慢性吗啡耐受大鼠脊髓神经元兴奋性氨基酸转运体3表达的变化

目的 观察慢性吗啡耐受大鼠脊髓神经元兴奋性氨基酸转运体3(EAAT3)表达的变化.方法 成年雄性SD大鼠45只,随机分为5组(n=9),除假手术组(S组)外,生理盐水组(NS组)、吗啡组(M组)、氯胺酮组(K组)和吗啡+氯胺酮组(M+K组)均进行鞘内置管,鞘内置管后3 d进行鞘内给药,Ns组鞘内注射生理盐水40 μl,M组给予吗啡20μg,K组给予氯胺酮30μg,M+K组给予吗啡20μg+氯胺酮30μg,2次/d,连续7 d.分别在给药前、给药1、3、5、7 d及停药后1 d时测定50%缩爪阈值(PWT)与辐射热缩爪潜伏期(PWL),最后一次测定痛阈后处死大鼠,分别采用免疫印迹分析和免疫组化法检测脊髓EAAT3的表达水平.结果 与S组比较,M组给药1、3 d时PWT升高,给药7 d及停药后1 d时PWT降低,给药1、3、5 d时PWL延长,停药后1 d时PWL缩短;M+K组给药1、3、5、7 d及停药后1 d时PWT升高,PWL延长,M组和M+K组脊髓EAAT3表达下调(P<0.05);与M组比较,M+K组给药3、5、7 d及停药后1 d时PWT升高,给药5、7 d时及停药后1 d时PWL延长.脊髓EAAT3表达上调(P<0.05).EAAT3主要分布于脊髓背角Ⅰ-Ⅱ层的感觉神经元.结论 脊髓背角神经元EAAT3表达下调参与了大鼠慢性吗啡耐受的形成,吗啡下调EAAT3表达的部分机制与激活N-甲基-D天冬氨酸受体有关.     

糖皮质激素受体在慢性吗啡耐受大鼠脊髓背角神经元凋亡中的作用

目的 评价糖皮质激素受体在慢性吗啡耐受大鼠脊髓背角神经元凋亡中的作用.方法 鞘内置管成功的健康雄性SD大鼠20只,体重300～350 g,随机分为4组(n=5):对照组(C组)、慢性吗啡耐受组(M组)、吗啡+糖皮质激素受体拮抗剂组(MR组)和吗啡+糖皮质激素受体激动剂组(MD组)分别于8:00和20:00鞘内注射生理盐水10μl、吗啡10μg、吗啡10μg+RU38486 2μg、吗啡10μg+地塞米松4μg,连续6 d.于每天8:00给药后30 min行甩尾实验,给药第7天处死大鼠,取L3～L5脊髓行TUNEL染色,光镜下观察脊髓背角神经元的凋亡情况,计算凋亡率.结果 地塞米松、RU38486分别对慢性吗啡耐受的形成起促进、抑制作用.与C组比较,M组和MD组脊髓背角神经元凋亡率升高(P＜0.05);与M组比较,MR组脊髓背角神经元凋亡率降低,MD组脊髓背角神经元凋亡率升高(P＜0.05).结论 糖皮质激素受体参与了慢性吗啡耐受形成中大鼠脊髓背角神经元凋亡的过程.     

脊髓背角自噬与大鼠吗啡耐受形成的关系

目的 探讨脊髓背角自噬与大鼠吗啡耐受形成的关系.方法 雄性成年SD大鼠,体重250～ 300 g,取鞘内置管成功的大鼠24只,采用随机数字表法,将其分为3组(n=8):对照组(C组)、吗啡耐受组(M组)和吗啡+自噬增强剂雷帕霉素组(MR组).采用鞘内注射吗啡20 μg,2次/d,连续7d的方法制备吗啡耐受模型.C组给予等容量生理盐水.MR组鞘内注射吗啡20 μg,2次/d,连续7d,并于第3天第2次注射吗啡同时鞘内注射雷帕霉素2.3μg,连续3d.于鞘内注射前及第1、3、5、7天第2次鞘内注射后30 min测定机械缩足反应阈(MWT).最后1次MWT测定结束后1h取L4-6段脊髓背角,采用Western blot法测定总哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和磷酸化mTOR(p-mTOR)及自噬标记蛋白LC3Ⅱ的表达.以p-mTOR占总mTOR表达水平的百分比反映mTOR的活性.结果 随鞘内注射时间延长,M组和MR组MWT逐渐降低(P＜0.05);与C组比较,M组和MR组鞘内注射期间MWT升高,脊髓背角mTOR活性降低,LC3Ⅱ表达上调(P＜0.05);与M组比较,MR组鞘内注射第3、5、7天MWT升高,脊髓背角mTOR活性降低,LC3Ⅱ表达上调(P＜0.05).结论 脊髓背角自噬增强是吗啡耐受形成时机体的适应性调节机制,可延缓吗啡耐受形成.     

