云南省边境地区输入性麻疹野病毒的分子流行病学监测

目的分析输入性麻疹野病毒对云南省边境地区麻疹分子流行病学的影响。方法用淋巴信号激活因子转染的非洲绿猴肾细胞(Vero/SLAM细胞),从麻疹患者的标本中分离麻疹病毒,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增核蛋白(Nucleoprotein,N)基因羧基末端的676个核苷酸片段,对扩增产物进行核苷酸序列测定。并以N基因羧基末端450个核苷酸序列构建基因亲缘性关系树,进行核苷酸变异分析。结果云南省于2009年监测到麻疹病毒株MVi/Menglian.Yunnan.CHN/47.09/1,经过世界卫生组织(WHO)认定为D11基因型,为全球首次发现,并将此毒株定为D11基因型的标准株;云南省于2012年监测到麻疹病毒株MVi/Yunnan.CHN/02.12/01,在亲缘性关系树上与D9基因型参考株同在一个大的分支,同源性为96.3%,为D9基因型麻疹病毒。两起麻疹疫情均为输入性麻疹野病毒。结论两次输入性麻疹病毒均造成云南省边境地区的流行,云南省在含麻疹成分疫苗的常规免疫基础上适时进行强化免疫,有效阻断了输入麻疹病毒的传播。     

四川省1株输入性麻疹病毒基因特征分析

目的分析四川省1麻疹病毒分离株的基因特征。方法病毒分离和核苷酸测序后,与麻疹病毒基因型参考株编码核蛋白羧基末端的456个核苷酸序列做进化树分析。结果该病毒分离株（MVi/Sichuan.CHN/7.09/1）与D9基因型参考株聚集在同一进化分枝上,bootstrap值为91%。与D9基因型参考株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为96.9%和96.6%;与其他22个基因型参考株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为89.9%～96.2%和90.7%～98.0%。结论现有的麻疹实验室网络数据表明,该病毒分离株为我国大陆首次分离到的D9基因型麻疹病毒,证实为输入性病毒。     

2008年-2012年江西省麻疹病毒分离株H基因特征分析

目的分析江西省麻疹病毒分离株的分子生物学特征,掌握江西省目前麻疹病毒流行株的基因特性。方法采用淋巴信号激活因子转染的非洲绿猴肾细胞(Vero/SLAM)对2008年-2012年疑似麻疹患者咽拭子标本进行麻疹病毒分离,分离到的毒株通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增麻疹病毒血凝素(hemagglutinin,H)基因,并对扩增出的核苷酸序列进行测定,与Gen Bank中麻疹病毒各基因型参考株比较并分析毒株变异情况。结果 2008年-2012年江西省麻疹病毒分离株均为麻疹H1基因型,属于我国麻疹病毒的优势株。13株麻疹病毒分离株之间H基因氨基酸的同源性为98.1%~100.0%;与H1基因代表型China93-7的H基因氨基酸同源性为97.2%~98.1%;与中国疫苗株沪191株的H基因氨基酸同源性为94.8%~95.6%。结论 2008年-2012年江西省麻疹病毒流行株为H1基因型,说明江西省近年来麻疹的流行株仍然是H1基因型。     

2014年鞍山地区麻疹暴发疫情基因特征分析

目的了解2014年鞍山地区麻疹暴发疫情的优势基因型别,并分析其与H1a亚型参考株Chin9322平均核苷酸和氨基酸的同源性。方法采集2014年鞍山市暴发的疑似麻疹患者的咽拭子标本,使用WHO推荐的vero-SLAM细胞进行麻疹病毒分离,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增麻疹病毒分离株的N基因羧基末端450 bp片段。对扩增产物的核苷酸序列与WHO各基因型参考株基于N基因构建的基因亲缘性关系树,分析麻疹病毒基因型。结果150份咽拭子标本中分离到26株麻疹病毒毒株,经对分离株的核蛋白(N)碳末端450个核苷酸进行序列测定和亲缘性关系比较,26株麻疹病毒均属于H1基因型的H1a亚型,其中核苷酸和氨基酸之间的同源性分别为98.2%~100.0%和98.0%~100.0%。结论 2014年鞍山地区麻疹暴发疫情是由麻疹病毒H1基因型的H1a亚型引起的流行,本次流行期内的麻疹病毒几乎是同源的,在病毒的传播过程中几乎不发生基因变异。     

