消毒剂灭活流感病毒方法的探讨

目的：以含氯消毒剂对甲型流感病毒灭活试验效果的观察，探讨消毒剂杀灭病毒试验方法。方法：试验采用细胞感染法，以活细胞染色法（MTT法）和观察细菌病理变化（CPE）法测定中和剂，消毒剂及中和产物对狗肾细胞（MDCK）存活性的影响。通过流感病毒对细胞感染情况的观察，计算半数细胞感染剂量（TCID50）的值，确定消毒剂对病毒的杀灭效果。结果：含量消毒剂有效氯含量25mg/L时，作用于细胞，仍可影响细胞的存活性，以MTT法测定，细胞存活率仅为26．15％，与CPE法测定含氯消毒剂对狗肾细胞存活性影响的结果基本一致；用MTT法筛选的含0．07％，硫代硫酸钠的PBS的中和剂，可作为含氟消毒剂杀灭甲型感病毒试验的中和剂，有效氯含量400mg/L,作用10min，对甲型流感病毒的平均杀灭率为99．91％，结论：以细胞感染法确定消毒剂对病毒杀灭效果的试验方法简便，可行。     

植物草本消毒剂灭活流感病毒效果的实验观察

[目的] 探讨稀释除药法检测消毒剂灭活流感病毒的效果。 [方法] 结合稀释除药法和细胞感染法,采用病毒灭活定量悬液试验检测消毒剂灭活流感病毒的效果。 [结果] 消毒剂稀释浓度100％和50％的1min灭活率都达99.995％以上;消毒剂稀释浓度25％的10min灭活率为99.867％。 [结论] 采用病毒灭活定量悬液试验,结合稀释除药法和细胞感染法检测消毒剂对流感病毒的灭活效果具有快速、简便等特点,特别适用于理化成分未明消毒剂的检测。     

苍术消毒剂空气消毒的效果观察

目的观察苍术消毒剂对空气消毒的效果. 方法在实验室和现场试验空气中,采用苍术消毒剂对金黄色葡萄球菌和自然菌进行杀灭效果测定. 结果以1.1 g/m3苍术消毒剂用于空气消毒,对金黄色葡萄球菌作用60 min,其杀灭率为99.91%;对空气中自然菌作用60 min,,其消亡率为99.29%. 结论苍术消毒剂具有使用方便、杀菌作用强、无刺激性、无残留污染、对人体无毒等突出优点.     

紫外线灯和化学消毒剂对空气消毒效果的评价

目的 :比较不同消毒方法对医院室内空气的消毒效果。方法 :采用FA - 1型 6级撞击式空气微生物采样器进行紫外线灯和化学消毒剂消毒前、后的空气采样 ,并进行细菌培养检验。结果 :带反光罩的紫外线灯对空气中自然菌的消除率为 92 .57% ,50 0 0mg·L 1的过氧乙酸、10 0 0mg·L 1的二氧化氯和 150 0 0mg·L 1的过氧化氢气溶胶喷雾 ,对空气中自然菌的消除率均达到 90 %以上。结论 :两种紫外线灯比较 ,带反光罩的紫外线灯照射强度高 ,消毒效果好 ;三种化学消毒剂中 50 0 0mg·L 1的过氧乙酸、10 0 0mg·L 1的二氧化氯和 150 0 0mg·L 1的过氧化氢对空气中自然菌均有良好的杀灭作用。     

不同消毒剂对流行性感冒病毒的消毒效果和检测方法

由于病毒只能在敏感的活细胞内复制、繁殖以及消毒剂本身和中和剂对细胞的影响等因素，因而检测消毒剂对病毒的消毒效果往往难度较大．目前尚缺乏直接对病毒的消毒数据和比较规范的检测方法。本通过碘伏、新洁尔灭和洗必泰三种常用消毒剂对流感病毒消毒效果的检测，为探索建立比较规范的检测方法提供科学依据。     

低浓度过氧乙酸空气消毒效果评价

过氧乙酸是一种高效广谱消毒剂,对病毒、细菌、真菌及芽胞均能迅速杀灭.我院自80年代就开始应用过氧乙酸熏蒸进行空气消毒,对防止手术交叉感染,在无菌管理上起到了重要作用.但过氧乙酸对人体及金属制品有强烈的刺激、腐蚀作用,浓度越高,刺激性越大.为寻求该药消毒的最佳浓度及剂量,我们试用低浓度过氧乙酸熏蒸法进行空气消毒,经检测效果良好,现介绍如下.     

