肉桂醛通过调节Cathepsin K改善高脂饮食C57BL/6小鼠骨微结构和骨强度的实验研究

目的:观察肉桂醛对高脂饮食C57BL/6小鼠骨代谢的影响,探讨其与组织蛋白酶K(Cathepsin K)表达的相关性。方法:肉桂醛治疗高脂喂养的C57BL/6小鼠8周后,分别取小鼠的股骨和胫骨,用HE染色和茜素红染色观察骨微结构变化、骨代谢以及骨发育情况;用质构仪评价骨生物力学性能;用免疫组织化学法观察Cathepsin K在骨组织中的表达情况。结果:肉桂醛治疗8周后,高脂饮食小鼠骨小梁断裂程度减轻,排列整齐,骨形成明显增多(P0.05);骨的硬度形变量、第一循环硬度和峰值压力均明显升高。同时,肉桂醛能明显降低骨组织Cathepsin K蛋白表达(P0.05)。结论:肉桂醛能改善高脂饮食喂养的C57BL/6小鼠骨强度,改善骨微结构,改善骨代谢,其作用机制可能是与调节Cathepsin K的表达有关。     

虎杖苷在ApoE~(-/-)动脉粥样硬化模型小鼠中的抗氧化作用

目的研究虎杖苷在ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化治疗中的作用,并探讨其对氧化还原信号通路的影响。方法利用ApoE~(-/-)小鼠建立高脂饲料诱导的动脉粥样硬化动物模型,将已经形成动脉粥样硬化的ApoE~(-/-)小鼠随机分为模型组、虎杖苷组和阳性药(辛伐他汀)对照组,以普通饲料喂养的同遗传背景C57BL/6J小鼠为正常对照,阳性药(辛伐他汀)以0.05 g/(kg·d)剂量灌胃,虎杖苷0.2 g/(kg·d)剂量灌胃,正常对照组及模型对照组分别给予同体积的蒸馏水。连续灌胃28 d后,利用HE染色对小鼠腹主动脉的进行形态学观察,检测血清中活性氧自由基和超氧化物歧化酶的含有量。结果病理切片显示,虎杖苷组的血管组织形态较模型组有明显的改善,显示出虎杖苷对动脉粥样硬化具有较好的的治疗效果。与模型组比较,虎杖苷可以显著抑制活性氧自由基的水平,增加超氧化物歧化酶的活性。结论虎杖苷对高脂诱导的动脉粥样硬化ApoE~(-/-)小鼠具有抗氧化作用,可改善动脉粥样硬化血管组织的形态,并减少脂质沉积。     

香青兰总黄酮对ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化病变中TGF-β1/Smad信号通路及基质金属蛋白酶表达的影响

研究香青兰总黄酮(TFDM)对高脂饮食诱导载脂蛋白E基因敲除(ApoE~(-/-))小鼠动脉粥样硬化形成的影响及其相关机制。采用40只SPF级8周龄雄性ApoE~(-/-)小鼠予高脂饲料喂养,随机分为5组:香青兰总黄酮低、中、高剂量组分别给予21,42,84 mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃;辛伐他汀组灌服辛伐他汀3.5 mg·kg~(-1)·d~(-1);模型组灌服等剂量生理盐水。另设8只相同基因背景和周龄的雄性C57BL/6J小鼠为对照组予普通饲料喂养。各组均灌胃干预12周,采用HE染色观察主动脉病理形态学变化;qRT-PCR法检测组织中TGF-β1,Smad2,Smad3,MMP-2和MMP-9基因的水平。实验结果显示:与模型组比较,HE染色观察TFDM给药组表现主动脉粥样硬化组织损伤明显减轻;TFDM不同剂量组可在一定程度上抑制高脂饲料诱导的ApoE~(-/-)小鼠主动脉TGF-β1,Smad2,Smad3,MMP-2,MMP-9 mRNA的表达,且呈现一定的剂量依赖关系趋势。提示TFDM具有减缓小鼠动脉粥样硬化形成的作用,其作用机制可能与干预TGF-β1/Smad信号转导有关。     

