泻心汤对糖尿病大鼠早期肾病的影响

目的 研究泻心汤对高脂饮食联合注射链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠早期肾病的影响。方法 采用高脂饮食并注射低剂量链脲佐菌素方法复制糖尿病大鼠模型,随机分为模型组、泻心汤组及二甲双胍组,并设对照组;连续给药13周后,检测各组血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbAlc)、血脂(TG和TC)、血清胰岛素(INS)、肾功能、肾脏指数及尿蛋白,光镜、电镜下观察肾脏组织结构的变化。结果 与模型组大鼠相比较,泻心汤给药13周明显缓解大鼠多食、多饮、多尿症状,降低 HbAlc、胰岛素抵抗指数 (IRI)、尿蛋白排泄率、肌酐清除率 (CCr) 和血脂水平,改善肾小球基底膜增厚及足突融合变化。结论 泻心汤有抗实验性糖尿病大鼠早期肾病的作用,作用机制可能与其降低血脂和 HbAlc 及改善胰岛素抵抗等作用相关。     

链脲佐菌素糖尿病肾病大鼠模型的建立及稳定性评价

目的建立实验检测和与症状均符合临床糖尿病肾病的大鼠模型并对其稳定性进行评价。方法采用单侧肾切除并链脲佐菌素尾静脉注射建立大鼠糖尿病肾病模型,动态观察16周,以大鼠体重、饮水量、尿量、尿微量白蛋白、24 h尿蛋白、空腹血糖,糖化血红蛋白、血脂、血清肌酐、尿素氮、肾脏病理等指标评价模型的成功和稳定性。结果糖尿病肾病模型组大鼠造模后3 d~16周血糖持续升高,饮水量和尿量大幅增多,体质量增长缓慢或负增长,尿微量白蛋白、24 h尿蛋白定量、糖化血红蛋白升高,血脂代谢异常,尿素氮、肌酐升高。肾脏病理出现糖尿病肾病的典型表现。随时间延长,病情逐渐加重。结论单侧肾切除术后尾静脉注射STZ复制的糖尿病肾病动物模型与人类糖尿病肾病早期临床症状、病理和化验指标非常相似,在16周内模型稳定,符合糖尿病肾病Mogensen分期III期。病情严重程度与病程相一致,适用于药物药效学评价和临床基础研究。     

链脲佐菌素诱导大鼠糖尿病肾病模型的建立及肾脏病理结构改变

目的:探讨糖尿病大鼠肾脏结构的变化,建立糖尿病肾病大鼠模型。方法:雄性清洁SD大鼠48只,随机分为实验组(DM组,n=24)和对照组(NC组,n=24)。DM组大鼠一次足量腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病动物模型,NC组给予等量的枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液。分别于注射后1、4、8和12周,检测体重、血糖、24 h尿量、24 h尿蛋白、肾重指数(肾脏重量/体重)和肾脏病理结构的变化。结果:与NC组相比,DM组大鼠血糖明显升高,肾重指数增加(P<0.01);随着病程的延长,24 h尿量、24 h尿蛋白量均持续升高(P<0.01)。病理切片显示,DM组大鼠肾脏重量增加、肾小体肿胀、肾小囊腔缩小、血管球内皮细胞排列紊乱和肾小体基膜增厚等。结论:STZ可诱导糖尿病大鼠肾脏结构和功能受损,成功制备糖尿病肾病大鼠模型。     

不同剂量链脲佐菌素诱导SD大鼠糖尿病肾病模型的研究

目的 探讨不同剂量链脲佐菌素（SIZ）致SD大鼠糖尿病。肾病模型状况的差异。方法 58只雄性SD大鼠随机分为5组，模型组大鼠（4组，每组12只）腹腔一次性注射40、50、60、70ms／ks的STZ以建立糖尿病模型；非糖尿病对照组10只，仅予注射缓冲液。注射后2，4、72h检测血糖，8周观察糖尿病大鼠尿微量白蛋白、血尿素氮、肾脏指数及肾组织光镜和超微结构等变化。结果 腹腔注射STZ60mg/kg成模率高，模型死亡率较低。8周后大鼠尿微量白蛋白水平即升高，。肾脏超微结构检查系膜细胞增生、基质增多、肾小球基底膜增厚。结论 腹腔注射STZ60mg／kg是致糖尿病SD大鼠发生肾病的最佳剂量。     

