脱氧氟尿苷用于提高人卵巢癌细胞株对顺铂敏感性的研究

肿瘤细胞减灭术及术后化学药物治疗 (化疗 )是目前治疗卵巢癌的主要手段 ,以铂类为基础的联合化疗明显改善了晚期卵巢癌患者的治疗效果 ,但耐药性的产生严重影响其化疗效果。本研究采用四甲基偶氮唑蓝 (ＭＴＴ)比色法、免疫细胞化学链霉菌抗生物素 过氧化物酶连接 (ＳＰ)法和流式细胞术等方法 ,分析了脱氧氟尿苷 (ＦＵＤＲ)作用后卵巢癌细胞株ＣＡＯＶ3对顺铂敏感性的变化 ,并初步探讨其机理 ,为临床制定有效的联合化疗方案提供理论依据。一、材料与方法1 材料 :( 1)卵巢癌细胞株 :ＣＡＯＶ3为顺铂耐药株[1] ,购自北京大学人民医院妇科肿瘤…     

ATM对卵巢癌细胞株CaOV3顺铂敏感性的影响

目的:探讨ATM激酶表达水平和活性对卵巢癌细胞Ca OV3顺铂敏感性的影响,以及可能的机制。方法:以ATM-siRNA转染Ca OV3细胞48h下调ATM蛋白水平,以KU-55933预处理Ca OV3细胞12h下调ATM激酶活性。CCK8试验检测细胞活性,Western blot法检测ATM及r-H2AX蛋白表达,荧光共聚焦confocal检测细胞DNA双链损伤标志蛋白r-H2AX表达及同源重组修复关键蛋白RAD51表达及两者细胞核中共定位,应用碱性慧星试验检测细胞内DNA双链损伤情况,流式细胞术检测细胞周期分布。结果:卵巢癌细胞系Ca OV3具备相对完整的同源重组修复能力,下调ATM或抑制ATM激酶活性均可降低DNA双链损伤情况下的同源重组修复能力,增加其对c DDP敏感性,同时减少c DDP引起的G0/G1期周期阻滞。结论:抑制ATM可影响卵巢癌细胞同源重组修复过程,增加DNA双链损伤,缓解G0/G1期周期阻滞,增加其对顺铂敏感性。     

全反式维甲酸与顺铂联合在体外对卵巢癌细胞株3AO增殖、分化、凋亡的影响及其机制的探讨

目的 观察全反式维甲酸（ATRA）和顺铂（CDDP）在体外对人卵巢癌细胞株3AO的增殖、分化和凋亡的影响，探讨全反式维甲酸提高3AO细胞株对顺铂化疗敏感性的机制。方法 ATRA，CDDP以及两药联合分别处理卵巢癌3AO细胞株，MTT法检测细胞存活率，瑞氏染色后高倍镜下计数凋亡细胞数，细胞免疫化学测定bcl-2，p53的表达。显微镜下观察细胞形态变化。结果 细胞存活率在联用组中随ATRA剂量的增加而下降，且低于同剂量单用组（P〈0．01）；细胞凋亡率在联用组中随ATRA剂量的增加而增加，且高于同剂量单用组（P〈0．01）；bcl-2在联用组中随ATRA剂量的增加而下降，p53在联用组中随ATRA剂量的增加而增加。细胞形态随ATRA剂量的增加而趋向下成熟细胞。结论 全反式维甲酸能抑制卵巢癌细胞株3AO的增殖，诱导其分化，提高其对顺铂促凋亡效应的敏感性。其作用机制可能与bcl-2的表达下降有关，p53作用尚不清楚。     