基于IKKβ/NF-κB信号通路探讨白桦脂醇对ApoE~(-/-)小鼠的血管保护作用及机制

目的:建立高脂血症小鼠模型,评价白桦脂醇对动脉的保护作用,并从脂质代谢紊乱、血管内皮功能失衡及炎症反应等方面探讨其作用机制。方法:将36只ApoE~(-/-)小鼠随机分为模型组、阿托伐他汀钙片组、白桦脂醇组,每组12只,以高脂饲料喂养12 w构建小鼠高脂血症模型。另取12只C57BL/6雄性小鼠为正常对照组,普通饲料喂养。阿托伐他汀钙片组给予阿托伐他汀钙片5 mg/kg灌胃给药,白桦脂醇组以20 mg/kg剂量灌胃给药,正常对照组和模型组灌胃相应体积生理盐水,持续给药12 w。第12周末处死小鼠,取小鼠主动脉进行HE染色,光学显微镜下观察血管组织病理学变化;检测小鼠血脂水平,并检测主动脉组织中ET-1、NO、TNF-α、IL-6、IFN-γ含量及eNOS、iNOS、IKKβ、p-IKKβ、NF-κBp65蛋白表达。结果:白桦脂醇能有效调节ApoE~(-/-)小鼠的脂质代谢紊乱,调节血管内皮功能失衡,抑制IKKβ/NF-κB信号通路,从而降低炎症因子的表达,抑制炎症反应的发生。结论:白桦脂醇能改善ApoE高脂血症模型小鼠动脉管壁病理学改变,有效保护动脉,其作用机制可能与改善脂质代谢紊乱、调节血管内皮功能失衡及抑制IKKβ/NF-κB信号通路进而减少炎症反应的级联放大有关。     

基于血脂代谢紊乱探讨益气调脂八味汤对CD40-CD40L系统的调控作用

目的:通过观察中药复方益气调脂八味汤对载脂蛋白E基因敲除(ApoE~(-/-))小鼠主动脉粥样硬化斑块病理形态和CD40-CD40L系统信号的影响,探讨益气调脂八味汤抗动脉粥样硬化的作用机制。方法:40只8周龄雄性ApoE~(-/-)小鼠予高脂饲料喂养建立实验性动脉粥样硬化小鼠模型,至第12周龄时,ApoE~(-/-)小鼠随机分为模型对照组、氯吡格雷组、中药高剂量组和低剂量组。取10只8周龄近交系C57BL/6小鼠作为正常对照组给予普通饲料喂养。各组于第24周取材检测血脂、外周血血小板表面PAC-1、CD40L表达;观察主动脉组织病理形态学改变;检测主动脉组织CD40L表达水平。结果:与模型对照组比较,中药2个剂量组小鼠血清TC、TAG和LDL-C水平均降低,HDL-C水平均升高,差异有统计学意义;与高剂量组比较,低剂量组小鼠血清TC、TAG、LDL-C和HDL-C水平比较差异均无统计学意义。中药组病变程度明显轻于模型对照组,并较氯吡格雷组轻。与模型对照组比较,中药个剂量组小鼠血清PAC-1、CD40L表达的百分比均明显降低,差异有统计学意义;与高剂量组比较,低剂量组小鼠血清PAC-1、CD40L表达百分比差异均无统计学意义。模型组动脉组织CD40L表达光密度值明显高于正常对照组;与高剂量组相比,低剂量组CD40L平均光密度值比较差异无统计学意义。结论:中药复方益气调脂八味汤能够调节血脂,调控CD40-CD40L系统的信号表达而抑制血小板活化,具有明显的抗动脉粥样硬化作用,且不存在剂量差异。     

