早孕母胎界面固有模式识别受体NOD1/NOD2的表达

【目的】 明确早期妊娠母胎界面中固有模式识别受体NOD1/NOD2的表达情况?【方法】 分别用免疫组织化学法及Real-Time PCR法检测12例早孕期绒毛及蜕膜组织中NOD1/NOD2表达?【结果】免疫组织化学结果显示绒毛组织中NOD1/NOD2主要定位于绒毛滋养细胞胞质中,蜕膜组织也检测到NOD1/NOD2分子的表达?在mRNA水平上,绒毛组织中NOD1/NOD2的表达量高于蜕膜基质细胞(DSC),分别为P = 0.03和P = 0.009;DSC中NOD1的表达量高于NOD2,P = 0.029,差异具有显著性?绒毛组织中NOD2的表达高于NOD1,差异无统计学意义(P > 0.05)?【结论】 NOD1/NOD2在早孕期母胎界面中绒毛组织有表达,可能参与胚泡的着床?     

无症状沙眼衣原体和解脲支原体感染对早孕绒毛滋养细胞表达CXCL12/CXCR4的影响

目的研究无症状沙眼衣原体和解脲支原体感染患者趋化性细胞因子CXCL12／CXCR4在母胎界面的表达情况，探讨其对早孕绒毛滋养细胞侵蚀力的影响。方法采用免疫组化法观察正常早孕和无症状沙眼衣原体、解脲支原体感染患者早孕绒毛组织中的CXCL12／CXCR4的定位和分布，采用免疫印迹、RT—PCR法检测其蛋白和mRNA的表达情况；将无症状沙眼衣原体和解脲支原体感染患者绒毛外滋养细胞进行分离培养和鉴定，应用免疫细胞化学法检测CXCL12／CXCR4的表达。结果免疫组化检测显示正常妊娠时CXCL12、CXCR4主要表达于绒毛滋养细胞、绒毛间质细胞以及蜕膜组织中；RT—PCR法和Western bolt检测显示：与正常妊娠相比，无症状沙眼衣原体和解脲支原体绒毛感染者的早孕绒毛组织中CXCL12、CXCR4 mRNA和蛋白表达减弱；正常早孕绒毛外细胞滋养细胞中CXCL12、CXCR4均呈强阳性表达，而无症状沙眼衣原体和解脲支原体绒毛感染者其绒毛外细胞滋养细胞中CXCL12、CXCR4表达减弱。结论CXCL12／CXCR4受体配体系统参与了绒毛外滋养细胞的侵蚀，无症状沙眼衣原体和解脲支原体感染状态下可能影响早孕绒毛CXCL12／CXCR4受体配体系统表达，导致母胎界面出现免疫紊乱现象，从而对早孕绒毛滋养细胞侵蚀力造成影响。     

人早孕期滋养细胞通过表达趋化因子SDF-1募集蜕膜免疫活性细胞

目的研究人早孕期绒毛及滋养细胞趋化因子SDF-1的表达、分泌及其对蜕膜免疫活性细胞的募集作用.方法收集早孕期绒毛组织并检测SDF-1的定位表达;用ELISA分析早孕期滋养细胞培养上清液中SDF-1的浓度水平;分离早孕期蜕膜免疫活性细胞,以趋化试验研究SDF-1及滋养细胞培养上清液对蜕膜免疫活性细胞的趋化作用.结果人早孕期滋养细胞表达并分泌SDF-1;一定浓度范围的SDF-l对蜕膜免疫活性细胞具有趋化作用,最大趋化指数为3.27±0.89;滋养细胞培养上清液也明显趋化蜕膜免疫活性细胞,趋化指数为2.11±0.79.结论人早孕期滋养细胞表达的SDF-1对蜕膜免疫活性细胞具有趋化、募集作用,从而有助于形成蜕膜独特的淋巴细胞群体并维持母-胎免疫耐受.     