实验性糖尿病大鼠性激素水平的变化研究

本文用链脲佐菌素（ＳＴＺ）复制了实验性Ｉ型糖尿病（ＩＤＤＭ）动物模型，给药两周后，糖尿病雌大鼠在动情间期血清Ｅ２水平较对照组显降低，Ｅ２／Ｔ比值下降，但血清ＦＳＨ，ＬＨ，Ｔ水平与对照组比较无差异。实验结果提示：ＩＤＤＭ雌鼠生殖功能异常可能与Ｅ２水平，Ｅ２／Ｔ比值降低有关。     

单侧肾切除联合 STZ 诱导糖尿病肾病大鼠模型构建影响因素分析

目的：：探讨单侧肾切除联合 STZ 诱导 SD 大鼠糖尿病肾病(DN)造模过程中的注意事项及动物成模后的病理改变。方法：健康雄性大鼠24只,随机分为2组：假手术组(S 组)和糖尿病肾病模型组(DN 组)。DN 组采用左侧肾切除,术后2周腹腔注射 STZ 方法建立大鼠 DN 模型,以造模后72 h 非空腹血糖达到16.8 mmol/L 为模型成立标准。观察 DN 大鼠体重、饮水量、进食量、尿量和血糖变化,于成模后4周处死动物,测定血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)含量,观察肾组织形态学变化。结果：与 S 组相比, DN 组大鼠于成模后体重增速明显放缓(P <0.01),进食量和饮水量增加,24 h 尿量增多(P <0.01),非空腹血糖维持在成模标准之上。DN 组大鼠 BUN 和 SCr 含量较 S 组大鼠明显升高,肾脏病理切片提示 DN组大鼠肾皮质细胞明显受损。结论：单侧肾切除联合 STZ 诱导可以建立稳定的大鼠 DN 模型。     

糖尿病模型鼠肾脏细胞增殖和凋亡关系的研究

目的通过观察糖尿病模型鼠肾脏细胞增殖和凋亡关系的研究，探讨糖尿病肾病的发生机制。方法雄性Balb/c小鼠腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型，电镜观察肾脏早期的形态学改变；应用免疫组织化学检测肾脏细胞PCNA、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果形态学变化：建立模型后第2周、3周、4周，电镜下可见脏层上皮细胞足突融合，肾小球系膜增宽，肾小管上皮细胞空泡样变性等变化。免疫组织化学染色结果：建立模型后第3天，肾脏PCNA阳性细胞数最多，之后逐渐减少，第4周最少；第3天，实验组Bax表达最强，Bcl-2的表达最弱，第1—4周，Bax表达逐渐减弱，第4周最弱，Bcl-2的表达逐渐增强，第4周表达最强。第3天，实验组Bax／Bcl-2的比值明显大于对照组，第1～4周，比值逐渐减小，尤以第4周最小。结论在糖尿病肾病发生的早期阶段，肾脏细胞的PCNA表达减弱，Bax／Bcl-2的比值减小，是糖尿病肾病发生的机制之一。     

SD大鼠糖尿病肾病模型构建的比较

目的:探讨不同方法建立糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)模型的差异,以确定建立糖尿病肾病大鼠模型的最佳方案?方法:清洁级健康雌性SD大鼠30只,随机分为3组,每组10只?A组大鼠单侧肾脏切除后腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)55 mg/kg,B组大鼠单侧肾脏结扎后腹腔注射STZ 55 mg/kg,C组为假手术对照组,注射等量的缓冲液?大鼠造模后从第1周开始每2周称体重,取血测血糖(Glu)?血肌酐(Scr)?总胆固醇(Chol)和甘油三酯(TG),收集尿测24 h尿蛋白(24Upro)?尿肌酐(Ucr),并计算内生肌酐清除率(Ccr)?11周后,处死大鼠,取肾脏称重并进行肾脏病理?结果:A?B 2组的成模周期相当,B组的存活率高于A组?结论:单侧肾脏结扎后再腹腔注射55 mg/kg STZ可以用来作为建立糖尿病肾病大鼠模型的理想方案?     

