增生与沉积为主要病理表现。活化的肝星状细胞在肝纤维化的进程中发挥着重要作用，其活化受多种因素影响。肝巨噬细胞作为肝脏免疫微环境的重要组成部分，对肝星状细胞的活化、增殖与迁移和细胞外基质的沉积、单核细胞的招募等都有重要意义。相关细胞疗法和中医药可通过调控肝巨噬细胞与肝星状细胞的相关通路及靶点来改善肝纤维化程度。     

肝喜合剂含药血清对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究肝喜合剂对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法 采用不同浓度肝喜合剂含药血清(10%、15%、20%)处理HepG2细胞，CCK-8法检测细胞存活率，流式细胞术检测HepG2细胞凋亡情况，RT-qPCR和Western blot法检测细胞凋亡相关因子Bax、Puma、caspase-9 mRNA和蛋白表达。结果 肝喜合剂含药血清可抑制HepG2细胞生长(P<0.05,P<0.01),促进HepG2细胞凋亡(P<0.05,P<0.01),升高Bax、Puma、active caspase-9蛋白表达及Bax、Puma mRNA表达(P<0.05,P<0.01),并呈剂量依赖性。结论 肝喜合剂可有效抑制HepG2细胞增殖，促进凋亡，其机制可能与促进凋亡相关因子Bax、Puma、caspase-9表达有关。     

益气活血法对血瘀证心肌缺血再灌注损伤兔血液流变性及内皮素的影响

目的研究益气活血法对血瘀证心肌缺血再灌注损伤（IRI）兔血液流变性及内皮素的影响,以探讨其对心肌IRI保护作用机制。方法家兔随机分为空白组、血瘀证组、IRI组、预处理组、丹参组和加味丹参饮组,建立血瘀证兔IRI模型,以益气活血的加味丹参饮对该模型进行干预,检测血液流变性和血浆内皮素～1（ET-1）水平变化。结果IRI组各项血液流变学指标及血浆ET-1水平均显著增高,与空白组比较差异具有统计学意义;而加味丹参饮组血液流变学指标及血浆ET-1水平降低,与IRI组比较差异有统计学意义。结论益气活血法可以改善IRI兔的血液流变学状态,调节血管内皮功能,可能为其保护IRI心肌作用机制之一。     

中西医结合治疗乳腺癌术后复发肺肝转移1例

乳腺癌是常见的妇科恶性肿瘤,手术治疗虽可取得一定效果,但术后复发及肺、肝、骨和脑转移仍多见。现将笔者治疗乳腺癌术后复发转移肺、肝1例报道如下。     

蛇毒复合酶对人肝癌细胞BEL-7402的抑瘤研究

观察蛇毒复合酶对人肝癌细胞 BEL - 74 0 2体外生长的抑制作用。经体外细胞培养 ,采用台盼兰染法、细胞形态观察和流式细胞术 ,检测人肝癌细胞的生长抑制率 ,以及细胞形态和细胞周期的变化。结果 ,蛇毒复合酶对人肝癌细胞有极强的抑瘤作用 ,8h和 12 0 h抑瘤率分别达 79.5%和 94 .5%。镜检及涂片染色发现癌细胞胞膜破裂、胞质外溢。流式细胞术分析显示蛇毒复合酶主要杀伤 G0 / G1期人肝癌细胞 ,同时 ,阻滞 S期细胞进入 G2 / M期。说明 :蛇毒复合酶对人肝癌细胞具有一定体外抑瘤作用 ,其作用机理与破坏细胞胞膜和干扰细胞生长周期有关。     

甘草酸表面修饰壳聚糖纳米粒体外对肝实质细胞的靶向结合作用

目的研究甘草酸表面修饰壳聚糖纳米粒对肝实质细胞的靶向结合作用。方法通过流式细胞术研究大鼠肝实质细胞对罗丹明B异硫氰酸标记壳聚糖纳米粒(RBITC-CS-NPs)和甘草酸表面修饰壳聚糖纳米粒(RBITC-CS-NPs-GL)的结合及摄取作用。结果RBITC-CS-NPs和RBITC-CS-NPs-GL与肝实质细胞结合后,与空白对照组对比,细胞体积(FS)增大、胞浆内的颗粒(SS)增多;RBITC-CS-NPs-GL结合组荧光强度表达高于RBITC-CS-NPs结合组。以不同浓度的RBITC-CS-NPs和RBITC-CS-NPs-GL分别处理肝实质细胞,在25μg·mL-1和50μg·mL-1浓度下,细胞对RBITC-CS-NPs-GL的转染率显著高于RBITC-CS-NPs组(P<0.01),在高浓度(300g·mL-1、500μg·mL-1)下,细胞对纳米粒的摄取呈饱和状态,转染效率达90%以上;与细胞结合的起始阶段(1h内),RBITC-CS-NPs-GL与肝实质细胞通过甘草酸介导的主动靶向结合作用明显。结论肝实质细胞表面存在甘草酸的结合位点,以甘草酸修饰壳聚糖纳米粒可通过甘草酸介导的方式促进含药载体的肝靶向输送。     

