人乳头瘤病毒16/18在宫颈癌中的表达及临床意义

目的:探讨人乳头瘤病毒(HPV)16/18在宫颈癌中的表达及临床意义。方法:随机选取2012-12～2015-12期间本院80例宫颈癌及宫颈上皮内瘤变(CIN)患者,根据疾病类型分为A组(宫颈癌,n=35)、B组(CIN,n=45)。选择同期40例良性宫颈疾病患者,作为C组。三组均收集宫颈组织标本,以原位杂交法检测HPV16/18,对比检测结果。结果:(1)A组、B组HPV16/18阳性检出率高于C组(P0.05);且A组高于B组(P0.05);(2)宫颈癌不同分化程度、是否存在淋巴结转移患者HPV16/18阳性率差异有统计学意义(P0.05)。结论:宫颈癌患者呈HPV16/18高表达,在宫颈癌筛查中具有重要作用。     

人乳头瘤病毒16型E7蛋白检测宫颈癌患者特异血清抗体的初步研究

目的探讨重组人乳头状瘤病毒(HPV16型)E7蛋白在宫颈癌血清学检测中的应用价值,以指导宫颈癌的临床诊断。方法采用原核表达系统制备重组HPV16型E7蛋白,通过间接ELISA方法检测29例宫颈癌患者血清中HPV16E7抗体,58例尖锐湿疣妇女及60名健康妇女的血清标本作为对照。结果宫颈癌组特异性抗体水平显著高于尖锐湿疣及健康对照组,3组抗体均值分别为0.63±0.44和0.27±0.10、0.22±0.13,抗体检出阳性率分别为31.0%、5.2%、5.0%;宫颈癌组中HPV16-DAN阳性患者抗体均值明显高于HPV16-DAN阴性者,两者差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HPV16型E7蛋白抗原性较强,可作为宫颈癌的血清学诊断候选抗原,对宫颈癌诊断具有的临床应用价值。     

HPV16E7蛋白在宫颈癌中的表达和意义

目的：探讨人乳头瘤病毒１６Ｅ７蛋白（ＨＰＶ１６Ｅ７）与宫颈癌间的关系。方法：采用免疫组化ＳＰ法对１５例正常宫颈组织、８０例宫颈鳞癌、１７例腺癌组织进行了研究。结果：①ＨＰＶ１６Ｅ７蛋白在宫颈癌中的表达明显高于正常宫颈组织,且在鳞癌中的表达明显高于腺癌;②ＨＰＶ１６Ｅ７蛋白表达与宫颈癌的临床分期成负相关,与组织学分级、淋巴结转移无关。结论：预防ＨＰＶ感染是防止宫颈癌发生的重要措施之一。     

人乳头瘤病毒 E6／E7 mRNA检测在宫颈癌筛查中的意义

目的：评估人乳头瘤病毒（HPV）E6／E7mRNA检测在宫颈癌筛查中的意义。方法对3381名行机会性宫颈癌筛查的女性分别行液基细胞学（TCT）、HPV DNA及HPV E6／E7mRNA检查,其中371例结果可疑者行阴道镜下活检。分别记录其TCT、HPV DNA及HPV E6／E7mRNA检测结果及活检病理结果等,采用SPSS 19．0软件进行数据分析。结果人群筛查中HPV E6／E7mRNA的总阳性率为16．47％（557／3381）;炎症患者与宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅰ级患者HPV E6／E7mRNA的阳性率分别为60．73％（116／191）和68．60％（83／121）,差异无统计学意义（F＝1．98,P＞0．05）;炎症患者与CIN Ⅰ级患者mRNA表达量分别为7781．26±2686．13和7498．47±2860．08 copy／mL,亦无显著差异（ t＝0．07,P＞0．05）,而CIN Ⅱ-Ⅲ级患者HPV E6／E7mRNA的阳性率为89．10％（49／55）,mRNA表达量为30716．66±10281．89,均显著高于炎症患者（χ2＝15．55,t＝2．19）及CINⅠ患者（χ2＝8．47,t＝2．18）,差异均有统计学意义（P＜0．05）;不同活检病理分级（≤CIN Ⅰ或≥CIN Ⅱ）中,只有HPV E6／E7mRNA的检测结果有显著性差异（χ2＝15．45,P＜0．05）;对于宫颈CIN Ⅱ以上病变的诊断,HPV E6／E7mRNA的敏感度最高（89．83％）;TCT特异度最高（62．18％）。 HPV E6／E7mRNA最佳工作点为1637．48copy／mL,其诊断宫颈高级别上皮内瘤变的敏感度为79．70％,特异度为63．50％。 ROC曲线下面积为0．75（P＜0．05）。结论 HPV E6／E7mRNA检测诊断宫颈高级别上皮内瘤变具有较高的敏感性和特异性,在宫颈癌筛查具有较为重要的意义。     