小檗碱对糖尿病肾病大鼠肾脏损伤的保护作用

目的：：探讨小檗碱对糖尿病肾病(diabetic nephrpathy,DN)大鼠肾脏损伤的保护作用。方法：健康成年雄性 SD 大鼠40只,随机分为正常对照组、模型组(DN 组)和小檗碱组。DN 组及小檗碱组大鼠行左侧肾摘除术,术后2周腹腔一次性注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)60 mg/kg 诱导 DN 大鼠模型,72 h 后测非空腹血糖>16.8 mmol/L 为造模成功;小檗碱组大鼠给予小檗碱0.1 g/(kg·d)灌胃。定时检测各组大鼠血糖、尿微量白蛋白和肾小球滤过率的变化。结果：与 DN 组大鼠相比,小檗碱组大鼠血糖和24 h 尿微量白蛋白明显降低,肾小球滤过率增加(P <0.05),肾功能明显改善。结论：小檗碱可明显降低 DN 大鼠血糖,改善 DN 大鼠肾功能紊乱,对 DN 大鼠肾脏具有较强的保护作用。     

腺病毒介导Cubilin反义RNA对肾小管上皮细胞Cubilin蛋白诱导表达的抑制作用

目的构建细菌内同源重组型的Cubilin反义RNA腺病毒表达载体并研究其对肾小管上皮细胞Cubilin蛋白诱导表达的影响.方法 PCR 扩增大鼠Cubilin起始编码区767 bp 的DNA 片段,与T载体连接,测序鉴定连接方向,通过选择反向和同向的双酶切位点与腺病毒穿梭载体pAdtack-CMV 同时酶切和连接,构建反向插入(正向插入作为对照)的腺病毒穿梭载体.将PmeⅠ线性化的腺病毒穿梭载体pAdtack-ACUB和pAdtack-CUB转染包含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1 的受体菌BJ5183(AdEasyTMXL) 进行同源重组.用含有卡那霉素的LB 平板筛选同源重组阳性的克隆, PacⅠ酶切和测序鉴定后,转染包装细胞(293细胞),经病毒扩增和纯化后,再以OD 法和GFP 法计算重组腺病毒的滴度.经免疫印迹法分析Cubilin反义RNA 对Cubilin 蛋白质诱导表达的抑制作用.结果成功构建了Cubilin的反义RNA腺病毒表达载体(pAdEasy-ACUB)和对照正义RNA腺病毒表达载体(pAdEasy-CUB),滴度为2.0 ×1010pfu/ ml、1.8×1010pfu/ ml;Cubilin反义RNA腺病毒表达载体转染可明显抑制大鼠肾小管上皮细胞的Cubilin 蛋白的诱导表达.结论 Cubilin的反义RNA腺病毒表达载体的成功构建以及对肾小管上皮细胞Cubilin蛋白诱导表达的明显抑制作用,为在基因水平的研究和治疗蛋白尿引起的肾间质损伤奠定了良好的基础.     

大鼠糖尿病性肾病模型的建立

给单侧肾切除雄性 Wistar大鼠的阴茎背静脉注射 3 5mg/kg链脲霉素引发糖尿病 ,在 5个月的实验过程中 ,大鼠的血糖水平一直处于稳定的中、高度状态。在实验第 1周大鼠体重明显下降 ,以后体重不再下降 ,也不增重 ,而对照组大鼠在 5个月的实验过程中体重持续增加。实验开始 5个月后 ,糖尿病大鼠的平均动脉压和肾脏血管阻力均显著高于对照组( P<0 .0 0 1 ) ,肾脏血浆流量则显著低于对照组 ( P<0 .0 1 ) ,导致滤过分数显著上升 ( P<0 .0 0 1 ) ,糖尿病大鼠的尿量比对照组明显增加 ,实验 4周起 2 4h的蛋白尿就有显著增加 ( 3 6.8± 3 .6mg vs.2 1 .5± 1 .7mg,P<0 .0 1 ) ,并且随着时间的延续呈进行性升高。无论是心脏与体重比 ( 0 .3 5%± 0 .0 1 % vs.0 .2 4%± 0 .0 1 % ,P<0 .0 0 1 ) ,还是左肾与体重比 ( 0 .99%± 0 .0 7% vs. 0 .3 9%± 0 .0 1 % ,P<0 .0 0 1 ) ,糖尿病大鼠都显著高于对照组。结果提示 ,给单侧肾切除的大鼠静脉注射低剂量 STZ可以诱发糖尿病性肾病模型 ,具有高血压、进行性蛋白尿、肾功能不良的体征。     

