HSP70在香烟诱导人类气道上皮细胞黏液高分泌中的作用

目的 研究热休克蛋白70(HSP70)在香烟提取物(CSE)诱导人类支气管上皮细胞(16-HBE)黏液高分泌中的作用.方法 建立CSE刺激16-HBE诱导黏液蛋白基因(MUC5AC)高表达模型,给予HSP70单抗阻断HSP70生物活性;提取细胞mRNA、蛋白,采用RT-PCR及Western blot等方法检测炎性细胞因子(TNF-α)、HSP70及MUC5AC的表达.结果 CSE刺激后细胞MUC5AC、TNF-α、HSP70 mRNA和HSP70蛋白表达较空白组(未予CSE刺激)增高(P<0.05).HSP70生物作用阻断后,MUC5AC和TNF-α mRNA的表达水平降低(P<0.05),同时表皮生长因子受体(EGFR)磷酸化水平也降低(P<0.05).结论 CSE可诱导16-HBE细胞MUC5AC基因表达增高,是重要的气道黏液刺激因子.HSP70参与了气道黏液分泌,其机制可能是通过上调TNF-α表达量,从而激活EGFR通路导致MUC5AC表达增加.     

热休克蛋白70和P53在人类乳腺癌中的表达及意义

目的　探讨HSP70和P5 3在乳腺癌中所起的作用及其在临床诊断中的应用价值。方法　运用超敏免疫组织化学技术 (SP法 )检测HSP70和抑癌基因P5 3蛋白在 5 2例乳腺癌中的表达情况。结果　HSP70的阳性率为 35 % (18/ 5 2 ) ,其表达与乳腺癌的病理学级别有关 (P <0 .0 5 )。P5 3的过度表达率为 36 .5 % (19/ 5 2 ) ,其表达与乳腺癌的病理学级别有关 (P <0 .0 5 )。在 5 2例乳腺癌中 ,P5 3的过度表达和HSP70的表达具有一定的相关性 (P<0 .0 5 )。结论　HSP70和P5 3在乳腺癌中的相关性提示HSP70可能参与P5 3的代谢 ;HSP70和P5 3表达程度与肿瘤的恶性程度有关。     

脑梗死大鼠经血管内皮生长因子165基因治疗后热休克蛋白70的表达

目的观察脑梗死大鼠经血管内皮生长因子(VEGF)165基因治疗后热休克蛋白70(HSP70)的表达。方法将25只大鼠随机均分为以下5组:正常对照组(A组);假大脑中动脉闭塞(MCAO)组(B组);MCAO组;空载质粒对照组(D组);hVEGF165基因治疗组(E组)。建模7 d后采用免疫组化的方法观察各组动物脑组织中的HSP70 的表达。结果(1)在皮质中,A、B两组HSP70均低表达(P>0.05);C、D两组表达均较高(P>0.05),与A、B两组相比有较显著的差异(P<0.01);E组表达最强,与各组相比均有显著差异(P<0.01)。(2)在半暗带中,C、D、E各组HSP70 表达均较高,C、D两组间无显著差异(P>0.05),而E组显著高于C、D组(P<0.01)。(3)在梗死灶内,E 组表达较高,显著高于C、D组(P< 0.01)。结论经hVEGF165基因治疗的脑梗死大鼠HSP70表达显著增高,提示VEGF165基因可诱导HSP70的表达。     

Aβ_(25～35)诱导大鼠AD模型及HSP_(70)的表达

目的 :探讨 β 淀粉样蛋白 (β amyloid ,Aβ2 5～ 3 5毒性作用能否诱导大鼠AD模型 ,以及热休克蛋白 70(heatshockproteins ,HSP70 )在海马神经元损伤中的表达。方法 :将 4 8只大鼠 ,随机分为 3组 (每组 16只 ) :AD模型组、溶媒体组、假手术组 ,前两组在双侧海马分别注射 2 μ1(10 μg2 )Aβ2 5～ 3 5、2 μl生理盐水 ,假手术组不注射任何溶液 ;于手术后 1、7、14及 2 1d采用免疫组织化学、积分光密度分析等手段对各组大鼠脑HSP70 的表达进行研究。结果 :AD模型组手术 7d后大鼠记忆明显减退 (P <0 .0 5 ) ,且HSP70 在海马神经元内表达ld时最高 ,7d锐减 ,14d和2 1d则逐渐减少。结论 :Aβ2 5～ 3 5可诱导大鼠AD模型 ,并对热休克蛋白 70在海马神经元损伤中的表达产生显著影响 ,HSP70 的表达是阿尔茨海默病 (Alzheimer’sdisease ,AD)大鼠脑内神经元存活的重要标志。     