四川省2003～2005年麻疹野病毒分离株基因特征分析

目的了解四川省2003~2005年流行的麻疹野病毒分离株基因特征,为控制、消除麻疹提供科学依据。方法用B95a、Vero/Slam细胞从疑似麻疹爆发和散发患者的标本中分离麻疹病毒,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从分离到的22株麻疹病毒中扩增出核蛋白(nucleoprotein,N)基因羧基末端676个核苷酸片段,再对扩增产物进行核苷酸序列测定和分析,并以C末端456个核苷酸片段构建基因亲缘性关系树,进行核苷酸、氨基酸同源性分析。结果四川省2003~2005年从6个市(自治州,下同)分离的22株麻疹野病毒全部为H1基因型,除2株为H1b基因亚型外,其余均为H1a基因亚型。22株麻疹野病毒的核苷酸同源性为96.2%~100.0%,氨基酸同源性为95.3%~100.0%。四川省11株麻疹病毒代表株与中国S191疫苗株的核苷酸同源性为90.0%~92.5%,氨基酸同源性为86.7%~91.6%。结论四川省2003~2005年流行的麻疹野病毒以H1a为绝对优势基因亚型,H1b为弱势基因亚型,未发现H1c基因亚型。其中以H1a基因亚型为主的病毒株引起的多个传播链造成四川省各市的麻疹流行。     

江苏省2007年麻疹野毒株基因特征分析

目的 阐明江苏省2007年流行的麻疹野病毒分离株的基因特征,为控制、消除麻疹提供依据.方法 用Ve-ro-Slam细胞从麻疹患者的咽拭子标本中分离麻疹病毒,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从分离到的麻疹病毒株中扩增出核蛋白(Nucleoprotein,N)基因羧基末端600个核苷酸片段,再对扩增产物进行核苷酸序列测定和分析,并以羧基末端450个核苷酸片段构建基因亲缘性关系树,进行核苷酸、氨基酸同源性分析.结果 江苏省2007年分离的14株麻疹野病毒全部为H1基囚型中的H1a基因亚型,在基因树上有多个分支.14株麻疹野病毒的核苷酸同源性为96.7%～100.0%,氨基酸同源性为94.0%～100.0%.与中国沪191麻疹疫苗株的核苷酸同源性为90.1%～91.6%,氨基酸同源性为84.7%～88.0%;与H2基因型代表株China94-1的核廿酸问源性为91.6%～93.4 0A,氨基酸同源性为88.0%～91.3%.结论 江苏省2007年流行的麻疹野病毒优势基闪亚型为H1a,与我国大陆其它省份流行的优势基因亚型相同.     

2015年黔东南地区麻疹病毒分离株基因特征分析

目的 分析2015年黔东南地区麻疹病毒基因型别和特征。方法 采集疑似麻疹病例临床咽拭子标本,经Real - time RT - PCR初筛为麻疹病毒核酸阳性,使用Vero/SLAM细胞进行病毒分离,对阳性分离物提取病毒RNA,采用RT - PCR方法扩增麻疹病毒N基因羧基末端编码的634个核苷酸片段,并进行测序与分析。结果 35例疑似麻疹病例中检测到4例麻疹病毒阳性核酸,经分离得到2株麻疹病毒。基因亲缘关系显示2株为H1基因型中的H1a基因亚型。2株麻疹病毒株与H1基因型参考株MVi/Hunan.CHN/0.93/7(AF045212)比较,核苷酸和氨基酸同源性分别为97.7%和98.0%;与H1a基因亚型参考株Chin9322比较,核苷酸和氨基酸同源性分别为98.9%和99.3%;2株H1a基因亚型与往年及本省流行的麻疹病毒的核苷酸和氨基酸同源性分别为98.2%～100%和98.0%～100%。结论 黔东南地区2015年分离到的麻疹病毒为H1a基因亚型,与贵州省本土麻疹流行的优势基因亚型一致。     

福建省发现输入性B3基因型麻疹病毒

目的 分析福建省2018年输入性B3基因型麻疹病毒的病原学特征。方法 采用实时荧光定量RT-PCR筛查和扩增麻疹病毒核酸阳性咽拭子及Vero/Slam细胞培养阳性产物。对麻疹病毒N基因羧基末端634个核苷酸片段进行扩增测序,比对分析构建基因亲缘性关系树。结果 分离获得2株麻疹病毒株,18条病毒核酸序列。所有福建株在亲缘关系上与WHO B3基因型参考株同属一个分支,其中标本MV18-41和MV18-42与2018年分离于中国香港地区的毒株（HongKong.CHN/35.18）核酸同源性为100.0%;其他毒株序列与2018年分离于日本的毒株（Mvs/Osaka.JPN/38.18/B3）同源性最高（99.9%）。福建株与除B3基因型外,23种WHO不同麻疹基因型参考株之间比较,福建株与B1基因型参考株核苷酸和氨基酸同源差异性最小,分别为95.1%～95.4%和95.3%;与H1基因型参考株同源差异性最大,其中与中国目前优势流行的参考株MVi/Hunan.CHN/0.93/7核苷酸和氨基酸同源差异分别为88.7%～89.0%和87.3%;在病毒N蛋白羧基末端150个氨基酸位点上,福建株与疫苗株（Shanghai-191）之间存在13个变异位点,但这些位点并未引起该蛋白区域的功能变化。结论 福建省成功分离获得2株B3基因型麻疹毒株,B3基因型麻疹病毒是福建省发现的新基因型麻疹病毒,在补充和丰富福建省麻疹病毒分子流行病学本底资料的同时也进一步警示必需加强输入性病例的监测,才能更好地完成福建省麻疹病毒的控制和消除工作。     

