三氧化二砷对裸鼠人乳腺癌移植瘤的作用及机制

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)对乳腺癌移植瘤的作用及其机制.方法 建立BALB/C-nu/nu裸鼠ER阴性MDA-MB-435s人乳腺癌移植瘤模型,分别以不同浓度的AS2O3、顺铂和0.9%氯化钠注射液(NS)腹腔内注射,观察移植瘤的瘤重及抑瘤率.并用免疫组化检测乳腺癌石蜡标本中PTEN和Casepase7的表达.结果 AS2O3高剂量组、AS2O3低剂量组、顺铂组均能明显抑制裸鼠皮下肿瘤的生长,抑瘤率分别为48.68%、32.80%、66.67%.用药后移植瘤组织巾PTEN和Casepase-7蛋白阳性细胞数显著增多(P＜0.05).结论 AS2O3能明显抑制乳腺癌移植瘤的生长,其作用机制可能是通过上凋PTEN和Caspase-7的表达(P＜0.05),促进细胞的凋亡来抑制人乳腺癌细胞的生长.     

5-氟尿嘧啶缓释剂瘤内注射治疗胰腺癌的实验研究

目的:观察5FU缓释剂瘤内注射对裸鼠胰腺癌肿瘤细胞的影响,探讨其作用机制。方法:体外培养胰腺癌细胞株PC3,以2×106个细胞分别接种于70只裸鼠。4周后挑选肿瘤大小一致的裸鼠60只,随机分成5组,即静脉NS对照组、5FU静注组(10mg/kg)、基质植入组、5FU缓释剂(4mg/kg)植入组及5FU缓释剂(1mg/kg)植入组。于治疗前及治疗后14d内测量肿瘤大小,计算肿瘤生长速度;观察组织学变化和细胞分裂指数;免疫组化法测定bcl2和Bax的蛋白表达水平;采用脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测凋亡指数(AI)。结果:5FU缓释剂瘤内注射组裸鼠移植瘤生长速度减慢(P<0.05),最终瘤重小于其他各组(P<0.05);细胞分裂指数亦均低于其他各组(P<0.05)。5FU缓释剂瘤内注射组肿瘤组织中炎症反应和血管内膜增厚程度明显高于其他各组(P<0.05)。5FU缓释剂瘤内注射组荷瘤裸鼠的bcl2基因蛋白表达明显低于其他各组,而Bax基因的蛋白表达明显高于其他各组,其肿瘤细胞的AI明显高于其他各组(P<0.05)。结论:5FU缓释剂瘤内注射可明显抑制裸鼠胰腺癌瘤体的生长,其作用机制与药物在肿瘤组织中引起的炎症反应和血管内膜增厚等因素有关,并可能与诱导肿瘤细胞的凋亡有关。     

PGL3 DF3 DTA特异性杀伤移植瘤裸鼠人乳腺癌细胞的实验研究

摘要：目的 研究新构建的含人乳腺癌DF3启动子和白喉毒素A片段的重组表达载体PGL3 DF3 DTA对裸鼠人乳腺癌移植瘤的特异性杀伤作用。方法 建立人乳腺癌移植瘤裸鼠动物模型，将4周龄裸鼠36只随机分为实验组、空载体组、空白对照组、阴性对照组4组，每组9只。将DF3阳性和阴性的人乳腺癌细胞MCF 7和MDA MB 231分别接种于相应的裸鼠皮下。待成瘤后，将重组表达载体PGL3 DF3 DTA和PGL3 DF3多次、多位点注射入相应裸鼠移植瘤内。连续测量瘤体大小，计算瘤体体积。在不同时间点分批处死部分动物，行形态学观察、检测肿瘤细胞的凋亡，检测Ki 67，Bax及Bcl 2蛋白的表达。结果 裸鼠人乳腺癌动物模型建立成功，经重组表达载体PGL3 DF3 DTA作用后的人乳腺癌细胞出现明显的凋亡现象， Ki 67及Bcl 2基因表达水平降低，Bax基因表达水平升高。结论 重组表达载体PGL3 DF3 DTA能对DF3阳性的乳腺癌细胞产生特异性杀伤作用。     