含有人热休克蛋白基因的重组腺病毒转染乳鼠心肌细胞的实验研究

目的:研究含有人热休克蛋白70(HSP70)基因的重组腺病毒对乳鼠心肌细胞的转染效率以及基因转染后HSP70的表达。方法:体外原代培养乳鼠心肌细胞,以携带增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因的腺病毒载体(Ad.EGFP)按不同感染倍数(MOI)体外感染心肌细胞,通过荧光显微镜、流式细胞仪观察所构建的腺病毒的感染力和安全性;应用含有人HSP70基因的重组腺病毒(Ad.HSP70)进行体外感染,采用ELISA法、Western印迹法及免疫组化染色法检测HSP70基因在心肌细胞中的表达情况。结果:Ad.EGFP感染心肌细胞的效率高于90%,在MOI值为200时,未见心肌细胞的生长明显受抑;ELISA法、Western印迹法以及免疫组化染色法证实转染的心肌细胞在正常生理状态下,可高水平表达HSP70。结论:重组腺病毒Ad.HSP70能够在体外高效、安全地感染心肌细胞,并成功地表达HSP70。     

热疗作用于肝癌细胞株SMMC-7721后几种凋亡相关基因的表达

目的　探讨热疗前后人肝癌SMMC -772 1细胞几种凋亡相关基因的表达情况 ,解释热疗促进肿瘤细胞凋亡的分子机制。方法　采用免疫组化S- P法检测热疗前后肝癌细胞中P5 3、HSP 70、c Myc蛋白的表达情况。结果　各个热处理组与对照相比 ,HSP-70、P5 3、c Myc蛋白的表达均增高 ,有统计学差异 (P <0 .0 1 ) ;42℃加热 1h和2h与加热 3 0min比较HSP 70蛋白的表达增多 ,有统计学意义 (P <0 .0 5 ) ;而P5 3和c Myc蛋白在各个热处理组间表达没有差异。结论　加热可以诱导HSP70蛋白的大量产生 ,可以激活P5 3基因诱导肝癌细胞凋亡 ,上调c- Myc基因 ,通过调节细胞凋亡来提高细胞的热敏感性。     

养血清脑颗粒对D-半乳糖致衰老大鼠慢性脑缺血模型脑组织中VEGF及HSP70的影响

目的：观察养血清脑颗粒对D-半乳糖致衰老大鼠慢性脑缺血模型脑组织中VEGF、HSP70表达的影响，并探讨其作用机制。方法：60只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、尼莫地平组、养血清脑颗粒低剂量组（简称低剂量组）、养血清脑颗粒高剂量组（简称高剂量组）5组。在D-半乳糖（D-gal）致衰老的基础上永久性结扎大鼠双侧颈总动脉制备衰老大鼠慢性脑缺血模型。术前1d，高低剂量组分别用0．32g／mL、0．16g／mL养血清脑颗粒混悬液灌胃，尼莫地平组用尼莫地平混悬液灌胃，模型组灌服等量蒸馏水，正常组用等量生理盐水颈背部皮下注射。4W后，断头开颅取脑，处死大鼠，测定脑组织中VEGF及HSP70含量。结果：与正常组比较，模型组脑组织血管内皮中VEGF表达无明显改变，HSP70表达明显减少（P〈0．05）。与模型组比较，高剂量组、低剂量组脑组织血管内皮中VEGF、HSPT0表达增高（P〈0．01）。与低剂量组比较，高剂量组脑组织血管内皮中VEGF、HSP70表达增高（P〈0．01，P〈0．05）。结论：养血清脑颗粒使缺血脑组织中VEGF及HSP70的表达增加，提示该药可能从促进血管侧支循环形成及抑制神经元死亡等方面保护缺血脑细胞。     