2008-2012年江西省麻疹病毒分离株N基因特征分析

摘要:目的　分析江西省麻疹病毒分离株的分子生物学特征,掌握该省目前麻疹病毒流行株的基因特性。方法　采用Vero/SLAM细胞对2008-2012年疑似麻疹患者咽拭子标本进行麻疹病毒分离,分离到的毒株通过RT-PCR方法扩增麻疹病毒核蛋白（Nucleoprotein,N）基因,并对扩增出的核苷酸序列进行测定,与GenBank中麻疹病毒各基因型参考株比较并分析毒株变异情况。结果　2008-2012年江西省麻疹病毒分离株均为麻疹H1基因型,属于我国麻疹病毒的优势株。13株分离株之间N基因氨基酸的同源性为98.1%～100%;与H1基因代表型China93-7的N基因氨基酸同源性为97.5%～98.7%;与中国疫苗株沪191株的N基因氨基酸同源性为95.0%～96.2%。结论　2008-2012年江西省麻疹病毒流行株为H1基因型,说明江西省近年来麻疹的流行株仍然是H1基因型。     

南康市2007年一起麻疹暴发的分子生物学研究

[目的]分析南康市麻疹暴发的分子生物学特征,掌握麻疹病毒的基因特性.[方法]采用Vero/SLAM细胞对2007年暴发疫情患者咽拭子标本进行麻疹病毒分离,通过RT-PCR方法扩增麻疹病毒分离株核蛋白(nucleoprotein,N)基因,并对扩增出的核苷酸序列进行测定和分析.[结果]2007年南康市麻疹病毒分离株为麻疹H1基因型,属于我国麻疹病毒的优势株.两株分离株之间N基因氨基酸的同源性为98.7%;与中国疫苗株沪191株的N基因氨基酸序列比较,其同源性分别为94.7%和96.O%.[结论]南康市此次麻疹暴发疫情病毒分离株为H1基因型,并与中国疫苗株沪191株在基因特性上有明显差异.     

河北省D8基因型麻疹病毒输入性疫情监测及基因型特征分析

目的:分析河北省D8基因型麻疹病毒输入性疫情流行及基因型特征。方法:对麻疹监测病例的流行特征进行分析,对采集的急性期咽拭子标本进行荧光定量RT-PCR鉴定、病毒分离培养及核苷酸序列测定和分析。结果:监测到输入性D8基因型麻疹病例36例,主要集中在邯郸市的8个县（区）,其中成安县确诊病例数最多,占报告病例数的58.33%...     

2014年北京市西城区40例麻疹患者分离的麻疹病毒基因型及同源性

目的了解北京市某城区2014年分离的麻疹病毒基因型,及时发现输入性麻疹病例。方法采用荧光聚合酶链反应（PCR）方法,对北京市西城区2014年采集的标本进行病毒核酸鉴定、RT PCR扩增,扩增产物进行测序及序列比对分析。结果2014年北京市西城区共采集81例麻疹疑似患者的82份标本,其中咽拭子63份,尿19份。麻疹病毒核酸检测阳性70例,RT PCR扩增、测序获得基因序列40份,麻疹病毒培养阳性毒株37例。种系进化树分析显示,获得的40份麻疹病毒基因序列与H基因簇代表株Chin9322/H1a,以及世界卫生组织推荐的代表株MVi/Hunan.CHN/0.93/7/H1在同一分支上,核苷酸水平上同源性分别为98％～98.9％、96.9％～97.8％;氨基酸水平上同源性分别为97.3％～99.3％、95.3％～98％。结论2014年北京市西城区麻疹病例以本土基因型(H1)病例为主,进一步加强麻疹病例病原学监测对麻疹输入性病例的控制和预防具有重要意义。     

2006年河北省麻疹病毒分子流行病学监测

目的了解2006年河北省流行的麻疹病毒基因型特征。方法对2006年分离的30株麻疹野病毒进行分子流行病学研究。结果 30株麻疹野病毒均为H1a基因亚型,其核蛋白(N)基因碳末端456个核苷酸同源性为99.7%～98.0%之间,氨基酸同源性为96.0%～100%之间;与S191株核苷酸同源性为91.4%～92.3%之间,氨基酸同源性在86.7%～89.4%之间。2006年分离到的30株麻疹病毒存在3个分支(传播链)。结论 H1a基因亚型为2006年河北省优势流行基因型,H1b基因亚型可能已经终止,麻疹野病毒与现行疫苗株S191之间变异仍在加大。     

