菟丝子总黄酮对多囊卵巢综合征大鼠模型的影响

目的:探讨菟丝子总黄酮对脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)联合人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,HCG)致大鼠多囊卵巢综合征(olycystic ovary syndrome,PCOS)模型的影响。方法:70只SD大鼠,10只正常组除外,其余大鼠上午颈背部注射DHEA 0. 06 mg·g-1,下午皮下注射1. 5 U HCG/只,连续21 d。造模第16天,阴道涂片,实施动情周期监测。挑选成模大鼠60只,分为模型组,达英-35组(0. 339 2 mg·kg-1),菟丝子总黄酮高、中、低剂量组(0. 2,0. 1,0. 05 g·kg-1),每组10只。分组当天按照组别分别进行给药,正常组和模型组给予等体积溶剂,连续给药21 d。末次给药2 h后,腹主动脉取血,测血清睾酮(testosterone,T),雌二醇(estrogen,E2),促黄体生成素(luteinizing hormone,LH)和卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)的含量;脱颈处死大鼠,取每只大鼠同一部位的卵巢固定于10%甲醛溶液中,进行苏木素-伊红(HE)染色光镜观察卵巢的形态变化;取另一相同部位的卵巢,免疫组化法测量卵巢中雄激素受体(androgen receptor,AR)和凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2 (B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax),观察相关蛋白在卵巢中的表达情况;取下丘脑和垂体,免疫组化法检测下丘脑中促性腺激素释放激素(gonadotropinreleasing hormone,GnRH),垂体促性腺激素释放激素受体(gonadorelin releasing hormone receptor,GnRHR)的表达情况。结果:PCOS大鼠模型复制成功。与模型组比较,各给药组可以显著降低PCOS大鼠血清T,E2和LH含量,显著升高血清FSH含量(P 0. 01);显著升高卵巢Bcl-2水平(P 0. 01),不同程度升高垂体GnRHR水平(P 0. 05,P 0. 01);不同程度降低卵巢AR和Bax水平(P 0. 05,P 0. 01),显著降低下丘脑中GnRH水平(P 0. 01)和显著改善PCOS大鼠卵巢组织的病理性改变。结论:PCOS大鼠模型复制成功。菟丝子总黄酮可能通过调节雌雄激素分泌、抑制卵巢凋亡蛋白的表达、影响下丘脑-垂体-卵巢轴途径发挥对PCOS模型大鼠的保护作用。     

菟丝子总黄酮对大鼠流产模型母-胎界面Fas／FasL、PCNA、HB—EGF表达的影响

目的:观察菟丝子总黄酮对大鼠流产模型母-胎界面Fas/FasL、PCNA、HB-EGF表达的影响。方法:对溴隐亭致SD孕鼠流产模型,以菟丝子总黄酮高、低剂量为治疗组,达芙通为阳性对照组,于孕12 d处死各组大鼠,应用免疫组织化学方法检测胎盘和蜕膜Fas/FasL、PCNA、HB-EGF的表达。结果:菟丝子总黄酮高、低剂量组、达芙通及正常妊娠组蜕膜和胎盘PCNA表达显著高于模型组,蜕膜和胎盘Fas/FasL表达显著低于模型组,胎盘HB-EGF表达显著高于模型组,差异均有显著性,菟丝子总黄酮高、低剂量组与孕激素达芙通组比较,差异无显著性,各组蜕膜皆无HB-EGF表达。结论:菟丝子总黄酮可能通过调节滋养细胞的增殖与凋亡,使其恢复到正常妊娠状态而起到保胎的作用。     

菟丝子总黄酮对大鼠流产模型血清P、PR、Th1／Th2细胞因子表达的影响

目的:探讨菟丝子总黄酮对大鼠流产模型蜕膜PR及Th1/Th2细胞因子表达的影响,同时观察血清P和PR的变化.方法:对溴隐亭致SD孕鼠流产模型,设菟丝子总黄酮高、低剂量治疗组、达芙通为阳性对照组,于孕12d处死各组大鼠,酶联免疫检测血清P和PRL的水平,免疫组化法检测蜕膜PR的表达,RT-PCR法检测蜕膜Th1/Th2 mRNA的表达.结果:模型组蜕膜IL4、IL-10 mRNA及PR蛋白表达明显低于正常妊娠组,TNF-α、IFN-γ mRNA表达明显高于正常妊娠组,差异有显著性(P<0.05),菟丝子总黄酮可上调流产大鼠蜕膜IL-4、IL-10、PR的表达,下调TNF-α、IFN-γ表达,同时可提高血清P的水平,其作用与孕激素达芙通相似.结论:菟丝子总黄酮可能通过调节母胎界面内分泌-免疫网络平衡而起到维持早孕的作用.     