二氢杨梅素保护ApoE~(-/-)动脉粥样硬化小鼠的作用及其机制

目的探讨二氢杨梅素(dihydromyricetin,DHM)对高脂诱导的ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化的对抗作用及作用机制。方法取健康雄性ApoE~(-/-)小鼠30只,随机分为3组,即模型组、二氢杨梅素组[50 mg/(kg獉d)]和阿托伐他汀组[5 mg/(kg獉d)],每组10只;另取10只C57BL/6 J小鼠作为对照组。对照组与模型组小鼠予以0.5%羧甲基纤维素钠溶液灌胃,药物组小鼠灌以0.5%羧甲基纤维素钠溶液配制的药物混悬液,灌胃容积均为0.2 mL/10 g。同时所有小鼠均给予高脂饲料(0.3%胆固醇,20%脂肪)饲养。10周后,眼眶取血,分离血清,生化仪检测血脂4项水平,试剂盒检测血清氧化酶活性。取心脏油红O染色观察主动脉根部脂质沉积;免疫荧光检测斑块处巨噬细胞的堆积以及Caspase-3的表达;TUNEL试验检测主动脉瓣膜处巨噬细胞凋亡情况。结果连续灌胃10周后,与模型组相比,DHM组小鼠血清TC、TG和LDL-C水平显著下降,主动脉瓣膜处粥样硬化斑块显著减少;DHM组血清MDA水平明显降低,CAT、GSH-Px和SOD活性明显提高;主动脉根部细胞Caspase-3表达明显降低;巨噬细胞在动脉粥样硬化斑块处的堆积减少,TUNEL实验结果显示DHM组斑块处巨噬细胞的凋亡明显降低。结论二氢杨梅素能够改善高脂饲料诱导的ApoE~(-/-)动脉粥样硬化小鼠脂质堆积,其机制可能与抑制巨噬细胞凋亡有关。     

补肾降脂方通过PPARγ-LXRα-ABCA1通路干预ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的效应机制

目的探讨补肾降脂方通过PPARγ-LXRα-ABCA1通路干预ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化(AS)的效应机制。方法采用高脂饮食喂饲ApoE~(-/-)小鼠复制AS模型,随机分为ApoE~(-/-)小鼠+高脂饮食喂饲组(模型组)、ApoE~(-/-)小鼠+高脂饮食喂饲+补肾降脂方组(补肾组)、ApoE~(-/-)小鼠+高脂饮食喂饲+阿托伐他汀组(他汀组),同品系、同周龄雄性C57BL/6小鼠为正常对照组(正常组),每组25只。各组给予相应干预12周。HE、油红O染色法分别检测小鼠主动脉窦、肝脏组织病理形态及脂质蓄积,Filipin染色法检测小鼠主动脉窦游离胆固醇;ELISA法检测小鼠外周血血清脂质(TC、TG、LDL-C、HDL-C)含量;Western blot法检测小鼠主动脉、肝脏组织PPARγ、LXRα及ABCA1蛋白表达。结果高脂饮食喂饲的ApoE~(-/-)小鼠呈典型的AS病变,主动脉窦可见大面积AS斑块及红染脂质,游离胆固醇增多;肝脏组织可见肝细胞结构紊乱,红染脂质蓄积;血清TC、LDL-C含量升高,HDL-C含量降低;主动脉及肝脏组织PPARγ、LXRα、ABCA1蛋白表达降低。与模型组比较,补肾组小鼠主动脉窦AS斑块面积、红染脂质、游离胆固醇均减少;肝脏组织肝细胞结构大部分清晰可见,红染脂质减少;血清TC、LDL-C含量降低;主动脉及肝脏组织PPARγ、LXRα、ABCA1蛋白表达上调。结论补肾降脂方可能通过调控PPARγ-LXRα-ABCA1通路进而有效干预治疗动脉粥样硬化。     

