瘤内注射pSTbAT-脂质体复合物对裸鼠移植瘤抑制效应的实验研究

目的:构建血管生成抑制因子arresten基 因的真核表达载体,并观察瘤内注射质粒DNA 脂质 体复合物对裸鼠移植瘤生长的影响。方法:利用 PCR方法,由重组质粒pGEM Arr中扩增出基因;将 该基因定向克隆于真核表达载体中。20只裸鼠皮 下注射HepG 2细胞,成瘤后以成功构建的质粒 DNA 脂质体复合物瘤内注射,治疗后采用免疫组化 方法检测肿瘤血管密度,并利用arresten基因瘤内注 射的方法对抑制肿瘤的效果进行分析。结果:我们 成功构建arresten基因真核表达载体(pSTbAT)。实 验组肿瘤生长速度较对照组慢(实验组平均15.3个 阳性血管/10个视野,对照组平均112.5个阳性血 管/10个视野)。结论:瘤内注射arresten基因质粒 DNA复合物能抑制裸鼠移植瘤的血管生成,并能抑 制移植瘤的生长。     

慢病毒介导的RNAi沉默TLR4基因对人乙肝病毒相关肝细胞癌裸鼠移植瘤生长的影响北大核心CSCD

目的探讨TLR4基因RNA干扰(RNAi)的重组慢病毒载体对人乙肝病毒相关肝细胞癌裸鼠移植瘤TLR4基因表达和移植瘤生长的影响。方法构建4个miR-TLR4质粒和一个阴性对照质粒,选择干扰效果最明显的质粒进行慢病毒包装。建立人乙肝病毒相关肝细胞癌裸鼠移植瘤模型,随机分成实验组、阴性对照组和空白对照组。隔天1次向各组动物肿瘤内分别注射TLR4 miRNA慢病毒颗粒、携带无关序列的慢病毒颗粒或0.2 ml 0.9%氯化钠溶液,共5次,测量各组肿瘤体积的大小,绘制肿瘤生长曲线;11天后处死裸鼠,应用半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot技术检测移植瘤中TLR4基因的表达。结果与空白对照组和阴性对照组相比,实验组的移植瘤生长速度明显减慢(P<0.05),并且实验组移植瘤细胞TLR4 mRNA和蛋白表达明显下降(P<0.05)。结论 TLR4 miRNA慢病毒载体瘤内注射可抑制人乙肝病毒相关肝细胞癌裸鼠移植瘤的生长。     

血管生成抑制因子arresten 的真核表达体系的建立

  目的 构建血管生成抑制因子arresten的真核表达细胞克隆体系。方法 用脂质体转染法，通过真核表达载体pSecTag2-arresten将arresten基因导入CHO细胞，经抗生素Zeocin筛选获得阳性细胞克隆，逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测arresten mRNA表达，免疫蛋白印迹技术（Westem-blot）测arresten蛋白的表达。结果 经过筛选获得阳性克隆的CHO细胞，RT-PCR、Westem-blot结果提示arresten基因成功导入CHO细胞并进行表达。结论 获得了稳定表达人arresten因子的CHO细胞克隆，为深入研究arresten在抑制肿瘤血管生成中的作用机制奠定了良好的基础。     

小干扰RNA对人胰腺癌细胞移植瘤血管生成的影响

目的研究小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达对裸鼠皮下人胰腺癌PANC-1细胞移植瘤血管生成的影响。方法构建人胰腺癌PANC-1细胞40只裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为4组。两组针对VEGF的siRNA真核表达载体(PU-VEGF-siRNA1,PU-VEGF-siRNA2)通过脂质体法行瘤内和瘤周注射;注射空质粒组作为实验对照组;未注射组作为空白对照组。注射1次/3天,共10次,末次注射3天后,剥离瘤体,免疫组化染色法观察VEGF阳性染色及微血管参数,RT-PCR检测瘤组织VEGF-mRNA表达。结果 PU-VEGFsiRNA2组移植瘤VEGF-mRNA及转染PU-VEGF-siRNA后肿瘤组织微血管密度(MVD)表达均较空质粒组及空白对照组低(P0.05)。而PU-VEGF-siRNA1组未发现差别(P0.05)。结论 siRNA能在体内抑制胰腺癌VEGF表达,抑制肿瘤血管生成。     

