甘草抗病毒有效部位(GD4)体外抑制呼吸道合胞病毒作用的研究

目的：观察甘草抗病毒有效部位（GD4）抑制呼吸道合胞病毒（RSV）作用。方法：采用煎煮法、二氯甲烷萃取法和柱层析法提取分离得到甘草抗病毒有效部位（GD4）。采用细胞病变抑制实验，观察GD4在Hela细胞中对RSV的抑制作用。结果：GD4半数中毒浓度（TC50）为0．23mg／ml，抑制RSV的半数有效浓度（EC50）为28．73μg／ml，治疗指数（TI）为8．0；GD4对RSV的抑制作用存在量效关系；在感染后至少12h以内给药，GD4能够有效地抑制RSV的复制。GD4不含有甘草酸。结论：甘草抗病毒有效部位（GD4）在Hela细胞中对呼吸道合胞病毒有明显的抑制作用。     

桑叶乙醇提取物体外对呼吸道合胞病毒的抑制作用

目的:研究桑叶体外对呼吸道合胞病毒(RSV)的作用。方法:采用细胞培养技术,将51.2 g·L-1桑叶液(70%乙醇提取物)倍比稀释后与密度为1.0×104/m L Hep-2细胞作用72 h,观察细胞病变效应(CPE),通过MTT法测定半数中毒浓度(TC50)。不同浓度桑叶液、Hep-2细胞与0.01 m L 100 TCID50RSV作用1,2 h后,测定其半数抑制浓度(IC50)和抗病毒指数(TI),以利巴韦林为阳性对照,评判桑叶抗RSV效果。结果:桑叶质量浓度在0.01~12.8 g·L-1,对RSV的抑制率表现出量效关系,TC506.56 g·L-1,IC501.015 g·L-1,TI 6.46。桑叶体外有抗RSV作用,比利巴韦林毒性小,抗病毒指数大,安全范围大(P<0.05)。结论:桑叶对RSV有明显的抑制作用,既能抑制RSV的吸附和生物合成,又能直接杀死病毒。     

清热合剂体外抗呼吸道合胞病毒作用

目的：了解清热合剂对呼吸道合胞病毒（RSV）的抑制作用。方法：采用细胞培养技术，以双黄连为阳性对照药，观察清热合剂在非洲绿猴肾细胞（VERO）和咽喉癌上皮细胞（HEP-2）细胞中对RSV的抑制作用。结果：在VERO细胞中，清热合剂半数中毒浓度（TD50）为31．62mg／mL，抗合胞病毒的半数有效浓度（IC50）为0．50mg／mL，治疗指数（33）为63．24；在HEP-2细胞中，TD50为32．10mg／mL，抗合胞病毒的IC50为0．54mg／mL，TI为59．44。且对RSV抑制作用存在明显的量效反应关系（P〈0．01）。结论：清热合剂在VERO和HEP-2细胞中对RSV有明显抑制作用。     

大青叶有效单体抗呼吸道合胞病毒作用的实验研究

目的 探讨中药大青叶单体1#,2#,3#,4#体外抗呼吸道合胞病毒(RSV)的作用.方法 通过观察病毒引起的细胞病变效应(Cytopathogenic effect,CPE)和MTT[Methyl Thiazolyl Tetrazolium,3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐]法检测药物抗RSV活性, 计算药物对病变的抑制率和半数抑制浓度(50% inhibiting concentration ,IC50),并从药物抗病毒吸附,药物对病毒的直接杀灭作用及抑制病毒在细胞内的生物合成3个方面初步探索大青叶单体抗RSV活性的作用机制.结果 大青叶单体1#,2#,3#,4#对RSV无直接灭活作用,也不能阻止RSV的吸附,而能抑制RSV在Hep-2细胞内的的生物合成,其半数抑制浓度(IC50)分别为32.57,26.37,31.60,29.61 μg/ml,治疗指数(TI) 分别为6.15,10.50,9.21,13.22,其抗病毒效果优于病毒唑(IC50=103.20 μg/ml, TI=5.21)和抗病毒口服液(IC50=105.21 μg/ml, TI=5.03) ,P<0.01.结论 大青叶单体1#,2#,3#,4#能安全高效地抑制RSV在Hep-2细胞中的增殖,抑制作用发生在病毒入侵细胞后.     