人乳头瘤病毒52型E2和E6/E7在宫颈病变中的表达及其意义

目的观察人乳头瘤病毒52型(human papillomavirus 52,HPV52)E2及E6/E7m RNA在宫颈癌及癌前病变组织中的表达以及高危型HPV分布情况,探讨HPV52感染及E2、E6/E7表达在宫颈癌发生发展中的临床意义。方法收集512例高危型HPV阳性病例,依据病理学诊断归入非典型鳞状上皮细胞病变组(atypical squamous cell lesions,ASC)、低度鳞状上皮内病变组(low grade squamous intraepithelial lesion,LSIL组)、高度鳞状上皮内病变组(high grade squamous intraepithelial lesion,HSIL)以及鳞状细胞癌组(squamous cell carcinoma,SCC)。以实时荧光定量PCR方法检测124例HPV52阳性样本E2及E6/E7 m RNA,并进行卡方检验及Spearman相关性分析。结果 HPV52型E2与E6/E7m RNA呈负相关,rs=-0.98,P<0.01,两者检出率在组间有统计学差异(P<0.05)。在13种高危型HPV中,检出率最高前三位为HPV52(24.2%)、HPV58(20.5%)、HPV16(11.7%)。结论 HPV52型E2缺失、E6/E7表达过度是宫颈癌变的关键环节,E2、E6/E7水平在评估宫颈病变程度中具有参考价值。同时,HPV52型在宫颈癌的发展其作用值得进一步研究。     

应用cDNA微阵列芯片检测人乳头瘤病毒16相关的宫颈癌基因

目的 研究感染人乳头瘤病毒16（human papillomavirus，HPV16）的宫颈癌组织中差异表达的基因，并探讨HPV16致富颈癌发生的分子机制。方法 采用杂交捕获Ⅱ代技术，筛选出3例感染HPV16的宫颈癌病例，取其癌组织及自身正常宫颈组织标本，用含14112条人类全长基因的eDNA微阵列芯片。筛选出差异表达的基因并进行分析。结果在3例富颈癌组织中。共同差异表达的基因有244条，其中136条上调，108条下调。这些基因涉及原癌基因和抑癌基因、细胞周期蛋白类、细胞信号和传递蛋白、代谢、免疫相关、细胞受体、蛋白翻译合成，以及其他一些未知功能的基因（ESTs）。绪论HPV16引发宫颈癌，是多因素、多基因共同作用的结果，它们通过相互调节，网络调控直接或间接地导致富颈癌的发生发展，可望进一步分析证实以明确HPV引发宫颈癌的精确分子机制。     

人乳头瘤病毒16型E5蛋白在宫颈癌中表达及其作用的研究进展

宫颈癌是常见的女性恶性肿瘤,其发生发展与HPV的感染密切相关。HPV16是宫颈癌患者中感染率最高的亚型,其编码的早期蛋白E5、E6、E7可刺激宫颈上皮细胞转化成肿瘤细胞。E6、E7蛋白在宫颈癌晚期表达,E5可能在早期表达。E5蛋白的是否表达及其致癌机制与多种因子相关。E5蛋白可作用于细胞生长因子受体通路,下调miRNA196a,并通过与HLAⅠ类分子结合协助感染细胞免疫逃逸,从而促进肿瘤的发生。E5蛋白与E6、E7蛋白协同会发挥更强的致宫颈癌作用。本研究对E5蛋白表达与病毒整合的关系及其对宫颈癌的作用进行了综述。     