Rb94对人肺腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用及SphK表达影响的研究*

目的:Rb94基因转染裸鼠肺腺癌皮下移植瘤,观察Rb94基因对人肺腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用及对鞘氨醇激酶（sphingosine kinase ,SphK）表达的影响。方法:收集一定数量的对数生长期A549 细胞,生理盐水重悬后每只裸鼠右后肢皮下接种5 × 106/0.1mL A549 细胞悬液,待瘤体生长至一定体积后随机分为4 组,分别为对照组、空载体组、脂质体组、转染Rb94基因组;每组裸鼠瘤体内分别注射PBS 、质粒pIRES 、脂质体（lipofectamine）、质粒pIRES-Rb94,观察肿瘤生长情况并检测抑瘤率;裸鼠脱颈处死后,采用Western bolt法检测瘤组织中Rb94基因表达情况,并采用实时RT-PCR 和免疫荧光法（immunofluorescence,IF ）观察其对裸鼠肺腺癌皮下移植瘤中SphK表达的影响。结果:对照组及转染组裸鼠在接种部位均有移植瘤生成;与空白对照组、脂质体组、空载体组相比,转染Rb94 基因组的裸鼠移植瘤的生长速度明显减慢,肿瘤的体积较小,重量较轻,有显著性差异（P<0.05）,而3 个对照组之间,无显著性差异（P>0.05）;空白对照组、空载体组、脂质体组抑瘤率分别为0、11.78% 、7.86% ,而转染Rb94基因组平均抑瘤率高达51.99% ,肿瘤生长明显抑制;SphK1 在mRNA 和蛋白水平表达下调而SphK2 表达上调。结论:Rb94基因成功转染裸鼠肺腺癌皮下移植瘤;Rb94基因抑制裸鼠皮下肿瘤生长;Rb94基因抑制SphK1 的表达,增强SphK2 的表达。      

表达白细胞介素-12质粒DNA抗小鼠肝癌皮下移植瘤的作用

目的 探讨瘤内注射mIL-12质粒DNA抗小鼠肝癌皮下移植瘤的作用。方法：构建真核表达质粒载体pDC511mIL-12，ELISA方法检测质粒载体在真核细胞中的表达，淋巴母细胞增殖法检测mIL-12的生物学活性；分别于小鼠肝癌H22皮下移植瘤内直接注射质粒DNA，观察各组小鼠存活时间、肿瘤体积变化及各组小鼠脾脏细胞毒T淋巴细胞(CTL)的活性：注射质粒DNA后1月进行瘤体组织病理学观察：结果：mIL-12基因治疗组与空载体对照组相比，肿瘤生长显著受抑制(F=4．10，P=0．03)，小鼠存活期显著延长(X^2=4．48，P=0．03)．并且小鼠脾细胞CTL杀伤活性增强。质粒DNA瘤内注射1月后，pDC511mIL-12组肿瘤病灶炎性细胞浸润明显，病灶内肿瘤细胞广泛坏死。结论：瘤内注射mIL-12表达质粒DNA可抑制小鼠肝癌皮下移植瘤生长，能提高机体抗肿瘤免疫应答。     

