中药肝康冲剂提取诱导人肝癌细胞系BEL-7402细胞凋亡的实验研究

本研究提取了肝康冲剂的主要成分并对抑瘤作用与诱导人肝癌细胞系BEL-7402细胞凋亡的关系进行了初步探讨.结果表明:1.肝康冲剂提取物对体外培养的肝癌细胞的生长具有抑制作用(MIT法):且抑制作用随药物浓度的加大而升高.其中肝康冲剂提取物>80mg/ml、阿霉素>5μg/ml作用显著,抑制率均大于50%.2.肝康冲剂提取物对人肝癌细胞BEL-7402细胞凋亡的诱导(1)对于肝癌冲剂和阿霉素作用的肝癌细胞BEL-74O2细胞周期DNA含量的检测表明,肝康冲剂、阿霉素均可阻滞人肝癌GO/G1期细胞进入S期,诱导细胞发生凋亡.(2)细胞核形态观察表明;AO染色,激光共聚焦扫描显微镜细胞扫描断层分析发现:对照组细胞完整无缺,DNA荧光强度分布地形图显示整个结构形似“蛋糕”.肝康冲剂组作用6小时后部分细胞核开始固缩,染色     

阿霉素热化疗对肝癌细胞及其耐药株凋亡的影响与机制

目的探讨阿霉素(ADM)加热化疗对人肝癌细胞BEL7402(以下简称BEL7402细胞)及其耐药株BEL7402/ADM细胞(以下简称BEL7402/ADM细胞)的凋亡诱导作用。方法以体外培养的人肝癌细胞BEL7402和BEL7402/ADM细胞为研究对象,采用水浴加温法,观察单纯热疗、单纯ADM化疗与热化疗对细胞凋亡的影响。用AnnexinV-FITC和PI双染色流式细胞仪检测细胞凋亡;采用流式细胞技术检测加热对BEL7402细胞和BEL7402/ADM细胞胞内ADM浓度和细胞膜上P糖蛋白(P-gp),多药耐药性相关蛋白(MRP)的影响。结果热化疗组细胞凋亡率(%)显著高于单纯热疗、单纯ADM化疗组的同种细胞[BEL7402细胞:(79.21±0.54)vs(16.67±1.03),(48.91±0.05),P均<0.05;BEL7402/ADM细胞:(75.42±0.16)vs(14.79±0.61),(23.78±0.04),P均<0.05]。热化疗组细胞内ADM浓度显著高于单纯化疗组的同种细胞(P<0.05)。热化疗组和单纯热疗组细胞膜上P-gp、MRP的表达率显著低于单纯化疗组的同种细胞(P<0.05)。结论加热可能通过抑制细胞膜上P-gp、MRP的表达,从而提高BEL7402细胞及BEL7402/ADM细胞对ADM诱导凋亡作用的敏感性。     

乙肝病毒X蛋白结合蛋白(HBXIP)在肝癌中的表达及定位

目的:研究乙肝病毒X蛋白结合蛋白(HBXIP)在人肝癌细胞中的表达和定位.方法:蛋白印迹法检测HBXIP在人肝癌细胞系中蛋白和基因的表达,激光共聚焦扫描显微镜检测内源HBXIP在BEL7402、HepG2肝癌细胞中的定位.结果:HBXIP在人肝肿瘤细胞系中蛋白和基因表达水平增高,激光共聚焦扫描显微镜观察发现HBXIP主要定位于BEL7402、HepG2细胞核中.结论:HBXIP在人肝癌细胞系中高表达,主要定位于肝癌细胞核内,可能是人肝癌重要的调节因子.     

端粒酶反义核酸对BEL-7402肝癌细胞生长和活性的影响

目的 研究人类端粒酶RNA（hTR)基因的反义寡核苷酸（AS－ODN）对BEL－7402肝癌细胞生长和活性的影响。方法 将AS－ODN作用于BEL－7402细胞，观察细胞生长状况，PCR－ELISA法检测端粒酶活性，流式细胞仪和细胞DNA电泳观察细胞的凋亡情况。结果 AS－ODN能抑制BEL－7402细胞的生长，降低其端粒酶活性并诱导细胞凋亡。结论 针对hTR的AS－ODN对治疗肝癌有潜在意义。     