人乳头瘤病毒18型主要衣壳蛋白原核表达系统的构建及鉴定

目的构建重组原核表达质粒获得人乳头瘤病毒18型(HPV18)主要衣壳蛋白,为进一步研制HPV18基因工程疫苗打下基础. 方法 以重组质粒pBR322-HPV18为模板,利用PCR方法扩增HPV18L1 DNA片段,将HPV18L1 DNA与pUC 19质粒重组构建pUC19-HPV18L1重组质粒;用酶切电泳验证重组结果的正确性;并通过测序检查质粒重组后序列有无变化;再利用pQE32质粒做表达载体构建重组质粒pQE32-HPV18L1,并用酶切电泳验证;利用SDS-PAGE检测HPV18L1目的蛋白;利用Western杂交鉴定HPV18L1目的蛋白的特异性. 结果 PCR扩增DNA片段约为1.7kb,与预期结果相同;克隆重组质粒pUC19-HPV18L1酶切后显示的酶切图谱与预期相同,而且测序验证插入片段全序列无改变;表达重组质粒pQE32-HPV18L1酶切图谱亦与预期相同;SDS-PAGE显示,约63×103处可见目的蛋白带,与预期结果一致;Western 杂交鉴定,在Mr约63×103处可见目的条带,与预期结果一致. 结论成功构建原核表达重组质粒pQE32-HPV18L1并能表达HPV18主要衣核蛋白.     

高危型人乳头瘤病毒阴性宫颈癌的研究进展

  目的   了解和掌握“一带一路”沿线国家宫颈癌流行病学负担现状。  方法  对照2018年世界卫生组织（WHO）癌症登记数据库,从“一带一路”政务网中选取127个宫颈癌流行病学数据较为完整的“一带一路”沿线国家作为研究对象。按照WHO划分的世界区域标准,对127个“一带一路”沿线国家进行归类。运用统计学参数检验法,比较分析不同WHO区域2018年“一带一路”沿线国家宫颈癌流行病学负担差异,应用聚类分析法分析不同WHO区域国家的宫颈癌流行程度。  结果  不同WHO区域“一带一路”沿线国家宫颈癌的流行病学负担差异性显著。WHO非洲区域国家的宫颈癌平均标化发病率和标化死亡率最高,分别是32.4/10万和21.9/10万;相反,东地中海地区国家的平均标化发病率为4.4/10万,标化死亡率为2.9/10万,位居六大WHO区域最低。WHO美洲区域的伤残调整寿命年（DALYs）最高（458.2/10万）,东地中海地区最低（69/10万）。聚类分析结果表明,WHO非洲区域国家的宫颈癌多为中、高度流行;低度流行国家主要分布在WHO欧洲、西太平洋和东地中海地区。  讨论  地理区域是影响“一带一路”沿线国家宫颈癌流病负担的主要因素,但并不是唯一因素,未来将综合考虑国家社会经济发展水平、自然和社会环境等因素,并纳入研究范畴。     

人乳头瘤病毒16/18型与宫颈癌的关系探讨

目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)16/18型与宫颈癌(cervical carcinoma,CC)的关系。方法选择2011年1月至2013年10月在我院手术切除的120例宫颈病变组织标本,采用原位杂交法(ISH)检测HPV16/18的DNA表达。结果不同宫颈组织的HPV16、HPV18的阳性检出率,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。HPV16阳性检出率:SCC明显高于AUC、CIN、NC,CIN明显高于NC,差异均有统计学意义(P<0.05),而AUC与CIN、NC比较差异均无统计学意义(P>0.05)。HPV18阳性检出率:AUC明显高于SCC、CIN、NC,差异均有统计学意义(P<0.05),而SCC、CIN、NC组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。在SCC、AUC中,就高、中、低分化的HPV16、HPV18的阳性检出率,组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 HPV16/18感染是CC的高危因素,可以客观反映出宫颈恶性病变的程度,而HPV型别可以反映出癌组织病理学类型,值得深究。     

宫颈组织中HPV16 E6蛋白的表达

[目的]检测人乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16 E6蛋白在宫颈组织中的表达情况及其与宫颈病交的关系. [方法]选择宫颈脱落细胞学检查异常者中进行宫颈活组织检查的213例为研究对象,根椐病理学诊断分为CCSC(官颈鳞状细胞癌)组,共13例;CIN(宫颈上皮内瘤变)组,共114例;无病变组,86例.采用免疫印迹(Western blot)方法分别检测宫颈组织中HPV16 E6蛋白的表达. [结果]①宫颈脱落细胞学检查异常者CSCC发病率为6.1%(13/213),CIN Ⅲ发病率为18.3%(39/213),CIN Ⅱ发病率为23.9%(51/213),CIN Ⅰ发病率为11.3%(24/213),无病变者占40.4%(86/213).②3组官颈组织中HPV16 E6表达阳性率分别为61.5%(8/13)、37.7%(43/114)、24.4%(21/86),两两比较P均＜0.05.③相关分析发现HPV16 E6表达阳性率与宫颈病交严重程度呈正相关(r=0.68,P＜0.05). [结论]发生病变的官颈组织中出现HPV16E6阳性表达,其阳性率随病变级别的升高而增加.     