三氧化二砷抗膀胱癌作用机制的实验研究

目的 观察三氧化二砷(As2O3)对膀胱癌T24细胞株生长、Caspase-3基因表达以及裸鼠移植瘤体积及质量变化的影响. 方法 以不同浓度的As2O3加入对数生长期的T24细胞并设立对照组,分别培养24、48、72 h,噻唑盐比色法检测膀胱癌细胞生长抑制情况,荧光染色观察细胞核形态变化,流式细胞术检测As2O3对细胞凋亡率的影响,蛋白质印迹法检测As2O3对Caspase-3蛋白表达的影响;将对数生长期T24细胞接种于30只裸鼠背部皮下,3周成瘤后随机分为As2O3腹腔注射组、皮下注射组及对照组,用药2周后处死裸鼠测量药物作用前后裸鼠瘤体积及质量变化. 结果 随着As2O3浓度增加及时间延长,T24细胞生长抑制率由(25.8±1.1)%增加至(86.6±1.6)%,其中各实验组与对照组比较、实验组各时间段比较、各实验组与前一组比较,差异均具有统计学意义(P＜0.05);随着As2O3作用时间延长,荧光显微镜下可见细胞核内荧光增强,细胞核呈新月形改变等凋亡形态学变化; T24细胞凋亡率由29.6%增加至60.6%;Caspase-3表达分别为对照组的1.15、1.98及2.76倍,差异具有统计学意义(P＜0.05);As2O3腹腔注射组及皮下注射组鼠瘤体积分别为(2612.9±77.7)及(1908.2±102.3)mm3,瘤重分别为(2.0±0.9)及(0.7±0.7)g,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),皮下注射组与腹腔注射组间差异亦有统计学意义(P＜0.05). 结论 As2O3对膀胱癌T24细胞生长和裸鼠移植瘤均有抑制作用,其抗癌机制可能与增加Caspase-3蛋白表达有关.     

砷对人乳腺癌移植瘤血管内皮细胞的影响

三氧化二砷(As2 O3 )对血液性肿瘤疾病、某些实体瘤有肯定疗效[1] ,本实验探讨As2 O3 对荷人乳腺癌裸鼠移植瘤血管内皮细胞生长的影响,研究其作用机制。材料和方法一、材料1 实验动物和瘤株:BALB/c nu/nu雌性裸鼠2 2只,鼠龄6～8周,体重16 9～2 2 8g/只,人乳腺浸润性导管癌移植瘤瘤株第36代,由四川大学动物中心提供。2 药物及试剂:As2 O3 (1mg/ml)、顺铂(5mg/ml)购于重庆医科大学第一医院药房。兔抗人FⅧ RAg多克隆抗体、兔抗人VEGF多克隆抗体、SP 90 0 0通用型试剂盒、均购于北京中山生物技术有限公司。二、实验方法1 移植瘤模型…     

p16重组腺病毒联合顺铂或三氧化二砷对人膀胱癌EJ细胞作用的实验研究

目的　探讨 p16重组腺病毒 (Ad p16 )与顺铂 (CDDP)或三氧化二砷 (As2 O3 )联合应用对人膀胱癌EJ细胞体内外生长的抑制效应及机制。　方法　将Ad p16与CDDP或As2 O3 联合应用 ,通过细胞生长抑制实验 ,克隆形成实验 ,细胞周期分析 ,免疫组织化学分析 ,以及裸鼠皮下移植瘤模型 ,观察其对人膀胱癌EJ细胞的作用及机制。　结果　与单独应用相比 ,Ad p16与低剂量的CDDP或As2 O3 联合应用可明显抑制EJ细胞的体外生长 ,诱导EJ细胞凋亡 ,明显阻滞EJ细胞G1期 ;裸鼠体内肿瘤发生时间延迟 ,4周后肿瘤体积与单独应用时相比差别有显著性意义 (P <0 .0 5 )。　结论　Ad p16与CDDP或As2 O3 联合应用 ,有可能进一步提高膀胱癌的治疗效果     

p53重组腺病毒联合顺铂或三氧化二砷对人膀胱癌EJ细胞的作用

目的：探讨p53重组腺病毒（Ad-p53）与顺铂（CDDP）或三氧化二砷（As2O3）联合应用提高膀胱癌疗效的可能性及其机制。方法：将Ad-p53[100感染强度（MOI）]与CDDP（0．5mg/L)或As2O3(2.0μmol/L）联合应用，通过细胞生长抑制实验、克隆形成实验、细胞周期分析、免疫组织化学分析以及裸鼠皮下移植瘤模型，观察其对膀胱癌EJ细胞的作用及机制。结果：与单独应用相比，Ad-p53与低剂量的CDDP或As2O3联合可明显抑制EJ细胞体外生长，诱导EJ细胞凋亡，EJ细胞G2／M期阻滞更明显；裸鼠体内肿瘤发生时间延迟，4周后肿瘤体积与单独应用时相比，差异有显著性（P＜0．05）。结论：基因治疗与化疗联合应用，可进一步提高膀胱癌的疗效。     