人早孕期滋养细胞通过表达趋化因子SDF-1募集蜕膜免疫活性细胞(摘要)

目的研究人早孕期绒毛及滋养细胞趋化因子SDF-1的表达、分泌及其对蜕膜免疫活性细胞的募集作用.方法收集早孕期绒毛组织并检测SDF-1的定位表达;用ELISA分析早孕期滋养细胞培养上清液中SDF-1的浓度水平;分离早孕期蜕膜免疫活性细胞,以趋化试验研究SDF-1及滋养细胞培养上清液对蜕膜免疫活性细胞的趋化作用.结果人早孕期滋养细胞表达并分泌SDF-1;一定浓度范围的SDF-l对蜕膜免疫活性细胞具有趋化作用,最大趋化指数为3.27±0.89;滋养细胞培养上清液也明显趋化蜕膜免疫活性细胞,趋化指数为2.11±0.79.结论人早孕期滋养细胞表达的SDF-1对蜕膜免疫活性细胞具有趋化、募集作用,从而有助于形成蜕膜独特的淋巴细胞群体并维持母-胎免疫耐受.     

KLF8在人早孕绒毛组织中的表达及其意义

目的：通过检测正常孕妇早孕期绒毛组织中双向转录因子Krüppel-like factor 8（KLF8）的定位及表达,探讨其在早孕期滋养细胞侵袭中的作用。方法：选择2012年3月至2012年6月在重庆医科大学附属第一医院门诊孕6～11周进行选择性流产的22例正常孕妇为研究对象,取绒毛组织标本,采用免疫组化SP法检测各组孕妇绒毛组织中KLF8蛋白的定位,实时荧光定量PCR技术检测各组孕妇绒毛组织中KLF8 mRNA表达水平,采用蛋白印迹法检测各组孕妇绒毛组织中KLF8、基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9,MMP-9）蛋白的表达水平。结果：（1）正常孕6～11周绒毛组织中均有KLF8蛋白表达,主要定位于绒毛组织滋养层中的细胞滋养细胞和合体滋养细胞。（2）KLF8 mRNA 随妊娠周数增加而逐渐升高,并在孕8～10周达到高峰（孕8周最高）,而后急剧降低。（3）正常早孕绒毛组织中KLF8、MMP-9蛋白表达水平同样随妊娠周数增加而逐渐升高,并在孕8～10周达到最高峰（孕9周最高）,而后逐渐降低。（4）正常早孕绒毛组织中KLF8蛋白及MMP-9蛋白表达呈正相关关系,相关系数r为0.66（P<0.001）。结论：KLF8在正常早孕组织中定位于滋养层细胞尤其是与侵袭密切相关的细胞滋养细胞中,且表达变化与MMP-9蛋白水平以及滋养细胞浸润能力相吻合,提示KLF8可能参与胚胎植入及胎盘形成过程中滋养细胞浸润活性调控。     

ET-1及受体在不明原因复发性流产绒毛中的表达及其对滋养细胞迁移的调节

目的 通过检测内皮素-1(endothelin-1, ET-1)及受体(endothelin receptors, ETR)在不明原因复发性流产(unexplained recurrent spontaneous abortion, URSA)绒毛组织中的表达,探讨其与URSA的关系。方法不明原因复发性流产患者30例(RSA组)及正常早孕人流妇女30例(正常组,即CTL组),采用实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)及Western印迹法检测两组绒毛组织中ET-1、ETR-A、ETR-B mRNA及蛋白的表达。取体外培养的妊娠早期绒毛外滋养细胞Transwell迁移实验法检测ET-1、ETR-A阻断剂BQ-123及ETR-B阻断剂BQ-788受体对绒毛外滋养细胞迁移能力的影响。结果RSA组较正常组绒毛组织中ETR-B mRNA及蛋白表达降低,差异有统计学意义(P＜0.05),而ET-1、ETR-A mRNA及蛋白在二组绒毛组织中的表达差异无统计学意义(P＞0.05)。ET-1促进HTR-8细胞迁移,ETR-B阻断剂阻断ET-1的促迁移作用。结论 ET-1可能通过ETR-B受体促进妊娠早期绒毛外滋养细胞迁移,URSA患者较正常组绒毛中ETR-B mRNA及蛋白表达降低可能与URSA相关。     

Jagged1蛋白在早期自然流产患者绒毛组织中表达的研究

目的：探讨Jagged1蛋白在早期自然流产患者绒毛组织中的表达及其对妊娠结局的影响。方法采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应技术和免疫印迹法检测15例自然流产患者和20例正常早期妊娠妇女绒毛Jagged1 mRNA和蛋白的表达水平。结果自然流产组患者Jagged1mRNA表达水平（0．0623±0．0007）,低于正常早期妊娠妇女（0．0315±0．0065）,差异有统计学意义（P＜0．05）;Western－blot检测显示,早期自然流产患者Jagged1蛋白的表达水平低于正常早期妊娠妇女,但差异无统计学意义（P＞0．05）。结论 Jagged1蛋白在早期自然流产患者绒毛组织中表达呈下调趋势,可能与母胎界面血管发育及滋养细胞缺氧有关,从而导致自然流产。     