高危型人乳头瘤病毒检测与液基细胞学检查在宫颈癌筛查中的联合应用价值

目的 研究高危型人乳头瘤病毒(HPV-DNA)检测与液基细胞学(TCT)检查在宫颈癌及癌前病变筛查中的联合应用价值.方法 对本院妇科门诊同时做HPV-DNA检测与TCT检查者并有活检资料者进行回顾性研究.细胞学诊断标准按照TBS(2001)分类.HPV-DNA检测以高危型病毒量RLU/CO1.O为阳性,TCT诊断≥ASCUS为阳性,宫颈活检病理诊断≥CIN Ⅰ为阳性.结果 高危型HPV-DNA检测对活检诊断≥CIN Ⅰ宫颈病变的敏感度为89.1%;TCT检查对活检诊断≥CIN Ⅰ宫颈病变的敏感度为78.3%,高危型人乳头瘤病毒(HPV-DNA)检测敏感性较液基细胞学(TCT)检查高,统计学有显著性差异.TCT检查对CIN Ⅰ、CIN Ⅱ、CIN Ⅲ及浸润癌的检出率明显高于HPV-DNA检测(均P<0.05).结论 TCT检测与HPV-DNA检查是筛查宫颈病变的有效方法,两者结合可以提高宫颈病变的早期诊断率.     

大肠癌发生过程中p16蛋白的表达及其临床意义

目的 :探讨p16蛋白在大肠癌中的表达及意义。方法 :采用免疫组化ABC法观察 80例大肠癌、大肠腺瘤及正常粘膜中 p16蛋白的表达情况。结果 :大肠癌组织 p16蛋白阳性表达率为 40 0 % ,低于正常粘膜及腺瘤中的表达(P <0 .0 5 ) ,其阳性表达率在癌组织的分化程度、有无淋巴结转移及病人生存时间等方面有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 :大肠癌组织中存在 p16蛋白的缺失和突变 ,且p16蛋白在大肠癌癌细胞的增殖和分化中起重要的调控作用     

硒甲基硒代半胱氨酸对乳腺癌细胞凋亡及Caspase蛋白表达影响的研究

目的研究硒-甲基硒代半胱氨酸(Se-methylselenocysteine,MSC)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡及凋亡相关蛋白caspase的影响,探讨其诱导细胞凋亡的作用。方法不同浓度的MSC(12.5、25、50、100、200μmol/L)RPMI-1640培养液作用于人乳腺癌MDA-MB-231细胞24h、48h,MTT法检测MSC对细胞增殖的抑制作用,Western blot法检测caspase3,8,9蛋白表达,SPSS16.0进行数据录入及统计学分析。结果 MSC对MDA-MB-231细胞的增殖具有抑制作用,呈现时间-浓度依赖性(P0.01),其中200μmol/L浓度抑制作用最明显。24h及48h后,凋亡相关蛋白caspase9和caspase3的蛋白表达较空白对照组明显上调(P0.01),变化呈浓度依赖性;而caspase8蛋白表达无显著性变化(P0.05)。结论 MSC能抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖,诱导其凋亡,呈现时间浓度依赖性;其发生可能与线粒体途径的细胞凋亡有关。     

Bcl-2家族蛋白在维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞凋亡中的作用

目的:研究Bcl-2家族蛋白在维生素E琥珀酸酯(RRR-α-tocopheryl succinate,α-TOS;vitamin E succinate,VES)诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡线粒体途径中的作用。方法:采用噻唑蓝(MTT)法测定VES对SGC-7901细胞的半数抑制浓度(IC50值);吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色观察细胞凋亡;Mito Tracker Red CMXRos染色观察线粒体膜电位(ΔΨm)的改变;Western Blot法检测不同剂量VES对人胃癌SGC-7901细胞Bid、Bax、Bcl-2蛋白表达和细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)蛋白表达与定位的影响。结果:VES对SGC-7901细胞的IC50值为101.45μg/ml;VES可引起SGC-7901细胞发生凋亡和线粒体膜电位下降;并引起Cyt C蛋白在细胞内重新定位、Bid蛋白剪切活化、Bax蛋白表达增加和Bcl-2蛋白表达减少。结论:VES可抑制SGC-7901细胞的生长,并通过线粒体途径诱导凋亡,其机制可能是通过剪切活化Bid蛋白、上调Bax/Bcl-2相对水平来实现的。     