菟丝子总黄酮对大鼠排卵障碍的治疗作用及其机制研究

目的 探讨菟丝子黄酮对排卵障碍大鼠的治疗作用.方法 将50只SD大鼠平均随机分为对照组、模型组、低剂量菟丝子黄酮组、高剂量菟丝子黄酮组以及阳性对照组,每组10只.采用羟基脲灌胃法制作排卵障碍动物模型,模型制作成功后,高剂量菟丝子黄酮组给予2 g/L菟丝子黄酮进行干预,低剂量菟丝子黄酮组给予1 g/L菟丝子黄酮进行干预,阳性对照组给予4.5 mg/kg克罗米芬,模型组及对照组均给予相同剂量生理盐水进行干预.均连续干预4周.观察并比较各组大鼠一般状况、动情周期、卵巢及子宫指数,并对卵巢组织学进行观察.结果 菟丝子黄酮可显著改善排卵障碍大鼠的一般状况,恢复大鼠动情周期,改善子宫及卵巢指数,且以高剂量菟丝子黄酮更为显著(P＜0.05);菟丝子黄酮对排卵障碍大鼠卵泡的生长发育具有促进作用,能够提高次级卵泡的数量.结论 菟丝子黄酮对排卵障碍具有显著的改善作用.     

菟丝子总黄酮对排卵障碍大鼠下丘脑-垂体-卵巢 轴性激素水平的影响

目的:探讨丝子总黄酮对排卵障碍大鼠下丘脑-垂体-卵巢(HPO)轴性激素水平的影响.方法:将大鼠分为对照组(C)、模型组(M)、菟丝子黄酮低、高剂量组(CCLD,CCHD)以及阳性对照枸橼酸氯米芬组(PC),采用羟基脲以300 mg· kg-1ig连续进行10 d制作排卵障碍大鼠模型,用不同剂量菟丝子总黄酮(10,20 mg· kg-)及阳性对照,4.5 mg· kg-ig连续5d干预.放射免疫法观察并比较大鼠血清卵泡刺激素(FSH)、雌激素(E2)、促黄体生成素(LH)以及孕激素(P)水平的变化.结果:与C组相比,M组血清FSH,LH,E2及P水平显著降低(均P＜0.05),其中FSH由(8.18±1.37) U·L-1降低至(4.22±0.94) U·L-1;LH由(17.25±5.36) U·L-1降低至(7.81±1.39) U·L-1;E2由(48.59±8.11) μg·L-1降低至(23.18±7.62) μg·L-1;p由(16.02±4.83) μg·L-1降低至(5.94±1.02) μg·L-1(均P ＜0.05).与M组相比,CCLD,CCHD以及PC组血清FSH,LH,E2及P水平显著升高(均P＜0.05).其中PC组与CCHD组FSH,LH,E2及P水平较CCLD组升高更为明显(均P＜0.05).结论:菟丝子黄酮可显著改善排卵障碍大鼠HPO轴性激素水平,且以高剂量更为有效.     

菟丝子总黄酮对来曲唑致多囊卵巢综合征大鼠模型的影响

目的:探讨菟丝子总黄酮对来曲唑致大鼠多囊卵巢综合征(PCOS)模型的影响。方法:正常组除外,其余大鼠每天灌服来曲唑1 mg·kg~(-1)复制PCOS动物模型,连续21 d。造模第16天,阴道涂片检测动物周期,以阴道上皮细胞持续角化者为PCOS成模大鼠,并随机分为模型组、达英-35组(0. 339 2 mg·kg~(-1))和菟丝子总黄酮高、中、低剂量组(200,100,50 mg·kg~(-1))。依据组别给予相应药物,连续21 d。给药结束后,取材,计算卵巢指数;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清雌激素(E_2),睾酮(T),促性腺激素释放激素(GnRH),卵泡刺激素(FSH)和促黄体生成素(LH)水平;取大鼠右侧卵巢,苏木素-伊红(HE)染色光镜观察病理改变;免疫组化法检测下丘脑、垂体、左侧卵巢雄激素受体(AR)表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清T,GnRH,LH水平显著升高,卵巢指数和LH/FSH值显著升高,FSH和E_2水平显著降低(P 0. 05,P 0. 01),卵巢组织闭锁卵泡增多、卵泡膜细胞层增厚明显,下丘脑、垂体和卵巢组织AR表达显著升高(P 0. 01)。与模型组比较,菟丝子总黄酮高、中、低剂量组可显著降低PCOS模型大鼠血清T,GnRH和LH水平,降低卵巢指数和LH/FSH值(P 0. 01);菟丝子总黄酮高、中剂量组可显著升高PCOS模型大鼠血清E_2水平(P 0. 01),明显升高FSH水平(P 0. 05),菟丝子总黄酮低剂量组可明显升高PCOS模型大鼠血清E_2水平(P 0. 05)。菟丝子总黄酮高、中、低剂量组可不同程度改善PCOS模型大鼠卵巢组织皮质增厚胶原化、闭锁卵泡增多、黄体减少等病理改变。免疫组化结果表明,菟丝子总黄酮高、中、低剂量组可显著降低下丘脑、垂体和卵巢AR表达(P 0. 01)。结论:菟丝子总黄酮可能通过调节雌雄激素分泌、影响下丘脑-垂体-卵巢轴途径发挥对PCOS模型大鼠的保护作用。     

