重型肝炎病人的乙肝病毒前C基因变异研究

对１１例重型肝炎病人乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ直接序列进行分析以阐述变异特点。一次或套式ＰＣＲ扩增到的ＨＢＶＤＮＡ，以不对称ＰＣＲ法制备成单链模板后直接作序列分析。结果１１个病例中，９例有１～２个氨基酸替代变异：Ｇ１８９６→Ａ的替代，产生一个终止密码，见于１例抗－ＨＢｅ阳性的病人，第１７位（ＡＡ１７）缬氨酸被苯丙氨酸替代，见于１例ＨＢｅＡｇ阴性的病人，ＡＡ１５和ＡＡ２９的丝氨酸替代变异见于２例ＨＢｅＡｇ阴性、ＨＢＶ含量甚低的病例，１８５８Ｃ→Ｔ替代见于４例病人，与ＨＢｅＡｇ表型无关，无一伴有终２８变异，呈相互排斥现象。说明重型肝炎病人的ＨＢＶ前Ｃ基因存在多种变异类型。这些变异点只见于１～２例病人，似乎不是引发重型肝炎的重要原因，Ｇ１８９６→Ａ替代变异和ＡＡ１７的苯丙氨酸替代与ＨＢｅＡｇ阴性表型相关     

HBsAg阴性应招飞行学员血清HBV-DNA检测研究

目的为控制ＨＢＶ慢性携带者进入航校提供对策，对应招飞行学员中ＨＢｓＡｇ阴性者的ＨＢＶ感染情况及对ＨＢＶ的免疫状态作一探讨。方法用ＥＬＩＳＡ法检测ＨＢｓＡｇ、抗－ＨＢｓ、抗－ＨＢｃ、ＨＢｅＡｇ、抗－ＨＢｅ，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测ＨＢＶ－ＤＮＡ。结果ＨＢｓＡｇ阴性应招飞行学员中抗－ＨＢｓ阳性２０６／９６２例（２７．６％），抗ＨＢｃ阳性２２９／９６２例（２２．８％），ＨＢｅＡｇ阳性０／４５０例，抗ＨＢｅ阳性３／４５０例（０．６７％），ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性１５／２２８例（６．６％）。ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性主要集中在单一抗ＨＢｃ阳性者中１４／７５例（１８．７％）。获得ＨＢＶ免疫者为３４．０％。结论在应招飞行学员中对单一抗ＨＢｃ阳性者应做ＨＢＶ－ＤＮＡ检测，未获ＨＢＶ免疫者应接种乙肝疫苗     

人抗HBsAg噬菌体抗体Fab段基因的序列分析及表达

对已建的噬菌体抗体库分离出来的人抗－ＨＢｓ克隆进行了序列分析和表达研究，发现４个克隆中３个克隆的重链和轻链完全相同，ＤＮＡ序列分析表明ＶＨ分别属于ＶＨ１亚群和Ⅱ亚群，其轻链ＶＬ分别属于ＶλⅡ亚群和ＶλⅠ亚群。构建了可溶性Ｆａｂ段表达载体，显示出在细菌中表达的Ｆａｂ段抗体与ＨＢｓＡｇ特异性结合，这说明所筛选出来的噬菌体抗体具有ＨＢdisplay status     

乙型肝炎病毒感染者血清前S1抗原检测的临床应用

乙型肝炎病毒ＨＢＶ是一种嗜肝细胞病毒 ,(ＨＢｓＡｇ)基因组分别编码Ｓ、前Ｓ1、前Ｓ2、三种蛋白 ,从而组成ＨＢｓＡｇ的主要蛋白。前Ｓ1主要存在于完整的Ｄｅｎｅ颗粒的表面 ,其在病毒的感染、装配、复制中具有十分重要的作用。本文旨在探讨此项指示对乙型肝炎病毒感染者检测、治疗和预后分析的临床应用价值。1　资料与方法1.1　一般资料 :采集 2 35例乙型肝患者血清 ,经乙肝试剂盒酶联免疫方法测定。其结果分成ＨＢｓＡｇ +ＨＢｅＡｇ +ＨＢｃＡｂ +组 (第 1组 ) ,ＨＢｓＡｇ +ＨＢｅＡｂ +ＨＢｃＡｂ +组 (第 2组 ) ,ＨＢｓＡｇ+ＨＢｃ…     