卵巢癌腹腔内顺铂和卡铂化疗

卵巢癌腹腔内化疗已广泛开展，顺铂和卡铂是常用药物。本文总结这两种药物腹腹内化疗治疗卵巢癌的理论基础、治疗现状，讨论临床应用的合理性，比较临床应用情况。     

利用外泌体评估卵巢癌患者对顺铂敏感性

目的:利用外泌体评估卵巢癌患者对顺铂敏感性。方法:超速离心法从卵巢癌细胞A2780、SKOV3、CAOV3培养上清及卵巢癌患者血清中提取外泌体。MTT法检测顺铂对卵巢癌细胞株的24h时半数抑制浓度(IC_(50)),检测出顺铂敏感细胞及耐药细胞。MTT法检测敏感细胞A2780在细胞外泌体与顺铂共培养条件下的增殖。Caspase 3/7活性凋亡检测A2780细胞在细胞外泌体与顺铂共培养条件下的凋亡。MTT法检测A2780细胞在卵巢癌患者血清外泌体与顺铂共培养条件下的增殖,并随访卵巢癌患者病情进展情况。结果:通过超速离心法能从卵巢癌细胞系培养上清及卵巢癌患者外周血清中分离出外泌体。MTT分析证实A2780为顺铂敏感细胞,SKOV3、CAOV3为顺铂不敏感细胞。细胞系来源的外泌体能显著降低A2780对顺铂的敏感性(P<0.05),同时削弱顺铂对A2780中Caspase 3/7的活性(P<0.05),其中SKOV3和CAOV3外泌体的抑制作用显著高于A2780。基于A2780细胞+顺铂模型,将30例卵巢癌患者分为顺铂敏感组和不敏感组,其中不敏感组的13例患者的血清外泌体降低A2780对顺铂敏感性(P<0.05),术后1年已有5例患者有复发情况,而敏感组无复发。结论:利用A2780细胞模型分析外泌体对顺铂杀伤作用的影响,能在一定程度上评估卵巢癌患者对顺铂的敏感性。     

端粒酶催化亚基反义基因抑制卵巢癌裸鼠移植瘤生长作用的观察

端粒酶是一种具有逆转录作用的核酶 ,端粒酶催化亚基(ｈＴＥＲＴ)反义脱氧寡核苷酸能通过降低端粒酶活性、增强细胞周期阻滞及诱导细胞凋亡等途径 ,抑制卵巢癌细胞生长 ,与顺铂 (Ｃ ＤＤＰ ,简称ＤＤＰ)联合应用能增强对癌细胞的杀伤作用[1 5] 。本研究旨在观察端粒酶ｈＴＥＲＴ反义脱氧寡核苷酸对卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的作用 ,及其与ＤＤＰ联合应用的效果。一、材料与方法1 实验材料 :(1)实验动物 :纯合型雌性裸鼠 (ｎｕ/ｎｕ) ,鼠龄为 4周 ,体重为 (14 4± 2 1)ｇ ,购自北京肿瘤研究所动物中心。在无特定病原体环境下饲养。 (2 )卵巢癌细…     

卵巢癌顺铂耐药的分子机制研究进展

顺铂耐药是卵巢癌术后复发和预后不良的重要原因之一,卵巢癌的顺铂耐药机制复杂,除抑癌基因、癌基因、耐药相关基因的改变处,还涉及染色体改变、细胞解毒过程及DNA损伤修复能力的增强以及细胞骨架、热休克蛋白表达异常等,对其分子机制的了解有助于指导卵巢癌临床治疗方案的选择。     

阿司匹林联合顺铂与单纯顺铂抗卵巢癌效应的体外对比研究

化疗是卵巢癌综合治疗的重要手段之一，对于延长中位数生存时间、提高患者生存质量都具有重要意义。多药耐药是化疗失败的重要原因，本实验旨在寻找化疗增敏药物，为提高抗肿瘤药物的临床疗效奠定基础。顺铂是卵巢癌-线化疗药物，顺铂耐药问题严重困扰着临床医生，本实验观察了阿司匹林对顺铂抗卵巢癌效应的影响并对其作用机制进行了初步探讨。     

CO_2对人卵巢癌细胞株生长转移相关因子表达及顺铂敏感性的影响

目的:探讨体外模拟腹腔镜二氧化碳(CO2)气腹环境对人卵巢癌细胞株SKOV3生长转移相关因子表达的影响及CO2气腹环境作用后SKOV3对顺铂(DDP)敏感性的变化。方法:将体外培养的处于对数生长期的SKOV3细胞分为4组,即CO2组、DDP组、CO2+DDP组及对照组。用实时荧光定量PCR(Real-timePCR)法及免疫细胞化学法检测各组细胞的PCNA、VEGF和CD44v6mRNA和蛋白的表达。结果:(1)CO2气体与顺铂间无交互作用(P0.05);(2)CO2处理组肿瘤细胞的PCNA、VEGF和CD44v6mRNA和蛋白表达均明显升高(P0.01);(3)DDP组与对照组、CO2+DDP组与CO2组比较,DDP处理组肿瘤细胞的PCNA、VEGF和CD44v6mRNA和蛋白表达均明显降低(P0.01,P0.01)。结论:CO2环境能促进人卵巢癌细胞株SKOV3生长转移相关因子表达;DDP对肿瘤细胞生长转移因子的表达有抑制作用;CO2环境作用后,肿瘤细胞对DDP敏感性的变化不明显。     