shRNA干扰HERG钾通道治疗裸鼠皮下人成神经细胞移植瘤

目的：探讨发卡结构小片段RNA（small hairpin interfering RNA，shRNA）干扰人ERG（human ether-α—go-go—related gene，HERG）钾通道治疗裸鼠皮下人成神经细胞移植瘤的疗效和作用机制。方法：用真核转录载体mU6pro构建针对herg基因的发卡状RNA干扰质粒（shRNA-herg）。18只BALB／c裸小鼠皮下接种成神经细胞瘤SH—SY5Y细胞，建立裸鼠皮下人成神经细胞移植瘤模型，当瘤体积达到100mm^3时随机分成3组，分别为生理盐水组（Ⅰ）、对照质粒组（Ⅱ）、干扰质粒组（Ⅲ）。各组瘤内分别注射生理盐水、对照质粒、干扰质粒，以后每7d注射1次，连续15d。观察各组肿瘤生长情况，RT—PCR测定肿瘤组织herg基因mRNA含量变化，免疫组化检测肿瘤组织中HERG钾通道蛋白变化。结果：经治疗后，第Ⅲ组肿瘤生长受到明显抑制，Ⅱ、Ⅲ组抑瘤率分别为3．04％和29．78％（P〈0．05）。肿瘤组织内berg基因mRNA含量、HERG钾通道蛋白，Ⅲ组较Ⅰ、Ⅱ组表达减弱。结论：构建的shRNA干扰质粒可通过靶向性抑制herg基因及其编码的HERG钾通道蛋白的表达，有效地抑制人成神经细胞瘤的生长。     

血管内皮生长因子-C干扰对人类结肠癌裸鼠移植瘤模型淋巴管生成的影响

 目的　构建携带有RNA干扰片段的腺病毒载体Ad5F35-VEGF-C siRNA-EGFP,探讨人类结肠癌BALB／c裸鼠皮下移植瘤模型瘤内注射腺病毒载体Ad5F35-VEGF-C siRNA-EGFP抑制血管内皮生长因子-C（VEGF-C）表达、结肠癌生长以及结肠癌淋巴管生成的效果。方法　选择针对人类VEGF-C mRNA的特异性siRNA靶序列,设计合成其相应的双链DNA,利用 BamHI、HindⅢ双酶切插入pDC316-EGFP-U6载体后构建穿梭质粒pDC316-VEGF-C siRNA-EGFP-U6,再与骨架质粒pBHGF35共转染293细胞,同源重组,酶切鉴定,包装扩增后得到重组腺病毒Ad5F35-VEGF-C siRNA-EGFP-U6。裸鼠皮下注射LoVo细胞构建人类结肠癌皮下移植瘤模型24只,随机分为4组（每组6只）：以腺病毒、空病毒、裸siRNA以及PBS分别进行瘤内原位注射干预,计算肿瘤体积变化并绘制生长曲线,使用抗LYVE-1单抗和抗CD34单抗分别染色瘤内的血管和淋巴管,检测瘤内淋巴管和血管生成情况,计算微血管密度（MVD）,微淋巴管密度（LVD）。结果　腺病毒组肿瘤体积明显小于其他各组,腺病毒组与PBS对照组LVD 分别为8.47±2.1,17.35±4.7（P＜0.05）,腺病毒组与PBS对照组MVD分别为22.65±6.04,23.19±7.63（P＞0.05）。结论　实验设计并合成的腺病毒载体介导的VEGF-C siRNA,在人类结肠癌裸鼠移植瘤模型中,瘤内注射腺病毒载体能显著抑制移植瘤的生长和肿瘤淋巴管生成,而对肿瘤血管生长无显著影响。     

重组人血管内皮生长因子165对K562白血病细胞生物学活性的影响

目的：探讨人重组血管内皮生长的因子165对人K562白血病细胞生物学活性的影响。方法：利用pcDNA3.1（＋）质粒构建人重组含VEGF165的真核表达载体,脂质体转染至K562白血病细胞,并用G418筛选阳性克隆;以RT-PCR测定重组质粒载体VEGF165基因的表达;MTT法测定K562白血病细胞的生长;建立裸鼠皮下移植人K562肿瘤模型,测定肿瘤体积的大小;免疫组化检测肿瘤的微血管密度（MVD）。结果：成功构建pcDNA3.1（＋）-VEGF165表达质粒。K562白血病细胞转染重组质粒后,明显增加K562细胞中VEGF165 mRNA的表达,转染重组质粒的K562细胞增殖明显快于对照组;移植重组pcDNA3.1（＋）-VEGF165质粒转染的K562细胞之后,荷瘤鼠移植瘤生长明显快于对照组;并且移植瘤组织微血管密度明显高于对照组（P〈0.05）。结论：利用pc DNA3.1（＋）真核表达质粒可成功构建含人VEGF165的重组质粒,重组质粒转染K562细胞后,体内外均明显促进K562细胞增殖。     