低浓度HBsAg人群血清乙肝病毒标志测定意义

乙型肝炎病毒表面抗原 (ＨＢｓＡｇ)测定是诊断乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)感染的重要依据之一 ,不同人群血清ＨＢｓＡｇ浓度可相差成千上万倍 ,关于低浓度ＨＢｓＡｇ血清ＨＢＶ标志测定研究不多。我们对低浓度ＨＢｓＡｇ人群血清进行了乙肝病毒表面抗体 (抗 -ＨＢｓ)、乙肝病毒核心抗体 (抗ＨＢｃ)、乙肝病毒ｅ抗原及其抗体 (ＨＢｅＡｇ、抗 -ＨＢｅ)测定 ,并探讨其临床意义。1　材料和方法1 1　标本　收集患者或健康体检者低浓度ＨＢｓＡｇ血清。1 2　仪器　奥地利ＣｌｉｎｉＢｉｏ 12 8Ｃ酶标仪 ,美国Ｍｕｌｔｉｗａｓｈ洗板机 ,德国ｅｐｐｅ…     

抗HBsAg人IgG表达载体的构建及其在CHO细胞中的表达

尝试将一株来源于人源性噬菌体抗体库的抗ＨＢｓＡｇ人Ｆａｂ,转换成完整的抗ＨＢｓＡｇ人ＩｇＧ。方法：采用重叠ＰＣＲ方法,在抗ＨＢｓＡｇ人Ｆａｂ的Ｖｋ和ＶＨ基因的５’端接上合工合成的人ｋ链的前导序列,构建表达完整ＩｇＧ１的真核表达载体,转染ＣＨＯ（ＤＨＦＲ＾－）细胞,用ＥＬＩＳＡ、ＲＴ－ＰＣＲ和免疫印迹检测抗ＨＢｓＡｇ人ＩｇＧ的表达,通过ＤＨＦＲ／ＭＴＸ体系及金属离子诱导提高Ｉｇ表达。结果：获得表达量     

用PCR及Southern杂交方法对HBsAg阴性献血员HBV感染的检测

用ＰＣＲ与Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交（ＳＢＨ）方法对７８例ＨＢｓＡｇ阴性献血员进行ＨＢＶ感染检测，结果２份标本经ＰＣＲ后直接在２５４ｎｍ紫外灯下观察就可见到特异扩增带，另有１２份标本经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ转膜杂交后可观察到特异扩增带，总阳性率较原来ＨＢｓＡｇ检测提高１７．９％，说明ＰＣＲ－ＳＢＨ可以区分ＨＢｓＡｇ阴性但仍然存在ＨＢＶ潜伏感染的献血员，使用ＰＣＲ－ＳＢＨ方法检测的ＨＢＶ可以提高输血的安全性。     

水芹乙酸乙酯提取物在2215细胞培养内对乙型肝炎病毒表面抗原 …

目的：观察水芹乙酸乙酯提取物（简称水芹提取物）在乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）基因的人吕细胞系（Ｈｅｐ Ｇ２）２２１５细胞培养中,对细胞的毒性及对ＨＢＶ表面抗原（ＨＢｓＡｇ）和ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）的抑制效果。方法：水芹提取物用培养液释释成２０００、１０００、５００、２５０、１２５μｇ．ｍｌ＾－１３浓度,分别加入２２１５细胞内培养,于第６、９ｄ收集的培养液,用固相放射免疫法测定ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ,γ－计     