炎性痛-慢性吗啡耐受大鼠脊髓背角谷氨酸-天冬氨酸转运体表达的变化

目的 探讨炎性痛-慢性吗啡耐受大鼠脊髓背角谷氨酸-天冬氨酸转运体(GLAST)表达的变化.方法 取鞘内置管成功的雄性SD大鼠30只,采用随机数字表法,将大鼠随机分为3组(n=10):生理盐水组(NS组)、关节炎组(A组)和关节炎+吗啡组(AM组).NS组于左后足踝关节腔注射生理盐水50μl,其余组注射完全弗氏佐剂50μl.3 d后分别经鞘内注射生理盐水10μl(NS组和A组)、吗啡10μg(AM组),药物容量10μl,2次/d,连续7 d.于鞘内给药前、鞘内开始给药后2、4、6、8 d(T0～4)时测定机械痛阈,于T4时痛阈测定后取脊髓,测定脊髓背角GLAST表达.结果 与NS组比较,其余两组机械痛阈降低,AM组脊髓背角GLAST表达下调(P＜0.05).与A组比较,AM组T3.4时机械痛阈差异无统计学意义(P＞0.05),GLAST表达下调(P＜0.05).结论 炎性痛大鼠慢性吗啡耐受的形成与脊髓背角GLAST功能降低有关.

Abstract：

Objective To investigate the changes in the expression of glutamate-aspartste transporter in spinal dorsal horn in rats with inflammatory pain and chronic morphine tolerance. Methods Thirty healthy male SD rats in which intrathecal (IT) catheters were successfully placed without complications were randomized into 3 groups ( n = 10 each): normal saline group ( group NS), arthritis group ( group A), and arthritis + morphine group (group AM). NS 50 μl was injected into the ankle joint of the left hindlimb in group NS, while complete Freund's adjuvant was injected in the other two groups instead. After 3 days, group NS and A received IT NS 10 μl twice a day for 7 consecutive days, group AM IT morphine 10 μg (10 μl) twice a day for 7 consecutive days. Mechanical pain threshold (MPT) was measured before IT administration and at day 2, 4, 6 and 8 after IT administration (T0-4). The animals were sacrificed after the last MPT measurement. The spinal cords were isolated for determination of GLAST expression in spinal dorsal horn. Results Compared with group NS, MPT was significantly decreased in the other groups and GLAST expression was down-regulated in group AM (P ＜ 0.05). Compared with group A, no significant change was found in MPT at T3,4 (P ＞ 0.05), while GLAST expression was down-regulated in group AM ( P ＜ 0.05). Conclusion The development of chronic morphine tolerance is related to the decrease in the function of GLAST in spinal dorsal horn in rats with inflammatory pain.     

脊髓蛋白酶体在大鼠慢性吗啡耐受形成中的作用

目的 评价脊髓蛋白酶体在大鼠慢性吗啡耐受形成中的作用.方法 取鞘内置管成功的健康雄性大鼠24只,采用随机数字表法,将大鼠随机分为4组(n=6),生理盐水组(NS组)、慢性吗啡耐受组(M组)、吗啡+蛋白酶体抑制剂MG-132组(M+ MG组)和MG-132组(MG组)于每天8:00和20:00分别鞘内注射生理盐水10 μl、吗啡10μg、吗啡10 μg+ MG-132 2.5μg、MG,-132 2.5 μg,连续7d.于鞘内注射前1 d(基础值)、鞘内注射第1、3、5和7天时测定大鼠甩尾潜伏期,以计算最大抗伤害效应百分比(MPAE).于最后一次鞘内注射结束后取5只大鼠,处死后取L3-5脊髓,采用Western blot法测定谷氨酸-天冬氨酸转运体(GLAST)和兴奋性氨基酸转运体1(EAAC1)的表达水平.结果 M组和M+MG组鞘内注射期间MPAE逐渐降低(P＜0.05);与NS组比较,M组和M+ MG组鞘内注射期间MPAE升高,M组脊髓GLAST和EAAC1表达下调(P＜0.05),M+ MG组脊髓GLAST和EAAC1表达差异无统计学意义,MG组上述指标差异均无统计学意义(P＞0.05);与M组比较,M+ MG组MPAE升高,脊髓GLAST和EAACI表达上调(P＜0.05或0.01).结论 脊髓蛋白酶体参与了大鼠慢性吗啡耐受的形成.     