转染hEndostatin基因对CNE2细胞株裸鼠移植瘤生长的影响

背景与目的：肿瘤的生长、转移是血管生成依赖性的,血管生成抑制剂有望通过抑制肿瘤血管生成及诱导肿瘤细胞凋亡,有效地抑制肿瘤的生长和转移。本文旨在探讨转染人内皮抑素基因hEndostatin对人鼻咽癌细胞株CNE2裸鼠移植瘤生长的影响。方法：采用脂质体介导法,分别将pBlast-hIL-hEndostatin、pBlast-hEndostatin和pBlast-MCS质粒导入人鼻咽癌细胞株CNE2,MTT法在体外检测转导细胞表达的hEndostatin的活性,并在体内实验中观察转导的CNE2细胞在裸鼠上的致瘤性的差异。结果：转染pBlast-hIL-hEndostatin的CNE2细胞的上清能显著抑制血管内皮细胞ECV304的生长,其在裸鼠体内形成的瘤组织重量和体积均显著低于对照组（P＜0．01）,生长速度明显慢于对照组细胞。结论：转染hEndostatin基因能有效抑制CNE2细胞在裸鼠体内的生长。     

siRNA沉默PI3K基因激活FoxO3a基因并抑制人乳腺癌裸鼠移植瘤生长的实验研究

目的：探讨应用小分子干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）沉默磷酸肌醇-3-激酶（phosphatidylinositol-3 kinase，PI3K）基因对人乳腺癌细胞MCF-7中抑癌基因FoxO3a的表达及人乳腺癌裸鼠移植瘤模型的肿瘤生长的影响。方法：构建PI3K基因siRNA质粒Psilencer1.0-U6-PI3K-siRNA；乳腺癌细胞株MCF-7裸鼠背部皮下接种，建立人乳腺癌裸鼠移植瘤动物模型，成瘤后将实验动物分3组，每组9只。1组注射Psilencer1.0-U6-PI3K-siRNA质粒、另2组分别注射Psilencer1．0-U6空质粒或0．9％的氯化钠溶液作为对照。观察肿瘤体积变化、裸鼠生存时间；并用Western印迹法检测瘤组织中FoxO3a和PI3K的表达。结果：PI3K-siRNA质粒治疗组裸鼠的肿瘤体积明显缩小（P〈0．01），平均生存时间显著延长（P〈0．01）；肿瘤内PI3K基因表达水平明显下降，而FoxO3a基因的表达水平明显升高。结论：PI3K基因siRNA能够明显抑制人乳腺癌裸鼠移植模型的PI3K基因的表达，上调抑癌基因FoxO3a的表达，抑制肿瘤生长，延长荷瘤鼠的生存时间。     

RNA干扰Bcl-2基因表达对人胆管癌细胞及胆囊癌细胞株裸鼠移植瘤生长的抑制

目的：探讨Bcl-2基因的小干扰RNA（siRNA）真核表达载体干扰Bcl-2基因表达对人胆管癌细胞QBC939、胆囊癌细胞GBC-SD裸鼠体内移植瘤生长的抑制作用。方法：分别制作人胆管癌细胞QBC939、胆囊癌细胞GBC-SD细胞株移植瘤模型,随机分为3组,pSilencerTM-EGFP sh515组（实验组）、pSilencerTM-EGFP shCon组（空载体阴性对照组）和对照组。实验组用Bcl-2基因的小干扰RNA（siRNA）真核表达载体多点注射于移植瘤周围,空载体阴性对照组用空载体多点注射于移植瘤周围,对照组不作处理,观察其生长情况,计算肿瘤生长体积、生长率。6周后,处死裸鼠,剥离瘤体组织进行称重,并采用免疫组化检测Bcl-2蛋白的表达。结果：成功建立裸鼠人胆管癌细胞QBC939,胆囊癌GBC-SD细胞的动物模型。胆管癌细胞实验组、空载体阴性对照组、对照组瘤体平均体积（mm3）分别为：801.776±59.6,1383.980±78.2,1490.235±89.0。瘤体平均瘤体重量（g）为：0.90±0.11,1.49±0.31,1.63±0.22。平均生长率为：20.558%,35.587%,38.211%。人胆囊癌细胞实验组、空载体阴性对照组、对照组瘤体平均体积（mm3）分别为：729.736±66.6,1493.162±98.9,1548.668±101.0。瘤体平均瘤体重量（g）为：0.82±0.10,1.68±0.21,1.90±0.25。平均生长率为：18.711%,38.286%,39.709%。两组实验组分别和空载体阴性对照组、对照组比较有统计学意义（P〈0.05）,空载体阴性对照组和对照组比较无统计学意义（P〉0.05）。结论：针对Bcl-2基因siRNA真核表达载体通过局部多点注射于移植瘤周围可以有效降低Bcl-2基因的表达,该基因沉默后肿瘤细胞增殖受到抑制,体内瘤体生长减慢。     