慢性乙型肝炎表面抗原携带者前S1基因的高度异质性

应用半巢式聚合酶链式反应（ＰＣＲ）从一例慢性ＨＢｓＡｇ携带者血清中扩增出ＨＢＶ前Ｓ１基因，将其克隆于噬菌体Ｍ１３ｍｐ１９中进行序列分析。结果发现：与同源性最好的ＨＢＶａｄｒ野生林相比，所测的１０个克隆均有替代和插入突变，９个克隆有缺失突变，１０个克隆的核苷酸变异率为５．０％－１７．０％，氨基酸的变异率为１３．０－６０．０％；１０个克隆之间的核苷酸变异率为２．３％－２４．３％，氨基酸的变异率为１４．     

HAV,HBV重叠感染34例分析

本文回顾了３４例ＨＡＶ和ＨＢＶ重叠感染者的临床经过和ＨＢＶ血清标志物改变。发现其甲肝的整个临床过程基本与一般甲肝一致；与ＨＡＶ感染前比较，ＨＡＶ感染恢复后１～２个月时ＨＢＶ血清标志物的阳性率（除ＨＢｓＡｇ和拉ＨＢｓ外）发生了明显改变：ＨＢｅＡｇ由７５％减至３５．３％，拉ＨＢｃ由８５．７％减至４１．２％，三项阳性者由６４．３％减至３５．３％，拉ＨＢｅ由３９．３％增至７６．５％，拉ＨＢｃ－ＩｇＭ由５４．３％减至２６．５％（均为Ｐ＜０．０１）。     

血清HBsAg阴性和HBsAg阳性慢性活动性肝炎患者肝内HBV DNA的研究

用原位杂交法和ABG法对慢性活动性肝炎患者(以下称CAH)血清HBsAg阴性34例和阳性30例对比进行了肝内HBV DNA、HBcAg和HBsAg的检测。上述检出率在34例HBsAg阴性CAH者中分别为23.5％,23.5％和32.4％,30例HBsAg阳性者中分别为63.3％、56.7％和83.3％。结果表明,在我国,血清HBsAg阴性、HBV相关抗体阳性或阴性的CAH中,仍有少部分人肝内存在HBV DNA和HBV抗原表达,并与肝病发病机理有关。血清HBsAg阳性的CAH者中,无论血清HBeAg阳性,或抗HBe阳性、或HBeAg阴性,均有较高比例的肝内HBV DNA和HBV抗原检出。肝内HBcAg与肝内HBV DNA关系密切,可作为反映HBV活跃复制指标;肝内HBsAg则不然。     

自然人群接种乙肝疫苗后11年的HBVM随访研究

对350名自然人群的“乙肝易感者”进行乙肝疫苗免疫接种,又于8年后加疫一次,该对该人群及HBsAg阳性人群进行了11年的随访研究,结果发现,40例HBsAg阳性者11年总阴转率为15％（6／40）,其中绝大多数（5／6）在半年内阴转,半年至11年间阴转者仅1例）1／35）。而单项抗－HBs阳性检出率由11年前的12．86％上升至目前的68．29％（P＜0．0001）,HBV总感染率由60．29％降至25．71％,从而表明,自然人群（大部分为成人）“乙肝易感者”经乙肝疫苗免疫后听说对少可维持8年。广泛接种乙肝疫苗可大幅度降低人群的HBV感染率。而慢性HBsAg携带者自然转阴率极低。     

乙型肝炎相关性肝细胞肝癌HBV血清标志物特征探讨

目的探讨乙型肝炎相关性肝细胞肝癌（HCC）乙型肝炎病毒（HBV）血清标志物特征。方法选择2009年6月~2013年6月临床确诊的有明确HBV感染史的HCC患者312例,分析患者HBV DNA载量,定量检测HBV标志物（包括HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb）并分析其组合方式。结果①312例HCC患者中,HBV DNA阳性299例（299/312,95.83%）。HBeAg阳性者41例（41/312,13.14%）,其HBV DNA载量为（5.79±2.53）Log10copies/ml;HBeAg阴性者271例（271/312,86.86%）,其HBV DNA载量为（4.59±1.66）Log10copies/ml（P〈0.01）。②HBV标志物存在6种组合方式,6.09%患者HBsAg阴性,86.86%患者HBeAg阴性。结论 HBV DNA多为低至中等水平,HBV DNA阳性者中高病毒载量者仅为少数;HBeAg阴性者远多于HBeAg阳性者;HBsAg滴度较低,少数患者HBsAg阴性。     