Survivin反义寡核苷酸对乳腺癌荷瘤裸鼠的抑瘤作用研究

目的探讨survivin反义寡核苷酸（ASODN）对乳腺癌荷瘤裸鼠的抑瘤作用。方法30只裸鼠建立人乳腺癌MCF-7细胞移植瘤动物模型。成瘤后动物随机分3组，每组10只。分别于瘤周及瘤体注射阳离子脂质体（1ipofectin，Lip），ASODN／Lip及NODN／Lip，每5天1次，共3次。观察肿瘤抑制率、肿瘤体积和裸鼠体重的变化。用TUNEL法，透射电镜观察体内瘤体的细胞调亡情况；用Western—blot检测各组肿瘤的survivin蛋白表达情况。结果成功建立了裸鼠皮下移植瘤模型。ASODN／Lip治疗组的肿瘤体积在治疗期内减少，抑瘤率达70．10％；而NODN／Lip治疗组和Lip对照组肿瘤体积增加。各组裸鼠体重无明显变化。ASODN／Lip组细胞凋亡率为38．6％明显高于其他两组，差异有显著性（P〈0．05）。ASODN／Lip组肿瘤的survivin蛋白表达明显降低。结论survivin反义寡核苷酸可有效地抑制人乳腺癌裸鼠皮下肿瘤的生长速度，并促进诱导肿瘤细胞的凋亡。     

三氧化二砷联合5-氟尿嘧啶对小鼠肝癌H22细胞移植瘤的作用

目的探讨三氧化二砷(As2O3)联合5-氟尿嘧啶(5-FU)对小鼠肝癌H22细胞皮下移植瘤的作用,为提高治疗肝癌的临床效果、降低毒性和克服耐药提供理论和实验依据。方法建立昆明小鼠肝癌皮下移植瘤动物模型,按瘤体体积均衡分为4组进行干预,依次为对照组(NS)、As2O3组(0.2mg/kg),5-FU组(10 mg/kg),As2O3(0.2 mg/kg)+5-FU(10 mg/kg)组,每组10只,连续腹腔注射药物2周,停药后第2天处死动物,留取血液标本,解剖提取肿瘤标本。分别测定比较各组小鼠肿瘤体积、肿瘤组织病理变化、肿瘤细胞增殖情况、凋亡率及肝肾功能相关生化指标。结果各组肿瘤体积有明显差异(F=252.7,P<0.01),各药物干预组平均肿瘤体积均明显低于对照组(P<0.01),同时As2O3+5-FU组平均肿瘤体积显著低于单用As2O3和5-FU组(P<0.01)。As2O3组和5-FU组细胞增殖指数显著低于对照组(P<0.05),As2O3+5-FU组细胞增殖指数显著低于对照组和As2O3组(P<0.05),但与5-FU组比较无显著差异(P>0.05);As2O3组细胞凋亡率高于对照组(P<0.05),As2O3+5-FU组细胞凋亡率显著高于As2O3组和5-FU组(P<0.05),血清ALT、AST、Cr检测值各组间无显著性差异(P>0.05)。结论体内As2O3和5-FU联合应用能显著增强对小鼠肝癌皮下移植瘤的抑制作用,两者具有协同作用,机制可能与增强抑制细胞增殖和诱导凋亡有关。且两者联合使用并未发现明显毒副作用。     

塞来昔布对膀胱癌裸鼠皮下移植瘤及移植瘤细胞凋亡的影响

目的探讨环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对膀胱癌裸鼠皮下移植瘤及移植瘤细胞凋亡的影响.方法6周龄BALB/c裸鼠8只,建立膀胱癌裸鼠皮下移植瘤动物模型,分为2组,实验组每kg食物添加1 g塞来昔布,观察塞来昔布对裸鼠健康状况、体重变化及移植瘤变化的影响,并用TUNEL方法检测其对移植瘤细胞凋亡的影响.结果塞来昔布对裸鼠健康状况及体重变化无明显影响(P＞0.05),对移植瘤的生长有抑制作用,肿瘤抑制率为83.7%(P＜0.05),对移植瘤细胞的凋亡有促进作用(P＜0.05).结论塞来昔布可能通过促进肿瘤细胞凋亡等途径对膀胱肿瘤产生抑制作用,可能成为膀胱肿瘤化学预防及治疗的辅助手段.     