Cdx2过表达对裸鼠人胃癌移植瘤生长和转移的影响

目的观察Cdx2基因过表达对裸鼠人胃癌移植瘤生长和转移的影响。方法利用脂质体将pCMV-Cdx2-HA质粒或pCMV-HA质粒分别转染人胃癌MGC-803细胞,命名为MGC-803/Cdx2细胞或MGC-803/EV细胞。将两种细胞分别注射入裸鼠近腋右背侧皮下,待皮下成瘤后将瘤组织接种于胃,建立裸鼠人胃癌移植瘤模型：接种MGC-803/Cdx2皮下瘤的裸鼠为实验组,接种MGC-803/EV皮下瘤的裸鼠为对照组;30 d后处死裸鼠,观察移植瘤生长、转移情况,并应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR）和Western blot技术检测移植瘤中Cdx2 mRNA和蛋白的表达。结果实验组肿瘤体积为(13.42±2.34）mm3,明显低于对照组的肿瘤体积(17.59±2.80）mm3(P<0.05）;实验组成瘤率(73.3%）低于对照组成瘤率(86.7%）;两组肿瘤转移情况比较,差异无统计学意义(P>0.05）;实验组肿瘤组织Cdx2 mRNA和蛋白表达明显增加(P<0.05）。结论 Cdx2过表达抑制裸鼠人胃癌移植瘤的生长,但对肿瘤转移无明显影响。     

RNA干扰Bcl-2基因表达对人胆管癌细胞及胆囊癌细胞株裸鼠移植瘤生长的抑制

目的:探讨Bcl-2基因的小干扰RNA(siRNA)真核表达载体干扰Bcl-2基因表达对人胆管癌细胞QBC939、胆囊癌细胞GBC-SD裸鼠体内移植瘤生长的抑制作用.方法:分别制作人胆管癌细胞QBC939、胆囊癌细胞GBC-SD细胞株移植瘤模型,随机分为3组,pSilencerTM-EGFP sh515组(实验组)、pSilencerTM-EGFP shCon组(空载体阴性对照组)和对照组.实验组用Bcl-2基因的小干扰RNA(siRNA)真核表达载体多点注射于移植瘤周围,空载体阴性对照组用空载体多点注射于移植瘤周围,对照组不作处理,观察其生长情况,计算肿瘤生长体积、生长率.6周后,处死裸鼠,剥离瘤体组织进行称重,并采用免疫组化检测Bcl-2蛋白的表达.结果:成功建立裸鼠人胆管癌细胞QBC939,胆囊癌GBC-SD细胞的动物模型.胆管癌细胞实验组、空载体阴性对照组、对照组瘤体平均体积(mm3)分别为:801.776±59.6,1383.980±78.2,1490.235±89.0.瘤体平均瘤体重量(g)为:0.90±0.11,1.49±0.31,1.63±0.22.平均生长率为:20.558%,35.587%,38.211%.人胆囊癌细胞实验组、空载体阴性对照组、对照组瘤体平均体积(mm3)分别为:729.736±66.6,1493.162±98.9,1548.668±101.0.瘤体平均瘤体重量(g)为:0.82±0.10,1.68±0.21,1.90±0.25.平均生长率为:18.711%,38.286%,39.709%.两组实验组分别和空载体阴性对照组、对照组比较有统计学意义(P<0.05),空载体阴性对照组和对照组比较无统计学意义(P>0.05).结论:针对Bcl-2基因siRNA真核表达载体通过局部多点注射于移植瘤周围可以有效降低Bcl-2基因的表达,该基因沉默后肿瘤细胞增殖受到抑制,体内瘤体生长减慢.     