骨碎补、淫羊藿、菟丝子总黄酮对成骨细胞体外培养影响的比较研究

目的骨碎补总黄酮、淫羊藿总黄酮及菟丝子总黄酮对成骨细胞体外培养影响的比较研究。方法UMA-106-01成骨细胞株进行成骨细胞培养,观察ALP活性和3H-TdR掺入的情况。结果24h培养液中骨碎补总黄酮ALP活性高于对照组,P<0.05;细胞内骨碎补总黄酮、淫羊藿总黄酮ALP活性显著增加,与对照组比较,P<0.05或P<0.001。48h培养液中骨碎补总黄酮、淫羊藿总黄酮、菟丝子总黄酮ALP活性高于对照组,P<0.05或P<0.001;细胞内骨碎补总黄酮、淫羊藿总黄酮、菟丝子总黄酮ALP活性显著增加,与对照组比较,P<0.001。骨碎补总黄酮、淫羊藿总黄酮24h3H计数显著高于对照组,P<0.001。结论3种中药总黄酮对成骨细胞活性的促进作用,以骨碎补总黄酮最为广泛,淫羊藿总黄酮次之,菟丝子总黄酮最差。     

菟丝子总黄酮对成骨细胞骨代谢的影响

目的:探讨菟丝子总黄酮(TFCC)对体外培养大鼠成骨细胞骨代谢的影响。方法:取新生SD大鼠的颅盖骨,采用改良的组织块法培养成骨细胞。应用MTT法、对硝基苯二钠基质动力学法(PNPP),放射免疫法及ELISA法分别测定TFCC0.01,0.1,1,10,100μg.L-1对成骨细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性、骨钙素(BGP)含量及Ⅰ型胶原(COL-I)分泌的影响。结果:TFCC在48 h和72 h能显著促进成骨细胞增殖并提高ALP活性;48 h时TFCC可促进细胞上清液中BGP和COL-I的分泌。结论:TFCC能够明显促进大鼠成骨细胞的增殖与分化,并通过提高COL-I的分泌影响骨代谢。     

正交实验法优选菟丝子总黄酮的提取工艺

目的研究菟丝子总黄酮最佳提取工艺条件。方法在单因素实验的基础上,采用正交实验,以菟丝子总黄酮含量为指标,分别考察所选的各因素对超声法提取工艺的影响,筛选最佳的提取条件。结果超声法提取菟丝子总黄酮的最佳条件为乙醇浓度55%,溶剂用量60ml,提取时间60min,提取温度60℃。结论用该工艺提取菟丝子总黄酮,提取率高,重现性好。     

正交试验法优选菟丝子总黄酮提取工艺

用正交实验法对菟丝子中总黄酮的提取工艺进行了探讨。实验确定的最佳提取条件为：用８倍量９５％乙醇回流提取６ｈ。     

菟丝子久煎对成分溶出的影响

目的:揭示菟丝子煎煮时间的长短对黄酮成分溶出的影响。方法:利用黄酮类成分和三氯化铁、醋酸钾产生的显色反应,用紫外分光光度法测定其含量。结果:菟丝子水煎液中的总黄酮含量在煮沸后50 min内随时间的增加,含量明显增加,50 min以后含量相对稳定。结论:根据实验结果,菟丝子久煎50 min左右,药液中黄酮成分的含量最高。     

