5株抗恶性疟McAb的免疫荧光特性及其靶抗原鉴定

本文观察了5株抗恶性疟McAb的免疫荧光特性,并对其抗原进行了鉴定。结果表明5株McAb主要与恶性疟原虫红内期发育晚期虫体的表面膜抗原发生免疫反应,免疫荧光图象为明亮的点状、均匀片状和蜂窝状。它们在对靶抗原的识别上与免疫荧光的特点呈现一致性,主要能识别恶性疟原虫红内期发育晚期虫体的~(125)Ⅰ-表面标记抗原,其中McAbs 93A_3、94B_5、92D_4和93D_4主要识别分子量为125、115、83、74和67KDa的表面抗原,而McAb94D_1则主要识别分子量为200和19KDa的抗原。     

非洲婴幼儿恶性疟疾65例临床分析

目的探讨非洲婴幼儿恶性疟疾临床特点、诊治方法及其转归。方法回顾性分析确诊为恶性疟疾65例（其中脑型疟19例）住院婴幼儿的临床资料。结果65例恶性疟疾婴幼儿的血涂片均见到恶性疟原虫；临床表现以发热（100％），呕吐32例（49．2％），腹泻23例（36．9％），咳嗽27例（41．5％），抽搐12例（18．5％），意识障碍19例（29．1％），贫血52例（80．0％），脾肿大46例（71．6％），肝肿大41例（63．1％），脑膜刺激征19例（29．1％）。65例均接受青蒿琥酯抗疟的综合治疗，治愈60例，死亡5例。结论婴幼儿恶性疟疾临床表现复杂多样化且不够典型，尽早诊断、及时治疗是改善本病预后的关键；青蒿琥酯是治疗疟疾安全、有效的首选药物。     

恶性疟原虫带7蛋白家族蛋白Cdna的克隆及表达产物特征分析

目的 分离、克隆恶性疟原虫带7蛋白家族蛋白编码基因pfstom,并对其功能进行初步研究。方法 根据国际恶性疟研究公共数据库释放的已完成序列数据(CoDing Sequence,CDS数据)设计引物,用RT—PCR方法从恶性疟原虫中国海南株(FCCl／HN)中得到其带7蛋白家族蛋白基因cDNA-pfstom。应用多种软件对其结构功能、基因进化特征以及同源性分析。用PET30a系统表达其具有stomatin样蛋白结构域的C端蛋白,免疫新西兰大白兔并纯化抗体。Western杂交检测其在FCCl／HN表达情况。结果 pfstom基因编码区全长1125bP,编码374个氨基酸,C端具有和人红细胞整合膜蛋白带7蛋白家族中stomatin样蛋白类似的结构。进化特征分析显示：在带7蛋白家族中,Pfstom蛋白与stomatin样蛋白亲缘关系较近。Western杂交发现Pfstom蛋白在FCCl／HN的滋养体期呈期特异性表达,在与膜相关和与膜不相关的感染红细胞蛋白提取物中都存在。结论 Pfstom是带7蛋白家族蛋白,在FCCl／HN红内期的滋养体期呈特异性表达,环状体期不表达,该蛋白是膜相关蛋白。     

恶性疟原虫AMA-1(Ⅲ)重组蛋白的免疫效应检测

目的探讨恶性疟原虫AMA-1(Ⅲ)重组蛋白的免疫活性。方法利用毕赤酵母高效表达系统分泌表达AMA-1(Ⅲ),表达产物用纯化后免疫新西兰兔,检测其血清中IgG滴度的变化,观察重组AMA-1(Ⅲ)免疫效应。结果重组AMA-1(Ⅲ)免疫后,ELISA检测新西兰兔血清中IgG滴度发现在3次免疫后OD490值明显高于佐剂免疫对照组(P<0.01)。结论AMA-1(Ⅲ)重组蛋白具有较好的免疫原性。     

伯氏疟原虫红细胞膜相关蛋白1缺失突变体的构建和鉴定

目的:研究伯氏疟原虫输出蛋白——红细胞膜相关蛋白1(EMAP1)在疟原虫生长发育和侵染中的作用,构建EMAP1缺失的伯氏疟原虫突变体.方法:以pL0035质粒为载体,PCR扩增EMAP1编码区上游和下游序列作为同源臂,用酶切连接和无缝克隆的方法将两条同源臂分别插入pL0035,获得重组质粒pL0035-ΔPbEMAP1...     