鞘内注射氯胺酮对神经病理性痛大鼠吗啡耐受时脊髓背角突触重塑的影响

目的 探讨鞘内注射氯胺酮对神经病理性痛大鼠吗啡耐受时脊髓背角突触重塑的影响.方法 鞘内置管成功的雄性SD大鼠48只,体重200～250 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为6组(n=8),置管后5 d,神经病理性痛组(NP组)、生理盐水对照组(NS组)、吗啡组(M组)、氯胺酮组(K组)和吗啡+氯胺酮组(MK组)采用背根神经节慢性压迫法制备神经病理性痛模型,假手术组(S组)仅暴露L5椎间孔.背根神经节慢性压迫后1 d NS组鞘内注射0.9%生理盐水20止,M组和K组分别给予吗啡20μg或氯胺酮50μg,MK组给予吗啡20μg+氯胺酮50μg,1次/d,连续14 d.分别于给药前(基础状态)、给药1、3、5、7、9、11、14 d时测定机械缩足阈值(PWT)和热缩足潜伏期(PWL).最后1d给药后立即处死大鼠,取脊髓组织,其中4只采用免疫组织化学方法测定脊髓背角突触数目,另外4只用于测定脊髓背角突触后膜致密物厚度.结果 与S组比较,其余5组PWT降低,PWL缩短,NP组、NS组、M组和K组突触数目和突触后膜致密物厚度增加(P＜0.05);与NP组比较,M组、K组和MK组PWT升高,PWL延长,突触数目和突触后膜致密物厚度降低(P＜0.05);与M组比较,MK组PWT升高,PWL延长,突触数目和突触后膜致密物厚度降低(P＜0.05).结论 鞘内注射氯胺酮可抑制神经病理性痛大鼠吗啡耐受时脊髓背角突触重塑.

Abstract：

Objective To investigate the effects of intrathecal (IT) ketamine on the synapsis remodeling in the spinal dorsal horn during devolopment of morphine tolerance in a rat model of neuropathic pain (NP). Methods Male SD rats weighing 200-250 g were used in this study. IT catheter was placed in the subarachnoid space according to Yaksh. Forty-eight SD rats in which IT catheter was successfully placed were randomly divided into 6groups (n=8 each): group sham operation (group S); group NP; group normal saline 20 μl IT(group NS);group morphine 20 μg IT (group M); group ketamine 50 μg IT (group K) and group morphine 20 μ g + ketamine 50 μg IT (group MK). NP was induced by compression of right L4,5 dorsal root ganglions with steel wire inserted through L4,5 intervertebral foramen in NP,M,K and MK groups. Normal saline or morphine and/or ketamine were injected IT once a day for consecutive 14 days. Paw withdrawal threshold (PWT) to mechanical stimulation and paw withdrawal latency (PWL) to a thermal nociceptive stimulus were measured on 0, 1, 3, 5, 7, 9, 11, 14 days during the consecutive 14 days of administration. The animals were sacrificed after the final IT administration. The lumbar segment of the spinal cord was removed for determination of the number of synapsis in the spinal dorsal horn by immuno-histochemistry in 4 animals in each group and observation of synaptic structure remodeling using electron microscope in another 4 animals in each group. Results Compared with group S, PWT was significantly decreased and PWL was shortened in the other 5 groups, and the number of synapsis was significantly increased and the synaptic structure was thickened in NP, NS, M and K groups (P ＜ 0.05). Compared with group NP,PWT was significantly increased and PWL was prolonged in M, K and MK groups, and the number of synapsis was significantly decreased and the thickness of synaptic structure was significantly reduced in group MK ( P ＜ 0.05).Compared with group M, PWT was significantly increased, PWL was prolonged, the number of synapsis was significantly decreased and the thickness of synaptic structure was significantly reduced in group MK ( P ＜ 0.05). Conclusion IT ketamine can inhibit the synaptic remodeling in the spinal dorsal horn during development of morphine tolerance in a rat model of NP.     