青英颗粒抗病毒作用的实验研究

目的观察青英颗粒对副流感病毒Ⅰ型的体外作用，方法采用体外抑制病毒致细胞病变作用（CPE）的方法：用制备好的青英颗粒含药血清及对照组（感冒退热冲剂、病毒唑颗粒剂）含药血清抑制感染病毒的Hep-2细胞，用MTY法观测青英颗粒含药血清对病毒致细胞病变的抑制作用。结果青英颗粒高、中剂量含药血清对副流感病毒Ⅰ型的抑制作用与药物对照组、模型组比较差异显著。结论青英颗粒的抗病毒作用优于感冒退热冲剂、病毒唑，是治疗急性上呼吸道感染的良好抗病毒中成药。     

清热抗感冲剂及其含药血清体外抑制腺病毒（ADV3）作用的实验研究

目的：通过清热抗感冲剂体外抑制腺病毒（ADV，）和呼吸道合胞病毒（aSV）的研究，探讨清热抗感冲荆体外抗病毒作用。方法：通过细胞培养，采用观察细胞病变（CPE）和活细胞染色计数法（MTT），观察清热抗感冲剂及其含药血清在Hep-2细胞中，抑制ADV，和RSV的作用。结果：清热抗感冲剂及其舍药血清具有抑制ADV3病毒复制作用。其，T℃50如分别为4760μg／mL、1／4．35稀释度；IC50为817μ9／mL、1／9．14稀释度；治疗指数（TI）分别为：5．8、2．03。清热抗感冲剂及其含药血清具有不同程度抑制RSV病毒复制作用，其TC50分别为4760μg／mL、1／4．35稀释度；IC50为178μg／mL、1／54稀释度；治疗指数（TI）分别为：26．7、12．3。结论：清热抗感冲剂及其舍药血清具有抑制ADV，和RSV在Hep-2细胞内的复制作用。     

甘草抗病毒有效部位(GC3-1-4)体外抑制呼吸道合胞病毒的研究

目的：探讨甘草抗病毒有效部位（GC3-1-4）体外抑制呼吸道合胞病毒（RSV）的作用。方法：采用煎煮法、乙醇沉淀法和柱层析法分离提取GC3-1-4。以病毒唑为阳性对照药物，采用细胞培养技术观察GC3-1-4抑制RSV作用。结果：GC3-1-4的TC50为0．45mg／ml，抑制RSV的EC50为41．32μg／ml，TI为10．89。GC3-1-4对RSV的抑制作用存在量效关系；感染RSV后0h、2h、4h、6h、8h加药，GC3-1-4在RSV的活性有抑制作用。化学实验证实GC3-1-4不含甘草酸或多糖类物质。结论：GC3-1-4在Hela细胞中对RSV有明显的抑制作用。     

热毒清口服液抑制呼吸道合胞病毒的体外实验研究

目的:评价热毒清口服液体外抑制呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)的效果.方法:采用MTT法及细胞病变抑制实验,以病毒唑为阳性对照,测定热毒清口服液在Hep-2细胞中对呼吸道合胞病毒的抑制作用.结果:热毒清口服液的半数中毒浓度(TC50)为9182.4 mg/L,抑制RSV的半数有效浓度(EC50)为559.8 mg/L,治疗指数(TI)为16.4.结论:热毒清口服液在体外实验中对呼吸道合胞病毒有显著抑制作用.     