丙二醇消毒空气效果检验和氨碘丙二醇碘丙二醇新消毒剂试验效果评价

在临床上应用空气消毒剂一般用乳酸、过氧乙酸、或采用其它消毒剂。有的单位则用丙二醇作为空气消毒剂。现我们将雨二醇做为空气消毒剂的效果作一下分析。一般采用丙二醇作为空气消毒剂主要是因为其气味小,平日检测合格,为了使对雨二醇消毒空气做到有据可查最近对丙二醇消毒空气效果检验,结果消毒效果远低于氯氧,碘氯消毒剂,当三氯化碘或碘溶入丙二醇     

常用手消毒剂对人肠道病毒71型灭活效果的研究

目的了解常用手消毒剂对人肠道病毒71型(HEV71)的灭活效果。方法采用悬液定量试验法进行试验观察。结果 A类消毒凝胶和B类手部消毒液分别作用1min和5min,对HEV71灭活对数值均>3.0;C类医用复方手消毒剂分别作用1min和5min,对HEV71灭活对数值均>4.0;自制乙醇甘油消毒液作用1min,对悬液内HEV71灭活对数值达5.5。结论目前市场销售常用手消毒剂对人肠道病毒均能达到消毒效果,自制乙醇甘油(77%乙醇、2%甘油)手部消毒液对人肠道病毒的杀灭效果理想。     

2013-2017年河南省H3N2亚型流感病毒流行特征分析

目的 分析河南省2013-2017年H3N2亚型流感病毒流行特征,为流感防控策略的制定提供依据。方法 采集河南省22家流感监测哨点医院的流感样病例(Influenza like illness,ILI)咽拭子标本,进行荧光定量PCR检测和病毒分离,对H3N2亚型流感病毒检测阳性标本进行统计分析。结果 河南省2013-2017年共检测62 307例ILI病例标本,其中H3N2亚型流感病毒核酸检测阳性4 791例,四个监测年度H3N2亚型阳性占流感总阳性的率分别为14.9%、95.68%、12.36%、76.57%,男女发病率差异无统计学意义;有三个监测年度不同年龄组的H3N2感染率差异有统计学意义;H3N2亚型流感病毒感染人群职业分布以散居儿童(24.73%-35.41%)、托幼儿童(21.94%-30.17%)、学生(16.77%-27.66%)检出人数最多;各个监测年度各市核酸阳性率和病毒分离率不同;H3N2病毒分离株以低血凝滴度(1〖DK〗∶16)二代细胞分离毒株为主(62.33%)。结论 2河南省H3N2亚型流感病毒呈年度周期性流行,是近些年流感流行的的主要型别,儿童和学生是H3N2亚型流感防控的重点人群,且该病毒在细胞中不易培养,呈低滴度高代数特点,应加强病毒分离工作。     

石家庄市2009年H3N2亚型流感病毒血凝素重链区基因变异分析

目的:了解石家庄市2009年H3N2亚型流感病毒流行情况,研究2009年分离H3N2亚型流感病毒株血凝素重链(HA1)的基因特性及变异情况。方法:用MDCK细胞分离流感病毒,采用血抑实验分型鉴定。随机选取24株H3N2亚型流感毒株进行RNA提取、逆转录扩增获得HA1基因产物,将其进行基因序列测定,之后用DNAStar软件的MegAlign功能进行序列比对和分析。结果:经MegAlign将24株毒株与WHO疫苗推荐株A/Wisconsin/67/200(07～08)、A/Bris-bane/10/2007(08～10)进行比对,发现与同年疫苗株同源性较高,为98.2%～98.6%,仅有个别位点出现氨基酸替换。结论:2009年石家庄市H3N2亚型流感毒株HA1区与同年疫苗株基因序列符合率较高,尚未形成一个新的变异株。     

青海省流感病毒病原学监测及H3亚型血凝素基因变异研究

目的 监测青海省2007～2008年度季节性流感病毒型与亚型分布,了解2007～2008年度部分A/H3N2分离株血凝素(HA)基因变异情况.方法 采集监测哨点医院流感样病例的鼻咽双拭子标本,接种MDCK细胞,采用标准抗血清鉴定阳性分离株型与亚型,并对2007～2008年度部分H3亚型流感病毒进行HA基因测序,分析HA基因变异情况.结果 2007～2008年度在哨点医院送检标本中共分离到144株流感病毒,其中124株为A/H3N2,B型20株,型与亚型有明显分布强弱特征.H3亚型HA序列分析,青海省6株分离株与2008、2009年部分省份分离株及江西同期分离株接近,与WHO 2008～2009年度疫苗推荐株相近.结论 WHO推荐的2006～2007年度疫苗株A/Hiroshima/52/2005滞后于在我省流行的流感病毒毒株.     