人参皂甙Rg1对炎性痛大鼠吗啡耐受时脊髓背角细胞凋亡的影响

目的 探讨人参皂甙Rg1对炎性痛大鼠吗啡耐受时脊髓背角细胞凋亡的影响.方法 雄性SD大鼠,体重280～320 g,采用右踝关节腔内注射完全弗氏佐剂的方法制备炎性痛模型.取模型制备成功的24只大鼠,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=6):生理盐水对照组(C组)、吗啡耐受组(M组)、人参皂甙Rg1组(G组)及吗啡复合人参皂甙Rg1组(MG组).致炎后3d时M组、G组及MG组分别鞘内注射吗啡10 μg、人参皂甙Rg1 100μg及吗啡10μg+人参皂甙Rg1 100 μg,C组给予等容量生理盐水,吗啡2次/d,人参皂甙Rg1 1次/d,连续7d.分别于致炎前(T1)、鞘内给药前1d(T2)、给药1、3、5、7 d(T3-6)时测定机械缩足阈值(PWT).最后一次测定痛阈后处死大鼠,取L3-5节段脊髓组织,采用TUNEL染色法测定细胞凋亡情况,计算脊髓背角细胞凋亡率.结果 与T1时比较,4组T2-6时PWT降低(P＜0.01);与T2时比较,M组T3.4时PWT升高,G组和MG组T3～6时PWT升高(P＜0.05);与C组比较,M组和MG组PWT和脊髓背角细胞凋亡率升高(P＜0.05),G组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与M组比较,MG组PWT升高,脊髓背角细胞凋亡率降低(P＜0.05).结论 人参皂甙Rg1预防吗啡耐受形成的机制与降低炎性痛大鼠脊髓背角细胞凋亡有关.     

急性吗啡耐受或炎性痛大鼠脊髓背角和背根神经节嘌呤受体P2X4表达的变化

目的 评价急性吗啡耐受或炎性痛大鼠脊髓背角和背根神经节嘌呤受体P2Y4 (P2X4R)表达的变化.方法 雄性SD大鼠30只,采用随机数字表法,将大鼠随机分为3组:生理盐水组(NS组,n=5)、急性吗啡耐受组(M组,n=5)和炎性痛组(F组,n=20).F组建立福尔马林炎性痛模型,M组和NS组鞘内注射吗啡或生理盐水,10 μg(10 μl)/次,2 h/次,连续6次,最后1次给药后2h处死取脊髓背角和背根神经节.NS组和M组分别于每次给药后(T1-6)测定热刺激缩足反射潜伏期(PWL),F组于致炎后4、7、10和14d时随机取5只大鼠测定PWL后处死取脊髓背角和背根神经节,采用免疫组化法检测P2X4R表达.结果 与基础值比较,F组致炎后4～14 d PWL明显降低,M组T1-5时PWL升高,T6时PWL差异无统计学意义(P＞0.05).与NS组比较,M组脊髓背角和背根神经节P2X4R表达上调,F组在致炎后第4天脊髓背角和背根神经节P2X4R表达上调,于第7天时P2X4R表达至峰值,第10天和第14天时P2X4R表达逐渐下调(P＜0.01).结论 急性吗啡耐受或炎性痛大鼠脊髓背角和背根神经节P2X4R表达上调,该变化可能与急性吗啡耐受和炎性痛的形成有关.     

氯胺酮对吗啡耐受小鼠脊髓星形胶质细胞的影响

目的 观察氯胺酮对吗啡耐受过程中脊髓星形胶质细胞的影响。方法 昆明种小鼠30只,随机分为5组(n=6):A组(对照组):皮下注射生理盐水(10 ml·kg-1)30 min后腹腔注射生理盐水(10 ml·kg-1);B组(慢性吗啡耐受模型组):皮下注射吗啡(10 mg·kg-1)30 min后腹腔注射生理盐水(10 ml·kg-1);C、D、E三组:吗啡用药均同B组,吗啡注射30 min后分别腹腔注射5、10、20 mg·kg-1氯胺酮。各组给药,每日重复2次,连续9 d采用免疫组织化学方法测定脊髓星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫反应阳性产物在吗啡耐受过程中的变化。结果 B组GFAP免疫反应阳性产物染色较A组深,其阳性产物表达相对面积(6.35±0.35)与A组(3.39±0.24)相比增加了88％(P<0.01)。D组、E组第9天GFAP免疫反应阳性产物面积分别比B组降低34％和45％(P<0.01).结论 吗啡耐受的机制可能涉及星形胶质细胞的激活,氯胺酮可能通过抑制星形胶质细胞激活而具有部分抗吗啡耐受作用。     