加味丹参饮含药血清诱导BMSCs移植IRI大鼠对心肌bFGF的影响

目的:观察加味丹参饮(JWDSY)含药血清诱导的骨髓间充质干细胞(BMSCs),移植于心肌缺血再灌注损伤(IRI)大鼠梗死心肌边缘后,对心肌细胞碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)蛋白表达的影响.方法:全骨髓贴壁法培养BMSCs,流式细胞术鉴定细胞表面抗原CD90,CD34,CD45.传至P3代时,用JWDSY含药血清诱导3d.建立大鼠心肌IRI造模,在心肌梗死区边缘移植血清诱导的细胞悬液.3,7,14 d后,取心肌组织用免疫组化法检测心肌细胞bFGF表达.结果:JWDSY血清组bFGF的积分吸光度(IA)在3,7,14d后分别升高至5 758.18±465.17,6 589.61±432.89,8 015.62±366.34;与模型组差异有统计学意义(P＜0.05),且随时间逐渐升高,比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:JWDSY血清诱导的BMSCs移植于IRI大鼠心梗区边缘后,可以改善心肌组织的病理学形态,增加心肌细胞bFGF蛋白表达,提示JWDSY含药血清诱导的BMSCs对IRI大鼠的心肌细胞有一定的保护作用.     

基于肝细胞焦亡的黄连温胆汤干预IGT IR的机制

基于肝细胞焦亡途径,探讨黄连温胆汤干预糖耐量低减(impaired glucose tolerance,IGT)大鼠胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)机制。高脂饮食长程(20周)喂养联合高温高湿环境及少动的不良生活方式建立IGT模型。实验分为空白组、模型组、盐酸二甲双胍组(阳性药组)(0.05 g·kg~(-1)·d~(-1))及黄连温胆汤组(7.8 g·kg~(-1)·d~(-1)),连续灌胃给药4周。测量大鼠体质量、体长和腹围,计算Lee's肥胖指数;血糖仪检测空腹血浆葡萄糖(fasting plasma glucose,FPG)及餐后2 h血糖(2-hour plasma glucose,2hPG)水平; ELISA法检测血清胰岛素水平和血清中肿瘤坏死因子-α(tumour necrosis factor-α,TNF-α)水平,并计算胰岛素敏感指数(insulin sensitivity index,ISI)和胰岛素抵抗指数(insulin resistance index,IRI); Real time-PCR技术和Western blot技术检测肝组织炎性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1,caspase-1)、gasdermin D(GSDMD)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)及白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18) mR NA和蛋白的表达;免疫荧光技术检测肝组织caspase-1、GSDMD蛋白表达。黄连温胆汤可有效调节IGT大鼠体质量和腹型肥胖,纠正2hPG水平,改善血清胰岛素水平和IRI,提高ISI。与空白组比较,模型组血清中TNF-α水平和肝组织caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18 mR NA与蛋白表达显著升高;黄连温胆汤可有效降低IGT大鼠血清TNF-α水平和肝组织中caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18 mR NA与蛋白表达。以上结果表明“肥胖-IR-糖代谢异常-2型糖尿病”的发生发展与炎症反应及caspase-1/GSDMD介导的经典细胞焦亡途径密切相关;黄连温胆汤改善IR的机制可能是通过降低炎症因子水平,缓解细胞焦亡状态,从而逆转IGT病程。     