卵巢癌顺铂耐药的分子机制研究进展

顺铂耐药是卵巢癌术后复发和预后不良的重要原因之一.卵巢癌的顺铂耐药机制复杂,除抑癌基因、癌基因、耐药相关基因的改变外,还涉及染色体改变、细胞解毒过程及DNA损伤修复能力的增强以及细胞骨架、热休克蛋白表达异常等,对其分子机制的了解有助于指导卵巢癌临床治疗方案的选择.     

bcl～Xs基因转移联合顺氯氨铂对卵巢癌细胞生长作用的研究

目的 采用以复制缺陷型腺病毒为载体的ｂｃｌ－Ｘｓ基因（Ａｄｖ－ｂｃｌ－Ｘｓ）对卵巢癌细胞进行基因转移,同时使用顺氯氨铂,观察其对卵巢癌细胞生长的抑制作用,方法 用不同浓度的Ａｄｖ－ｂｃｌ－Ｘｓ感染卵巢癌细胞株ＮｕＴｕ－１９,同时使用顺氯氨铂,３ｄ后,用四甲基偶氮唑蓝比色法检测存活细胞,并用流式细胞仪计数细胞周期百分比。结果 Ａｄｖ－ｂｃｌ－Ｘｓ对卵巢癌细胞生长的抑制作用随病毒浓度的增加而增大,至浓     

Fn14活化凋亡增强人上皮性卵巢癌细胞顺铂敏感度的研究

目的：探讨成纤维细胞生长诱导因子14（Fn14）对人上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer,EOC）细胞的顺铂（DDP）敏感度的影响及其可能机制。方法：蛋白质印迹（Western blotting）法检测EOC细胞株SKOV3、CAOV3、OVCAR3、ES2、3AO、A2780、A2780/DDP中Fn14蛋白的表达情况,选择低表达Fn14蛋白的细胞株转染Fn14过表达质粒后,观察转染后细胞株的Fn14蛋白、凋亡相关蛋白caspase-3、cleaved caspase-3和Bcl-2的表达情况。CCK-8法检测细胞增殖能力及DDP半数抑制浓度（IC50）。流式细胞学检测细胞凋亡。结果：人EOC细胞株SKOV3、CAOV3、OVCAR3、ES2、3AO、A2780、A2780/DDP中,A2780/DDP细胞株Fn14蛋白表达水平最低。Fn14过表达质粒转染A2780/DDP细胞后,细胞内Fn14表达水平上调（P＜0.05）;细胞的增殖能力无变化,但细胞DDP的IC50显著降低（P＜0.05）。流式细胞学检测结果进一步显示Fn14可以增加DDP诱导的A2780/DDP凋亡细胞数目。同时,Western blotting结果显示促凋亡蛋白caspase-3表达升高,抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显下降（P＜0.05）。结论：Fn14可能活化凋亡通路进而提高A2780/DDP细胞对DDP的敏感度。     

Toxicity of Paclitaxel and Cisplatin in Combination for Advanced Ovarian Cancer

Ｏｖａｒｉａｎｃａｎｃｅｒ(ＯＣ)ｃｏｎｔｉｎｕｅｓｔｏｂｅａｍａｊｏｒｃａｕｓｅｏｆｍｏｒｔａｌｉｔｙｏｆｗｏｍａｎ .Ｉｔｉｓｔｈｅｌｅａｄｉｎｇｃａｕｓｅｏｆｄｅａｔｈｆｒｏｍｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｃｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ .Ｍｏｓｔｔｕｍｏｒｓａｒｅｃｈｅｍｏｓｅｎｓｉ ｔｉｖｅ ,ｍｅｔａ -ａｎａｌｙｓｅｓｏｆｒａｎｄｏｍｉｚｅｄｃｏｎｔｒｏｌｔｒｉａｌｓｏｆｃｈｅ ｍｏｔｈｅｒａｐｙｈａｖｅｓｕｇｇｅｓｔｅｄｔｈａｔｐｌａｔｉｎｕｍｂａｓｅｄｃｈｅｍｏｔｈｅｒ ａｐｙｅｆｆｅｃｔｓｂｅｔｔｅｒ…     