脊髓蛋白激酶C表达在代谢型谷氨酸受体5参与大鼠吗啡耐受形成中的作用

目的 评价脊髓蛋白激酶C(PKC)表达在代谢型谷氨酸受体5(mGluR5)参与大鼠吗啡耐受形成中的作用.方法 鞘内置管成功的雄性SD大鼠32只,体重180～240 g,随机分为4组(n=8):对照组(C组)、吗啡耐受组(M组)、反义链组(ANT组)和错义链组(MIS组).M组鞘内注射0.9%生理盐水5μl、ANT组和MIC组分别鞘内注射30 nmol反义、错义寡聚脱氧核苷酸(溶于5μl0.9%生理盐水),2次/d,连续8 d,于第6～8天鞘内注射吗啡15μg,2次/d,C组注射等容量生理盐水.于鞘内注射寡聚脱氧核苷酸6、7、8 d(T1～3)时测定大鼠的热痛阈和机械痛阈,第9天(T4)时处死大鼠取L4.5脊髓,采用RT-PCR法测定mGluR5、PKCα、PKCγ的mRNA表达,采用Western blot法测定PKCα、PKCγ的表达.结果 与C组比较,M组和MIS组T1.2时、ANT组T1～3时大鼠热痛阈和机械痛阈升高,T4时M组和MIS组脊髓mGluR5 mRNA、PKCα、PKCγ的表达上调,ANT组脊髓mGluR5 mRNA表达下调(P＜0.05);与M组比较,ANT组T2.3时大鼠热痛阈和机械痛阈升高,脊髓mGluR5 mRNA、PKCα、PKCγ的表达下调(P＜0.05),MIS组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 脊髓PKC表达在mGluR5参与大鼠吗啡耐受形成中起重要作用.     

炎性痛-吗啡耐受大鼠背根神经节辣椒素受体磷酸化水平的变化

目的 探讨炎性痛-吗啡耐受大鼠背根神经节辣椒素受体(VR1)磷酸化水平的变化.方法 鞘内置管成功的成年雄性SD大鼠20只,体重230～250 g,2～3月龄,采用左后足踝关节腔注射完全弗氏佐剂(CFA)50μl的方法制备炎性痛模型.大鼠随机分为4组(n=5),炎性痛+生理盐水组(NS组):注射剂CFA后3 d鞘内注射生理盐水10μl,2次/d,连续7 d;单纯吗啡组(M0组):不建立炎性痛模型,鞘内注射吗啡10μl/kg,2次/d,连续7 d;炎性痛+单次吗啡组(M1组):注射CFA后3 d鞘内注射吗啡10μl/kg;炎性痛+连续吗啡组(M2组):注射CFA后3 d鞘内注射吗啡10 μg/kg,2次/d,连续7 d.于鞘内置管后、注射CFA后3 d鞘内给药前、给药1～7 d测定机械缩足反射阈值和缩足潜伏期,最后一次测定痛阈后处死大鼠,采用Western blot法测定背根神经节磷酸化VR1(p-VR1)的表达水平.结果 NS组和M1组未发生吗啡耐受,M0组和M2组发生吗啡耐受.4组中,M2组背根神经节p-VR1表达水平最高(P＜0.05).结论炎性痛-吗啡耐受大鼠背根神经节VR1磷酸化水平升高,该变化可能是吗啡耐受形成的机制.     

炎性痛-吗啡耐受大鼠DRG辣椒素受体表达的变化及电针对吗啡耐受的影响

目的 探讨炎性痛-吗啡耐受大鼠背根神经节(DRG)辣椒素受体(VR1)表达的变化及电针对吗啡耐受的影响.方法 鞘内置管成功的雄性SD大鼠30只,采用左后足踝关节腔注射完全弗氏佐剂(CFA)50μl的方法制备炎性痛模型.随机分为6组(n=5):A组于注射CFA后第4天,鞘内注射生理盐水10μl,2次/d,连续7 d;B组不制备炎性痛模型,鞘内注射吗啡10μg/kg(10μl),2次/d,连续7 d;C组于注射CFA后第4天,鞘内注射吗啡10μg/kg(10μl);D组于注射CFA后第4天,鞘内注射吗啡10μg/kg(10μ1),2次/d,连续7 d;E组鞘内给药方法同D组,同时每天首次给药后,电针大鼠阳陵泉和足三里,强度2 mA,频率2 Hz,时间30 min;F组:电针频率为15 Hz,余同E组.于炎性痛模型制备前、鞘内注药前1 d、鞘内注药第1～7天时测定大鼠后肢热缩足潜伏期(PWL).吗啡第7天末次给药后采用Western blot方法测定DRG总蛋白及细胞膜蛋白VR1的表达.结果 各组炎性痛模型制备前PWL比较差异无统计学意义(P＞0.05).B组和D组发生吗啡耐受,E组和F组未发生吗啡耐受.D组DRG总蛋白及细胞膜蛋白VR1表达水平最高,E组VR1表达水平低于F组(P＜0.05).结论 DRG VR1表达上调参与了大鼠吗啡镇痛耐受的形成;电针刺激可抑制吗啡镇痛耐受的形成,该作用与下调DRG VR1的表达有关.     