浙江省1998--2009年H3N2亚型流感流行株基因组全序列分析

目的 从基因组全序列分析探讨浙江省1998-2009年H3N2亚型流感病毒的基因变异与流感流行的关系.方法 选择浙江省1998-2009年流感流行期间分离到的H3N2亚型流感病毒流行代表株19株,采用RT-PCR方法扩增其8个基因片段后进行序列测定,并与近十余年间使用的疫苗株序列进行比较.结果 H3N2亚型流感流行株HA和NA基因的氨基酸变异率最高,分别为13.98%和10.00%;其他6个内部基因所表达的蛋白中,除NP、M2和NS1(氨基酸变异率分别为6.43%、6.19%和3.48%)外,其他蛋白的氨基酸变异均＜3.00%;在H3N2亚型流感存在较大范围流行的年份,除HA和NA基因外,流感病毒其他6个内部基因也会发生不同程度的变异.此外,在以往一些年份中,WHO推荐的H3N2流感病毒疫苗株与浙江省同期流行株之间,在许多基因上存在着滞后现象.结论 在加强对H3N2亚型流感毒株表面HA与NA基因监测的同时,也应注意到其他内部基因的变异,为新一轮流感流行株的出现提供重要的预警信息.     

两种甲3型流行性感冒疫苗株交叉免疫研究

目的 探究2007-2008年度甲3型流行性感冒(简称流感)疫苗2株相似株之间交叉免疫反应的情况.方法 以18～60岁无流感疫苗免疫史的健康人作为受试者,分别接种2种流感裂解疫苗,其中52名接种安尔来福TM,137名接种凡尔灵(R),采集免疫前、后血清,采用微量血凝抑制(HI)试验检测血清抗体.以免疫后血清抗体阳转率、抗体几何平均滴度(GMT)增长倍数和抗体保护率3项指标进行评价.结果 用广岛株抗原检测,安尔来福TM和凡尔灵(R)的抗体阳转者分别有43名和110名,抗体平均阳转率分别为82.7%(95%CI:69.2%～91.8%)和80.3%(95%CI:72.4%～86.5%),差异无统计学意义(χ2=0.141,P>0.05);用威斯康星株抗原检测,抗体阳转者分别有37名和101名,抗体阳转率分别为71.2%(95%CI:56.7%～82.8%)和73.7%(95%CI:65.4%～80.8%),差异亦无统计学意义(χ2=0.126,P>0.05).用广岛株抗原检测,安尔来福TM和凡尔灵(R)的免疫后抗体GMT增长倍数分别为11.5(95%CI:7.5～17.5)和13.0(95%CI:10.0～16.9),差异无统计学意义(F=0.497,P>0.05);而用威斯康星株抗原检测,分别为9.5(95%CI:6.3～14.3)和10.9(95%CI:8.5～13.7),差异亦无统计学意义(F=0.554,P>0.05).2种疫苗免疫前、后血清抗体保护率,用广岛株抗原检测免疫前安尔来福TM和凡尔灵(R)分别为48.1%和54.7%,免疫后达到98.1%和95.6%,2种疫苗的差异无统计学意义(χ2=0.135～0.673,P值均>0.05);用威斯康星株抗原检测,免疫前分别为11.5%和13.9%,免疫后达到80.8%和86.1%,2种疫苗的差异亦无统计学意义(χ2=0.178～0.834,P值均>0.05),但是广岛株抗原检测的结果均高于威斯康星株抗原检测的结果(χ2·=7.111～52.155,P值均<0.01).结论 WHO推荐的2种季节性流感疫苗相似株之间有良好的交叉免疫反应,但是存在毒株之间的检测系统误差,应采用相同毒株检测.     

2007～2008年流感监测季北京地区H3N2亚型流感病毒抗原性与HA1基因特性分析

目的:了解2007~2008年流感监测季北京地区分离的H3N2亚型流感病毒抗原性及血凝素基因变异情况。方法:选取2007~2008年流感监测季中分离的首株H3N2亚型毒株及其后不同时间、不同地点共9株毒株,通过单向血凝抑制试验进行抗原性分析;测定血凝素基因的HA1区核苷酸序列并推导出其氨基酸序列,进行基因进化特性分析。结果:与我国代表株A/江西/东湖/312/2006本身的血凝抑制效价相比,9株病毒中3株有4倍及以上差异。HA1区核苷酸序列和氨基酸序列分析表明,有部分毒株的氨基酸发生下述替换:3 L→F、53 D→N、57 Q→H、157 L→S、158 K→R、171 N→K、173 K→N、182 V→I、194P→L、261 R→Q、272 A→V、291 N→D、299 K→R;其中53、157、158、171、173、194位氨基酸位于抗原决定簇。结论:北京地区2007~2008年流感监测季分离的H3N2亚型流感病毒有部分毒株已发生抗原性及基因特性的改变。     