骨桥蛋白在母胎界面中表达的研究

目的 通过检测骨桥蛋白(osteopontin,OPN)在正常早、中、晚孕期绒毛及蜕膜组织中的定位及表达情况来探讨其在妊娠期的可能作用.方法 分别采用免疫组化染色法(SP法)及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测早、中、晚孕期绒毛及蜕膜中OPN的表达.结果 OPN在正常早、中、晚孕期绒毛及蜕膜中均有表达,其主要定位于细胞滋养层细胞、合体滋养层细胞及蜕膜细胞的胞膜和胞质中,此外在绒毛间质及血管中亦呈阳性表达.OPN mRNA及其蛋白表达水平的比较,在绒毛组织中,早孕期低于中孕期(P<0.05),中孕期低于晚孕期(P<0.05);蜕膜组织中,早孕期的表达量最高,与中、晚孕期比较差异均有统计学意义(均P<0.05),而在中、晚孕期组间比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 在胚胎发育进程中.绒毛中OPN的表达量随孕周增加而增加,而蜕膜中以早孕期表达最强,推测它在孕早期可能更多是参与调节侵袭作用,而在中晚孕期可能更多的是维持免疫调节作用.     

Rho-GDI在子痫前期蜕膜组织中的表达及其意义

目的探讨Rho-GDI在子痫前期蜕膜组织中的表达及意义。方法采用荧光实时定量PCR(SYBR GREEN I assay)、Western blot和免疫组织化学技术分别对正常足月妊娠妇女(对照组)30例、晚发型重度子痫前期30例及早发型重度子痫前期30例的Rho-GDI mRNA及蛋白进行测定。结果 Rho-GDI主要表达于蜕膜细胞的胞浆、胞核和少许间质。荧光实时定量PCR,Western blot和免疫组化表达等各方法验证结果显示Rho-GDI mRNA及蛋白在正常妊娠组蜕膜组织中表达最高;早发型子痫前期组中次之;晚发型子痫前期中最低。正常组与早发组和晚发组比较,差异均有显著性(P<0.05),但早发组与晚发组间比较的差异无显著性(P>0.05)。结论 Rho-GDI在子痫前期蜕膜组织中表达下调,Rho-GDI可能通过调控滋养细胞浸润和血管平滑肌舒缩状态等环节参与了子痫前期的发生发展。     

MMP-25在早孕绒毛和蜕膜中的表达及意义的研究

目的研究基质金属蛋白酶-25 (matrix metalloproteinase-25，MMP-25)在正常早期妊娠和自然流产患者绒毛及蜕膜组织中的表达特点，探讨其在胚胎植入中的作用及其与自然流产的关系。方法采用半定量RT-PCR和免疫组化法检测60例正常早期妊娠和40例自然流产患者绒毛及蜕膜组织中MMP-25mRNA及蛋白的表达。结果① MMP-25mRNA在正常早期妊娠的绒毛及蜕膜组织中均有表达，且绒毛组织中MMP-25mRNA表达水平随妊娠周数的增加逐渐上升，各孕周组间相比差异有统计学意义(P＜0.05)。自然流产组绒毛及蜕膜组织中MMP-25mRNA的表达明显低于正常妊娠组(P＜0.05)。② 正常妊娠组的绒毛组织中，MMP-25主要定位于细胞滋养细胞和合体滋养细胞，并且随妊娠周数增加表达逐渐增强，与RT-PCR结果吻合；自然流产组仅在合体滋养细胞中有表达，两组平均光密度分别为0.21±0.02和0.13±0.04，差异有统计学意义(P＜0.05)。蜕膜组织中MMP-25主要在腺上皮细胞表达，自然流产组的表达微弱，两组平均光密度分别为0.25±0.13和0.21±0.12，差异有统计学意义(P＜0.05)。结论MMP-25表达变化与滋养细胞浸润能力相吻合，且蜕膜组织中呈阳性表达，推测其参与胚胎植入及胎盘形成过程中滋养细胞浸润活性调控及子宫内膜组织重构；自然流产患者MMP-25表达水平降低，造成滋养细胞浸润能力下降，可能与自然流产的发生有关。