关节炎慢性吗啡耐受大鼠脊髓背角谷氨酸转运体3型的表达

目的观察谷氨酸转运体3型(EAAT3)在关节炎慢性吗啡耐受大鼠脊髓背角表达的变化。方法36只健康雄性SD大鼠随机分为六组,每组6只,行鞘内置管。其中的四组制成佐剂性关节炎模型,分别经鞘内给予生理盐水(A组)、吗啡10μg/kg(B组)、吗啡20μg/kg(C组)、吗啡10μg/kg加纳洛酮10μg/kg(D组);另外两组非致炎大鼠分别经鞘内给予生理盐水(E组)、吗啡20μg/kg(F组)。各组给药均为每日2次,连续7d。动态检测大鼠50%缩爪阈值,以免疫组化方法检测脊髓背角EAAT3表达。结果B、C组关节炎大鼠在鞘内给予吗啡第7天形成较稳定的吗啡耐受,其脊髓背角EAAT3表达下降。结论脊髓EAAT3可能参与炎性痛大鼠慢性吗啡耐受的形成机制。     

瑞舒伐他汀对大鼠吗啡耐受的影响

目的 探讨瑞舒伐他汀对大鼠吗啡耐的影响.方法 雄性SD大鼠48只,体重200～250 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为6组(n=8):对照组(C组)、吗啡耐受组(MT组)、瑞舒伐他汀对照组(RC组)和不同剂量瑞舒伐他汀处理组(R1组～R3组).每天8:00和16:00皮下注射吗啡10 mg/kg,连续5d,制备吗啡耐受模型.C组和RC组给予等量生理盐水.C组和MT组每天皮下注射生理盐水或吗啡前30 min给予生理盐水10 ml/kg灌胃,连续5 d;RC组、R1组、R2组和R3组每天皮下注射生理盐水或吗啡前30 min分别给予10.0、0.4、2.0和10.0 mg/kg瑞舒伐他汀灌胃,连续5d.模型制备前1 d(T1)和制备后1 d(T2)测定热缩足潜伏期,计算最大镇痛效应百分比(MPE);T2时痛阈测定结束后,处死大鼠,取L5脊髓,采用Western blot法测定脊髓细胞外调节蛋白激酶(ERK)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)的表达水平,采用ELISA法测定以及白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量.结果 与C组相比,MT组和R1组T2时MPE降低,脊髓p-ERK、IL-1β和TNF-α水平升高(P＜0.05),RC组、R2组和R3组差异无统计学意义(P＞0.05);与MT组相比,RC组、R2组和R3组T2时MPE升高,脊髓p-ERK、IL-1β和TNF-α水平降低(P＜0.05),R1组差异无统计学意义(P＞0.05).R2组和R3组上述指标比较差异无统计学意义(P＞0.05),6组大鼠脊髓ERK表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 瑞舒伐他汀可减轻大鼠吗啡耐受,其机制可能与抑制脊髓ERK磷酸化及降低IL-1β和TNF-α水平有关.     

鞘内注射重组大鼠白细胞介素18对大鼠吗啡耐受形成的影响

目的 评价鞘内注射重组大鼠白细胞介素18(rrIL-18)对大鼠吗啡耐受形成的影响.方法 清洁级健康雄性SD大鼠,体重150～ 180 g,鞘内置管成功后,采用随机数字表法,将其分为4组(n=12),Ⅰ组鞘内注射PBS溶液20μl,Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组分别鞘内注射20μl含rrIL-18 0.2、2.0、10.0μg的PBS溶液,1次/d,连续7d.分别在鞘内给药前1d和给药后第8、10、12天,尾静脉注射吗啡4mg/kg,吗啡注射前及注射后45 min时测定辐射热缩爪潜伏期,计算吗啡的最大可能镇痛效应百分比,第12天行为学测试结束后处死动物,取脊髓腰膨大,采用免疫荧光染色法测定脊髓星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白的表达,采用Western blot法检测磷酸化细胞外信号调节激酶42/44(p-ERK42/44)的表达.结果 与Ⅰ组比较,Ⅲ组和Ⅳ组第8、10、12天基础辐射热缩爪潜伏期缩短,最大可能镇痛效应百分比降低,第12天脊髓胶质纤维酸性蛋白和p-ERK42/44表达上调(P＜0.05).结论 大鼠鞘内连续注射7 d rrIL-18 2.0、10.0μg可促进吗啡耐受形成,可能与活化脊髓星形胶质细胞有关.     