三氧化二砷对人肝癌细胞生长增殖的影响

目的观察三氧化二砷（As2O3）对人BEL7402肝癌细胞株的作用及其机制。方法采用MTF法检测As2O3对BEL7402细胞的生长抑制率;流式细胞仪测定经不同浓度As2O3处理后的BEL7402细胞周期及增殖细胞核抗原（PCNA）变化,同时Annexin V—FITC／PI双染法检测细胞凋亡。结果三氧化二砷可显著抑制BEL7402细胞生长,且剂量-效应关系显著（r=0．9650,P〈0．01）,半数抑制浓度（IC50）为4．93μmol／L;BEL7402经As2O3处理后可发生凋亡。As2O3能显著下调PCNA蛋白表达（P〈0．01）,并使细胞周期阻滞在G2／M期。结论三氧化二砷可有效抑制人肝癌BEL7402细胞生长增殖,其机制可能与诱导细胞凋亡、下调PCNA表达及阻滞细胞周期有关。     

siRNA沉默RhoC表达诱导人肝癌BEL7402细胞凋亡

目的:研究siRNA沉默RhoC基因表达对人肝癌细胞BEL7402凋亡的影响及其机制,为肝癌的基因治疗提供实验依据。方法:构建RhoC-siRNA真核表达载体pU6mRFPRhoC-siRNA,转染BEL7402细胞,激光共聚焦显微镜检测转染效率,RT-PCR和Western blotting鉴定RhoC基因沉默效果;流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳和瑞氏染色检测BEL7402细胞凋亡,RT-PCR检测细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达。结果:成功构建pU6mRFPRhoC-siRNA重组载体,转染BEL7402细胞的效率为70%,RT-PCR和Western blotting检测RhoC基因沉默效率分别为85%和82%。pU6mRFPRhoC-siRNA转染组BEL7402细胞凋亡显著高于未转染BEL7402细胞和pU6mRFP Scramble-siRNA转染组BEL7402细胞[(21.00±2.23)%vs(6.47±1.64)%、(4.63±0.47)%,P<0.01)],pU6mRFPRhoC-siRNA转染组BEL7402细胞DNA呈典型的"梯状"条带,瑞氏染色见转染组BEL7402细胞中有大量凋亡细胞。pU6mRFPRhoC-siRNA转染组BEL7402细胞Bcl-2基因水平显著低于、而Bax基因水平显著高于未转染BEL7402细胞和pU6mRFP Scramble-siRNA转染组BEL7402细胞(0.28±0.15vs0.96±0.21,1.03±0.24,P<0.05;1.09±0.21vs0.26±0.10,0.25±0.07,P<0.01)。结论:siRNA沉默RhoC基因可诱导人肝癌BEL7402细胞凋亡,其机制与下调Bcl-2基因、上调Bax基因表达有关。     

siRNA沉默RhoC表达诱导人肝癌BEL7402细胞凋亡

目的:研究siRNA沉默RhoC基因表达对人肝癌细胞BEL7402凋亡的影响及其机制,为肝癌的基因治疗提供实验依据。方法:构建RhoC-siRNA真核表达载体pU6mRFPRhoC-siRNA,转染BEL7402细胞,激光共聚焦显微镜检测转染效率,RT-PCR和Western blotting鉴定RhoC基因沉默效果;流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳和瑞氏染色检测BEL7402细胞凋亡,RT-PCR检测细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达。结果:成功构建pU6mRFPRhoC-siRNA重组载体,转染BEL7402细胞的效率为70%,RT-PCR和Western blotting检测RhoC基因沉默效率分别为85%和82%。pU6mRFPRhoC-siRNA转染组BEL7402细胞凋亡显著高于未转染BEL7402细胞和pU6mRFP Scramble-siRNA转染组BEL7402细胞[(21.00±2.23)%vs(6.47±1.64)%、(4.63±0.47)%,P<0.01)],pU6mRFPRhoC-siRNA转染组BEL7402细胞DNA呈典型的梯状条带,瑞氏染色见转染组BEL7402细胞中有大量凋亡...     

缺氧对肝癌BEL7402细胞周期及放射敏感性的影响

目的:研究肿瘤细胞在缺氧及放射情况下细胞周期的改变及细胞存活的情况。方法:将贴壁培养的肝癌细胞株BEL7402分成对照组、缺氧24h组、缺氧48h组、缺氧加照射组和单纯照射组。应用流式细胞仪检测细胞周期的改变,同时应用成克隆分析法观测细胞存活情况。结果缺氧24h与48h组的肝癌细胞株BEL7402存活分数变化不明显,加照射后的实验组则明显下降而缺氧加放射组与单纯放射组比较细胞存活分数明显升高。肝癌细胞株BEL7402细胞缺氧培养后随着缺氧时间的延长(0～48h)S期细胞逐渐减少,而凋亡细胞逐渐增多;G1期和G2/M期细胞变化不明显;单纯放射组可以看到明显的G2/M期细胞阻滞;而在缺氧加放射组看不到明显的G2/M期细胞阻滞,但凋亡细胞明显增高。结论缺氧(1%氧浓度)对肝癌细胞株BEL7402的存活无明显影响;但能保护肝癌细胞株BEL7402使其免受放射线的损伤;缺氧通过影响射线对G2/M期细胞阻滞降低了肝癌细胞株BEL7402对射线的敏感性。     