菟丝子总黄酮对大鼠卵巢储备功能减退的改善作用

【目的】 探讨菟丝子总黄酮通过卵泡刺激素（FSH）-环磷酸腺苷（cAMP）信号轴对大鼠卵巢储备功能减退的改善作用。 【方法】 从68只雌性SD大鼠中抽取10只为正常组,其余构建卵巢储备功能减退模型。将成功建模的48只大鼠随机分为抑制剂组、模型组、抑制剂+菟丝子总黄酮组、菟丝子总黄酮组,每组12只。抑制剂组灌胃H-89 0.1 mg/kg,抑制剂+菟丝子总黄酮组灌胃H-89 0.1 mg/kg+菟丝子总黄酮 530.1 mg/kg,菟丝子总黄酮组灌胃菟丝子总黄酮530.1 mg/kg,模型组、正常组灌胃等体积生理盐水,均连续4周,每周休息1 d。给药4周后,称取各组大鼠卵巢湿质量,计算卵巢指数,酶联免疫吸附分析（ELISA）检测大鼠血清性激素水平,苏木素-伊红（HE）染色观察卵巢组织形态学变化,ELISA 法检测卵巢组织中 cAMP 含 量,蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测卵巢组织卵泡刺激素受体（FSHR）、蛋白激酶A（PKA）及磷酸化PKA（p-PKA）表达。 【结果】 模型组大鼠进食、二便、毛色、动情周期出现异常,卵巢萎缩明显,卵泡数量、黄体减少;与模型组比较,抑制剂组大鼠进食、二便、毛色、动情周期异常情况更严重,卵巢萎缩更明显,卵泡与黄体数量更少,而抑制剂组+菟丝子总黄酮组、菟丝子总黄酮组大鼠进食、二便、毛色、动情周期,卵巢、卵泡与黄体数量明显改善。与正常组比较,抑制剂组、模型组、抑制剂+菟丝子总黄酮组、菟丝子总黄酮组的左侧和右侧卵巢湿质量及卵巢指数降低,FSH、FSH/LH、E2水平升高,卵巢组织中cAMP含量降低,FSHR、p-PKA蛋白相对表达量降低（P＜0.05）;与抑制剂组比较,模型组、抑制剂+菟丝子总黄酮组、菟丝子总黄酮组的左侧和右侧卵巢湿质量及卵巢指数升高,FSH、FSH/LH、E2水平降低,卵巢组织中cAMP含量升高,FSHR、p-PKA蛋白相对表达量升高（P＜0.05）;与模型组比较,抑制剂+菟丝子总黄酮组、菟丝子总黄酮组的左侧和右侧卵巢湿质量及卵巢指数升高,FSH、FSH/LH、E2水平降低,卵巢组织中cAMP含量升高,FSHR、p-PKA蛋白相对表达量升高（P＜0.05）;与抑制剂+菟丝子总黄酮组比较,菟丝子总黄酮组的左侧和右侧卵巢湿质量及卵巢指数升高,FSH、FSH/LH、E2水平降低,卵巢组织中cAMP含量升高,FSHR、p-PKA蛋白相对表达量升高（P＜0.05）。【结论】 菟丝子总黄酮可能通过FSH-cAMP信号轴改善大鼠卵巢储备功能减退。     

超声波协同复合酶提取菟丝子总黄酮工艺优化

目的:将酶解法和超声波法联用,通过工艺优化提高菟丝子总黄酮的含量。方法:实验采用紫外分光光度法测定总黄酮提取率,选取酶解pH、酶解温度和超声时间3个指标为影响因素,菟丝子总黄酮提取率为响应值,Design-Expert 8.0统计分析软件的响应面分析法安排试验后获得最适合工艺参数。结果:最适合的工艺参数是PH为4.0,酶解温度为52.6℃,超声时间为20.3 min,在此条件下得到的总黄酮质量分数为23.39 mg·g~(-1)。结论:此工艺操作简单、稳定性好、总黄酮提取率高,可为菟丝子总黄酮的相关工业生产提供技术支持。     

菟丝子总黄酮对早孕期人细胞滋养细胞增殖能力的影响及其信号机制

目的:探讨菟丝子总黄酮对早孕期人细胞滋养细胞增殖的影响及其信号转导机制.方法:应用硅化聚乙酞胺吡咯烷酮(Percoll)密度梯度离心法,分离纯化早孕期人细胞滋养细胞,经免疫细胞化学法鉴定其分子表达特征和纯度;采用MTT法评价早孕期人细胞滋养细胞活力;流式细胞术分析细胞滋养细胞PCNA的表达;用Western blotting法观察pERK1/2的水平.结果:菟丝子总黄酮呈时间和剂量依赖性增强早孕期人细胞滋养细胞活力,促进细胞滋养细胞ERK1/2的磷酸化.结论:菟丝子总黄酮可能通过活化MAPK/ERK1/2信号通路促进人细胞滋养细胞增殖.     