红细胞膜脂质成分变化与脑血管病关系的探讨

目的：为探讨红细胞膜脂质成分变化与脑血管病的关系。方法：采用高速冷冻离心机，自动生化分析仪对23例脑梗死患、20例脑动脉硬化症患及30例正常组进行红细胞膜（RBCm)上胆固醇（CHOL）、甘油三酯（TG）及高密脂蛋白胆固醇（HDL－C）含量分析。结果：脑血管病患红细胞膜胆固醇（CHOL）、甘油三酯（TG）高于正常组（P＜0．01），而高密度脂蛋白胆固醇（HDL－C）水平明显低于正常组（P＜0．01）；脑梗死组与脑动脉硬化症组比较，HDL－C含量及CHOL／HDL－C比值有差别（P＜0．05）。结论：红细胞膜胆固醇、甘油三酯的升高及高密度脂蛋白胆固醇的降低与脑血管病密切相关，红细胞膜脂质成分变化可能参与了脑血管病的病理生理过程。     

Immune responses to the expressed products of the CSP antige n gene of Plasmodium falciparum southern China isolate FCC1/HN in Hela cell

Objective To construct a eukaryotic expression system with pcDNA3-PfCSP/Hela for the Circ umsporozoite protein (CSP) gene of Plasmodium falciparum (P.falciparum), t o observe the immune responses in BALB/c mice induced by the expressed proteins .Methods The recombinant plasmid pcDNA3-PfCSP was transformed into the Hela cell line. The expressed protein was isolated and analyzed by using SDS-PAGE and used for immunization of BALB/c mice by subcutaneous, intravenous, and intraperitone al adminstration.Enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA), Dot-ELISA, Wester n blot, T lymphocyte proliferation test, natural killer cell(NKC) activity assay , and CD4(+) and CD8(+) T cell detection were used for observation of humoral an d cellular immune responses.Results Immune sera strongly reacted with the expressed protein, antibody titer was up to 1∶6400 as detected by ELISA.Western blot analysis revealed a specific b and at 38.3 Kda.When the spleen cells of normal and immunized BALB/c mice we re specifically stimulated with expressed protein, the optical densities were 0 .12±0.03 and 0.34±0.04, respectively.The latter were significantly highe r than the former (P&lt;0.01).We used the MTT colorimetric assay to measure NKC activity of mice spleen.The results showed that the NKC activity of immuni zed BALB/c mice was remarkably higher than that of the controls (P&lt;0.05). CD4(+) and CD8(+) T cells were detected by using monoclonal antibody immunofluor escence methods.The results showed that the percentage of CD4(+) and CD8(+) T cells of immunized group were significantly higher than that of control group ( P&lt;0.05).Conclusions The humoral and cell-mediated immune responses and elevated NKC activity to pr oducts made with a eukaryotic expression system could be specifically detected i n BALB/c mice.These findings indicate that the expressed protein could enhance the immune function in mice.     

西非及柬埔寨西部地区恶性疟原虫基因组拷贝数变异研究

目的 对非洲地区（马里）及柬埔寨西部（菩萨和拜林）地区恶性疟原虫基因组的拷贝数变异情况进行初步研究。方法 从疟原虫基因组数据库下载西非及柬埔寨西部地区20个恶性疟原虫样本的全基因组测序数据,预处理过滤后得到14个虫株样本测序数据纳入下一步研究（西非地区6个,柬埔寨西部地区8个）。用生物信息学软件检测拷贝数变异情况,并对发生拷贝数变异的基因进行功能注释和功能富集分析。结果 西非地区在14条染色体上共检测到112个拷贝数变异区域,包含230个基因;柬埔寨西部地区在14条染色体上共检测到111个拷贝数变异区域,包含179个基因。GO富集分析显示,西非地区拷贝数变异基因主要与恶性疟原虫微管运动活性过程有关;柬埔寨西部地区主要与恶性疟原虫天冬氨酸肽链内切酶活性及细胞内小泡等相关。对于恶性疟原虫药物抗性相关基因,在西非地区检测到pfmrp-1及pfmrp-2发生了拷贝数增加,柬埔寨西部地区检测到pfmdr-1、pfmrp-1、plasmepsin-2、 plasmepsin-发生拷贝数增加。结论 西非及柬埔寨西部地区恶性疟原虫基因组内存在较多拷贝数变异,且发生拷贝数变异的大部分基因与微管运动活性过程、天冬氨酸肽链内切酶活性及细胞内小泡相关。     