莪术瓜蒌汤含药血清诱导PGLH7 细胞凋亡的实验研究

 目的 探讨莪术瓜蒌汤含药血清对人肺癌细胞凋亡的诱导作用. 方法 不同剂量的莪术瓜蒌汤含药血清分别作用于PGLH7细胞,采用倒置显微镜、光学显微镜和激光共聚焦扫描显微镜观察PGLH7细胞凋亡的形态学特征并进行凋亡细胞鉴定;流式细胞仪观察含药血清与PGLH7凋亡的量效关系. 结果 经莪术瓜蒌汤含药血清处理后,倒置显微镜下可见PGLH7细胞变小变圆,悬浮于培养液中;HE染色光镜观察到PGLH7细胞体积缩小变圆,胞核内染色质呈半月形凝集在核膜周边;激光共聚焦扫描显微镜观察到凋亡早期细胞呈Annexin V高染而PI低染,细胞膜呈绿色而细胞核不着色;凋亡中,晚期细胞则Annexin V和PI均为高染,细胞膜呈绿色而细胞核呈红色;部分细胞的核呈碎片状或梅花状,为典型的细胞凋亡形态;流式细胞仪定量检测莪术瓜蒌汤含药血清中剂量、高剂量组随着作用时间的延长,诱导细胞凋亡的比例明显增加,有统计学差异（P〈0.05）. 结论 莪术瓜蒌汤具有一定的抗肺癌作用,其机制可能与诱导肺癌细胞凋亡有关.     

绿茶儿茶素对于人肝癌细胞的凋亡诱导作用

目的：探讨绿茶儿茶素（GTC）对BEL－7402人肝癌细胞的凋亡诱导作用。方法：应用透射电镜、流式细胞术、TUNEL和免疫组化等方法检测受100或200μg／ml GTC作用4天后的BEL－7402细胞的凋亡情况及其PCNA、bcl－2、c－myc、p53蛋白表达情况。结果：受GTC作用4天后的BEL－7402细胞的凋亡显著性增加,其PCNA表达显著性下降,而与凋亡相关的癌基因bcl－2、c－myc、p53蛋白表达未见明显改变。结论：GTC对于BEL－7402细胞的生长抑制作用可能与诱导细胞凋亡有关,也可能与抑制癌细胞DNA合成有关。本研究未发现GTC诱导BEL－7402细胞凋亡与bcl－2、c－myc、p53蛋白表达的相关性。     

新型线粒体靶向铂类配合物Mor-platin抑制肝癌细胞HepG2增殖和抑制细胞球侵袭的研究

  目的  探讨新型线粒体靶向性铂类配合物Mor-platin对人肝癌细胞HepG2的细胞增殖和细胞球侵袭的影响。  方法  运用细胞毒性实验CCK-8法,比较新型线粒体靶向性铂类配合物Mor-platin和经典铂类抗癌药顺铂(cisplatin)对人肝癌细胞HepG2的细胞增殖抑制作用;利用激光共聚焦显微镜观察Mor-platin是否靶向于线粒体;利用透射电子显微镜观察Mor-platin对细胞线粒体形态的影响;流式细胞仪检测Mor-platin作用细胞后细胞凋亡的改变;建立三维肿瘤细胞球模型,探讨Mor-platin对细胞球侵袭的影响。  结果  Mor-platin能够抑制HepG2细胞增殖,半数抑制浓度(IC₅₀)少于cisplatin;Mor-platin能够靶向到线粒体;加Mor-platin后,细胞线粒体膜结构不完整,嵴不清晰或消失以及线粒体中有大片空白区域;Mor-platin引起的细胞凋亡具有剂量依赖性;三维肿瘤细胞球模型显示,Mor-platin处理的细胞球面积小于对照组。  结论  新型线粒体靶向性铂配合物Mor-platin能够靶向于细胞的线粒体,引起线粒体形态变化,抑制细胞增殖,最终导致细胞凋亡,Mor-platin还能抑制三维肿瘤细胞球侵袭,比cisplatin具有更好的抗癌效果。上述研究结果提示Mor-platin具有成为新抗肿瘤药物的潜质。      