乙型肝炎患者肝内HBV抗原表达与肝细胞病变的关系

本文用ABC法和单克隆抗体检测139例乙肝患者肝组织内HBsAg和HBcAg。HBcAg阳性89例(64.0％),阳性率随乙肝病变严重程度依次递增,膜型HBsAg可能与疾病严重程度有关。HBcAg阳性68例(48.9％),阳性率以慢活肝最高而HBsAg携带者最低,浆膜型HBcAg可能反映了疾病的活动性。HBsAg和HBcAg的膜表达可能与乙肝肝细胞病变密切相关。     

乙肝患者肝移植前后血清病毒指标的变化及意义分析

目的 观察乙肝患者肝移植术后血清5项指标及HBV DNA含量的变化并分析其临床意义.方法 选择2006年10月-2007年3月在解放军第302医院施行肝移植术且术前采用拉米夫定治疗的35例乙肝患者为研究对象,采用ELISA法测定手术前、后血清5项指标,采用荧光FCR法测定血清HBV DNA含量变化.选择拉米夫定治疗前HBV DNA高于10 000U/ml的45例乙肝患者作为对照,测定用药前和用药2周后血清乙肝5项指标和HBV DNA.结果 35例肝移植患者中移植后第2天,除1例术前、术后乙肝5项和HBV DNA无明显变化外,其余34例肝移植患者的血清HBsAg和HBV DNA全部转阴,HBsAb全部转阳.其中11例大三阳患者的HBeAg全部转阴,6例发生从HBeAg到HBeAb的血清学转换,但移植前后血清HBeAb均无变化.45例拉米夫定对照患者均未发生HBsAg阴转和HBsAb阳转的现象,11例患者血清HBV DNA含量下降到500U/ml以下,29例血清HBV DNA含量下降,但持续高于1 000u/ml,5例患者的HBV DNA无明显变化.在34例大三阳患者中,有29例患者HBeAg转阴但未发生HBeAb阳转现象.结论 肝移植术外加抗病毒和免疫学的综合治疗方案,可使97%的乙肝患者彻底清除血清HBV DNA,并发生HBsAg、HbeAg的血清转换.     

乙型肝炎患者1—15的追踪观察及预后分析

对182例经组织学确诊的乙型肝炎患者进行1－15年的随访，每年采血检测肝功能，病毒学指标及HBV DNA定量，了解乙型肝炎患者的远期临床及HBVM变化。显示，累计死亡14例，转为肝硬化15例，肝癌6例，累计HBsAg阴转率为13．6％，HBeAg阴转率为87．9％，60岁以后HBsAg阳性率明显下降。提示慢乙肝患者血清HBVM有自发清除和不易清除双向趋势，肝组织损害迁延不愈，肝硬化患者保健得当可长期生存。     

