异种器官移植免疫生物学研究进展

异种器官移植是解决器官移植短缺的有效手段之一,猪作为潜在的器官移植供体来源已得到广泛认可,但是要实现猪至灵长类动物的异种器官移植的临床应用需要克服多重免疫生物学障碍。本文以异种器官移植多重免疫排斥反应发生的时间先后为顺序,依次对超急性排斥反应、急性体液异种移植排斥反应和急性细胞排斥反应、血栓性微血管病和慢性排斥反应的研究进展进行了综述。     

补体系统在异种移植中作用的研究进展

补体系统在异种移植超急性排斥反应中的作用已基本被阐明。通过转基因方法使猪血管内皮细胞表达人补体调节蛋白,可以避免发生异种移植超急性排斥反应。但移植过程中的缺血再灌注损伤却不可避免,补体介导的血管内皮细胞激活可以引起急性血管性排斥反应,并影响移植物的长期存活。本文就补体系统在异种移植领域的研究进展作一综述。     

补体系统在异种移植中作用的研究进展

补体系统在异种移植超急性排斥反应中的作用已基本被阐明。通过转基因方法使猪血管内皮细胞表达人补体调节蛋白，可以避免发生异种移植超急性排斥反应。但移植过程中的缺血再灌注损伤却不可避免，补体介导的血管内皮细胞激活可以引起急性血管性排斥反应，并影响移植物的长期存活。本文就补体系统在异种移植领域的研究进展作一综述。     

猪血管内皮细胞与人血清反应早期PGI2和TXA2的变化

目的 探讨在猪与人异种移植超急性排斥反应中血管内皮细胞的作用。方法 用体外培养的猪血管内皮细胞和不同人的血清共同反应,建立猪与人异种移植超急性排斥反应的体外实验模型。用放射免疫法检测上清液中前列环素（ＰＧＩ２）和血栓素Ａ２（ＴＸＡ２）的稳定代谢产物（ＰＧＦ１α和ＴＸＢ２）含量,将其作为评定血管内皮细胞激活和损伤的标志。结果 各组血清与猪血管骨皮细胞反应０．５ｈ后,正常人血清组ＰＧＦ１α／ＴＸＢ２比     

猪血管内皮细胞α-Gal对人外周血淋巴作用初探

超急性排斥反应克服后，异种移植物将面临血管性和细胞性排斥。血管内皮是免疫排斥的主要场所，异种移植免疫中血管内皮细胞的作用以及其携带的αＧａｌ在超急性排斥后免疫反应中的作用研究尚少。通过混合淋巴细胞反应（ＭＬＲ），以同种异体ＭＬＲ为对照，对异种（内江猪→人）外周血淋巴细胞（ＰＢＬＣ）混合反应和内江猪血管内皮细胞（ＰＡＥＣ）人ＰＢＬＣ混合反应进行研究，同时考察α半乳糖基酶消化后ＰＡＥＣ对人ＰＢＬＣ的刺激性。结果表明：异种ＭＬＲ增殖较相应的同种异体ＭＬＲ弱，可能与在异种周围淋巴细胞ＭＬＲ中以间接呈递为主有关；ＰＡＥＣ作为刺激细胞的ＭＬＲ增殖极强，可能与ＰＡＥＣ本身是抗原呈递细胞且抗原呈递以直接呈递为主有关；αＧａｌ引起增殖，可能与其在体内数量多、与生物大分子结合可成为全抗原有关，提示该抗原可能也是超急性排斥后排斥反应的靶抗原；去除ＰＡＥＣ表面αＧａｌ后，仍可诱发人Ｔ细胞反应，提示可能还存在其它超急性排斥后抗原。     

