原位杂交检测孕酮受体mRNA在周期子宫内膜的表达

应用地高辛标记的探针进行原位杂交，检测周期内膜各组分的孕酮受体（ＰＲ）ｍＲＮＡ的表达。内膜取自子宫肌瘤患者，子宫全切术后即取内膜及部分肌层，储于液氮。据月经史及形态表现将内膜分为三期：增殖、分泌早期及中晚分泌期。结果显示，ＰＲｍＲＮＡ在子宫内膜的表达有明显的组织／细胞差异。基质细胞普遍表达ＰＲｍＲＮＡ，增殖期与分泌期比较无明显差异。中晚分泌期内膜腺体细胞ＰＲｍＲＮＡ的表达极低甚至不表达，且无明显的表浅及深层的表达差异。提示子宫内膜孕酮受体至少在腺体上可能存在转录水平的调节。     

子宫内膜异位症和腺肌症患者子宫内膜雌激素受体的时空表达

目的　研究子宫内膜异位症和子宫腺肌症子宫内膜各种细胞中雌激素α和 β受体的表达模式 ,为探索子宫内膜异位症和子宫腺肌症的致病机理提供依据。　方法　 10 8例患有内膜异位症、腺肌症、两症并发组和对照组子宫内膜组织 ,常规光镜下按Noyes分期标准行形态学分期。采用免疫组织化学的方法观察不同月经周期时相子宫内膜腺上皮、基质和血管内皮细胞中雌激素受体ERα和ERβ的表达。　 结果　与对照组相比 ,ERα信号强度在各组相应的细胞类型、相应的时相无显著差异 ,但子宫内膜腺上皮细胞、基质细胞和血管内皮细胞中显示阳性信号的细胞比例增大 ,且腺上皮细胞质普遍出现ERα阳性信号。子宫内膜异位症和腺肌症的血管内皮细胞中ERα阳性细胞数显著增加。ERβ在各组的表达模式与对照组相比无明显差异 ,甚至略呈下降趋势。　结论　人子宫内膜中ERα为雌激素效应的主要受体亚型 ,表达ERα的腺上皮、基质和血管内皮细胞数量的增多以及腺上皮细胞质普遍出现ERα阳性信号可能与这两种疾病的发病密切相关 ;ERβ并不参与这一过程。     

血管内皮生长因子在子宫内膜的表达及调控

血管内皮生长因子 ( vascular endothelial growth factor,VEGF)为特异性促血管内皮细胞丝裂原并具促血管通透性作用。 VEGF及其受体在子宫内膜中表达 ,受雌孕激素、缺氧、c AMP的调节 ,其与生理性月经后的内膜修复、胚胎植入及子宫内膜癌、内膜异位症、子宫异常出血密切相关     

应用小鼠月经模型对子宫内膜血管周期性变化的形态学研究

目的应用小鼠月经模型,研究子宫内膜血管形态学和血管内皮细胞在子宫组织中所占体积百分比(volumefraction)的月经周期变化。方法成年雌性去势C57BL/6小鼠34只,经性激素处理后,实验组小鼠宫腔内注射0.2 ml消毒花生油诱导子宫内膜蜕膜化反应;对照组无宫腔油剂注射。取各组子宫组织,行常规HE染色,并用CD31单克隆抗体作为血管内皮细胞的标记分子进行免疫组织化学染色,计算机辅助图像分析软件CAST2,计算分析血管内皮细胞在子宫组织中所占体积百分比。结果实验组宫腔注射油剂后30~35 h观察到子宫内膜脱落,内膜血管呈双层结构,近肌层的血管组织结构保持正常,近内膜的血管结构紊乱;对照组子宫内膜始终完整,但全层血管结构紊乱,未见分层现象。注射油剂后56~70 h实验组子宫内膜上皮基本修复,但血管稀疏,结构紊乱;对照组血管均完全修复。血管内皮细胞在子宫组织所占体积百分比在注射油剂56~70 h后明显下降而其他各组间则无显著变化。结论此月经模型的子宫内膜血管形态学呈分层改变类似于人类子宫内膜的功能层和基底层。血管内皮细胞在子宫组织所占体积百分比仅在子宫内膜修复早期的实验组出现下降。     