消溶稳斑方对不稳定斑块及AMPK/SIRT1通路的影响

目的拟通过观察消溶稳斑方对AMPK/SIRT1通路的影响,进一步探索消溶稳斑方对ApoE~(-/-)小鼠主动脉弓不稳定斑块的作用机制。方法 ApoE~(-/-)小鼠经高脂饲料喂养8周,确定主动脉弓形成不稳定斑块后,随机分为ApoE+高脂+水组、ApoE+高脂+他汀组、ApoE+高脂+消溶稳斑方组,同时选用C57BL/6J小鼠经标准饲料喂养8周作为C57+标准+水组。各组分别进行灌胃,他汀组和消溶稳斑方组给予对应药物,余两组给予同等容量蒸馏水。4周后,通过电镜观察各组主动脉弓斑块特点,各组小鼠经提取主动脉弓蛋白和RNA后,运用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测其AMPK磷酸化、SIRT1水平,利用RT-PCR技术检测其IKKβmRNA、MMP-9mRNA表达量。结果与C57+标准+水组相比,各组都存在不同程度的动脉粥样硬化斑块。与ApoE+高脂+水组比较,他汀组和消溶稳斑方组动脉粥样斑块明显减小,AMPK磷酸化水平均升高(P0.05),SIRT1值均升高(P0.05),IKKβmRNA、MMP-9mRNA表达量均降低(P0.05)。结论消溶稳斑方具有抑制斑块炎症基因,减少炎症反应,延缓形成并稳定斑块的作用,其机制与调节AMPK/SIRT1通路有关。     

定心方降低脂质运载蛋白-2表达抑制ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化形成的研究

目的探讨定心方对动脉粥样硬化(AS)小鼠的防治作用及其机制。方法 50只载脂蛋白E基因敲除(ApoE~(-/-))小鼠喂食高脂饲料并随机分为5组:定心方低、中、高剂量组分别给予定心方(DXR)9.375,18.75,37.5 g/(kg·d)灌胃;辛伐他汀组予辛伐他汀5 mg/(kg·d)灌胃;模型组予等剂量生理盐水。另设10只C57BL/6J小鼠喂食普通饲料为对照组。14周后测小鼠血清脂质运载蛋白-2(LCN-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及白细胞介素-6(IL-6)水平;HE染色观察主动脉组织病理形态学改变;Western blot检测主动脉LCN-2蛋白表达。结果DXR中、高剂量组及辛伐他汀组小鼠血清LCN-2、TNF-α、MCP-1及IL-6水平、主动脉LCN-2蛋白表达及主动脉AS斑块面积均显著低于模型组(P0.05或P0.01)。结论 DXR可能通过降低LCN-2表达,抑制炎症反应,显著减轻ApoE~(-/-)小鼠AS病变。     

田蓟苷对高脂饮食ApoE~(-/-)小鼠抗动脉粥样硬化活性及作用机制

目的探讨田蓟苷对高脂饮食ApoE~(-/-)小鼠抗动脉粥样硬化活性及作用机制研究。方法将ApoE~(-/-)小鼠60只随机分为普通饮食组,高脂饮食组,田蓟苷低、中、高剂量组(40、120、200 mg/kg)和阿托伐他汀给药组(15 mg/kg),1次/d,连续给药12周后,收集小鼠血清,检测其中TC(总胆固醇)、TG(甘油三酯)、HDL-C(高密度脂蛋白胆固醇)、LDL-C(低密度脂蛋白胆固醇)、ALT(谷丙转氨酶)、AST(谷草转氨酶)、TBA(总胆汁酸)和FBG(空腹血糖)水平。通过油红O染色对各组小鼠主动脉进行染色,并计算主动脉斑块面积占总血管面积之比。采用Western blot检测各组小鼠肝脏组织中PI3K(磷脂酰肌醇3-激酶)、p-PI3K、AKT(蛋白激酶B)、p-AKT、SREBP-2(固醇调节元件结合蛋白2)、LDLR(低密度脂蛋白受体)蛋白表达。结果与普通饮食组比较,高脂饮食组ApoE~(-/-)小鼠血清中TC、TG、LDL-C和FBG水平均升高,而HDL-C和TBA水平降低,差异具有统计学意义(P0.05,P0.01)。与高脂饮食组比较,田蓟苷高剂量组和阿托伐他汀组ApoE~(-/-)小鼠血清TC水平降低,田蓟苷高剂量组血清TG水平降低,田蓟苷低、中、高剂量组和阿托伐他汀组血清LDL-C水平均降低、主动脉斑块的沉积减少,田蓟苷高剂量组和阿托伐他汀给药组小鼠肝脏组织中p-PI3K、p-AKT、SREBP-2和LDLR蛋白表达升高,差异具有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论田蓟苷可降低高脂饮食ApoE~(-/-)小鼠血脂代谢水平,减少主动脉斑块沉积,可能与调节肝脏中SREBP-2和LDLR蛋白表达有关,从而发挥抗动脉粥样硬化的作用。     