肝癥口服液含药血清对人肝癌BEL-7402细胞系生物学行为的影响

目的:探讨肝癥口服液含药血清对人肝癌BEL-7402细胞系增殖、凋亡、侵袭和转移等生物学行为的影响及其机制。方法:培养技术培养BEL-7402细胞,以原发性肝癌患者服用肝癥口服液前后血清处理肝癌细胞,MTT法测定细胞抑制率,流式细胞术测定细胞凋亡率,通过Boyden小室模型测定其侵袭力、黏附力,细胞迁移实验测定细胞运动能力,同时观察细胞形态,流式细胞术测定肝癌细胞MMP2、TIMP2、integrinβ1、E-cd表达的改变。结果:肝癥口服液含药血清能明显抑制肝癌细胞增殖,促进细胞凋亡,同时抑制肝癌细胞侵袭力、黏附力及运动能力。形态学观察发现,服药后血清组细胞形态较圆,伪足数目较少,MMP2阳性表达细胞减少,TIMP2阳性表达细胞增多,MMP2/TIMP2比值下降;integrinβ1表达增加,E-cd的表达则减低。结论:肝癥口服液含药血清能抑制肝癌BEL-7402细胞增殖,促进细胞凋亡,同时抑制细胞侵袭与转移,其机制可能与直接抑制细胞迁移运动,抑制细胞基质溶解相关基因蛋白MMP2表达,促进TIMP2表达;抑制黏附分子E-cd的表达,促进integrinβ1表达有关。     

健脾柔肝方含药血清抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖及诱导凋亡作用

目的:探讨健脾柔肝方含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721增殖抑制及诱导凋亡的作用。方法:SMMC-7721细胞体外培养,以健脾柔肝方低、中、高剂量含药血清培养液作用SMMC-7721细胞,并设立空白血清及5-Fu组。MTT法检测细胞增殖程度,TUNEL法检测细胞凋亡指数。结果:健脾柔肝方含药血清各组均有一定的抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖的作用,均能不同程度的诱导细胞凋亡;而以化疗药5-Fu组作用最强,健脾柔肝汤中剂量含药血清组次之。结论:健脾柔肝方含药血清不仅可直接抑制人肝癌细胞SMMC-7721生长,而且可有效诱导细胞凋亡。     

黄根提取物对肝星状细胞及相关细胞外基质的影响

目的研究黄根乙酸乙酯部位对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)的增殖抑制作用及其对相关细胞外基质的影响。方法采用MTT法检测黄根乙酸乙酯部位对大鼠肝星状细胞的增殖抑制并运用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞中TGF-β1、Co1-I及α-SMA蛋白表达。结果黄根乙酸乙酯部位对肝星状细胞的抑制作用随药物浓度的增长呈梯度增长;可诱导细胞发生早、中、晚期凋亡,各浓度凋亡率分别为2.5%、20.2%、43.9%;细胞中的TGF-β1、Co1-I、α-SMA蛋白,随药物浓度增加,其表达均下降,高剂量组(400 mg/L)与空白组相比具有显著性差异(P0.05)。结论黄根乙酸乙酯部位在体外能抑制HSC-T6细胞增殖,其机制可能通过抑制细胞中TGF-β1、Co1-I、α-SMA蛋白表达,从而减少细胞外基质的合成与沉积,进而起到抗肝纤维化的作用。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对缺血再灌注损伤大鼠心肌脂质过氧化及细胞凋亡的影响

目的：观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对缺血再灌注损伤大鼠心肌脂质过氧化及细胞凋亡的影响。方法：结扎大鼠左冠状动脉前降支30min后，松开结扎恢复灌流613min。实验结束后，取一部分左室心肌制成10％匀浆，测定SOD水平及MDA含量；另一部分心肌用4％多聚甲醛固定后切片，用TUNEL法测定凋亡细胞指数(AI)，用SABC法检测Bax和Bcl-2基因的阳性蛋白表达指数(PEI)。实验分假手术组、缺血再灌注损伤组(IRI)、EGCG治疗组(10mg/kg与20mg/kg)和丹参对照治疗组(1．0g/kg)。结果：(1)IRI组心肌组织SOD水平较假手术组明显降低，而MDA含量则明显升高。与IRI组比，EGCG和丹参能显著提高SOD水平，并显著降低MDA含量，且EGCG 20mg/kg的作用强于EGCG 10mg/kg，与丹参相当。(2)与假手术组比，IRI组的AI值显著增加，Bcl-2及Bax的PEI值亦显著增加，但Bcl-2／Bax值却显著降低。与IRI组比，EGCG组的AI值明显降低。并显著降低Bax的唧值，明显提高Bcl-2的PEI值及Bcl-2／Bax值。结论：EGCG通过抑制脂质过氧化反应及细胞凋亡。对缺血再灌注损伤心肌产生保护作用。