沉默H-ras基因对人涎腺腺样囊性癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的构建H-ras靶向短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)质粒,研究其对人涎腺腺样囊性癌裸鼠成瘤的抑制作用及其对移植瘤细胞增殖活性及细胞凋亡率的影响.方法构建含H-ras靶向特定序列的真核表达质粒pHRAS,稳定表达pHRAS质粒的细胞为实验组,未处理的SACC-M细胞为对照组,建立裸鼠荷瘤模型,计算成瘤率;移植瘤原代培养检测质粒表达及瘤细胞增殖活性;免疫组织化学法检测瘤内H-ras蛋白表达;采用组织学观察、流式细胞术及TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡情况.结果pHRAS质粒转染组成瘤率及肿瘤体积显著低于对照组,原代培养可见大量瘤细胞表达绿色荧光.实验组瘤内H-ras蛋白表达量明显减少,实验组肿瘤细胞凋亡率为(41.55±4.25 )%,明显高于对照组的(4.73±1.35) %(P＜0.05).结论shRNA沉默H-ras基因能抑制SACC-M细胞裸鼠皮下移植瘤的形成,在体内有效下调H-ras蛋白的表达,且对肿瘤细胞具有促凋亡作用.     

siRNA抑制胃腺癌VEGF-C表达和淋巴管生成

目的 研究瘤内注射VEGF-C siRNA抑制胃癌移植瘤VEGF-C表达和肿瘤淋巴管生成的有效性.方法 建立裸鼠胃癌皮下移植瘤模型随机分为4组:VEGF-C sLRNA脂质体混合液组、单脂质体组、单siRNA组和PBS组,对肿瘤进行原位注射干预,记录各实验组肿瘤体积变化,免疫组织化学法检测各实验组肿瘤组织VEGF-C的表达,并通过抗人CD31和抗人LYVE-1单克隆抗体检测瘤体内血管和淋巴管生成情况.结果 免疫组化显示干扰组肿瘤细胞VEGF-C染色减弱,和对照组相比VEGF-C表达下调68.3%(P<0.01),而胃癌组织中淋巴管密度(LVD)值干预组和对照组分别为3.2±1.3、9.8±2.7,VEGF-C siRNA干预组LVD值下降至对照组的32.7%(P<0.01),而MVD值无明显差异(P>0.05).结论 瘤内注射VEGF-C siRNA能显著下调肿瘤组织内VEGF-C的表达,有效抑制肿瘤生长和瘤内淋巴管生成,而对肿瘤血管生成无影响.     

IL-12基因联合吡柔比星治疗裸鼠膀胱癌移植瘤的实验

目的 探讨联合应用白细胞介素12(IL-12)质粒和吡柔比星（THP）对人膀胱癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法 将人EJ膀胱癌细胞株裸鼠腋下接种,成瘤后设4组（每组6只）：联合组于骨骼肌注射IL-12真核表达质粒pcAGGS-mIL-12和腹腔注射THP;IL-12组骨骼肌注射pcAGGS-mIL-12;THP组腹腔注射THP;对照组肌肉及腹腔注射0.9%氯化钠溶液,以上注射每周2次,共4次。观察各组裸鼠肿瘤大小变化。4周后处死荷瘤鼠。免疫组织化学法检测肿瘤内VEGF 表达。ELISA法测定血液及肿瘤组织中IL-12和γ-干扰素(IFN-γ)的表达。结果 联合组肿瘤生长明显抑制,瘤重及体积明显小于其他组。ELISA法表明IL-12组和联合组 IL-12和IFN-γ都高表达。免疫组织化学法表明联合组VEGF基因表达量明显低于其他组（P<0.05）。结论 联合应用IL-12真核表达质粒pCAGGS-mIL-12和THP,对人膀胱癌裸鼠移植瘤的抑制作用明显强于单独应用IL-12和THP。     