抗柯萨奇 B病毒性心肌炎胶囊复方新制剂对柯萨奇 B3病毒感染的人喉癌上皮细胞的影响

目的：观察不同浓度抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊（ K-CoxB-JN）复方新制剂对柯萨奇B3病毒（CVB3）感染人喉癌上皮（Hep-2）细胞的影响。方法首先测定K-CoxB-JN复方新制剂的最大无毒浓度（TC0）,再通过K-CoxB-JN复方新制剂不同的加药和加病毒方式,用溴化噻唑蓝四氮唑（MTT）法检测对CVB3感染Hep-2细胞的活性,观察K-CoxB-JN复方新制剂对CVB3感染Hep-2细胞的影响,并采用利巴韦林颗粒对照观察。结果测得K-CoxB-JN复方新制剂TC0为1．5625 mg/mL,利巴韦林颗粒TC0为6．25 mg/mL;当K-CoxB-JN复方新制剂浓度为0．78125 mg/mL、利巴韦林浓度为3．125 mg/mL时对CVB3感染Hep-2细胞保护作用最明显;当K-CoxB-JN复方新制剂浓度为1．5625 mg/mL、利巴韦林颗粒浓度为6．25 mg/mL时直接抗病毒和抑制病毒释放作用最明显,并且表现出良好的量效关系。结论不同浓度的K-CoxB-JN复方新制剂对CVB3感染的Hep-2细胞具有保护作用,能直接抗CVB3病毒,并且能抑制病毒的释放。     

呼吸道合胞病毒对Hep-2细胞增殖的影响

目的研究呼吸道合胞病毒(RSV)感染对细胞增殖活性的影响。方法培养RSV感染Hep-2细胞,观察细胞形态,在感染后不同时间点用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测Hep-2细胞增殖情况。结果RSV感染Hep-2细胞后48 h细胞开始出现病变,72~96 h病变最明显,120 h细胞全部死亡,不存在正常细胞。感染后24 h4、8 h、72 h9、6 h1、20 h Hep-2细胞的增殖指数分别为0.85,1.2,1.08,0.90,0.74。结论呼吸道合胞病毒感染早期促进宿主Hep-2细胞增殖,晚期抑制增殖。     

4’-去甲基-4’-氧-环丁甲酰基-去氧鬼臼毒素及鬼臼苦素抑制肿瘤细胞生长作用研究

目的:探讨不同浓度4’-去甲基-4’-氧-环丁甲酰基-去氧鬼臼毒素对宫颈癌细胞Hela和黑色素瘤细胞B16增殖的抑制作用;鬼臼苦素对Hela细胞、肝癌Hep G2细胞、肺癌A549细胞及骨肉瘤MG-63细胞增殖的抑制作用。方法:采用MTT法检测不同浓度的4’-去甲基-4’-氧-环丁甲酰基-去氧鬼臼毒素及鬼臼苦素对以上多种癌细胞的抑制作用。结果:不同浓度4’-去甲基-4’-氧-环丁甲酰基-去氧鬼臼毒素与对照组(0.1%DMSO)相比,对肿瘤细胞生长抑制率明显升高,均有显著性差异(P<0.05);不同浓度鬼臼苦素与对照组(0.1%DMSO)相比,对肿瘤细胞生长抑制率也明显升高,均有显著性差异(P<0.05)。结论:4’-去甲基-4’-氧-环丁甲酰基-去氧鬼臼毒素对Hela细胞和B16细胞增殖具有明显的抑制作用,鬼臼苦素对Hela、MG-63、Hep G2及A549细胞具有明显的抑制作用。     

丹参酮ⅡA诱导人喉癌细胞Hep-2凋亡的研究

目的:研究丹参酮ⅡA对人喉癌细胞Hep-2的生长抑制作用及凋亡诱导作用。方法:四亚基噻唑蓝(MTT)法测定丹参酮ⅡA对细胞生长的抑制作用,流式细胞仪技术(FCM)观察细胞周期及凋亡。结果:不同浓度的丹参酮ⅡA均能抑制人喉癌细胞Hep-2生长,并有明显的时间和剂量依赖性;流式细胞仪检测不同浓度丹参酮ⅡA作用48h后的细胞凋亡率增高,与对照组比较差异均有统计学意义。结论:丹参酮ⅡA在体外能明显抑制人喉癌细胞Hep-2生长,抑制其生长的机制可能是诱导细胞凋亡。     

HPLC测定蓝菊抗病毒口服液中蒙花苷的含量

目的：建立蓝菊抗病毒口服液中蒙花苷的含量测定方法。方法：采用HPLC法,色谱柱：Acclaiml20C18柱（4．6mm×250mm,5μm）;流动相：甲醇-水-冰醋酸（26：23：1）;柱温：25℃;检测波长为334nm;流速为1．0mL·min^-1。结果：蒙花苷在O．025—0．25μg之间线性关系良好,R^2=0．9999,平均加样回收率为102．41％（RSD=1．5％,n=6）。结论：本方法简便、准确,重复性好,可用于该制剂的质量控制。     