慢性乙型肝炎血清学标志、HBV DNA定量分析及HBV前C/C变异的临床研究

目的 :探讨慢性乙型肝炎患者血清学标志、HBVDNA载量及HBV前C/C变异与临床病变的关系。方法 :随机选取慢性乙型肝炎患者 2 4 6例 ,其中轻度 10 2例、中度 88例、重度 5 6例 ,分别应用ELISA、实时PCR法检测其血清中的HBV免疫学标志及HBVDNA含量。同时对HBeAg阴性而HBVDNA含量高拷贝的 3例轻度、6例中度及 8例重度患者血清 ,应用巢式PCR方法分离前C/C区全长基因 ,纯化后克隆入T载体 ,鉴定后进行序列测定。结果 :10 2例轻度、88例中度及 5 6例重度患者中血清学标志HBsAg ,HBeAg,抗 -HBc阳性模式分别为 5 3例 (5 1.9% )、4 6例(5 2 .3% )、33例 (5 8.9% ) ;HBsAg ,抗 -HBe,抗 -HBc阳性模式分别为 37例 (36 .3% )、32例 (37.5 % )、2 1例 (37.5 % ) ;单独HBsAg阳性为 8例 (7.8% )、5例 (5 .6 % )、1例 (1.7% ) ;其他模式分别为 4例、5例、1例。HBVDNA含量平均值分别为 10E 5 .5 3拷贝 /ml、10E 6 .0 3拷贝 /ml、10E 6 .5 8拷贝 /ml。HBeAg阴性而HBVDNA含量 >10E 6拷贝 /ml的病例数分别为 3例、6例、8例。统计分析表明 ,轻、中、重慢性乙肝患者间血清学标志及HBVDNA含量差异均不具统计学意义 ,而HBeAg阴性HBVDNA含量高拷贝的患者出现频率差异具有统计学意义。序列测定结果显示 17例患者血清的HBV分离株的前C/C     

利用甲胎蛋白及B型超声进行原发性肝癌普查的初步报告

利用AFP在高危人群中普查肝癌尽管切实可行,但AFP阴性肝癌可有漏检。作者等采用AFP及B型超声两种方法在重点人群中普查肝癌,受检人数2109人,均行AFP、HBsAg、GPT、ZnT测定,其中1170人同时做B超检查。共检出肝癌6例,检出率284.49/10万。其中4例AFP阳性,2例阴性,B超检查有5例显示肝占位病变,1例为肝硬化表现。本文资料显示AFP血凝法阳性、有肝炎病史、及男性的受检者HBsAg阳性率均显著增高(P分别<0.01,0.05),由于HBV感染与肝癌发生密切相关,以上情况应为普查的重点。对11例AFP升高者进行AFP变异体检测,结果肝癌之LCA结合型AFP均>30％,良性肝病与妊娠之LCA结合型均<30％。184名受检者进行了乙肝5项标志物检查,对其表现类型作了分析。     

乙型肝炎病毒在原发性肝细胞癌中病原意义的研究

本文收集我院近年经病理确诊的肝细胞癌70例、毛细胆管型肝癌7例,复核临床材料和HE染色切片,同时再作Victoria blue染色观察肝细胞内HBsAg,证明未查血清HBsAg、血清HBsAg阴性和阳性者肝细胞内HBsAg检出率分别为85.7％、75.0％和90.2％,三者无明显差别,仅血清HBsAg阴性者肝细胞内HBsAg数量明显少些,提示肝细胞癌病例呈血清内HBsAg阴性,并不能除外HBV感染和致癌可能。再者,34.3％标本内可在肝癌细胞内查见HBsAg,9.8％标本于癌、肝组织间不正常肝细胞内查见HBsAg,而7例毛细胆管型肝癌,HE染色肝组织内未见毛玻璃样肝细胞,Victoria blue染色未见HBsAg,进一步说明HBV感染与肝细胞癌问确具密切因果关系。     

血清HBV-DNA检测在招收飞行学员筛选中的意义

目的 调查在ELISA方法检测血清HBsAg阴性飞行学员中，血清HBV-DNA的检出情况。方法 用ELISA法检测2224名应招飞行学员血清HBsAg。其中阴性者进一步检测抗-HBs、抗-HBc、HBeAg、抗-HBe，并用聚合酶链反应（PCR）检测HBsAg阴性者HBV-DNA。结果 在2224名应招飞行学员中HBsAg阳性158例，阳性率7.1%；HBsAg阴性者中，除单项抗-HBs阳性血清模式外，其他各模式均有不同例数的人检测到HBV-DNA。结论 本研究表明，仅检测血清中HB-sAg的表达状况。不足以将所有感染有HBV者筛选出去，应由灵敏度更高的分子生物学方法取代。