糖尿病肾病大鼠模型制备方法与模型建立标准研究

对常用的糖尿病肾病大鼠模型制备方法进行分析,总结出合理且易于控制的模型制备方法。根据统计学原理,采用医学参考值范围来确定糖尿病肾病大鼠模型建立的标准。提出建立地区内、范围内的实验动物生理正常值数据库的必要性。     

Cubilin反义RNA对大鼠肾小管超负荷重吸收白蛋白的抑制作用

目的探讨经肾动脉灌注腺病毒载体介导Cubilin反义RNA对肾小管超负荷重吸收白蛋白的抑制作用。方法建立大鼠阿霉素肾病模型,正义RNA组和反义RNA组分别经肾动脉缓慢灌注GFP基因标记的pAdEasy-Cub和pAdEasy-ACub,对照组和模型组灌注等量生理盐水。激光共聚焦显微镜下观察GFP的表达,并监测24h尿蛋白量及其他生化指标;光镜下观察肾小管间质病理变化;免疫组化法观察肾小管Cubilin基因的表达以及肾小管上皮细胞内白蛋白的沉积。结果转染第4天,正、反义RNA组肾脏GFP基因有较强表达,11d达到高峰,可持续至实验结束;反义RNA组与其他各组相比,24h尿蛋白量明显增高（P〈0.01）,小管间质病变轻微,Cubilin阳性表达率最低,且与白蛋白的沉积呈显著正相关（r=0.896,P〈0.01）。结论经肾动脉途径灌注重组腺病毒,能器官靶向性表达外源基因;Cubilin反义RNA对肾小管超负荷重吸收白蛋白有明显的抑制作用,并可以有效地减轻蛋白尿引起的肾间质损伤。     

血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂对阿霉素肾病模型骨调素表达的影响

目的　探讨骨调素 ( OPN)在阿霉素肾病模型中的表达和作用以及血管紧张素 ( Ang )受体拮抗剂对其表达的影响。方法　将实验动物随机分为正常对照组 ( C组 ) ,阿霉素肾病组 ( A组 )和厄贝沙坦治疗组 ( IR组 ) ,第2、 4周用免疫组化方法检测各组肾内 OPN和单核巨噬细胞抗原 ( ED1)的表达情况。结果　发现在第 2周和第 4周 ,A组和 IR组 OPN与 ED1表达水平均明显高于正常组 ( P<0 .0 5 ) ,而 IR组 OPN与 ED1表达水平均低于 A组 ( P<0 .0 5 )。在第 2周和第 4周 ,A组 OPN与 ED1的表达水平呈显著正相关 ( r=0 .92 2 ,P<0 .0 1;r=0 .80 0 ,P<0 .0 5 )。结论　 OPN在阿霉素肾病这种微小病变模型中是一种重要的趋化因子 ,与肾小管间质单核巨噬细胞浸润密切相关 ,使用 Ang 受体拮抗剂可使该模型 OPN表达下调 ,从而减轻了炎性细胞浸润和肾损伤     

Therapeutic Potential of Naja Naja Atra Venom in A Rat Model of Diabetic Nephropathy

ObjectiveTo study the protective effects of naja naja atra venom (NNAV) in a rat model of diabetic nephropathy (DN).MethodsThe rat diabetes model was induced by intraperitoneal injection of streptozotocin (STZ). Thirty-two model rats were randomly divided into one DN group (n=8) and three treatment groups (n=8 each) that received NNAV at doses of 30, 90, or 270 μg/(kg·day) via oral gavage, another eight rats as normal controls. After 12 weeks, all rats were sacrificed and the changes in serum and urine biological index levels were determined by colorimetric assay. Microalbumin (mALB), N-acetyl-β- glucosaminidase (NAG) and cystatin C (CysC) concentrations were measured by ELISA. Renal tissues were sliced for pathological and immunohistochemical observations.ResultsComparied with the DN group, serum glucose was decreased by 31.04%, total cholesterol 21.96%, triglyceride 23.78%, serum creatinine 19.83%, blood urea nitrogen 31.28%, urinary protein excretion 45.42%, mALB 10.42%, NAG 20.65%, CysC 19.57%, whereas albumin increased by 5.55%, high-density lipoprotein-cholesterol 59.09%, creatinine clearance 19.05% in the treatment group by NNAV administration at dose of 90 μg/(kg·day). NNAV also reduced the levels of malondialdehyde in serum (22.56%) and kidney tissue (9.79%), and increased superoxide dismutase concentration in serum (15%) and decreased it in renal tissue (8.85%). In addition, under light microscopy kidney structure was improved and glomerular hypertrophy decreased by 8.29%. As shown by immunohistochemistry, NNAV inhibited transforming growth factor-β1 by 6.70% and nuclear actor-κB by 5.15%.ConclusionNNAV improves biological indexes in DN, and it may exert renoprotective effects in rats with STZ-induced diabetes.     

