小鼠肝癌细胞H22膜蛋白组的双向电泳

目的 运用双向电泳及生物信息学技术,对小鼠肝癌细胞H22与正常肝细胞的膜蛋白进行比较和鉴定,以期为探索膜蛋白在肝癌发生,发展及侵袭转移过程中的作用提供实验依据.方法 运用顺序抽提法结合与双向电泳兼容的膜蛋白抽提试剂盒提取小鼠肝癌细胞H22和正常小鼠肝细胞膜蛋白,用考马斯亮蓝法定量,经双向凝胶电泳分离、银染,Image Master 2D Platinum软件分析,切取差异蛋白点,采用基质辅助激光解吸附飞行时间质谱技术检测,Aldente软件检索Swiss-Prot数据库进行匹配鉴定. 结果与正常小鼠肝细胞膜蛋白双向电泳图谱对比分析鉴定了8个在小鼠肝癌细胞H22中表达明显增强的膜蛋白,分别为硫酸酯酶修饰因子2,蛋白激酶C和肌酸激酶Ⅱ底物蛋白3,序列装配结构组件50同系物,巨噬细胞清道夫受体Ⅰ/Ⅱ,非特异蛋白C9或f135同系物,紧密结合蛋白ZO-2,3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶,空泡蛋白序列相关蛋白52同系物.结论 已鉴定的8个膜蛋白的生理功能涉及细胞代谢、细胞增殖、细胞信号转导、细胞骨架等,且在肝癌细胞H22中表达明显增强,提示小鼠肝癌细胞H22发生发展及侵袭转移可能涉及相关膜蛋白生理功能的改变.     

核苷二磷酸激酶等蛋白在人胰腺癌与癌旁组织中的差异表达

目的 应用比较蛋白质组学方法研究人胰腺导管腺癌组织和癌帝组织之间差异的蛋白质.方法利用双向凝胶电泳(2-DE)对8例胰腺导管腺癌组织和癌旁组织的总蛋白进行分离,两组间差异蛋白质点用质谱和数据库检索鉴定利用蛋白质印迹分析和免疫组织化学法检测差异蛋白在胰腺癌和癌旁组织的表达.结果 鉴定出30个差异表达蛋白,包括亲环素A、过氧化氧化还原蛋白1、14-3-3 sigma、Annexin Ⅱ、热休克蛋白27、核苷二磷酸激酶(NDPD)等.差异表达蛋白NDPK在35例胰腺癌组织表达率为77.1%,而配对癌旁组织为28.6%.结论 2-DE为基础的蛋白质学技术是研究肿瘤的一种重要手段.NDPK等差异表达蛋白可能是潜在的胰腺癌诊断标记物.     

HBV相关性肝细胞癌肝组织蛋白质组差异的初步分析

目的分析HBV相关性肝细胞癌蛋白质组与癌周组织（肝硬化组织、慢性肝炎组织）蛋白质组之间的差异，鉴定其中的差异蛋白质点。方法应用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳，对18例肝细胞癌组织与12例肝硬化组织、6例慢性肝炎组织的蛋白质组表达谱进行差异分析，应用基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱仪对差异蛋白质点进行了鉴定。结果肝细胞癌组织与癌周组织的对比中，共发现有表达水平存在显著差异的47个蛋白质点，17个差异蛋白质点得到了初步鉴定，其中8个蛋白质点在既往文献中未曾报道其与肝细胞癌变相关。结论慢性肝炎基础上发生的癌变与肝硬化基础上发生的癌变，其癌变机制存在差别。本实验研究中初步鉴定的差异蛋白质，可能有助于HBV相关性肝细胞癌的癌变机制、肿瘤标记和治疗靶标的进一步研究。     