阿霉素诱导人肝癌细胞凋亡模型的建立

目的建立肝癌细胞凋亡模型,为进一步研究细胞凋亡分子机理打下基础。方法用抗癌药阿霉素诱导培养的人肝癌细胞株ＨＣＣ－９２０４肝癌细胞发生凋亡,用四唑盐比色试验（ＭＴＴ法）检测。结果研究发现,０．５μｇ／ｍｌ放线菌素Ｄ可明显抑制２０μｍｏｌ／Ｌ阿霉素对肝癌细胞凋亡的诱导作用。用２０μｍｏｌ／Ｌ阿霉素作用肝癌细胞３小时,换培养液继续培养１２小时后,肝癌细胞ＤＮＡ结构断裂,电泳呈梯状带型。肝癌细胞形态学改变出现膜小泡和凋亡小体形成等凋亡细胞特征。用流式细胞仪测定,出现典型的凋亡峰,凋亡细胞占７２．１％。用２０μｍｏｌ／Ｌ阿霉素诱导肝癌细胞凋亡后,细胞周期Ｇ１期、Ｓ期和Ｇ２期分别为７５．９％,２４．１％和０％,肝癌细胞活细胞率为３５．５％。结论用抗癌药阿霉素成功地诱导人肝癌细胞株ＨＣＣ－９２０４肝癌细胞发生凋亡,该细胞凋亡模型的建立,将有助于进一步探讨肝癌细胞凋亡的分子机制。     

碱性成纤维细胞生长因子反义寡核苷酸对肝癌细胞凋亡的影响

目的 检测碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)反义寡核苷酸对肝癌细胞凋亡的影响,探讨bFGF作为肝癌治疗靶点的有效性.方法 以脂质体作为转染载体,转染bFGF反义寡核苷酸于HepG2细胞,用共聚焦显微镜和Western blot方法,检测转染bFGF反义寡核苷酸后肝癌细胞株HepG2中bFGF蛋白的表达,用流式细胞仪检测转染bFGF反义寡核苷酸后HepG2细胞的凋亡率.结果 与转染错义寡核苷酸组相比,bFGF反义寡核苷酸对HepG2细胞中bFGF蛋白表达有明显抑制作用,转染bFGF反义寡核苷酸可明显增加HepG2细胞的凋亡率(P＜0.01).结论 bFGF在肝癌细胞凋亡中有重要调节作用,可作为肝癌增敏治疗的有效靶点.     

蚯蚓组织中抑制肿瘤细胞生长物质的分离提取及其作用机制初探

目的 探索一条从蚯蚓中分离有效抑癌成分的途径，并对其作用机制进行初探。方法 选取赤子爱胜蚓(Eisenia Foe—tida)，采用硫酸铵分段盐析、DEAE纤维素-DE52离子交换柱层析、SephadexG100凝胶过滤柱层析等方法分离纯化。MTT方法测定各分离步骤所得样品对于肿瘤细胞的抑制作用。流式细胞术、共聚焦激光扫描显微镜检测细胞凋亡。结果 蚯蚓组织抽提液经分离纯化后，得一蛋白组分。它可有效抑制BEL-7402细胞(人原发性肝癌细胞系)、HeLa细胞(人宫颈癌细胞系)的生长。凝胶过滤测其分子量为42．2kD，SDS-PAGE显示两条带(分别为33和10kD)。细胞凋亡检测结果证实此组分有促肿瘤细胞凋亡的作用。结论 对蚯蚓组织进行分离提取，可得到抑制实体瘤细胞生长的活性组分。它可引起肿瘤细胞的凋亡，凋亡机制有待进一步探索。     

氨基葡萄糖对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究氨基葡萄糖对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响,并初步探讨其分子机制。方法:CCK-8法检测人肝癌HepG2细胞的增殖情况。流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡。Western blot检测ERK及P-ERK蛋白的表达水平。结果:氨基葡萄糖可以抑制人肝癌HepG2细胞的增殖,且该作用随着药物浓度的增加而逐渐增强。1.0mmol/L氨基葡萄糖作用72h可以使G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例降低。同时,2.0mmol/L及4.0mmol/L氨基葡萄糖处理72h可以使人肝癌HepG2细胞发生凋亡。另外,随着药物浓度的增加,人肝癌HepG2细胞中ERK蛋白的磷酸化水平逐渐降低。结论:氨基葡萄糖可能是通过降低ERK1/2蛋白的磷酸化水平影响细胞周期,从而抑制人肝癌HepG2细胞的增殖并诱导其发生凋亡。     