半边旗提取物5F-Na盐溶液对三种肝细胞癌细胞株的增殖抑制作用

目的:评估半边旗提取物5F-Na盐溶液对肝细胞癌细胞株的增殖抑制作用。方法:采用MTT法,观察不同浓度的半边旗提取物物5F-Na盐溶液分别作24、48、72h对三种不同类型肝细胞癌细胞株(HepG2,Hep3B,BEL-7402)生长增殖的影响。结果:不同浓度的半边旗提取物5F-Na盐溶液分别对3种肝癌细胞作用24、48、72h后,所有的肝癌细胞株生长增殖均受到不同程度的抑制(P<0.05),5F-Na盐溶液对HepG2,Hep3B,BEL-7402作用72h后的IC50分别是20.67,16.74,16.09mg/L。结论:半边旗提取物5F-Na盐溶液能有效抑制肝细胞癌细胞株的体外增殖。     

清肺口服液对Hep-2细胞感染呼吸道合胞病毒后IL-6、IL-8调控的研究

目的探讨清肺口服液对人喉癌上皮细胞（Hep-2）感染呼吸道合胞病毒（RSV）后白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-8（IL-8）表达的影响。方法分时段以清肺口服液含药血清、利巴韦林含药血清及空白血清干预RSV感染的体外培养的Hep-2细胞,48h及72h后收集各组细胞上清,采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定各组人喉癌细胞IL-6、IL-8表达变化。结果 48h及72h后病毒模型组IL-6、IL-8的表达明显高于清肺口服液组（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）、利巴韦林组（Ⅱ、Ⅲ）,有显著差异,空白血清组（Ⅱ、Ⅲ）与病毒模型组无显著差异。清肺口服液组（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）与利巴韦林组（Ⅱ、Ⅲ）比较,无显著差异。清肺口服液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组之间比较,无显著差异;72h后各组IL-6、IL-8的表达与48h相比,无显著差异。结论清肺口服液可降低Hep-2感染RSV后IL-6、IL-8的过度表达,减轻炎症反应,提前给药更可获得良好的效果,这可能是清肺口服液抗病毒的机制之一。     

清肺口服液对人喉癌细胞感染呼吸道合胞病毒后ICAM-1表达水平的影响

目的探讨清肺口服液对人喉癌细胞（Hep-2）感染呼吸道合胞病毒（RSV）后细胞间黏附分子-1（I-CAM-1）表达水平的影响。方法分时段以清肺口服液含药血清,利巴韦林含药血清及空白血清干预RSV感染的体外培养的Hep-2细胞,48h时及72h后收集各组细胞上清,采用酶联免疫吸附试验法（ELISA法）测定各组人喉癌细胞ICAM-1表达变化。结果 48h时及72h后病毒模型组ICAM-1的表达明显高于清肺口服液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组及利巴韦林Ⅱ、Ⅲ组;空白血清组与病毒模型组无显著差异。清肺口服液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组与利巴韦林Ⅱ、Ⅲ组比较,无显著差异。清肺口服液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组之间比较,无显著差异。72h后各组ICAM-1的表达与48h相比,无显著差异。结论清肺口服液可降低Hep-2感染RSV后ICAM-1的过度表达,减轻炎症反应,提前给药更可获得良好的效果,这可能是清肺口服液抗病毒的机制之一。     

HPLC法测定复方抗病毒口服液中绿原酸的含量

目的建立HPLC法测定复方抗病毒口服液中绿原酸含量的方法。方法采用Shim-pack VP-ODS C18反相色谱柱（4．6mm×250mm,5μm）,以乙腈-0．2％磷酸（12：88）为流动相;流速为1．0mL／min;检测波长：327nm;柱温：30℃。结果绿原酸在0．051～0．922Pg范围内线性关系良好（r=0．9999,n=6）,平均回收率为99．04％,RSD=1．31％（n=6）。结论该方法准确、重复性好、简便易行,可作为复方抗病毒口服液的质量控制方法。     