中山市6例疑似麻疹疫苗相关病例病原学特征分析

目的 分析中山市6例疑似麻疹疫苗相关病例的病原学特征。 方法 采集中山市2014－2015年6例疑似麻疹疫苗相关病例咽拭子样本并提取核酸,采用巢式PCR法扩增麻疹病毒核蛋白(N)基因羧基末端450个核苷酸片段并测序,分析其与世界卫生组织(WHO)参考株、麻疹病毒中国疫苗株沪₁₉₁(Shanghai₁₉₁,S₁₉₁)基因的亲缘关系、核苷酸与氨基酸序列相似度。 结果 6份样本中,2份未检出核酸,4份检出核酸,序列比对结果示3株病毒核苷酸、氨基酸序列相似度均为100%,与S₁₉₁株相比,核苷酸序列和氨基酸序列相似度也为100%,属于A基因型;1株病毒与Chin9322-H_1a株相比,核苷酸序列相似度为97.7%,氨基酸序列相似度为96.6%,为H_1a基因型。 结论 3例病例为疫苗株感染,1例为野毒株感染。     

吉林省2001～2008年麻疹病毒血凝素蛋白基因特征和氨基酸变异分析

目的研究吉林省2001～2008年麻疹病毒代表株的血凝素蛋白基因（Hemagglutinin,HA）特征和氨基酸变异。方法从吉林省2001～2008年流行的麻疹野病毒中选取5株代表株,提取核糖核酸,用逆转录-聚合酶链反应扩增HA基因片段,对扩增产物进行核苷酸序列分析,并与基因库中的中国麻疹疫苗病毒株沪191以及所有23种麻疹野病毒基因型代表株的H基因序列,进行基因亲缘关系、同源性、氨基酸变异以及糖基化位点变异比较。结果吉林省5株麻疹病毒分离株均属于H1基因型H1a基因亚型,5株病毒H基因之间有6～17个核苷酸差异（0.3%～0.9%）,3～9个氨基酸差异（0.5%～1.5%）。与中国现行疫苗病毒株沪191H基因相比,有89～95个核苷酸差异（4.8%～5.1%）,25～30个氨基酸差异（4.1%～4.8%）。与H1a基因亚型代表株China93-4H基因相比,有9～17个核苷酸差异（0.5%～0.9%）,3～7个氨基酸差异（0.5%～1.2%）。吉林省5株麻疹病毒分离株的H蛋白均保留了4个糖基化位点,第5个糖基化位点在氨基酸第240位由丝氨酸突变成天冬酰胺,导致一个潜在糖基化位点NLS238～240的缺失。结论吉林省2001～2008年流行的5株麻疹病毒,均丢失了一个可能影响抗原性的糖基化位点。5株麻疹病毒的核苷酸、氨基酸差异均不大,但无论与H1a基因亚型代表株China93-4相比,还是与疫苗株S191相比,核苷酸和氨基酸的同源性均呈逐年递减趋势,吉林省麻疹野病毒H基因的变异仍在逐年增加、逐年积累。     

中国2006年麻疹野病毒血溶素基因特征分析

目的研究中国2006年流行的麻疹野病毒代表株血溶素蛋白（Fusion Protein,F）基因的分子特征,与其他年份毒株相比分析F基因的变异规律。方法从2006年各省（自治区、直辖市）送检的麻疹野病毒中选取9株代表株,使用逆转录-聚合酶链反应扩增病毒的F基因全长,并进行核苷酸序列测定,同时与中国疫苗株及其他年份毒株进行序列比对及基因亲缘性关系分析。结果2006年9株中国流行麻疹野病毒代表株,其核苷酸同源性为98．5％-99．8％,氨基酸同源性为99％-100％;与中国疫苗株沪。相比,其核苷酸同源性为95．4％-96．2％,氨基酸同源性为96．7％～97．2％;与1999～2003年代表株相比,其核苷酸同源性为97．9％-99．7％,氨基酸同源性为98．1％-100％。F基因3个糖基化位点（第32、64、70位氨基酸）、对病毒整合功能起着重要作用的第112位精氨酸（Arg）、第195位亮氨酸（Leu）未发生改变。结论中国2006年流行的麻疹病毒F基因变异不大,与其他年份毒株相比变异也不明显。F蛋白的重要功能位点未发生变异,F蛋白的变异与2006年麻疹流行无相关性。但由于F蛋白对病毒感染细胞和促使机体产生抗体具有重要意义,对F蛋白变异规律进行常规监测,对了解麻疹病毒变异规律和评价疫苗的保护效果具有重要意义。