卵巢癌对顺铂和紫杉醇耐药的分子机制

卵巢癌致死率居女性生殖道恶性肿瘤之首,严重威胁女性的生命健康。肿瘤细胞减灭术及铂类联合紫杉醇的系统化疗是治疗卵巢癌的金标准。因卵巢癌起病隐匿,多数卵巢癌患者确诊时已属晚期,而晚期肿瘤易对目前的化疗药物产生抗药性,因此化疗耐药已成为提高卵巢癌治愈率的关键制约因素。明确化疗耐药的分子机制对探索有效的靶向治疗、研发逆转耐药的新药物具有极其重要的价值,从而提高化疗敏感性和逆转化疗耐药。卵巢癌化疗耐药的形成是多基因、多因素、多水平共同参与的结果,主要的分子机制有抗凋亡、促生存、细胞内药物排出增多、细胞解毒及DNA修复功能增强等。卵巢癌对顺铂和紫杉醇耐药的分子机制尚无定论,现就其可能的耐药机制进行综述。     

顺铂、维拉帕米和环孢菌素诱导卵巢癌细胞凋亡的研究

目的 探讨顺铂（ＤＤＰ）,维拉帕米（ＶＰ）及３′－酮基－去甲基苏氨酸１－缬氨酸２－环孢菌素（ＰＳＣ８３３）诱导卵巢癌细胞凋亡的作用机理。方法 以人卵巢癌亲代细胞株ＣＯＣ１及其耐ＤＤＰ亚细胞株ＣＯＣ１／ＤＤＰ为材料,根据所加药物的不同分为ＤＤＰ组,ＶＰ组,ＰＳＣ８３３组,ＤＤＰ联合ＶＰ组,ＤＤＰ联合ＰＳＣ８３３组和对照组,计算各组细胞生长抑制率,细胞凋亡率同时进行细胞周期分析。结果 ＤＤＰ联合ＶＰ组     

人卵巢癌细胞系具有不同转移潜能亚系的分离及体内和体外鉴定

目的:克隆具有不同转移潜能的癌细胞亚系,并对其侵袭转移能力进行体内外鉴定。方法:应用有限稀释法对卵巢癌细胞系SKOV3进行单细胞克隆,共分离出14个克隆亚系,根据细胞电泳率,流式细胞仪检测所得细胞周期,筛选出3个电泳率差异较大的克隆亚系(S1、S6和S14)。并应用体内外试验检测各亚系的生物学特性及其侵袭转移能力。结果:S1为高转移亚系,体外生长快,侵袭人工基底膜细胞数及软琼脂集落形成数显著多于其他二者,裸鼠体内100%成瘤,70%转移;而S14为不转移亚系,体外生长慢,侵袭人工基底膜细胞数及软琼脂集落形成数显著少于其他二者,裸鼠体内仅20%成瘤,无1例发生转移。结论:该系统为来自同一肿瘤母系,遗传背景完全相同,却具有不同转移潜能的异质性克隆,为肿瘤转移机制的研究和克隆肿瘤转移相关基因提供了良好模型。     