恶性疟的两种重组复合抗原的纯化与鉴定

用我们构建的高效表达恶性疟原虫复合抗原融合蛋白的工程菌ＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉｐＷＲ－Ｃ／ＪＭ１０９和ｐＷＲ－ＣＡＣ／ＪＭ１０９进行发酵培养，收集菌体经超声波破菌、硫酸铵分级沉淀、分子筛层析、离子交换层析等步骤纯化后，纯度可达８２．０％。纯化后的融合蛋白保持β－半乳糖苷酶的活性。用等电聚焦技术测定纯化蛋白等电点分别为８．４０和８．２５．用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法测定纯化蛋白的免疫原性，证实纯化的重组蛋白可与小鼠抗恶性疟原虫抗体及疟区病人血清发生特异性免疫反应。重组蛋白加弗氏佐剂免疫家兔制备的抗血清可与４种工程菌表达产物发生特异免疫反应，并可识别恶性疟原虫海南株和云南株红内期抗原。说明纯化的重组融合蛋白为具有恶性疟原虫抗原活性的重组复会抗原。     

脑梗塞及脑动脉硬化患者红细胞膜ATP酶活性、膜脂质及血液流变学改变

研究急性脑梗塞、脑动脉硬化患者红细胞膜ＡＴＰ酶活性、脂质含量以及红细胞成分、血液流变学指标及其相关性。方法：采用微滤筛法和锥板式粘度计分别测定红细胞变形能力和多切变粘度，分光光度计比色法测定ＡＴＰ酶活性和膜磷脂、胆固醇含量及其比值。结果：发现中风患者存在红细胞膜ＡＴＰ酶活性降低，脂质成分改变，红细胞变形能力下降，且在发病前就有不同程度的改变。结论：临床上对中风前期病变进行针对性的预防治疗和发病后采取适当的改善微循环，纠正离子转运障碍等措施有一定的实际意义。     

恶性疟原虫MESA基因的克隆和测序

目的克隆、测定恶性疟原虫海南株(FCC1／HN)成熟疟原虫感染红细胞表面抗原(MESA)基因序列，并进行序列分析。方法根据恶性疟原虫palo-alto株MESA基因已知序列，设计合成四对引物，用PCR技术从FCC1／HN株基因组DNA中扩增出4个部分序列重叠的MESA基因片段，分别克隆入pMD-18T测序载体。用双脱氧链末端终止法测定这4个基因片段的序列，拼接得到全长MESA基因序列。应用DNAstar、AnthProt软件辅助进行序列同源性比较和抗原表位区预测。结果PCR扩增得到特异的恶性疟原虫FCC1／HN株MESA基因片段，酶切及PCR鉴定获得了包含MESA基因片段的重组质粒。测序结果表明，FCC1／HN株MESA全基因编码区长4102bp，A T含量为72．11％，G C含量为27．89％，有1个内含子；编码1323个氨基酸残基，分子量为154470u。序列分析表明，FCC1／HN株与Palo-aho、D10株MESA蛋白在长度和序列组成上呈多态性，序列差异较大区域位于MESA蛋白的氨基酸重复区1、3、4、5和7。经多参数综合分析，有7个潜在的抗原表位区。结论测定、分析了恶性疟原虫FCC1／HN株MESA基因序列。FCC1／HN株MESA基因与其它分离株的MESA基因编码的氨基酸序列存在一定差异。     

冠心病患者红细胞膜ATP酶活性及血脂水平的变化

观察２１例冠心病患者及正常对照组的空腹血浆甘油三酯（ＴＧ）、总胆固醇（ＴＣ）、低密度脂蛋白胆固醇（ＬＤＬＣ）、高密度脂蛋白胆固醇（ＨＤＬＣ）,红细胞膜Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶、Ｃａ２＋ＡＴＰ酶,Ｍｇ２＋ＡＴＰ酶及红细胞内Ｃａ２＋浓度（［Ｃａ２＋］）的变化。发现冠心病组ＴＧ,ＴＣ,ＬＤＬＣ及红细胞内［Ｃａ２＋］高于对照组;而血浆ＨＤＬＣ,红细胞膜Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶与Ｃａ２＋ＡＴＰ酶活性低于后者;Ｍｇ２＋ＡＴＰ酶无变化;Ｎａ２＋Ｋ＋ＡＴＰ酶,Ｃａ２＋ＡＴＰ酶分别与血浆ＴＧ,ＴＣ和ＬＤＬＣ呈负相关,与血浆ＨＤＬＣ呈正相关。根据测定结果,对其发病机制进行了讨论     