核苷二磷酸激酶等蛋白在人胰腺癌与癌旁组织中的差异表达

目的应用比较蛋白质组学方法研究人胰腺导管腺癌组织和癌旁组织之间差异表达的蛋白质。方法利用双向凝胶电泳（2-DE）对8例胰腺导管腺癌组织和癌旁组织的总蛋白进行分离，两组间差异蛋白质点用质谱和数据库检索鉴定。利用蛋白质印迹分析和免疫组织化学法检测差异蛋白在胰腺癌和癌旁组织的表达。结果鉴定出30个差异表达蛋白，包括亲环素A、过氧化氧化还原蛋白1、14-3-3sigma、AnnexinII、热休克蛋白27、核苷二磷酸激酶（NDPK）等。差异表达蛋白NDPK在35例胰腺癌组织表达率为77．1％，而配对癌旁组织为28．6％。结论2-DE为基础的蛋白质组学技术是研究肿瘤的一种重要手段。NDPK等差异表达蛋白可能是潜在的胰腺癌诊断标记物。     

应用蛋白质组学技术筛检肝癌血清差异蛋白质并分离鉴定阿朴脂蛋白AⅡ

目的 应用蛋白质组学技术筛选并鉴定肝癌患者血清中的差异蛋白质.方法 采用表面增强激光解析及电离飞行时间质谱技术,对33例肝癌患者和33例正常对照的血清蛋白质进行了检测分析,筛选肝癌的差异蛋白;用等电点沉淀法、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳及高效液相色谱串联质谱等一系列方法分离鉴定差异蛋白质.肝癌组与正常组蛋白质峰差异比较采用两样本t检验. 结果 肝癌组与正常人组血清蛋白质图谱在相对分子质量为2 000～10 000范围内,有65个蛋白质峰差异有统计学意义(P<0.05),由此组建的诊断模型灵敏度为100%,特异度为96.97%其中包括8706.5 M/Z和8579.2M/Z(t值分别为2.562和2.783,P值均<0.05),经分离鉴定其为阿朴脂蛋白AⅡ. 结论 阿朴脂蛋白AⅡ是肝癌的差异蛋白之一,可能与肝癌的发生有关.     

不同转移潜能人肝癌细胞系酪氨酸磷酸化蛋白质差异分析

目的研究不同转移潜能人肝癌细胞系中酪氨酸磷酸化蛋白质表达的差异并筛查与肝癌转移相关的酪氨酸磷酸化蛋白质分子。方法应用双电泳(2-D E)、免疫印迹法及基质辅助激光解析电离飞行时间质谱分析,对三种不同转移潜能人肝癌细胞系Hep 3B、MHCC97L和MHCC97H进行酪氨酸磷酸化蛋白质组分析。结果对照2-DE胶和免疫印迹发光胶片,Hep3B检测到10个点,MHCC 9 7L检测到19个点, MHCC97H检测到17个点。经质谱鉴定,得到膜连蛋白Ⅰ等19个差异点。结论细胞内酪氨酸磷酸化蛋白的表达差异与肝癌的侵袭转移有关。     

人胰腺组织及胰腺癌细胞株蛋白质组的双向电泳分析

目的建立具有高分辨率和稳定性的胰腺癌蛋白质组研究的双向电泳方法.方法取正常胰腺、胰腺癌手术标本和胰腺癌细胞株,分别制备组织、细胞匀浆,提取蛋白质组分,进行双向电泳.结果加大蛋白酶抑制剂,应用两性电解质,可以得到理想的胰腺组织、细胞的蛋白质组分,并获得清晰、重复性良好的双向电泳图谱.结论胰腺组织细胞蛋白质双向电泳中,样本的制备和双向电泳的条件是关键因素.     

应用蛋白质组学技术筛检肝癌血清差异蛋白质并分离鉴定阿朴脂蛋白AⅡ

Objective To screen differential proteins in serum from hepatocellular carcinoma (HCC) patients by Proteomic Technology and to purify and identify them. Methods Surface enhanced laser desorp-tion Ionization time of flight-mass spectrum (SELDI-TOF-MS) was employed to screen differential proteins in serum from 33 HCC patients and 33 control cases, and then to purify and identify them using isoelectric precipitation, Tricine sodium dodecyl sulphate ployacrylamide gel electrophoresis (Tricine-SDS-PAGE) and high performance liquid chromatography tandem Mass Spectrum (HPLC-MS). Result 65 protein peaks in the range of relative molecular weight from 2000 to 10 000 were found significant difference (P < 0.05) between the patient group and control group. Based on these differential protein peaks, diagnostic model for HCC detection was established and its sensitivity and specificity were 100% and 96.97 % respectively. Proteins with 8706.5 and 8579.2 relative molecular weights (the t value was 2.562 and 2.783 respectively, and P value was 0.013 and 0.015 respectively) out of the 65 differential proteins were purified and identified, and then recognized as Apolipoprotein A Ⅱ (Apo AⅡ). Conclusion Apo A II is probably a differential protein of HCC and maybe related to the pathogenesis of HCC.     