电针对大鼠吗啡耐受时脊髓背角细胞外信号调节激酶1/2活性的影响

目的 探讨电针对大鼠吗啡耐受时脊髓背角细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)活性的影响.方法 取鞘内置管成功的雄性SD大鼠25只,采用随机数字表法,将其分为5组(n=5):生理盐水组(NS组)鞘内注射生理盐水10μl;吗啡组(M组)鞘内注射吗啡10 μg;错义寡核苷酸组(MO组)鞘内注射吗啡10μg+ ERK1/2错义寡核苷酸10μg;反义寡核苷酸组(AO组)鞘内注射吗啡10 μg+ERK1/2反义寡核苷酸10 μg;电针组(EA组)鞘内注射吗啡10 μg,同时每日首次给药后电针大鼠阳陵泉和足三里(频率2 Hz,波宽1 ms,电流强度3 mA,刺激时间30 min).各组注射药物容量均为10μl,2次/d,连续7d.于鞘内给药前、鞘内给药2、4、6d和鞘内给药结束后1 d(T0-4)测定机械痛阈.于T4时机械痛阈测定结束后,取脊髓背角组织,采用Western blot法测定大鼠ERK1/2和磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)的表达.结果 M组、MO组和AO组和EA组发生了吗啡耐受,EA组吗啡耐受程度最轻.与NS组比较,M组和MO组p-ERK1/2表达上调,AO组总ERK1/2表达下调(P＜0.05),EA组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与M组和MO组比较,AO组p-ERK1/2和总ERK1/2表达下调,EA组p-ERK1/2表达下调(P＜0.05);与AO组比较,EA组p-ERK1/2和总ERK1/2表达上调(P＜0.05).结论 电针可抑制慢性吗啡给药所导致的脊髓背角ERK1/2活性升高,从而缓解吗啡耐受的形成.     

大鼠骨癌痛-慢性吗啡耐受模型的建立

目的 建立大鼠骨癌痛-慢性吗啡耐受模型.方法 鞘内置管成功的成年雌性SD大鼠36只,体重180～200 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为3组(n=12):假手术组(S组)、慢性吗啡耐受组(M组)和骨癌痛+慢性吗啡耐受组(BM组).BM组右侧胫骨上段骨髓腔注入Walker256癌细胞10 μl(4×102个细胞/μl)制备骨癌痛模型,M组注射热灭活的Walker256癌细胞10μl,接种后10 d开始鞘内注射吗啡20μg/kg,2次/d,连续9 d.S组仅暴露右侧胫骨上段.分别于接种Walker256癌细胞前、接种后1、3、6、9 d、给予吗啡1、3、5、7、9 d时测定机械缩足阈值(MWT)和机械缩足持续时间(MWD),并于接种后9 d时行放射学检查,进行骨质破坏评分.最后1次测定痛周后,对右侧足底进行触摸刺激,停止刺激后3 h时取脊髓L4-6节段,测定脊髓背角Foa表达水平.结果 与S组比较,M组MWT降低,MWD延长,脊髓背角Fos表达上调(P＜0.05或0.01);与M组比较,BM组MWT降低,骨质破坏评分升高,MWD延长,脊髓背角Fos表达上调(P＜0.05或0.01).结论 成功制备了大鼠骨癌痛-慢性吗啡耐受模型.

Abstract：

Objective To establish a rat model of bone cancer pain-chronic morphine tolerance. Methods Thirty-six adult female Sprague-Dawley rats weighing 180-200 g in which intrathecal catheters were successfully placed without complications were randomly divided into 3 groups ( n = 12 each) :group sham operation (group S),group chronic morphine tolerance (group M) and group bone cancer pain + chronic morphine tolerance (group BM). Bone cancer pain was induced by intra-tibia inoculation of Walker256 mammary gland carcinoma cells (4 ×102 cells/μl) in group BM, while in group M heat-inactivated Walker256 mammary gland carcinoma cells were given instead, and then 10 days later, intrathecal morphine 20 μg,/kg was administered twice a day for 9 consecutive days. The mechanical paw withdrawal threshold (MWT) and mechanical paw withdrawal duration (MWD) were measured before inoculation, at day 1, 3, 6 and 9 after inoculation, and at day 1, 3, 5, 7 and 9 of morphine administration. The degree of bone destruction was assessed by radiological analysis at day 9 after inoculation. After the last measurement of pain threshold, the rats were given innoxious touch-stimulus. The rats were sacrificed 3 h after stopping the stimulus, and L4-6 segment of the spinal cord was isolated to determine the expression of Fos protein in the spinal dorsal horn. Results Compared with group S, MWT was significantly decreased, MWD was significantly prolonged and the expression of Fos protein was up-regulated in group M ( P ＜ 0.05 or 0.01 ). MWT was significantly decreased, MWD was significantly prolonged, bone destruction scores were significantly increased,and the expression of Fos protein was up-regulated in group BM compared with group M ( P ＜ 0.05 or 0.01 ). Conclusion A rat model of bone cancer pain-chronic morphine tolerance is successfully established.     