铜宫内节育器和含吲哚美辛铜宫内节育器对大鼠子宫内膜血管内皮生长因子表达的影响

目的　研究置固定式铜宫内节育器 ( FCu-IUD)和固定式吲哚美辛铜宫内节育器 ( FICu-IUD)的大鼠子宫内膜组织中血管内皮生长因子 ( VEGF)及其受体 Flk-1的表达对子宫异常出血的影响。　方法　采用免疫组化 SP法检测 FCu-IUD组、FICu-IUD组大鼠子宫内膜组织 VEGF的表达及 Flk-1的定位 ,逆转录聚合酶链反应 ( RT-PCR)检测各组 VEGF m RNA的表达。以未置器一侧作为对照。　结果　 VEGF在子宫内膜腺上皮细胞、基质细胞及血管内皮细胞均有表达 ,Flk-1定位于血管内皮细胞及子宫内膜基质细胞的胞膜与胞浆。 FCu-IUD组、FICu-IUD组均有 VEGF m RNA扩增。 FCu-IUD组置器侧较对照侧 VEGF蛋白及 m RNA表达明显增加 ,FICu-IUD组置器侧与对照侧比较 ,VEGF表达无明显差异。而 FCu-IUD组与 FICu-IUD组比较 ,VEGF表达有显著差异。　结论　 Cu-IUD引起的子宫异常出血与 VEGF的增加有关 ,吲哚美辛减少 Cu-IUD引起的子宫异常出血的作用可能与通过抑制前列腺素合成从而 VEGF生成减少有关     

Norplant使用者子宫异常出血内膜血管变化的研究

目的　探讨 Norplant使用者子宫内膜出血病理变化的特点。　方法　应用组织学及免疫组织化学方法对正常子宫内膜和避孕药具 Norplant使用者子宫内膜进行组织形态学和血管内皮细胞 CD3 4和基膜层粘连蛋白 ( LN)的比较研究。　结果　避孕药具 Norplant引发的出血为弥漫性 ,内膜发育受抑制 ;出血部位的血管呈断裂像 ,血管内皮细胞中 CD3 4和血管基膜中 L N的阳性表达都明显减弱。　结论　 Norplant导致子宫出血的直接因素是毛细血管内皮细胞中的 CD3 4和基膜中 LN的含量减少     

孕酮对培养人子宫内膜腺上皮细胞HOXA11基因表达的影响

目的研究孕激素对人子宫内膜腺上皮HOXA11基因表达的影响,初步探讨其影响机制。方法6例增殖期子宫内膜腺上皮细胞进行原代培养,在细胞生长汇合时,分别加入孕酮或孕酮+17β-雌二醇;米非司酮(RU486)预处理后加入孕酮或孕酮+17β-雌二醇培养4、68、d,提取细胞总RNA。用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测HOXA11基因表达量。结果在原代培养的人子宫内膜腺上皮细胞中加入孕酮或孕酮+17β-雌二醇,第4天时HOXA11基因表达量增加,第6天达高峰,第8天时有所下降;孕酮+雌激素的作用无叠加效应;经RU 486预处理后,上述作用消失。结论孕酮对原代培养的人子宫内膜腺上皮细胞HOXA11基因的表达具有正调控作用,这种作用由孕酮受体介导。     

同型半胱氨酸对血管生成的影响及叶酸的作用

目的通过研究不同浓度同型半胱氨酸（homocysteine,HCY）对人脐静脉内皮细胞血管生成的影响及叶酸（folicacid,FA）对其的保护作用。方法实验分6组,0、1、10、100μmol／L同型半胱氨酸,10μmol／L同型半胱氨酸＋100μmol／L叶酸,100μmol／L叶酸,进行体外血管生成能力实验,Transwell迁移能力检测。Western-blot检查血管生成及迁移相关蛋白表达。结果同型半胱氨酸能明显抑制血管生长因子的表达,降低人脐静脉内皮细胞的成血管环能力。同型半胱氨酸能明显抑制迁移相关蛋白表达,降低人脐静脉内皮细胞的迁移运动能力。叶酸能改善同型半胱氨酸的抑制作用。结论同型半胱氨酸通过抑制血管生长因子、ROCKl／2的表达,从而抑制血管内皮细胞分裂增殖、血管环生成及迁移能力,导致内皮功能障碍,而叶酸能改善这种抑制作用。     