应用蛋白质组学技术筛检肝癌血清差异蛋白质并分离鉴定阿朴脂蛋白AⅡ

Objective To screen differential proteins in serum from hepatocellular carcinoma (HCC) patients by Proteomic Technology and to purify and identify them. Methods Surface enhanced laser desorp-tion Ionization time of flight-mass spectrum (SELDI-TOF-MS) was employed to screen differential proteins in serum from 33 HCC patients and 33 control cases, and then to purify and identify them using isoelectric precipitation, Tricine sodium dodecyl sulphate ployacrylamide gel electrophoresis (Tricine-SDS-PAGE) and high performance liquid chromatography tandem Mass Spectrum (HPLC-MS). Result 65 protein peaks in the range of relative molecular weight from 2000 to 10 000 were found significant difference (P < 0.05) between the patient group and control group. Based on these differential protein peaks, diagnostic model for HCC detection was established and its sensitivity and specificity were 100% and 96.97 % respectively. Proteins with 8706.5 and 8579.2 relative molecular weights (the t value was 2.562 and 2.783 respectively, and P value was 0.013 and 0.015 respectively) out of the 65 differential proteins were purified and identified, and then recognized as Apolipoprotein A Ⅱ (Apo AⅡ). Conclusion Apo A II is probably a differential protein of HCC and maybe related to the pathogenesis of HCC.     

肝内转移和多中心发生的多结节肝癌蛋白质表达谱的差异分析

目的 比较分析多结节肝癌的肝内转移癌灶和多中心发生癌灶的蛋白质表达谱,为更加准确的分子分型方法提供实验依据. 方法对5例肝内转移(IM)和6例多中心发生(MO)的多结节肝癌按照结节大小分为IM1、IM2、MO1、MO2四组,联合双向凝胶电泳与质谱技术分析多结节肝癌的蛋白质表达谱;并用Westem blot验证质谱结果.结果 双向凝胶电泳联合质谱技术鉴定IM1、IM2、MO1、MO2四组共30个差异蛋白质点,确认为25种差异表达的蛋白质;Gene Ontology 分类显示其与细胞运动、信号转导、氧化还原、脂类代谢、氨基酸代谢等有关. 结论多结节肝癌肝内转移和多中心发生的蛋白质表达不同;双向凝胶电泳联合质谱技术可作为二者分子分型的方法,有利于临床医师对肝癌患者实施治疗和判断预后.     

血清多标志物蛋白质谱在原发性肝细胞癌诊断中的应用

HCC早期诊断和早期治疗是提高患者生存率的关键。表面增强激光解吸电离飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）技术是一项近年来新兴的临床蛋白组学实用技术,已被广泛地用于肿瘤标记物的筛查等研究。本研究比较了HCC患者和健康对照者血清蛋白质质谱,通过决策树分类技术筛选出一组特异的标志蛋白,建立HCC诊断模型,为HCC的早期预警和早期诊断提供更敏感可靠的指标。[第一段]     

血清蛋白质组分析技术筛选肝癌自发抗体

目的采用血清蛋白质组分析技术(SERPA)筛选、鉴定肝癌自发抗体。方法双向电泳分离肝癌细胞系HCCLM3的总蛋白后将其转膜,肝癌、肝炎和正常组血清各8份与膜免疫印迹,图像分析确定不同血清免疫印迹图谱间的差异点及其与双向电泳图谱的对应关系,最后用基质辅助激光解吸飞行时间质谱进行鉴定。结果建立了高重复性HCCLM3的双向电泳图谱及其肝癌、肝炎及正常组血清的免疫印迹图谱,图谱均点数分别为603、70.75±24.25、68.50±23.44和41.38±15.05,肝癌、肝炎组图谱点数明显多于正常组,但肝癌与肝炎组差异无统计学意义。质谱鉴定确定了核蛋白、细胞骨架、代谢酶及热休克蛋白等五类肝癌自发抗体。结论SERPA是一种高通量筛选、鉴定肿瘤自发抗体的新技术,大量肝癌自发抗体的发现为肝癌进一步的免疫诊断及治疗奠定了基础。     