吗啡对电刺激坐骨神经诱发大鼠脊髓背角突触长时程增强的影响

目的 评价吗啡对电刺激坐骨神经诱发大鼠脊髓背角突触长时程增强(LTP)的影响.方法 雄性SD大鼠27只,日龄60～90 d,体重180～200 g,随机分为4组:对照组(C组,n=7)、吗啡组(M组,n=7)、纳洛酮组(N组,n=6),纳洛酮+吗啡组(MN组,n=7).麻醉下分离左侧坐骨神经,记录电极插入左侧T13～L1脊髓背角,刺激电极刺激左侧坐骨神经,给予15 V、0.5 ms、1/60 Hz单个方波电刺激30 min以诱发场电位,抽取生理盐水10 μl、吗啡10 μl(15 μg/μl)、纳洛酮10 μl(2.5 μg/μl)、纳洛酮(2.5 μg/μl)和吗啡(15 μg/μl)各5 μl的混合液,在脊髓上方3～5 mm,经2 min内缓慢滴注,给药后5 min时,给予4串高频高强度强直电刺激后,再给予15 V、0.5 ms、1/60 Hz单个方波电刺激210 min,记录强直刺激前30 min、强直刺激后即刻～30 min、35～60 min、65～120 min、125～210 min时段平均场电位幅值及潜伏期.结果 与C组比较,M组和MN组平均场电位幅值降低,潜伏期延长(P<0.05或0.01),N组上述指标差异无统计学意义(P>0.05).与M组比较,MN组平均场电位幅值升高,潜伏期缩短(P<0.05或0.01).与强直刺激前30 min比较,C组和N组在强直刺激后各时段平均场电位幅值升高,潜伏期缩短,M组在强直刺激后各时段平均场电位幅值降低,潜伏期延长,MN组在强直刺激后即刻～30 min和35～60 min时段平均场电位幅值升高,强直刺激后即刻～30 min时段潜伏期缩短,65～120 min和125～210 min时段平均场电位幅值降低,潜伏期延长(P<0.05或0.01).结论 吗啡可抑制电刺激坐骨神经诱发大鼠脊髓背角突触LTP,可能是其抑制中枢敏化的机制之一.     

氯胺酮预先给药对慢性炎性痛大鼠急性吗啡耐受的影响

目的 探讨氯胺酮预先给药对慢性炎性痛大鼠急性吗啡耐受的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠24只,体重180～200 g,随机分为3组(n=8):吗啡组(M组)、氯胺酮组(K组)和氯胺酮+吗啡组(KM组).于左后足底皮下注射完全弗氏佐剂0.125 ml制备慢性炎性痛模型.注射完全弗氏佐剂后3 d,M组腹腔注射吗啡5 mg/kg,K组腹腔注射氯胺酮10 mg/kg,KM组腹腔注射氯胺酮10mg/kg,10 min后腹腔注射吗啡5 mg/kg,1次/d,连续3 d.于制模前(基础状态)、注射氯胺酮前(T1)、注射氯胺酮后15 min(T2)、30 min(T3)、60 min(T4)及120 min(T5)时测定机械痛阈和热痛阈.结果 与基础值比较,各组T1时机械痛阈及热痛阈均降低(P<0.01).第1次注射情况:与11时比较,M组和KM组T2-5时机械痛阈及热痛阈升高(P<0.05或0.01).第2次注射情况:与T1时比较,M组T2时机械痛阈升高(P<0.05),KM组T3-5时机械痛阈和热痛阈升高(P<0.05或0.01).第3次注射情况:与T1时比较,KM组T4时热痛周升高(P<0.05);与M组第3次注射时比较,KM组T3,5时机械痛阈及T3-5时热痛阈升高(P<0.05).结论 氯胺酮10 mg/kg预先给药可减轻慢性炎性痛大鼠急性吗啡耐受.     

幻肢痛大鼠脊髓背角神经元和突触数量的变化

目的 探讨幻肢痛大鼠脊髓背角神经元和突触数量的变化.方法 健康成年SD大鼠11只,雄雌不拘,体重290～300 g,随机分为2组:假手术组(S组,n=5)和单侧坐骨神经横断组(P组,n=6).术后持续观察P组大鼠自噬情况,并进行自噬评分.术后28 d时,取L3～6节段脊髓组织,分别进行尼氏染色(显示神经元)和突触素免疫组织化学染色(显示突触数量),计数手术侧和非手术侧脊髓背角神经元和突触的数量.结果 P组自术后2 d开始陆续发生自噬,自噬评分9～11分.与S组比较,P组各节段双侧脊髓背角神经元数量及L3.6节段脊髓背角突触数量差异无统计学意义(P＞0.05),手术侧L4.5节段脊髓背角突触数量增加(P＜0.05).结论 幻肢痛大鼠脊髓背角突触数量增加,神经元数量未发生变化;突触数量增加可诱发幻肢痛.