应用大孔吸附树脂吸附分离技术制备菟丝子总黄酮的研究

目的:研究大孔树脂富集菟丝子药材总黄酮的工艺条件和参数.方法:以总黄酮为指标,以比色法测定含量,考察富集总黄酮工艺条件.结果:菟丝子提取液回收乙醇后上大孔树脂柱,水洗除杂质,以30%及70%乙醇洗脱,为最佳工艺.结论:大孔树脂吸附分离技术可制备菟丝子总黄酮.     

不同寄主植物对菟丝子、南方菟丝子多糖含量的影响

目的:研究不同寄主上的菟丝子、南方菟丝子中多糖的含量。方法:用苯酚-浓硫酸法测定含量。结果:寄生于大豆上的菟丝子及南方菟丝子多糖含量较高。菟丝子及南方菟丝子种间多糖的含量差异不明显。随着菟丝子种子成熟程度的增加,多糖及可溶性糖的含量均增加。结论:寄主植物影响菟丝子及南方菟丝子中多糖的含量。     

菟丝子总黄酮中树脂残留物的顶空GC检测

目的:建立树脂法富集的菟丝子总黄酮中树脂残留物的检测方法.方法:采用项空气相色谱法,对苯、甲苯、二乙烯基笨、邻二甲苯、苯乙烯、正庚烷进行检测.结果:本方法线性关系良好,r为0.9997～0.9999,精密度RSD均小于5%,平均回收率为97.5%～101.1%.结论:本方法便于操作,分离度高,重现性好,结果可靠,可作为树脂法富集的菟丝于总黄酮中树脂残留物的检测方法.     

菟丝子总黄酮对过氧化氢损伤的血管内皮细胞的保护作用

目的:探讨菟丝子总黄酮对H202损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用.方法:于37℃、5％ CO2、95％空气饱和湿度的培养箱内体外培养内皮细胞,将细胞分为4组,即正常对照组:加入DMEM培养液(pH 7.2 ～7.4)、菟丝子对照组(菟丝子0.5mg·L-1)、模型组(过氧化氢终浓度为200 mmol·L-)、菟丝子+过氧化氢组(菟丝子0.5mg· L-1,过氧化氢200 mmol·L-),研究菟丝子总黄酮对受损血管内皮细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、乳酸脱氢酶(LDH)释放情况、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及对细胞形态学的影响.结果:菟丝子总黄酮(0.5 mg·L-1)能明显减轻H2O2对HUVECs所致的氧化损伤,可明显改善氧化损伤的HUVECs形态学变化,H2O2模型组(200 mmol·L-)与空白组比较,LDH释放和MDA含量显著升高(P＜0.01,P＜0.05),SOD释放水平和GSH-Px活力显著下降(P＜0.01),菟丝子(0.5mg·L-1)+ H2O2(200 mmol·L-1)组与H2O2模型组(200 mmol·L-1)比较,LDH释放和MDA含量显著下降(P＜0.01,P＜0.05),SOD释放水平和GSH-Px活力显著升高(P＜0.01).结论:菟丝子总黄酮对H202诱导的HUVECs的损伤具有保护作用.     

菟丝子总黄酮的提取方法筛选及其雌激素活性研究

目的 优选菟丝子总黄酮的最佳提取方法,并对提取物的雌激素活性进行测定.方法 用紫外分光光度法测定菟丝子总黄酮的含量,并以此作为评价指标,采用L4(23)正交设计实验对超声提取、回流提取及闪式提取法进行工艺优化和筛选;并采用性未成熟小鼠子宫增重和子宫(苏木精-伊红)(HE)染色法,以小鼠的子宫系数和子宫内膜厚度评价菟丝子...     

菟丝子品种及成熟期与黄酮含量的相关性研究

目的 :考察山东不同品种以及不同成熟期菟丝子的总黄酮含量。方法 :分光光度法。结果 :山东四种菟丝子的总黄酮含量在 1 5 7%～ 3 72 %之间 ,以菟丝子 (Cuscutachinen sisLam .)的含量最高 ,平均为 3 4 2 % ;啤酒花菟丝子 (C .lupuliformisKrocker)含量最低 ,平均为 1 75 %。各种菟丝子均随着成熟程度的增加 ,总黄酮含量增大。结论 :菟丝子和南方菟丝子 (C .australisR .Br)的成熟种子总黄酮含量高 ,质量好。