肿瘤坏死因子在小鼠药理性孕酮撤退月经样模型中的定位和表达

目的 在药理性撤退小鼠月经样模型中,观察孕酮撤退后,肿瘤坏死因子(TNF-α)的定位和表达情况.方法 卵巢切除的小鼠在诱导蜕膜化之后给予米非司酮即通过拮抗孕酮受体的方法(药理性撤退),导致孕酮撤退,并用免疫组化的方法观察米非司酮处理的不同时相,TNF-α在小鼠子宫内膜的定位;用实时PCR的方法观察TNF-α表达情况.结果 免疫组化结果显示米非司酮处理后0～8 h,TNF-α主要存在于腔周围的血管内皮细胞;12～16 h,主要存在于内流的白细胞;24～48 h,主要存在于崩解组织边缘的间质细胞区域和修复好腺上皮细胞周围的间质细胞.实时PCR结果显示TNF-α mRNA在孕酮撤退后24 h内都有表达,并且TNF-a表达量逐渐增高,在12h、16h达到峰值. 结论 在此小鼠月经样模型中,米非司酮处理即孕酮撤退后TNF-α在此模型子宫中定位呈区域性分布,并诱导TNF-α表达升高,可能参与了子宫内膜的崩解.     

C型利钠肽对血管内皮细胞株增能力的影响

目的 了解C型利钠肽（CNP）对血管内皮细胞增殖能力的影响。方法 将所构建的含人CNP（hCNP）的重组质粒pcDNA3．1（＋）在聚乙烯亚胺介导下转染人脐静脉血管内皮细胞株。通过反转录-聚合酶链反应、免疫组织化学和蛋白质印迹法检测该质粒的表达，用噻唑蓝法检测该质粒的表达产物对人脐静脉血管内皮细胞株增殖能力的影响。同法转染下列物质作对照：pcDNA3．1（＋）（阴性对照）、增强型绿色荧光蛋白质粒（阳性对照，只用于检测转染率）、磷酸盐缓冲液（空白对照）。结果pcDNA3，1（＋）转染48h后人脐静脉血管内皮细胞株的增殖能力为0．164±0．012；与其比较，含hCNP的pcDNA3．1（＋）在血管内皮细胞中能高效表达，可使细胞增殖能力达0．3014±0．096（P〈0．05）。结论 CNP具有促进血管内皮细胞增殖的生物学活性。以聚乙烯亚胺介导转染质粒、检测CNP在血管内皮细胞中的表达及测定被转染细胞增殖活性等方法的建立，为开展CNP基因治疗提供了物质基础和实验依据。     

Fas在正常睾丸组织及精原细胞瘤中的表达

目的 :明确Fas在正常睾丸组织及精原细胞瘤中的表达情况。　方法 :采用免疫细胞化学、原位杂交、反转录PCR(RT PCR)法检测 8例正常睾丸组织及 34例精原细胞瘤组织中Fas蛋白及FasmRNA的表达。　结果 :免疫组织化学方法发现在正常睾丸组织中的 3类主要细胞 (Leydig细胞、Sertoli细胞及生殖细胞 )中均有Fas分子表达 ;免疫组织化学和原位杂交方法在精原细胞瘤中检测到Fas表达阳性率分别为 41.18%和 38.2 4% ,表达水平明显减低或丧失 ,多呈现小片状或点状表达 ;RT PCR方法证明正常人睾丸组织中有FasmRNA的表达。　结论 :Fas在精原细胞瘤中的表达明显减少或丧失可能是精原细胞瘤形成及进展的原因。     

Fas配体mRNA在正常睾丸组织及精原细胞瘤中的表达

为明确Fas配体mRNA在正常睾丸组织及精原细胞瘤中的表达情况，采用原位杂交，反转录PCR（RT－PCR）法检测正常睾丸组织8例Fas配体mRNA的表达，采用原位杂交法检测33例精原细胞瘤组织中的Fas配体mRNA的表达。结果RT－PCR方法证明正常人睾丸组织中有Fas配体mRNA的表达；原位杂交法证明8例正常睾丸组织中均有Fas配体mRNA的表达，且表达局限于睾丸Sertoli细胞，正常生殖细胞中无Fas配体mRNA的表达；原位杂交方法在33例精原细胞瘤组织中检测到Fas配体mRNA表达阳性11例，阳性率为33．33％，多呈现小片状或点状表达。提示Fas配体mRNA仅表达于人类睾丸的Sertoli细胞中，Fas配体mRNA在精原细胞瘤组织中的出现可能是精原细胞瘤形成及进展的原因。     