LRRC4基因表达能降低胶质母细胞瘤细胞系U251的生长和成瘤潜能

背景与目的：LRRC4是作者最近克隆的一个新基因,该基因在原发性脑肿瘤活检标本中明显表达下调。本研究旨在研究LRRC4基因是否具有抑制脑肿瘤生长的能力。方法：LRRC4基因的全长编码区被亚克隆至表达载体pcDNA3．1中,应用脂质体转染的方法将重组的质粒载体导入胶质母细胞瘤细胞系U251,经G418筛选,建立稳定表达LRRC4基因的U251的细胞系。采用细胞增殖实验、软琼脂实验、肿瘤形成实验来考察LRRC4基因表达对于细胞生长和肿瘤形成的影响。结果：经过脂质体转染和筛选,建立了稳定表达LRRC4全长编码区的U251细胞系,用于进一步实验。比较未转染组和转染空白载体组,Northern blot实验证实转染了LRRC4基因的细胞LRRC4 mRNA的表达增强。细胞增殖一定时间后,转染LRRC4基因的细胞较未转染细胞的生长速度明显减慢,克隆形成率明显降低。将这些细胞注射入无胸腺裸鼠体内,40天后处死裸鼠,测量肿瘤大小,结果显示,转染LRRC4基因的细胞形成的肿瘤明显小于对照组。结论：LRRC4基因可转染于人脑胶质母细胞瘤细胞系U251。LRRC4在U251细胞的表达有抑制瘤细胞增殖和抑制裸鼠移植瘤的形成和生长的作用。     

RNA干扰抑制血管内皮生长因子影响舌癌耐药细胞移植瘤增殖及血管生成

目的研究RNA干扰抑制血管内皮生长因子（VEGF）的表达对舌癌耐药细胞移植瘤增殖及血管生成的影响。方法用顺铂体外连续诱导法诱导舌癌Tca8113细胞系获得耐药细胞,将耐药细胞接种裸鼠皮下建立移植瘤模型,并随机分为空白对照组、空载体组、无关片段组、干扰质粒组。以脂质体法对空载体组、无关片段组、干扰质粒组进行瘤内及瘤周注射转染,RNA干扰抑制VEGF的表达,测量瘤体重量及体积,免疫组化法检测移植瘤PCNA、CD34,比较肿瘤增殖性及微血管参数,原位杂交法检测VEGFmRNA,免疫印迹法检测VEGF蛋白。结果干扰质粒组的瘤体体积、重量、PCNA平均光密度值、微血管参数均小于其他各组（P〈0．05）。干扰质粒组中VEGFmRNA及蛋白表达水平较其他各组明显下降（P〈0．05）。结论通过靶向VEGF的RNA干扰下调VEGF的表达,能抑制人舌癌耐药细胞移植瘤的增殖及血管生成,提示RNA干扰抑制VEGF可能为临床治疗耐药舌痛柽供新途径。     

CH50多肽真核表达载体pCH510的构建、表达及体内趋化和抑瘤作用

目的：探讨血管内皮生长因子的表达与肿瘤血管生成的关系。方法：将VEGF165正、反义RNA表达载体导入人胃癌细胞,观察接种VEGF高表达和低表达胃癌细胞裸鼠移植瘤的生长情况,并对移植瘤进行组织学检查,检测其血管密度、组织增生及环死程度等变化。结果：VEGF正义转染细胞所致移植瘤的生长速度明显快于反义转染细胞所致的移植瘤;组织学检查发现,正义转染细胞移植瘤的血管密度显著高于的转染细胞所致的肿瘤。结论：血管皮生长因子通过启动血管生成而促进肿瘤的生长,阻断血管内皮生长因子的产生可以抑制肿瘤的生长。