肿瘤患者红细胞膜CR1免疫分子定量测定的临床意义

目的探讨肿瘤患者红细胞膜CR1免疫分子定量变化的意义。方法纳入肿瘤患者73例,其中呼吸系统肿瘤40例,血液系统肿瘤16例,消化系统肿瘤11例,其他肿瘤6例。健康对照组56例,分别测定红细胞膜CR1免疫分子定量(以吸光值A表示),并进行比较。结果红细胞膜CR1免疫分子定量:呼吸系统肿瘤0.79±0.25,血液系统肿瘤0.83±0.29,消化系统肿瘤0.75±0.31,其他肿瘤0.67±0.31,健康对照组为1.36±0.26,肿瘤患者较健康者明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01),但是部分患者病情缓解后其红细胞膜CR1免疫分子定量有不同程度的提高。结论肿瘤患者发病期红细胞膜CR1免疫分子定量降低,病情缓解后升高,红细胞膜CR1免疫分子定量测定对肿瘤患者的辅助诊断及预后判断有一定临床意义。     

Sequence analysis and genotypes of glutamate rich protein of Plasmodium falciparum isolates from different malaria endemic areas in China

To sequence the gene encoding glutamate rich protein (GLURP) and identify the genotypes of geographically different Plasmodium falciparum (P. f ) isolates from China. Methods The gene of R2 repeat region of GLURP was amplified by nested polymerase chain reaction and cloned into T-vector. The nucleotide sequence of GLURP gene was determined by automatic sequencer (Dideoxy termination method) and analyzed by DNA Star software. Results At least 7different GLURPgenotypesranging from 600 bp to 1 500 bp were found in Yunnan and Hainan provinces. R2 region of GLURP gene consisted of several repeat units. Each repeat unit was composed of 19-20 residues which were shown to be highly conserved. GLURP gene was also size polymorphic due to differences in the number of repeat units, whereas the repeat sequence was conserved. Sequence analysis showed that DNA sequences and deduced amino acid sequences were highly homologous among the geographically dispersed isolates or various isolates from the same geographical region. No obvious differences were found in the GLURP gene sequences among geographically different isolates. Conclusion GLURP gene is highly structure conserved and size polymorphic, and so is useful in searching for malaria vaccine candidate antigen and developing a genotyping method for malaria research.     

川芎嗪对急性脑梗死患者全血黏度及红细胞聚集指数的影响

目的探讨川芎嗪对急性脑梗死(ACI)患者的全血黏度及红细胞聚集指数的影响。方法将110例ACI患者随机分为观察组和对照组,每组55例。对照组行常规的治疗方法,观察组在常规治疗的基础上加用川芎嗪注射液,测定2组治疗前后血液中全血黏度和红细胞聚集指数。结果2组治疗后全血黏度及红细胞聚集指数与治疗前比较均有显著性差异(P<0.05),观察组改善程度明显优于对照组(P<0.05)。结论川芎嗪能显著降低ACI患者全血黏度及红细胞聚集指数。     

恶性疟原虫海南株节结相关组氨酸富集蛋白基因的克隆及序列分析

目的 克隆恶性疟原虫海南株（FCC1／HN）节结相关组氨酸富集蛋白（KAHRP）基因，并进行序列分析。方法 采用PCR技术分两段从FCC1／HN株基因组A趸扩增出部分序列重叠的KAHRP基因片段，分别克隆入pMD-18T测序载体。用双脱氧链末端终止法测定这2个片段的序列，从而得到全长KAHRP基因序列。应用AnthProt、DNAstar软件辅助分析基因结构及进行同源性比较。结果 恶性疟原虫FC1/HN KAHRP全基因长2358个核苷酸，在112至564位核苷酸是内含子，全基因编码634个氨基酸残基，其中赖氨酸含量为14．35％，丙氨酸含量为9．15％，组氨酸含量为7．72％；分子量为69．37kDa。序列分析表明，我国恶性疟原虫FCC1／HN株与国外的3D7、FCR3、India-1、India-2、NF17、Palo-alto,PUPSP株KAHRP基因编码的氨基酸残残留基有52个氨基酸残基替代位点，并存在氨基酸残基序列的增加和缺失。经多参数综合分析，可能有5个潜在的抗原表位区。结论 克隆了恶性疟原虫FCC1／HN株KAHRP基因。序列测定及同源性分析表明，FCC1／HN株与其它分离株KAHRP基因编码的氨基酸序列存在一定差异。     