敖必德森古日古木-13质量标准的研究

目的：制定敖必德森古日古木-13质量控制方法。方法：采用薄层色谱法及显微鉴别法对方中的旋复花、红花进行定性鉴别。结果：旋复花、红花可用薄层色谱鉴别，旋覆花、红花、草乌叶可用显微鉴别。结论：所建立的方法可用于该药的质量控制。     

高效液相色谱法测定乌圆补血口服液中二苯乙烯苷含量分析

目的比较高效液相色谱法和紫外分光光度法测定保存不同时间的乌圆补血口服液中有效成分二苯乙烯苷含量的灵敏度。方法利用高效液相色谱仪和紫外分光光度计测定保存多年的样品中二苯乙烯苷含量,并进行统计分析。结果高效液相色谱法和紫外分光光度法测定样品中二苯乙烯苷含量分别为(0.549±0.226)g/L和(0.250±0.150)g/L,二者比较有显著性差异(P<0.01),各年度样品中二苯乙烯苷含量也有明显差异(P<0.05或P<0.01)。结论高效液相色谱法测定二苯乙烯苷灵敏度高于紫外分光光度法。     

RP—HPLC法测定脂降宁片中葛根素、二苯乙烯苷的含量

目的：建立高效液相色谱法测定脂降宁片中葛根素、二苯乙烯苷的含量。方法：采用kromasilC18柱（4．6mm×250mm,5μm）;流动相为甲醇（A）-水（B）,梯度洗脱;流速1．0mlMmin;检测波长为250nm及320nm;枉温：30℃。结果：葛根素进样量在232—29μg范围内（r=0．9998）,二苯乙烯苷进样量在220—19．5μg范围内（r=0．9997）线性关系良好,平均回收率葛根素为97．2％（RSD：0．8％）,二苯乙烯苷为97．6％（RSD=0．7％）。结论：该方法操作简便,分离度高,重复性好,可同时测定脂降宁片中葛根素、二苯乙烯苷的含量。     

“三通四联”疗法治疗颈性眩晕临床疗效观察

目的：观察我科独创＂三通四联＂疗法与口服西比灵胶囊治疗颈性眩晕的疗效。方法：将60例确诊为颈性眩晕的病人随机分为三通四联组与西比灵组,每组各30例,治疗一疗程后对两组病人进行疗效对比。结果：观察两组患者的有效率,三通四联组的有效率高于西比灵组（P〈0.01）。结论：三通四联疗法治疗颈性眩晕疗效优于口服西比灵胶囊。     

凉营清透除热瘀

在邪热深入营分的阶段,器官、组织等实质性损害成为病理变化的重心,邪毒炽盛,阴伤液耗,脏损络伤气滞成为其基本病理特点,热毒与瘀血交结成为重要的病变特征之一,治法以凉营清透为主。通过对古今文献的研究及临床与实验观察认为,以该治法为主的方药能有效改变热瘀交结的病变基础,减轻病理损害。而这一治法在临床中也可推广应用于一些出现类似病机的内伤杂病中,可扩大适用范围。     

葶苈降血脂片治疗高血脂症临床疗效观察

目的:观察葶苈降血脂片对高脂血症患者TC、HDL-C、TG的影响.方法:选择高脂血症患者共130人,随机分为治疗组和对照组,其中治疗组100例,男61例,女39例,平均年龄47.5岁,对照组30例,男19例,女11例,平均年龄48.3岁,观察组口服葶苈降血脂片,每次3片,每日3次,30天为1个疗程.对照组口服血脂宁丸,1次2丸,每日3次,30天为1个疗程.结果:两组药物对降低胆固醇和甘油三酯,提高高密度脂蛋白含量的疗效,组内有明显差异(P＜0.01),但组间比较无明显差异.两组观察未出现明显的不良反应及毒副作用.结论:葶苈降脂片可有效降低胆固醇和甘油三酯,提高高密度脂蛋白,且依从性好,服用安全.     