癫痫大鼠脑组织内HSP70表达的免疫组化研究

目的 :探讨热休克蛋白 70 (HSP 70 )在癫痫大鼠脑组织内的表达情况及其意义。方法 :采用戊四氮致痫模型 ,应用免疫组织化学及常规病理检查的方法进行研究。结果 :在正常大鼠脑内未见HSP 70免疫反应 (IR)阳性细胞 ,戊四氮致痫后 12h脑内开始出现HSP 70IR阳性细胞 ,2 4hIR达高峰 ,3d后开始下降 ,7d后消失。HSP 70主要在边缘系统 (尤其是海马的CA1、CA3、CA4区 )、大脑皮质 (尤其是颞叶皮质、梨状皮质 )等区域表达。常规病理检查发现 ,上述区域散在出现受损的异常神经元。结论 :癫痫发作可诱导HSP 70在大鼠脑内广泛表达。HSP 70表达可作为神经元受损的一个早期指标。     

血管内皮生长因子对脑梗死大鼠热休克蛋白-70的影响

热休克蛋白 70 (HSP 70 )是细胞受有害刺激后产生的一组应激蛋白 ,与肿瘤的增殖及分化有关 ,有证据表明缺血可诱导HSP 70表达[1 3] 。另有证据表明 ,HSP 70可能具有保护脑细胞的作用[4 7] 。本研究着重观察HSP 70在血管内皮生长因子 (VEGF)基因有效治疗前后的变化 ,以进一步证实HSP 70的神经保护作用。一、材料与方法(一 )材料　雌性Wistar大白鼠 (购自湖北省医科院动物中心 ) 40只 ,随机分为 5组 :A组 (正常对照组 ) 5只 ,常规饲养。B组 (假手术组 ) 5只 ,在建立大脑中动脉闭塞(MCAO)模型过程中 ,将栓线插入颈内动脉约 1cm。…     

原发性肾细胞癌中HSP70与MDR1/P-gp的表达及其与预后的关系

目的 :研究原发性肾细胞癌组织中HSP70 和多药耐药基因 1(MDR-1/P gp)的表达情况并分析其与预后的关系。方法 :应用免疫组化SP法检测HSP70 和MDR1/P gp的表达情况。结果 :5例正常肾组织中均可见到HSP70和MDR1/P gp的表达。 6 0例原发性肾细胞癌中HSP70 和MDR1/P gp的阳性率分别为 5 5 %和 71.6 7% ,二者的表达与组织学类型、临床分期无关 ;与分级呈负相关 ,即分级越高 ,表达越低 ;与预后呈正相关 ,阳性表达预后好于阴性表达者 ;HSP70 和MDR1/P gp之间存在相关性。结论 :HSP70 和MDR1/P gp在肾细胞癌中高表达 ,二者可作为判断预后的指标。     

脑梗死大鼠经血管内皮生长因子165基因治疗后热休克蛋白70的表达

OBJECTIVE: To investigate the expression of heat shock protein 70 (HSP70) in the brain of rats with cerebral infarction after the administration of vascular endothelial growth factor 165 (VEGF165) gene therapy, thereby to provide molecular basis for clinical gene therapy of cerebral infarction. METHODS: Twenty-five Wistar rats were divided equally into 5 groups, namely normal control group, sham-operated control group, middle cerebral artery occlusion group (MACO group), eukaryotic expression plasmid group (pUCCAGGS group) and gene therapy group (receiving pUCCAGGS/hVEGF165).Rat models of permanent MACO was established by ligation with nylon suture, and in the latter two groups, pUCCAGGS or pUCCAGGS/ hVEGF165 was directly injected into the infarcted area. Seven days after the infarction, the rats were killed to obtain the brain tissues for immunohistochemical detection of HSP70 expression. RESULTS: In the rat brain cortex of the normal and sham-operated control group, similar low levels of HSP70 expression were detected (P >0.05), while in the MCAO group and pUCCAGGS group, HSP70 levels were both significantly higher (P <0.01), showing no differences between the latter two groups (P >0.05). Most intense HSP70 expression was detected in the gene therapy group (P <0.01). In the penumbra of the infarct area, MCAO, pUCCAGGS, and gene therapy group all had high expression levels of HSP70, which were comparable in the former two groups (P >0.05), with the highest expression levels occurring in the latter group. Within the infarct area, similar expression pattern was observed (P <0.01). CONCLUSION: The elevated HSP70 expression in response to VEGF165 gene therapy in the rats as observed in this study suggests the potency of VEGF165 gene to induce HSP70 expression.     