多西紫杉醇对人卵巢癌SKOV3裸鼠移植瘤的抑制作用及其与顺铂、曲妥珠单抗联合作用的探讨

目的:观察多西紫杉醇(Docetaxel,又名多西他赛,商品名泰素帝)对人卵巢癌SKOV3裸鼠移植瘤的抑制作用,并观察其与顺铂和(或)曲妥珠单抗(Trastuzumab,商品名赫赛汀)联用的抑制作用差异。方法:将SKOV3细胞悬液接种于裸鼠右侧腋窝皮下,成功建立人卵巢癌SKOV3裸鼠移植瘤模型后,随机将荷瘤裸鼠分为8组,即顺铂组、赫赛汀组、泰素帝组、顺铂+赫赛汀组、顺铂+泰素帝组、赫赛汀+泰素帝组、顺铂+赫赛汀+泰素帝组和对照组,每组4只。顺铂按3 mg/kg、赫赛汀按30 mg/kg、泰素帝按5 mg/kg每周1次经尾静脉给药,连续6周,每周测量1次小鼠肿瘤的长、短径及小鼠体质量,用药结束后1周处死小鼠,计算抑瘤率,肿瘤组织HE染色观察细胞凋亡,TUNEL技术检测凋亡指数,免疫组织化学方法检测肿瘤组织中Ki-67的表达情况。结果:(1)泰素帝能明显抑制人卵巢癌SKOV3细胞裸小鼠移植瘤的生长,且分别与顺铂、赫赛汀联合后对肿瘤生长的抑制作用更明显,顺铂+赫赛汀+泰素帝组对肿瘤生长的抑制作用最明显;(2)泰素帝单药组肿瘤细胞凋亡指数较对照组显著升高,且分别与顺铂、赫赛汀联合后肿瘤细胞凋亡指数更高,顺铂+赫赛汀+泰素帝组肿瘤细胞凋亡指数最高;(3)泰素帝单药组肿瘤组织中Ki-67的表达率较对照组显著下降,且分别与顺铂、赫赛汀联合后肿瘤组织中Ki-67的表达率下降更明显,而顺铂+赫赛汀+泰素帝三联组肿瘤组织中Ki-67的表达率下降最明显。结论:(1)泰素帝能够有效抑制人卵巢癌SKOV3裸小鼠移植瘤的生长,其可能的机制是通过下调Ki-67等的表达而抑制肿瘤的增殖活性,并诱导肿瘤细胞凋亡;(2)泰素帝分别与顺铂、赫赛汀间具有协同作用,而泰素帝、顺铂、赫赛汀三药联合应用能更有效地抑制肿瘤生长。     

外源性Rb基因对卵巢癌细胞株生长的抑制作用

目的 探讨外源性Ｒｂ基因对卵巢细胞生长的抑制作用,为卵巢癌的基因治疗提供实验依据,方法 通过腺病毒介导的Ｒｂ基因,于体外转染卵巢癌细胞株ＣＡＯＶ３。应用免疫组织化学,ＤＮＡ琼脂糖电泳等方法,检测外源性Ｒｂ基因的导入及其表达。通过四甲基偶氮唑蓝比色法及流式细胞术等,观察转染Ｒｂ基因的ＣＡＯＶ３细胞的生长情况。结果 重组腺病毒载体有可效于体外转染卵巢癌细胞株ＣＡＯＶ３;转染外源性Ｒｂ基因后,ＣＡＯＶ３     

孕激素对人卵巢癌细胞株H08910细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨孕激素（Ｐ）对人卵巢癌细胞株ＨＯ８９１０细胞体外增殖及凋亡的调控作用。方法 选用人卵巢癌细胞株ＨＯ８９１０进行体外培养,实验组中加入含有同浓度Ｐ的培养液,对照组加入等量空白培养液,采用四甲基偶氮唑蓝（ＭＴＴ）比色法检测细胞增殖,流式细胞仪测定细胞周期和凋亡率,光学显微镜和透射电子显微镜进行形态学观察,终末脱氧核苷酸转移酶介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记法（ＴＵＮＥＬ）计数凋亡细胞,流式细胞仪间     

米非司酮对不同种类人卵巢癌细胞株细胞体外作用的研究

目的:研究米非司酮对不同种类人卵巢上皮癌细胞株细胞体外生长的作用。方法:应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定不同浓度米非司酮作用不同时间对人卵巢上皮癌细胞株3AO、OVCAR3和SKOV3细胞生长的抑制作用,以流式细胞间接荧光技术检测肿瘤细胞ER、PR蛋白表达率。结果:米非司酮以剂量和时间依赖方式抑制3AO和OVCAR3细胞体外增殖活性(均P<0.05),而对SKOV3细胞生长增殖无显著影响(P>0.05)。米非司酮和地塞米松联合应用与相同浓度的米非司酮单独应用比较,3AO和OVCAR3细胞增殖抑制率无统计学意义(P>0.05)。米非司酮浓度为10μmol/L,培养48小时,3AO细胞PR表达率为12.7±1.4%,明显低于对照组44.9±1.4%(P<0.05);OVCAR3细胞PR表达率为23.5±2.1%,明显低于对照组53.4±1.9%(P<0.05);3AO、OVCAR3和SKOV3细胞ER表达率与对照组比较,均无统计学意义(均P>0.05)。结论:米非司酮以剂量和时间依赖方式抑制PR表达阳性人卵巢上皮癌3AO、OVCAR3细胞体外增殖活性,其抑制作用与PR变化相关。