Tiam 1与胃癌细胞侵袭转移及与裸鼠移植瘤形成的关系

摘要：目的 检测胃癌细胞中T淋巴瘤侵袭转移诱导因子 1(Tiam 1)的表达，并分析其与胃癌细胞离体、在体侵袭转移能力的关系。方法 采用层粘连蛋白黏附法，由胃癌MKN 45细胞株(M0)中筛选获得高(MH)、低(ML)黏附亚株。应用RT PCR和定量细胞ELISA技术分别检测Tiam 1 mRNA与蛋白在M0，ML，MH细胞中的表达；应用Boyden小室法测定M0，ML，MH细胞的离体侵袭移行能力，并分析其与Tiam 1表达的关系。应用裸鼠接种法观察M0，ML，MH细胞的在体成瘤及转移能力。结果 MH细胞中Tiam 1 mRNA(RV=0.855±0.051)与蛋白的表达(RD=1.262±0.165)以及其离体侵袭转移能力(24.33±8.02，52.00±14.53)、在体裸鼠肺转移率(4/5=80%)均较M0细胞(RV=0.759±0.047，RD=0.911±0.104，11.67±3.79，26.00±9.54，2/5=40%)，ML细胞(RV=0.743±0.039，RD=0.892±0.101，9.67±3.06，23.67±8.50，1/5=20%)为强，统计学差异显著(P< 0.05)，但在M0，ML细胞间无统计学差异(P> 0.05)；Tiam 1表达水平与胃癌细胞的侵袭转移能力呈完全及高度正相关(P< 0.05)。结论 Tiam 1表达水平升高有可能促进胃癌细胞侵袭转移能力的增强。     

维生素E琥珀酸酯对乳腺癌荷瘤裸鼠的抑瘤作用

目的 检测维生素E琥珀酸酯（VES）对裸鼠荷乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用。方法 裸鼠皮下接种MCF-7乳腺癌细胞建立荷瘤裸鼠模型。以150mg／kg（体重）剂量的VES治疗模型鼠共5周。处死动物后测量肿瘤大小。以流式细胞仪检测细胞周期变化和细胞表面Fas和FasL的表达；以免疫组化法检测肿瘤组织Fas和FasL的表达，并以TUNEL法检测细胞凋亡指数。结果 VES对荷乳腺癌裸鼠具有显著的增殖抑制作用。细胞周期分析显示，VES冶疗后肿瘤细胞表现为G0／G1期阻滞，肿瘤组织和细胞表面的Fas和FasL均出现上调，同时细胞的凋亡指数升高。结论 VES对于MCF-7乳腺癌荷瘤裸鼠具有强效的抑制作用，其机制与上调肿瘤细胞Fas／FasL表达，促进细胞凋亡有关。     

环氧化酶-2和血管内皮生长因子在胃肠道间质瘤中的表达及其意义

摘要：目的 探讨环氧化酶 2（COX 2）和血管内皮生长因子（VEGF）的表达与胃肠道间质瘤（GIST）的性质、恶性程度及预后的关系。方法 采用免疫组织化学S P法检测54例GIST中的COX 2及VEGF表达情况，并分析它们与GIST临床病理特征的关系及其对预后的影响。结果 COX 2在良性、潜在恶性和恶性中的阳性表达率分别为53.3%,83.3%和96.3%；VEGF则分别为53.3%,75.0%和92.6%;COX 2和VEGF在恶性GIST中的表达明显高于潜在恶性及良性GIST（P<0.05）；COX 2与VEGF表达呈显著正相关（r=0.6667）；COX 2，VEGF的表达与肿瘤良、恶性的生长方式、肿瘤大小、肿瘤中心有无坏死有明显关系（P<0.05）；COX 2，VEGF高表达者5年生存率明显低于低表达者（P<0.01）。结论 COX 2和VEGF表达与GIST生长、浸润转移关系密切；联合检测可以互补并作为判断GIST性质、恶性程度、转移及预后的客观指标。     

bcl-2反义寡核苷酸促进乳腺癌MCF-7细胞凋亡的研究

目的 观察ｂｃｌ－２反义寡核苷酸（ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ,ＯＤＮ）对ＭＣＦ－７细胞内ｂｃｌ－２表达及细胞凋亡的影响。方法 电转染法将合成的针对ｂｃｌ－２ ｍＲＮＡ的反义ＯＤＮ导入ＭＣＦ－７乳腺癌细胞,用荧光显微镜,电镜,免疫组化法及流式细胞仪检测反义ＯＤＮ对乳腺癌细胞凋亡,ｂｃｌ－２表达及细胞周期的影响。     