益气脱敏煎的实验研究

益气脱敏煎治疗过敏性鼻炎 6 9例[1 ] ,有效率95.6 % ,近期又治疗 5例 ,疗效满意 ,现将动物实验结果报告如下。1　淋巴细胞脂酶染色率影响　　用ＡＮＡＥ染色法 ,取小鼠 2 0只 ,随机分为对照实验组 ,两组每天分别灌胃生理盐水、益气脱敏煎液 0 .2ｍｌ(2 ｇ生药 /ｍｌ) ,连续 10天 ,末次给药后4ｈ ,眶静脉丛穿刺取血 0 .5ｍｌ,置干净的载玻片上 ,迅速呈均匀的血涂片 ,并将片子用电吹风 (冷风 )迅速吹干。将片子浸入已预热 30ｍｉｎ的孵育液中37℃孵育 3ｈ ,用自来水冲洗 4ｍｉｎ ,去掉沉渣 ,用滤纸吸干水珠。再将片子置入 1/ 15ｍｏｌ/Ｌ、ｐ…     

自我保健推拿术对原发性轻、中度高血压病的疗效观察

目的:观察自我保健推拿术对原发性轻、中度高血压病的疗效。方法:将60例原发性轻、中度高血压患者,采取治疗前后自身对照,并经统计学处理。结果:治疗前后收缩压和舒张压均有显著性差异(P<0.05)。结论:自我保健推拿术对原发性轻、中度高血压有肯定的降压效果,可作为其非药物治疗的一个较好的方法。     

4-羟基苯并恶唑-2-酮对HSC-T6细胞增殖的影响

目的研究4-羟基苯并恶唑-2-酮(HBOA)对HSC-T6细胞增殖的影响。方法 HSC-T6细胞分别在药物处理组(HBOA浓度分别为0.008,0.04,0.2,1,5 mg/ml)及对照组(单纯培养液)中体外培养32 h。应用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测细胞增殖情况;荧光倒置显微镜下观察对照组和药物处理组HSC-T6细胞的形态学变化。结果药物处理组HSC-T6细胞的增殖率均低于对照组,浓度为0.008 mg/ml的药物处理组与对照组相比无显著性差别(P>0.05);其他药物处理组分别与对照组比较能显著地抑制细胞增值(P<0.05或P<0.01)。HBOA对HSC细胞的增殖抑制率均随着药物作用浓度的升高而逐渐升高;经吖啶橙染色后,在荧光倒置显微镜下观察,均可见细胞数量减少、体积缩小、核破裂、核浓缩等变化,且随着作用浓度的增加变化更加明显。结论 HBOA对HSC-T6细胞具有抑制增殖的功效。     

痔瘘熏洗颗粒对肛门溃疡的作用研究

目的观察痔瘘熏洗颗粒对动物实验性肛门溃疡愈合与抗炎、镇痛、抗菌的作用。方法在大鼠肛门外周粘膜注射冰醋酸制备大鼠肛门溃疡模型,采用小鼠耳肿胀、热板法和扭体法,外用给药观察药物促溃疡愈合、抗炎、镇痛作用,采用试管稀释法观察该药的体外抗菌作用。结果痔瘘熏洗颗粒外用能明显缩小大鼠肛门溃疡面积和缩短肛门溃疡平均愈合天数,此外还具有对抗二甲苯致小鼠耳肿胀、提高小鼠热痛阈值、减少冰醋酸致小鼠的扭体数及体外抗金黄色葡萄球菌的作用。结论痔瘘熏洗颗粒具有促进大鼠肛门溃疡愈合、抗炎、镇痛和抗菌作用。