鼠疫菌pYC质粒对菌体蛋白质组影响的初步研究

目的 了解鼠疫菌pYC质粒对菌体蛋白质组的作用。方法 将含有pYC质粒的鼠疫菌与不含该质粒的鼠疫菌通过双向电泳的方法进行蛋白质组比对,并将差异蛋白进行质谱鉴定。结果 含有pYC质粒的鼠疫菌与不含该质粒的鼠疫菌的蛋白图谱可识别的蛋白点均在500个以上,两者总体上相似性较高;前者较后者在大小约70×103、等电点5.0左右处,明显多一个蛋白点簇,该蛋白簇经质谱鉴定均为伴侣蛋白GroEL,但该蛋白并非是pYC质粒编码蛋白。结论 pYC质粒对菌体蛋白质组有影响,其编码蛋白pYC_p10与pYC_p11,可能调控GroEL高表达。     

乙型肝炎病毒X基因转染人肝癌细胞株双向凝胶电泳图谱分析

目的 研究转染HBV X基因的人肝癌细胞株中蛋白质表达谱的改变,为筛查在HBV相关性肝细胞癌发生中发挥重要作用的关键蛋白质分子奠定基础.方法 利用分子生物学方法建立稳定表达HBV X蛋白(HBx)的肝癌细胞株HepG2+HBx,同时设空载体peDNA3转染细胞HepG2-pcDNA3及HBV全基因转染的人肝癌细胞株HepG2.2.15为对照.PCR法扩增Neo基因检测质粒DNA片段的插入,免疫印迹法检测HBx蛋白的表达.利用固相pH梯度双向凝胶电泳分离3种肝癌细胞株HepG2-pcDNA3、HepG2-HBx和HepG2.2.15的总蛋白,用图像分析软件比较、分析、识别细胞间的差异表达蛋白质.统计学分析采用t检验.结果 获得分辨率高、重复性好的3种细胞的双向电泳(2-DE)图谱.软件分析表明,HepG2-pcDNA3、HepG2-HBx和HepG2.2.15细胞的2-DE凝胶可识别蛋白点分别为(2 095±137)、(2 188±105)和(2 109±20)个.比较HepG2-pcDNA3与HepG2-HBx细胞的2-DE图谱发现37个差异显著的蛋白点,其中21个在HepG2-HBx表达上调,16个下调.6个表达量差异在5倍以上(t=0.027,P＜0.05);HepG2.2.15与HepG2-HBx细胞相比,有38个差异显著的蛋白点,其中35个在HepG2-HBx细胞中上调,3个下调,14个表达量差异在5倍以上(t=0.031,P＜0.05).结论 HBx基因转染引起人肝癌细胞株蛋白质表达谱的变化,可能与感染的肝细胞发生恶性转化的分子生物学机制有关.     

肝癌细胞亚细胞组分的双向凝胶电泳分析

目的建立超速离心方法分离亚细胞组分的技术路线，以提高肝癌细胞蛋白质组的双向凝胶电泳分离效率。方法体外培养的肝癌细胞QGY-7703匀浆破碎后，经差速离心分离成细胞核、20000xg沉淀、100000xg沉淀和细胞浆4个亚细胞组分，分别进行双向凝胶电泳，然后用ImageMaster软件分析电泳图谱。结果亚细胞组分分离后，电泳分辨率明显提高，特别是细胞核和细胞浆蛋白质的检出效率得到很大提高。不同亚细胞蛋白质组电泳图谱的差异显示了其蛋白质组构成的不同。结论超速离心是一种有效的亚细胞组分分离手段，蛋白质组技术与超速离心技术的结合能克服全细胞双向凝胶电泳的一些缺陷，并可将蛋白质组研究引向亚细胞水平。