猪到人异种移植超急性排斥反应的靶抗原

目的　探索猪到人异种移植超急性排斥反应的靶抗原。方法　对近年来国内、外有关文献进行检索 ,并作综述。结果　α半乳糖基 (α Gal)是目前公认的猪到人异种移植超急性排斥反应的主要抗原 ,其表达受α 1,3半乳糖转移酶 (α 1,3GT)控制。克服α Gal引起的超急性排斥反应的方法有免疫吸附天然抗体、酶消化α Gal、α GT基因敲除及转基因技术等。除α Gal外 ,还存在与人血清中天然抗体相结合的其它抗原 ,如红细胞表面相对分子质量为 40× 10 3 的分子 ,猪胚胎脑细胞上相对分子质量为 2 10× 10 3 、10 5× 10 3 及 5 0× 10 3 的抗原分子等。结论　α Gal是异种移植超急性排斥反应的主要靶抗原 ,除α Gal外还存在有待进一步研究的非α Gal。     

异种移植免疫学研究进展

目的 论述异种移植排斥反应的发生机制和各种免疫细胞的相互作用。方法 结合基础研究相关资料对异种移植免疫学研究成果和新进展作一回顾。结果 转基因猪技术，新型免疫抑制剂等分别用以克服超急性排斥，急性血管性排斥；急性细胞性排斥的克服采用了针对T细胞，抗原递呈细胞的策略以及诱导免疫耐受等方法。结论 转基因猪技术较为成熟而有效；急性血管性排斥，急性细胞性排斥的发生机制和克服仍有待进一步研究。     

异种肝移植中补体作用及抑制策略

近 40年来 ,随着同种肝移植的巨大成功 ,供肝短缺的问题日益突出。异种移植作为较有希望的解决途径之一 ,得到越来越多的重视。但阻碍异种肝移植临床实施的首要障碍即是超急性排斥反应 (ＨＡＲ)。大量的研究表明 ,补体在ＨＡＲ发生中起着重要作用 ;而抑制补体激活可以阻止ＨＡＲ ,尤其是转人补体调节蛋白 (ｈＣＲＰ)基因的动物的出现 ,更使人们看到了征服ＨＡＲ的光明前景。这里 ,将近年补体在异种肝移植中超急性排斥反应中的作用及其防治策略的进展作一综述。一、补体在超急性排斥反应发生中的作用及激活途径1.补体在超急性排斥反应发生中…     

异种肾移植超急性排斥反应时血液流变学的变化

采用猪-犬肾移植建立超急性排斥反应模型，以研究此时的血液流变学变化。分别在移植前、移植肾超急性排斥发生时和排斥肾切除后10～15分钟检测外周血的血液流变学参数变化。结果异种肾移植发生超急性排斥时，血小板聚集显著增高，移植肾切除后血中的血小板数和纤维蛋白原明显下降，血小板聚集也恢复原有水平。提示血小板、纤维蛋白原参与了异种移植超急性排斥反应的发生过程，而血小板聚集可能是诊断异种移植超急性排斥反应一个有价值的指标。     

转染人补体调节基因对猪血管内皮细胞的保护作用

供者血管内皮细胞(EC)是猪到人异种移植时引发超急性排斥反应的靶抗原的主要分布部位。利用转基因技术让猪的内皮细胞表达人补体调节基因(hDAF)，可能会增强其血管内皮细胞的防御能力，借以克服超急性排斥反应的发生，联合转染一种以上人补体调节蛋白基因可能效果更好。为此，我们进行了如下实验。     