雌二醇预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织HSP70表达的影响

目的：观察雌二醇对脑缺血再灌注损伤脑组织HSP70表达的影响。方法：大鼠分假手术对照组、脑缺血再灌注组和雌二醇治疗组,每组32只,采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,每组分别于再灌注3h、6h、12h、24h处死8只动物,于视交叉前后2mm脑冠状切开,取闭塞侧组织制备连续性切片．免疫组化技术检测脑组织中HSP70的表达。结果：3组脑血管内皮均有HSP70的表达。假手术组皮层和纹状体无HSP70表达：雌二醇治疗组与脑缺血再灌注组再灌注后各时间点皮层、纹状体均有HSP70的表达,且雌二醇治疗组脑缺血再灌注后12h、24h皮层HSP70表达高于脑缺血再灌注组。结论：雌二醇预处理,可以诱导大鼠脑缺血再灌注脑组织HSP70的表达,对缺血性脑损伤可能有一定的保护作用。     

rAAV1介导血管内皮生长因子基因表达对大鼠脑缺血新生血管形成及神经功能恢复的影响

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)基因治疗对大鼠脑缺血的治疗作用及其机制.方法 成年雄性SD大鼠64只,分为对照组和治疗组,每组均32只,采用立体定向微量注射的方法将相同滴度的rAAVl-VEGF(治疗组)和rAAVl-Lacz(对照组)注入大鼠侧脑室,21 d后制作大脑中动脉区缺血再灌注(MCAO)模型,于不同时间点对各组动物进行神经损伤程度评分(NSS),以免疫定量分析法榆测各组大鼠脑组织中VEGF的表达量、以免疫组织化学染色检测脑内VEGF的表达部位和微血管密度(MVD),并行vWF和BrdU的免疫荧光双重标记,采用尾静脉注射FITC-葡聚糖法行脑微血管灌注成像,并对各组缺血半暗带区域的脑微血管灌注情况进行评估.结果 (1)治疗组的NSS评分有明显改善;(2)VEGF可在脑内多个结构表达,其VEGF表达量是对照组的27倍;(3)治疗组MVD为157±13、对照组为89±9(P<0.05),且治疗组半暗带区域可见大量BrdU阳性的内皮细胞,而对照组未见;(4)缺血半暗带区域微血管显影面积为(152 617±13 076)μm2/mm2,对照组为(91 658±6577)μm2/mm2(P<0.05).结论 rAAVI-VEGF可介导VEGF在大脑内表达,并对脑缺血大鼠神经功能的恢复具有促进作用,其治疗机制可能与VEGF促进新生血管形成并改善脑组织供血有关.     

神经节苷酯GM1对脑缺血后热休克蛋白70表达的影响

目的：探讨神经节苷酯GM1对脑缺血后的脑保护作用及其对脑缺血后热休克蛋白70表达的影响。方法：采用Koizumi‘s线栓法制作可复流大脑中动脉闭塞大鼠模型。32只雄性、健康Wistar大鼠随机分为正常组、MCAO组、生理盐水对照组、神经节苷酯GM1治疗组。MCAO后第5天处死动物，取脑组织进行Nissl染色及HSP70免疫组化检测。检测结果经CMIAS图像分析系统进行定量分析。结果：神经节苷酯GM1治疗组组海马各区神经元损伤轻，神经元脱失相对较少；MCAO后海马各区及大脑皮层均有不同程度的HSP70阳性细胞表达，GM1治疗后，海马各区及大脑皮层HSP70阳性细胞的数密度值较MCAO组减少。结论：GM1能减轻脑缺血后的神经元损伤，具有脑保护作用；抑制HSP70的表达亦可能是神经节苷酯GM1的脑保护作用机制之一。     

短暂局部预缺血对脑梗塞大鼠的影响及HSP70表达的变化

目的：建立局灶性可重复性大鼠脑缺血动物模型，研究短暂性局部脑缺血后再灌注不同时间对永久性大脑中动脉闭塞（MCAO）的影响。方法：应用改进的Longa's法局灶性脑缺血模型，建立阻断左侧大脑中动脉的局部脑缺血预处理模型。各组大鼠均经两次处理，预处理组大鼠经15分钟短暂缺血(PC)，分别在再灌注6小时，12小时，24小时，72小时，168小时后（n=15-16），造成MCAO；单纯MCAO组大鼠只在第二次处理造成大脑中动脉闭塞；单纯PC组只经15分钟短暂缺血；各组大鼠均在第二次处理后24小时，检测以下指标：神经功能缺失评分 ；TTC染色测量梗塞范围；HE染色，观察组织结构变化；干湿法测量脑水含量；免疫组织化学染色观察HSP70表达的变化。结果：PC－24h,PC-72h和PC－168h组与MCAO组相比较，脑梗塞范围、脑水肿的严重程度、 梗塞周边区脑组织的 缺血性损伤明显减轻；PC引起了轻微的神经细胞结构的改变；单纯PC组HSP70表达增加，永久性MCAO后24小时，各组HSP70蛋白在缺血周边区表达无显差异。结论：短暂局部缺血预处理可以引起脑梗塞后脑组织产生缺血耐受性，其保护作用出现在再灌注后1－7天；PC后引起HSP70蛋白表达的改变与缺血 耐受的产生有密切关系。     