糖尿病肾病大鼠肾脏差异表达基因研究

目的 糖尿病肾病是糖尿病患者的重要死亡原因。本研究旨在探讨糖尿病肾病大鼠肾脏差异表达基因,以期揭示DN发病的机制。方法 将5周龄SD大鼠随机分为正常组和糖尿病肾病模型组。糖尿病肾病模型组给予高脂饲料喂养加腹腔注射链脲佐菌素诱导大鼠糖尿病肾病模型。每4周测定空腹血糖、体重、24h尿白蛋白和尿肌酐水平。12周时处死大鼠,取血样测定血肌酐和血清尿素氮水平。取肾脏进行表达谱基因芯片实验。反转录实时定量PCR方法对芯片结果进行验证。结果 糖尿病肾病组空腹血糖,24h尿白蛋白、尿肌酐、血肌酐和尿素氮水平较正常组显著升高,而体重和尿肌酐显著降低。糖尿病肾病大鼠肾脏较正常组有624个基因差异表达,其中495个基因上调,129个基因下调。real-time PCR验证实验证实糖尿病肾病组ATP合成酶β亚基(Atp5b)、胶原蛋白1型α1(Col1α1)、细胞色素c氧化酶亚基Ⅵc(Cox6c)、NADH脱氢酶(辅酶Q)铁硫蛋白3(Ndufs3)和转化生长因子-β1(TGF-β1)显著上调。结论 氧化磷酸化通路和TGF-β1介导的细胞外基质(ECM)受体相互作用通路的激活可能与糖尿病肾病发生有关。     

2型糖尿病大鼠模型血管钙化及相关因素分析

目的观察2型糖尿病大鼠模型血管钙化发生情况并分析其危险因素。方法用高脂肪、高热量饲料加腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立大鼠糖尿病模型,对照组予常规饲料。通过VonKossa染色和原子分光光度计方法观察2组大鼠血管钙化情况,同时检测血糖、胰岛素、尿白蛋白和肌酐清除率(Ccr)等变化。结果血糖、胰岛素和腹腔注射葡萄糖糖耐量试验等结果证实造模成功。2组大鼠胸主动脉HE、VonKossa染色未见明显钙盐沉积,原子分光光度计定量检测显示实验组大鼠血管钙含量明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。相关分析未发现体质量、血糖、血胰岛素、尿白蛋白和Ccr与血管钙含量相关。结论用高脂肪、高热量饲料和腹腔注射STZ建立的糖尿病大鼠模型的胸主动脉钙含量明显增加,其血管钙化的原因和机制有待于进一步研究。     

糖尿病鼠模型研究新进展

建立理想的动物模型是对糖尿病病因、发病机理及其药物治疗进行研究的重要途径.糖尿病鼠模型的制备方法 可以分为自发性、实验性诱发模型、转基因模型等,各有其特点.对1、2型糖尿病鼠模型研究新进展做一综述.     

TCF7L2在2型糖尿病大鼠胰岛中的表达及影响

目的研究2型糖尿病大鼠模型中Wnt通路关键基因转录因子7类似物2(TCF7L2)的表达。方法利用小剂量链脲佐菌素(STZ,25mg/kg)联合高脂高糖喂养诱导建立2型糖尿病大鼠模型,成模后处死并取大鼠胰腺组织,镜下观察胰岛形态学改变,免疫组化检测胰岛β细胞的增殖、凋亡,免疫荧光和Western blot法检测TCF7L2和β-catenin表达。结果 12周后检测糖尿病模型组中大鼠血糖较正常对照组明显升高,体重变化不明显。免疫组化检测糖尿病模型组胰岛β细胞增殖减少,凋亡增加,免疫荧光及Western blot法检测均提示糖尿病模型组中胰岛细胞TCF7L-2表达明显增多。结论 Wnt信号通路中的关键效应基因TCF7L2可能通过参与调节胰岛β细胞的增殖和凋亡途径,在糖尿病的发病机制中起着重要作用。