猪到猕猴异种心脏移植超急性排斥反应的免疫学及病理学变化

目的观察猪到猕猴异种心脏移植超急性排斥反应时的免疫学及病理学变化。方法采用猪到猕猴腹腔内异位心脏移植模型,检测发生超急性排斥反应者的血液中补体、天然抗体及T淋巴细胞亚群的变化,并对移植心脏进行免疫组化(测定C3、C4、C5b9、IgG及IgM的沉积)及病理学分析。结果发生超急性排斥反应时,血清补体C3、C4的含量、总补体活性及抗猪内皮细胞天然抗体均有一定程度的下降;CD4 /CD8 T淋巴细胞的比率也有所下降;移植心脏中均有补体C3、C4、C5b9的沉积,IgG及IgM也均有沉积,但IgG和IgM沉积强度的差异无统计学意义;病理学改变主要为心肌间质弥漫性出血、水肿,毛细血管内普遍淤血。结论补体通过经典途径激活参与猪到猕猴异种心脏移植超急性排斥反应;超急性排斥反应时受者血中天然抗体水平明显下降;CD4 T淋巴细胞可能参与异种移植超急性排斥反应过程并有所消耗;发生超急性排斥反应的移植物突出病理表现为间质出血。     

清除补体避免猪到猕猴异种心脏移植超急性排斥反应的实验研究

目的 观察纯化的眼镜蛇毒因子(CVF)对猪到狱猴异种心脏移植超急性排斥反应的影响。方法 以幼猪为供者，施行猪到狱猴腹腔内异位心脏移植，实验组(n＝4)使用CVF完全清除受者体内补体，对照组(n＝5)不使用CVF，两个组术后均采用环抱素A、甲泼尼龙和环磷酰胺抑制排斥反应，通过检测血清C3、C4水平及总补体活性验证CVF的效果，移植心停跳时切取移植心进行病理检查。结果 在使用CVF后，实验组血清C3降为0，总补体活性CH50值也几乎为0，末发现明显毒副反应，移植猪心存活时间平均为lld，最长达13d，病理学提示均发生了延迟性异种排斥反应；对照组3个移植心在移植后60min内发生超急性排斥反应，另2个分别存活22h及6d。结论 纯化的CVF有良好的清除补体的作用，且末见明显副作用；使用CVF可克服猪到狱猴异种心脏移植超急性排斥反应的发生。     

异种移植中转基因动物策略研究进展

近年来 ,在同种移植研究的基础上 ,异种移植的研究也进行了大量的工作 ,突出的成绩表现在异种移植免疫障碍阶段的划分和定义 ,即超急排斥反应、急性血管排斥 (有时也称延迟排斥 )、细胞排斥或慢性排斥、生理功能及其它。根据异种移植免疫学理论 ,利用转基因技术 ,建立转基因动物克服超急免疫排斥是异种移植研究的又一进步 ,显示转基因动物具有很大的发展前景 ,使异种移植走进临床成为可能。本文将就近年异种移植免疫学理论及根据其机制、利用转基因动物克服免疫排斥研究状况作一综述。     

转人CD59基因的猪胚胎成纤维细胞的建立

补体介导的超急性排斥反应(HAR)是异种移植成功应用的主要障碍。CD59 是一种补体活化调控蛋白,具有良好的抗超急性排斥反应作用。通过对猪胚胎成纤维细胞进行基因修饰,体细胞克隆,有希望克服上述问题。材料与方法一、猪胚胎的获取孕30 d实验用猪(购自中国农业科学院实验站)     

转人CRP基因在异种移植中的研究

目的：研究转入补体调节蛋白（CRP）DAF、MCP和CD59基因对抑制人补体激活从而克服超急性排斥反应的作用。方法：利用显微注射建立转人衰变加速因子（hDAF)小鼠和猪的模型和转梁hMCP及hCD59真核表达质粒的猪内皮细胞（EC）,研究小鼠和猪EC表达抑制人补体激活的人补体调节蛋白（CRP）对异种移植超急性排斥反应的抑制作用。结果（1）转人DAF基因小鼠心脏用新鲜人血连续丛外灌注,转基因组心脏搏动时间（174．6min)比对照组（106．5min)明显延延长。（2）转hDAF基因猪心脏异位移植给猕猴、移植心最长存活90h,受者死亡前移植心仍有功能,移植心病理检查未见超急性排斥反应病理改变。（3）转DAF基因基因猪EC死亡率在不同浓度血清时均明显低于对照组,在转hDAF基因猪EC上再分别转染hMCP及hCD59真核表达质粒,转hDAF hMCP或hDAF hCD59在不同血清浓度时EC死亡率较单纯hDAF组明显下降（P＜0．05）。结论,转人DAF及MCP、CD59补体调节蛋白基因能克服人对异种器官或组织的超急性排斥反应。     