促性腺激素释放激素拮抗剂对大鼠睾丸支持细胞雄激素受体和Fas配体基因表达的影响

本实验利用注射促性腺激素释放激素拮抗剂（ＧｎＲＨ Ａ）引起睾丸生精细胞程序化死亡的大鼠模型，用地高辛标记的大鼠雄激素受体和Ｆａｓ配体的ＲＮＡ探针对大鼠睾丸石蜡切片进行原位杂交，观察雄激素受体和Ｆａｓ配体基因在生精细胞凋亡中的变化。结果显示，ＧｎＲＨ Ａ处理后曲细精管有退行性变，原位杂交表明此时Ｓｅｒｔｏｌｉ细胞的雄激素受体表达明显减低，而Ｆａｓ配体表达显著升高。提示Ｆａｓ配体的表达可能与生精上皮细胞程序化死亡关系密切。     

TRAIL真核表达质粒的构建及抑制肝癌生长的实验研究

目的构建TNF相关凋亡诱导配体(TRAIL)基因的真核表达质粒，观察其对BALB／c裸鼠肝癌细胞皮下移植瘤模型的抑瘤作用。方法提取U937细胞总RNA．用RT-PCR方法扩增出胞外区(114—281aa)，连入溶菌酶信号肽序列，构建分泌型TRAIL重组质粒；建立裸鼠7402肝癌细胞皮下移植瘤模型，纯化后的质粒DNA与脂质体聚乙烯胺混合后经肌肉注射进行基因转染，体内验证重组蛋白的抑瘤活性，采用TUNEL法进行肿瘤组织细胞凋亡检测。结果肿瘤体积测定结果显示．TRAIL对肝癌细胞生长有抑制作用；凋亡检测光镜下可见有棕褐色凋亡细胞，细胞凋亡指数增高。结论重组TRAIL质粒能引起肿瘤细胞的凋亡，抑制7402肝癌细胞的生长。     

奥曲肽对人胆囊癌裸鼠皮下种植瘤的抑制作用

目的：探讨奥曲肽对人胆囊癌裸鼠皮下种植瘤生长的影响及其机制。方法：建立人原发性胆囊癌皮下种植瘤裸鼠模型。将荷瘤裸鼠随机分成实验组和对照组各9只,分别自腹腔注射奥曲肽100 μg/(kg·d)和生理盐水,用药共6周。观察两组种植瘤生长情况。流式细胞术测定肿瘤细胞凋亡率,免疫组化法检测p53,bcl-2,Ki-67的表达。结果：实验组裸鼠皮下种植瘤的生长明显受到抑制,实验组肿瘤重量显著低于对照组［(0.99±0.54)g vs. (1.58±0.51)g,t=2.38,P<0.05］,抑瘤率达37.3%,肿瘤细胞的凋亡率显著高于对照组［(7.76±2.62)% vs. (4.27±1.50)%,P<0.01］;实验组的p53,bcl-2,Ki-67阳性细胞百分率均低于对照组［(79.48±5.22)%vs. (87.13±8.26)%,(46.72±6.40)%vs.(53.85±7.72)%,(37.56±6.67)%vs(45.45±8.73)%,P均<0.05］。结论：奥曲肽能抑制人胆囊癌裸鼠皮下种植瘤的生长,可能系通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导凋亡的机制而实现的。     

腰椎椎间盘突出症经椎板间和经椎间孔入路内镜治疗的比较研究

目的 探讨经皮内镜治疗L5/S1腰椎椎间盘突出症的入路选择。 方法 2011年8月~2012年8月符合入选条件的68例L5/S1腰椎椎间盘突出患者按入院奇偶顺序分成2组,椎板间入路组34例,椎间孔入路组34例。对2种手术入路的手术时间、透视次数、术中患者耐受情况、患者疗效满意度、术后残余症状、并发症及术前术后疼痛视觉模拟量表（visual analogue scale, VAS）评分进行比较。 结果 椎板间入路组有4例术中改为椎间孔入路,椎间孔入路组有7例改为椎板间入路,经椎板间入路和椎间孔入路手术时间分别是（50.2±7.0）min、（61.9±9.6）min（P＜0.05）,术中透视次数分别为5.4±2.3次、10.3±2.5次（P＜0.05）,2种入路治疗后腿痛术后即刻及术后3个月VAS评分与术前相比差异均有统计学意义（P＜0.05）。改良MacNab标准评定2组间差异无统计学意义（P＞0.05）。 结论 经皮内镜下治疗L5/S1腰椎椎间盘突出症经椎板间或经椎间孔入路治疗各有特点,且均能取得优良的临床疗效,但需针对患者的解剖情况、影像定位及临床表型选择适宜的个体化手术入路。