常氧条件下姜黄素对肝癌Hep1细胞增殖及HIF-1α mRNA表达的影响

目的:研究常氧条件下姜黄素对Hep1细胞的增殖及HIF-1α mRNA表达的影响。方法CCK-8法检测常氧条件下不同浓度姜黄素(0、5、10、15、20μmol/L)对肝癌Hep1细胞增殖的影响;用终浓度为15μmol/L姜黄素对体外肝癌细胞系Hep1细胞进行干预,流式细胞术分析Hep1细胞凋亡的变化;常氧条件下不同浓度姜黄素(0、5、10、15、20μmol/L)对肝癌Hep1细胞作用24h后,RT-PCR检测Hep1细胞HIF-1α mRNA表达水平的变化。结果:5、10、15、20μmol/L的姜黄素在作用1周后,呈浓度依赖性抑制肝癌Hep1细胞增殖;流式分析显示15μmol/L的姜黄素使Hep1细胞凋亡率增高,差异具有统计学意义(P0.05);与空白对照组相比,10μmol/L姜黄素处理组的HIF-1α mRNA的表达水平升高,差异具有统计学意义(P0.05),15、20μmol/L姜黄素处理组的HIF-1α mRNA的表达水平升高更为显著(P0.01)。结论:常氧条件下,姜黄素呈浓度依赖性抑制肝癌Hep1细胞的增殖,促进Hep1细胞的凋亡和HIF-1α mRNA的表达,常氧条件下姜黄素抑制肝癌Hep1细胞增殖的机制可能与缺氧条件下姜黄素的抑瘤机制有所不同。     

益胃化裁方免煎颗粒抗胃黏膜损伤的作用机制研究

目的：观察益胃化裁方免煎颗粒对大鼠急性胃黏膜损伤模型成模的抑制作用,揭示益胃化裁方免煎颗粒对急性胃黏膜损伤的预防保护作用及其可能机制。方法：将SD大鼠随机分为正常组、模型组、益胃化裁方免煎颗粒组和替普瑞酮组,采用60%乙醇灌胃制备急性胃黏膜损伤大鼠模型,观察益胃化裁方免煎颗粒对急性大鼠胃黏膜损伤模型成模的影响,并测定血清和胃黏膜组织中SS、PGE2的含量。结果：益胃化裁方免煎颗粒组和替普瑞酮组均能明显改善黏膜出血、糜烂及炎症等损伤状况,并能分别显著提高血清和胃组织中SS、PGE2的含量,较模型组有显著性差异（P〈0.01,P〈0.05）;且益胃化裁方免煎颗粒组对血清及胃组织中SS含量的提高优于替普瑞酮组（P〈0.05）。结论：益胃化裁方免煎颗粒对大鼠急性胃黏膜损伤具有成模抑制作用,对急性胃黏膜损伤具有预防保护作用,其机理可能与促进SS、PGE2等胃黏膜保护因子的生长有关。     

从TH1/TH2细胞平衡角度探讨清肺口服液对感染RSV小鼠内T-bet、GATA3水平的影响

目的:从TH1/TH2细胞平衡角度观察清肺口服液对感染RSV肺炎小鼠肺组织内T-bet、GATA3及IL-12的影响,并对其作用机制进行初步探讨。方法:将45只BABL/c小鼠随机分为5组,正常对照组,模型组,利巴韦林组,清肺(3.4 g/mL)组,清肺(10.2 g/mL)组。每组9只,用RSV(Long株)病毒予小鼠滴鼻造模,病毒激发24 h后,分给药72 h后处死小鼠,立即取小鼠肺组织行病理分析,及肺细胞中RT-PCR检测T-bet和GATA3蛋白表达水平,ELISA方法检测肺泡灌洗液(BALF)中IL-12的含量,流式细胞术方法检测小鼠脾脏细胞IL-4和INF-γ表达含量。结果:小鼠模型组与各给药组小鼠肺组织均有T-bet和IL-12(P<0.05,P<0.01)显著升高,GATA3显著降低。结论:清肺口服液具有调节TH1/TH2平衡,并对于感染rsv小鼠体内T-bet及IL-12细胞因子具有明显提升作用,而对GATA3则有明显抑制效果,从而进一步证明了清肺口服液治疗RSV病毒性肺炎有效性。