食管癌变过程中p16和FHIT甲基化与蛋白失表达关系的研究

[目的]研究食管癌变过程中p16和FHIT基因甲基化与蛋白表达的关系. [方法]应用甲基化特异性聚合酶链反应方法,对44例癌前病变、14例原位癌、37例浸润癌和10例慢性食管炎共105例患者组织DNA进行了p16和HHIT基因甲基化检测,应用免疫组织化学的方法检测了相应组织两基因蛋白表达情况,并进行相关性分析. [结果]在105例患者组织中,随着病变程度的加重,p16和FHIT基因甲基化频率和蛋白缺失率均呈逐渐增加的趋势,重度不典型增生、鳞状细胞原位癌及浸润癌的甲基化频率和蛋白表达缺失率均显著高于黏膜慢性炎症组,且p16和FHIT基因甲基化与蛋白失表达密切相关. [结论]p16和FHIT蛋白表达缺失是食营癌以及癌前病变发生的一个早期事件;p16和FHIT基因可能通过启动子区甲基化失活参与了食管癌的发生发展过程.     

两株宫颈癌细胞株中HPV16E6/E7蛋白的表达

目的 :探索及检测宫颈癌细胞株 Caski、 Si Ha细胞内 HPV1 6 (16型人乳头瘤病毒 ) E6 /E7蛋白含量 ,筛选宫颈癌基因治疗研究的合适细胞株。方法 :用间接免疫荧光染色及流式细胞术检测 Caski、 Si Ha宫颈癌细胞株中 HPV1 6 E6 、 HPV1 6E7蛋白含量 (荧光强度值 )。结果 :Caski细胞中 HPV1 6 E6 、 HPV1 6 E7蛋白含量分别为 :2 0 .72± 6 .35、 5 6 .80± 4 .30 ;Si Ha细胞中 HPV1 6 E6 、E7蛋白含量分别为 :1.77± 0 .75、 4 9.2 7± 8.0 6。 2细胞株间 HPV1 6 E7蛋白表达量无明显差异 (P>0 .0 5 )。结论 :Caski、Si Ha宫颈癌细胞株中 HPV1 6 E6 、E7蛋白的表达是不平行的。Caski细胞适用于以 HPV1 6 E6 ,HPV1 6 E7蛋白为观察对象的研究 ,Si Ha细胞可用于 HPV1 6 E7蛋白的研究 ,但不适宜用于以 HPV1 6 E6 蛋白为观察对象的研究。     

核因子-κBp50和P16INK4A在尖锐湿疣皮损组织中的表达及意义

[目的]探讨核因子-kBp50(NFp-κBp50)和P16INK4A在感染HPV 6/11、HPV16/18型尖锐湿疣(condylomata acuminate CA)组织中的表达及其意义.[方法]采用荧光定量PCR法检测确定CA组织HPV 6/11阳性同时HPV 16/18阴性26例:HPV 16/18阳性同时HPV 6/11阴性21例;免疫组织化学En vision二步法检测26例低危型CA、21例高危型CA和18例正常包皮组织中NF-xBp50和P16INK4A的表达.[结果]NF-κBp50阳性表达主要定位于细胞浆,部分细胞核也表达,NF-KBp50在正常包皮、低危型、高危型.CA三组间阳性表达强度比较有统计学意义(χ2=26.739,P＜0.05),P16INK4A阳性表达主要定位于细胞浆,P16INK4A在正常包皮、低危型、高危型CA三组闻比较表达程度无差异(χ2=5.860,P＞0.05).[结论]NF-κBp50的表达增高可能在CA细胞增殖中起一定作用.     

EZH2蛋白在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的研究EZH2蛋白在乳腺癌中的表达情况及其临床意义。方法通过免疫组化SP法检测EZH2蛋白在40例乳腺癌伴有淋巴结转移、63例乳腺癌不伴淋巴结转移及31例乳腺增生组织中的表达情况。结果从乳腺增生-乳腺癌不伴淋巴结转移-乳腺癌伴有淋巴结转移,EZH2蛋白阳性表达率依次增强,分别为22.58%、52.38%、75.00%。EZH2与患者乳腺癌及淋巴结转移呈显著关系（p〈0.01）。结论 EZH2蛋白在乳腺癌中高表达,尤其是在乳腺癌伴有淋巴结转移中的表达显著提高,提示EZH2的过表达与乳腺癌进展及不良预后有关。