平阳霉素诱导人食管癌细胞EC8712凋亡的研究

目的：以平阳霉素诱导食管癌细胞凋亡,并探索药物浓度与诱导凋亡之间的关系。材料与方法：应用电镜、ＤＮＡ电泳、ＴＵＮＥＬ、荧光显微镜、激光共聚焦扫描微镜等手段,观察食管癌细胞在不同浓度平阳霉素作用不同时间后的变化插征及诱导凋亡之作用。结果：细胞形态学及ＤＮＡ水平的变化均证实靶细胞发生了凋亡,但较大浓度较长时间的平阳霉素作用可致其坏死;平阳霉素对ＥＣ８７１２凋亡的诱导效率呈浓度、时间依赖性增强。结论：一     

Chlorophyllin e4 is a novel photosensitizer against human bladder cancer cells

The aim of the study was to investigate the photodynamic effect of the novel photosensitizer chlorophyllin e4 against human bladder cancer cells. T24 and 5637 bladder cancer cell lines were incubated with chlorophyllin e4 and irradiated with a 650-nm laser light. The controls included cells treated with chlorophyllin e4 but without light as well as cells exposed to laser light without chlorophyllin e4. Photocytotoxicity was monitored with MTT assay and apoptosis was measured by flow cytometry. In addition, confocal laser scanning microscopy was used to assess the subcellular localization of chlorophyllin e4. Chlorophyllin e4 exhibited signi?cant photocytotoxicity in both T24 and 5637 cells, which resulted in a maximum of 82.43 and 85.06% cell death, respectively. Treatment with chlorophyllin e4 or laser light alone did not induce cytotoxicity. In addition, chlorophyllin e4-mediated PDT induced a significantly higher percentage of apoptosis in T24 and 5637 cells compared to the control groups (p<0.01). Moreover, confocal laser scanning microscopy revealed that chlorophyllin e4 co-localized with mitochondria in both cell lines. In conclusion, the remarkable photocytotoxicity, natural abundance and inexpensive composition of chlorophyllin e4 suggest that this compound may be a novel, effective photosensitizer for the treatment of human super?cial bladder cancer.     

DHA 联合葫芦素B对人胃癌BGC -823细胞增殖及凋亡的影响

目的：研究二十二碳六烯酸（docosahexaenoicacid，DHA）联合葫芦素 B（cucurbitacin B）体外对人胃癌BGC -823细胞增殖及凋亡的影响。方法：利用 NADH 酶染色、吉姆萨染色显微镜下观察人胃癌 BGC -823细胞经 DHA 联合葫芦素 B 作用后细胞形态学上的变化。采用 MTT 法、流式细胞仪检测细胞增殖、周期及凋亡的情况。结果：根据 MTT 法 DHA 联合葫芦素 B 作用于胃癌细胞比分别利用 DHA、葫芦素 B 直接作用细胞增殖抑制更为明显，更有效降低细胞的存活率，且在相同时间随着药物浓度的提高，作用效果也随之提高。NADH 酶染色法、吉姆萨染色法在显微镜下明显可见细胞凋亡现象。流式细胞仪检测肿瘤细胞，药物联合干预 G0/ G1期细胞明显增多，G2/ M 期和 S 期细胞明显减少。结论：DHA 联合葫芦素 B 可抑制人胃癌 BGC -823细胞增殖、诱导细胞凋亡，其联合具有协同作用。     

矢车菊-3-O-葡萄糖苷增强肝癌HepG2细胞的抗肿瘤活性及其机制探讨

目的:探讨矢车菊-3-O-葡萄糖苷(cyanidin-3-glucoside, C3G)增强人肝癌HepG2细胞的抗肿瘤活性及其作用机制。方法:采用MTT法研究C3G对HepG2细胞抑制率的影响;利用激光共聚焦观察Hoechst 33342染色后细胞形态;流式细胞分析仪分别测定C3G对HepG2细胞凋亡、周期和线粒体膜电位的影响;Western blot法测定C3G对HepG2细胞凋亡相关蛋白表达量的影响。结果:当C3G浓度在12.5～100.0μmol/L范围内,随C3G浓度增加HepG2细胞的抑制率显著增加,呈浓度依赖性,同时在24、48、72 h对HepG2细胞抑制率的IC₅₀分别为97.16、40.35、39.83μmol/L。C3G能显著增加HepG2细胞凋亡率和细胞核的荧光强度,并将细胞周期阻滞在G₂/M期,同时线粒体膜电位显著降低。C3G可上调Bax、Cytochrome c、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达水平,下调Bcl-2蛋白表达水平。结论:C3G可通过激活线粒体介导的凋亡通路和周期阻滞来实现抗肿瘤作用。