异种移植中的排斥反应及其对策研究进展

随着器官移植技术在临床的广泛应用 ,同种异基因器官供体远不能满足受体的需要 ,异种移植有可能解决这一矛盾。非灵长类动物 ,特别是猪 ,因其易于饲养 ,且器官大小及免疫学、生理学特性与人类有一定的相似性 ,作为最适的异种移植器官供体已日益引起人们的关注[1,2 ] 。但由于人类和猪两种源间存在巨大的抗原差异 ,针对异种移植物的免疫应答比对同种移植物更加强烈。本文现对近年来有关异种移植排斥机制及其防治策略作一简要回顾。一、异种移植排斥机制1.超急性排斥反应 (hyperacuterejection,HAR):HAR以血栓形成、出血及异种移植物破坏为…     

中国内江猪各脏器组织中人类ABO血型抗原的分布

目的确证中国内江猪各脏器组织中是否存在人类ＡＢＯ血型抗原。方法抗人类血型Ａ、Ｂ、Ｈ抗原单克隆抗体为一抗,免疫组织化学ＥｎＶｉｓｉｏｎ法分别检测１０头中国内江猪多种组织人类血型Ａ、Ｂ、Ｈ抗原分布。结果所有血管内皮细胞均无Ａ、Ｂ、Ｈ抗原表达。其它多种组织表达Ａ抗原,而不表达Ｂ、Ｈ抗原。结论中国内江猪的部分脏器组织中有人类Ａ血型抗原表达,虽不属于超急性排斥反应抗原,但在猪→人异种移植中是值得研究并应加以克服的异种抗原。中国内江猪人血型抗原的表达不同于已报道的其它猪种,有可能寻找一种抗原性弱的猪作为异种移植供者的选育对象。     

异种器官移植过程中预防T细胞排斥反应的研究进展

异种器官移植是解决供体器官短缺的最适途径。基因工程已很大程度上克服了异种器官移植出现的超急性排斥反应等早期障碍,但是异种器官的成功存活还需要预防T细胞介导的急性排斥反应。目前异种器官移植中预防T细胞免疫排斥的方案分为3种:从基因水平进行改造减少T细胞免疫排斥反应、直接阻断T细胞免疫排斥反应、诱导移植受体的免疫耐受能力。在临床应用前,对这些方案进行研究和优化,有望实现异种器官移植后的长期存活。     

异种移植超急性排斥反应的研究进展

异种移植排斥反应一般分为超急性排斥（xenogeneic hyperacute rejection，HAR），延迟性排斥（又称急性血管性排斥），急性细胞性排斥和慢性排斥。     

五指山小型猪-藏酋猴异种肝移植的术前检测

目的本研究为了减少五指山小型猪-藏酋猴异种肝移植手术的超急性排斥反应(hyperacute rejection,HAR)和急性排斥反应(acute rejection,AR)发生率,进行全面术前检测。方法分别利用PCR技术和植物凝集素细胞染色对供体GGTA1基因敲除类型进行鉴定;30只藏酋猴分别与五指山小型猪进行淋巴细胞毒实验;供受体ABO血型鉴定。结果供体为GGTA1基因敲除猪,GTKO猪外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)植物凝集素细胞染色未检测出荧光,表明GGTA1基因敲除成功,与基因型鉴定结果一致。通过淋巴细胞毒实验选定28#与供体PBMC毒性最小的藏酋猴做为备选受体。血型鉴定显示供受体血型一致。结论通过对GTKO五指山小型猪-藏酋猴异种肝移植的术前检测选定合适的受体,可有效减少异种移植HAR和AR的发生率。