井穴放血法对急性脑缺血大鼠缺血区脑组织凋亡相关蛋白的影响

[目的]观察井穴放血法对急性缺血性脑损伤的脑保护作用。[方法]将实验大鼠分为假手术组、脑缺血组和脑缺血+井穴放血治疗组,一侧大脑中动脉阻塞致急性缺血性脑损伤模型(MCAO),治疗组在脑缺血后即刻给予井穴放血治疗,出血量为每穴1滴。分别于缺血后的1、3、6、24h处死,进行免疫组织化学染色,检测缺血区皮层脑组织c-fos蛋白(FOS)及HSP70蛋白免疫阳性细胞,以观察井穴放血法对急性缺血性脑损伤后早期抑凋亡基因表达的影响。[结果]c-fos蛋白和HSP70蛋白在缺血区皮层脑组织表达增加,缺血后1hHSP70无表达,FOS表达增加,在随后观察的3、6、24h时程内HSP70和FOS均有随缺血时间延长表达增多的趋势。井穴放血治疗组在以上各时程c-fos及HSP70免疫阳性细胞数均高于同时段的缺血病模组,有统计学意义。[结论]急性脑缺血后应用井穴放血干预治疗可明显增强缺血区脑组织对抗神经细胞凋亡的即刻早期基因c-fos蛋白和抗应激HSP70蛋白的表达,从而提高了缺血后神经细胞对缺血、缺氧的耐受和适应能力,提高了缺血后神经元的可塑性,进而可影响晚期目的基因的表达,抵抗细胞凋亡的发展,增强脑修复能力。表明井穴放血法对中风初期有一定的脑保护作用。     

妥泰对脑缺血再灌注后HSP70表达的影响和脑保护作用的研究

目的　探讨高血压大鼠急性脑缺血再灌注后妥泰对HSP70 表达的影响及其脑保护作用。方法　将大鼠制成高血压模型 ,喂养 2个月。再次手术将大鼠制成大脑中动脉闭塞 (MCAO)模型 ,MCAO时间均为 2h ,并随机分为三组 :妥泰干预组、缺血再灌注组和假手术组。各组再分为测体积组和HSP70 组。再灌注时点 :测体积组为 6h ;HSP70 组为 1d。将测体积组鼠脑经TTC染色 ,用计算机病理图象分析仪测量并计算梗死体积比。测HSP70 组鼠脑经免疫组化染色后用病理图象分析仪测出HSP70阳性细胞数。结果　 (1)妥泰干预组脑梗死体积比明显小于缺血再灌注组 (P <0 0 5 ) ;(2 )妥泰干预组HSP70 的表达高于缺血再灌注组 (P <0 0 5 )。结论　妥泰能促进HSP70 的表达 ,使梗死体积减少 ,对脑缺血再灌注损伤的脑组织有保护作用。     

GM1对缺氧缺血新生大鼠脑损伤的保护作用

目的研究外源性单唾液酸四已糖神经节苷脂(monosialotetrahexosylgangtliosicle,GM1)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic—ischemic brain damage，HIBD)的保护作用。方法建立HIBD模型，观察腹腔注射GM，对HIBD模型鼠体重增长、脑水肿的影响，并用免疫组化及苏木素-伊红(HE)染色方法检测缺氧缺血(hypoxic—ischemic，HI)和GM1干预后不同时间点脑海马组织HSP70阳性细胞及病理学改变。结果HI后新生大鼠海马CA1区仅能检出少量阳性HSP核蛋白(仅在核内表达的蛋白)，海马CA1区神经元呈较严重的缺血损伤性改变。而GM1组体重增加、脑水肿减轻、可见应激蛋白HSP70明显表达。结论GM1可使新生大鼠海马CA1区HSP70表达上调，减轻脑水肿、减轻脑缺氧缺血后病理损伤，对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤具有保护作用。