Use of GFP-expressing influenza viruses for the detection of influenza virus A/H5N1 neutralizing antibodies

The hemagglutination inhibition (HI) assay is used most commonly for the detection of antibodies to influenza viruses. However, for the detection of antibodies to avian influenza viruses of the H5N1 subtype either induced by infection or by vaccination, the HI assay is insensitive. Therefore, the virus neutralization (VN) assay has become the method of choice to detect human serum antibodies directed to these viruses. However, this assay requires a second assay for the detection of residual virus replication, which makes it laborious to perform and less suitable for high throughput testing of large numbers of samples. Here we describe an alternative method for the detection of these antibodies, which is based on the use of reporter viruses that express the green fluorescent protein (GFP) upon infection of target cells. GFP-expressing viruses were generated carrying the HA of a variety of antigenically distinct H5N1 influenza viruses. The method proved easy to perform and could be carried out rapidly. Using a panel of antisera raised against H5N1 influenza viruses, the assay based on GFP expressing viruses was compared with the classical virus neutralization assay and the hemagglutination inhibition assay. In general, the results obtained in these assays correlated well. It was concluded that the assay based on the reporter viruses is an attractive alternative for the classical virus neutralization assay and suitable for large sero-epidemiological studies or for the assessment of vaccine efficacy in clinical trials.     

2005～2006年流感季节河北省甲3亚型流感病毒血凝素重链区基因变异分析

目的：研究2005～2006年流感流行期河北省分离的甲3（H3N2）亚型流感病毒株血凝素重链（HA1）的基因特性,了解H3N2亚型流感病毒株HA1基因的变异及其与流感流行的关系。方法：用狗肾（MDCK）细胞分离培养流感病毒,提取病毒核糖核酸（RNA）,采用RT-PCR法扩增病毒HA1基因,纯化产物进行核苷酸序列测定,用DNAStar软件作分析处理。结果：2005～2006年流感流行期在河北省分离到的H3N2亚型流感病毒株HA1与同时期的H3N2亚型流感疫苗株A/Calfornia/7/04相比其抗原性变异不大,核苷酸同源性为96.2%～98.2%,氨基酸同源性为98.7%～99.0%,3个位点发生了氨基酸替换,其中2个在抗原决定簇B区（188N〉D、193S〉F）,1个在受体结合位点（225D〉N）。结论：H3N2亚型流感病毒HA1尚未发生明显变异,与疫苗株同源性较高。人群对其已建立起较好的免疫屏障,这是河北省该流行期H3N2亚型活动水平低的主要原因。     

浙江省1 998年H3N2流感流行的溯源研究

目的 对1998年浙江省的H3N2流感流行进行溯源研究.方法 采用RT-PCR扩增浙江省1998年3株H3N2流感流行代表株的全基因组序列,并与GenBank上1995-1998年世界其他地区H3N2流感流行株进行比较;同时,采用交叉血凝抑制实验,计算各毒株间的抗原比.结果 HA基因进化树表明,1998年浙江省H3N2优势流行株A/Zhejiang/11/98、A/Zhejiang/18/98与1995-1996年世界各地以及1997年我国大陆的H3N2流行株间存在显著差异,在进化树上虽与A/Sydney/5/97同属一簇,但和美国纽约以及中国香港1997年后期流行株更为接近.在HA1、NA和MP基因上,A/Zhejiang/18/98与香港1997年后期流行株同源性最高,而在PA、HA和NS基因上,与纽约流行株的遗传距离也小于A/Sydney/5/97.A/Zhejiang/18/98与香港或纽约株在HA1区仅存在1～3个位点的氨基酸残基不同,而与A/Sydney/5/97存在7个位点的氨基酸残基差异,其中3个位点于抗原决定簇区.各毒株间的交叉血凝抑制实验表明A/Zhejiang/18/98与A/Sydney/5/97的抗原比已达2.0,提示二者在抗原性上存在一定差异.此外,1997-1998年H3N2各地流感流行的起始时间序列,也显示了该次流感传播的可能途径.结论 浙江省1998年H3N2流感的流行很可能是由1997年底H3N2新型流感变异株经纽约和香港输入中国大陆所导致.