囊性纤维化跨膜转导调节器在培养人子宫内膜上皮细胞的表达

目的　探讨雌、孕激素对体外培养人子宫内膜腺上皮细胞囊性纤维化跨膜转导调节器(CFTR)基因和蛋白质表达的影响。　方法　采用逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)、原位杂交、免疫组织化学方法检测CFTR mRNA和蛋白质表达量的变化。　结果　RT PCR结果显示单纯雌二醇、雌二醇与孕酮合用、对照组均扩增出特异的 CFTR mRNA条带,孕酮组则未见到;原位杂交结果也证实雌二醇刺激CFTR mRNA的表达(P<0.05),孕酮则抑制CFTR mRNA的表达。免疫组织化学检测子宫内膜腺上皮细胞中CFTR蛋白质含量表明雌二醇显著刺激其生成。　结论　卵巢性激素雌二醇上调、孕酮下调体外培养人子宫内膜腺上皮细胞CFTR mRNA及蛋白质的表达,从而调节月经周期不同时相宫腔液微环境中水与电解质含量,适应不同的生殖阶段。     

血管内皮生长因子C在人乳腺癌细胞株MCF-7及MCF-7/Adr中的表达

目的：检测血管内皮生长因子C（vascular endothelial growth factor C,VEGF-C)mRNA和蛋白在人乳腺癌细胞株MCF－7及其耐药株MCF－7／Adr中的定位，定性表达。方法：根据VEGF－C基因序列，设计合成地高辛标记的特异性寡核苷酸探针，运用原位杂交方法检测培养的细胞株MCF－7和MCF－7／Adr中VEGF－C mRNA的表达；并运用免疫组织化学方法检测了两种细胞中VEGF－C蛋白的表达。结果：原位杂交检测到MCF－7和MCF－7／Adr细胞的胞浆中有阳性蓝色颗粒，免疫组化检测发现两种细胞的胞浆中均有阳性棕黄色颗粒，而阴性对照细胞的胞浆中则均无阳性颗粒。结论：人乳腺癌细胞株MCF－7及其耐药株MCF－7／Adr细胞能够转录VEGF－C mRNA并在其细胞浆中翻译合成相应的蛋白。     

Expression of E-selectin and its transcripts during intestinal ischemia-reperfusion injury in pigs

BACKGROUND: Ischemia-reperfusion injury (IRI) can result in severe organ dys- or nonfunction. Interaction of leukocytes and endothelial cells mediated by E-selectin appears to be a key step for disturbed microcirculation. Therefore we studied gene and protein expression as well as localization of E-selectin during intestinal IRI. METHODS: Intestinal tissue samples were obtained from extracorporeal perfused intestines (cold ischemia time [CIT] 2 or 20 hours, each n = 5) and additionally in intestinal transplanted pigs (CIT 2 or 20 hours, each n = 1). Mucosal damage was graded according to the Chiu classification. E-selectin mRNA was determined by PCR and quantitative RT-PCR. Localization of E-selectin mRNA was performed by in situ hybridization and of the protein by immunohistochemistry. RESULTS: Histologically, mucosal damage occurred during reperfusion and was earlier and more severe after 20 hours of CIT. E-selectin mRNA expression was detected by PCR already after laparotomy and was elevated after reperfusion. Interestingly, mRNA expression was already increased after 20 hours of CIT. E-selectin mRNA was localized to the luminal surface of muscular, submucosal, and mucosal endothelial cells and the protein was detected on submucosal arterial endothelium as early as 2 hours after reperfusion. CONCLUSION: Prolongation of CIT results in more severe mucosal damage during reperfusion, which is associated with protein expression of E-selection that might be used as a marker for activated endothelial cells. Increased E-selectin mRNA at end of 20 hours of CIT might indicate a preactivated state of endothelial cells potentially triggered by bacterial translocation or products.