非洲输入性疟疾重症与非重症患者临床资料对照分析

目的 分析163例非洲输入性疟疾患者的临床资料,为尽早识别重症疟疾提供参考。方法 收集广州医科大学附属市八医院 2018年1月—2020年11月收治的163例非洲输入性疟疾患者临床资料,回顾性分析患者一般情况、临床症状、实验室检查、治疗及预后。结果 本研究共纳入163例患者,其中重症组37例,非重症组126例;平均年龄（37.90 ± 10.17）岁,男性患者147例（90.2%）,中国籍患者132例（81.0%）,既往有基础疾病患者15例（9.2%）;感染虫种以恶性疟原虫为主,144例（88.3%）。与非重症组相比,重症组患者的乳酸、降钙素原、白细胞计数、中性粒细胞计数、红细胞分布宽度变异系数、血小板平均体积、血小板分布宽度、凝血酶原时间、总胆红素、丙氨酸氨基转氨酶、天门冬氨酸氨基转氨酶、碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶、三酰甘油、尿素、肌酐和胱抑素C均升高（P<0.05）,红细胞计数、血红蛋白、红细胞压积、血小板、白蛋白、总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白和载脂蛋白AI均降低（P<0.05）。经积极治疗,重症组患者死亡1例,其余均治愈出院。结论 非洲输入性疟疾患者以恶性疟原虫感染为主。恶性疟疾发展成重症比例高,死亡率高。疟疾患者的血常规、乳酸、降钙素原、血脂、凝血功能以及肝肾功能的变化对重症疟疾有很好的预警作用,有助于尽早识别重症疟疾,提高治愈率,降低死亡风险。     

GIK溶液对瓣膜置换术病人红细胞膜流动性和脂质过氧化物的影响

目的　观察GIK溶液对瓣膜置换术病人术中红细胞膜流动性的影响。方法　 2 0例病人随机等分成对照组和GIK治疗组 ,红细胞膜流动性用DPH荧光标记法测定。结果　两组病人转流 30min和停机 30min红细胞膜平均微粘度 (η)、各向异性(г)和脂质过氧化物 (MDA)明显增加 (P <0 .0 1 ) ,对照组停机 30minη、г明显高于转流 30min(P <0 .0 5 ,P <0 .0 1 ) ;而GIK治疗组转前 1 0min、转流 30min和停机 30min各时相点 ,η、г值明显低于对照组 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1 ) ,但对MDA无明显影响。 结论　GIK溶液可明显改善瓣膜置换术病人红细胞膜流动性     

慢性肺心病急性期红细胞膜脂质成分对红细胞膜流动性及超微结构的影响

目的 观察慢性肺心病患者急性发作期红细胞膜脂质成分对红细胞膜流动性和红细胞超微结构的影响。方法 慢性肺心病患者急性发作期患者45例，测定膜胆固醇、磷脂含量、胆固醇／磷脂比值，同时用DPH探针测定红细胞膜流动性，扫描电镜观察红细胞形态。结果 肺心病患者膜胆固醇含量、胆固醇／磷脂比值明显升高，膜磷脂含量和膜流动性明显降低，异常形态的红细胞明显增多；直线相关分析显示，红细胞膜流动性降低与红细胞膜脂质成分改变有明显相关性。结论 红细胞膜胆固醇、磷脂含量改变是引起红细胞膜流动性降低和红细胞形态异常的基本因素。     

红细胞1型补体受体在系统性红斑狼疮患者中的表达及意义

目的通过检测红细胞1型补体受体(CR1)在系统性红斑狼疮(SLE)患者中的表达,探讨其临床意义。方法采用流式细胞术检测50例SLE患者和30例健康对照者红细胞CR1表达的水平,并对SLE患者病情活动程度行SLE疾病活动指数(SLEDAI)积分,分为活动期组与稳定期组,同时将活动期组红细胞CR1表达与稳定期组相比较;并分析SLE活动度指标与CR1表达的相关性。结果①SLE患者组红细胞CR1表达明显低于健康对照组,差异具有统计学意义(P<0.01)。②SLE患者活动期组红细胞CR1表达明显低于稳定期组,两组间CR1表达有显著性差异(P<0.01)。③SLE患者SLEDAI积分与CR1表达呈显著负相关(r=-0.971,P<0.01)。结论 SLE患者红细胞CR1表达的变化与疾病活动有明显的相关性,可以作为评判SLE病情活动的指标之一。