JNK磷酸化在哮喘大鼠肺内的动态变化

气道重塑在哮喘病程中的重要性已被逐渐认识。丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号传导途径是参与哮喘发病机制的一条重要信号通路,我们前期研究发现,细胞外信号调节激酶(external signal regulated kinase,ERK)磷酸化是哮喘气道炎症和重塑的重要因素[1],C-JUN氨基末端激酶(C-JUNN-te     

c-Jun氨基末端激酶选择性抑制剂对哮喘小鼠肺组织IL-8表达的影响

目的探讨c-Jun氨基末端激酶选择性抑制剂(SP600125)对哮喘小鼠肺组织白介素-8(IL-8)表达的影响。方法 30只BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组和SP600125组,制作哮喘模型及干预处理后,处死小鼠,取肺组织,采用免疫组织化学方法和Western blot方法检测各组小鼠肺组织内IL-8的表达。结果免疫组化结果显示,哮喘组小鼠肺组织IL-8表达的平均光密度值为(0.75±0.12),显著高于对照组(0.25±0.03,p0.01),而SP600125组小鼠明显低于(0.44±0.06,p0.01)哮喘组。Western blot结果显示,哮喘组小鼠肺组织IL-8表达的平均光密度值为(0.51±0.08),显著高于对照组(0.15±0.02,p0.01);而SP600125组与哮喘组相比明显降低(0.29±0.04,p0.01)。结论 c-Jun氨基末端激酶选择性抑制剂能降低哮喘小鼠肺组织IL-8的表达。     

紫草醌通过TGF-β1/Smad3信号通路改善哮喘小鼠气道重塑

目的探讨紫草醌对哮喘小鼠气道重塑的影响及其作用的机制。方法建立OVA诱导的哮喘Balb/c小鼠慢性气道炎症模型,经腹腔注射紫草醌0.5 mg/kg、2 mg/kg及4 mg/kg 3种剂量,对照组用生理盐水代替;取支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)进行细胞涂片,Diff-Quick染色进行炎症细胞的分类及计数;采用ELISA法检测小鼠BALF细胞因子及IgE水平;肺组织HE及Masson染色观察其病理学改变。试剂盒检测肺组织中HYP含量;Western blot法检测小鼠肺组织中α-SMA、TGF-β1、p-Smad3、Smad3水平。结果紫草醌抑制了BALF中炎症细胞数量的增加,并降低了BALF中总IgE及OVA特异性IgE含量,调节BALF中Th1/Th2细胞因子的平衡;紫草醌能减轻小鼠慢性气道炎症模型的炎性细胞浸润和胶原沉积,减少胶原纤维的形成并抑制支气管平滑肌的增生;Western blot结果显示,紫草醌抑制了α-SMA、TGF-β1、Smad3的蛋白表达量,并抑制Smad3的磷酸化水平。结论紫草醌能改善哮喘小鼠的气道重塑,...     

哮喘大鼠肺组织中Wnt5a/JNK信号通路相关分子表达增强

目的研究Wnt5a/JNK信号通路相关分子在哮喘大鼠肺组织中的表达。方法将实验大鼠随机分为正常组和哮喘组,成功复制哮喘模型后,通过HE染色观察气道病理改变,实时荧光定量PCR检测肺组织和血液中Wnt5a mRNA的表达,Western blot法检测肺组织中磷酸化的c-Jun(p-c-Jun),磷酸化的c-Jun N端激酶(JNK)蛋白的表达。结果与正常组相比,哮喘组支气管黏膜增厚,褶皱增多,管腔狭窄;气管和血管周围有炎细胞的浸润。气道壁与平滑肌层显著变厚。哮喘组大鼠肺组织和血液中Wnt5a mRNA与对照组比较表达上调,p-c-Jun,p-JNK蛋白表达增加。结论哮喘大鼠的Wnt5a、p-JNK、p-c-Jun表达增强。     

细胞周期蛋白E在哮喘大鼠肺组织中的表达及其与气道重塑的关系

目的:通过测定哮喘大鼠肺组织中细胞周期蛋白E(cyclin E)的表达,研究cyclin E在哮喘气道重塑中的作用。方法:20只Wistar大鼠随机分为哮喘组和对照组,每组10只。用鸡卵清白蛋白(OVA)溶液致敏及激发复制哮喘模型。HE染色观察气道炎症;图像分析测量气道管壁厚度;流式细胞仪测定外周血单个核细胞细胞周期时相分布;免疫组化法检测cyclin E的表达情况;实时定量(real-time)RT-PCR测定肺组织中cyclin E mRNA水平表达;Western blotting法检测肺组织中cyclin E蛋白的表达。结果:哮喘组大鼠支气管管壁厚度较对照组增加(P0.01);哮喘组外周血单个核细胞S期、S+G2/M期百分率均较对照组增加,而G0/G1期百分率较对照组降低(均P0.01);哮喘组肺组织中cyclin E mRNA和蛋白水平的相对表达量较对照组高(均P0.01);肺组织中cyc-lin E蛋白的相对表达量与支气管管壁厚度呈正相关(P0.01)。结论:Cyclin E在哮喘大鼠肺组织中表达增加,其表达的上调可使细胞周期的G1期缩短,进而可能通过促进细胞的分裂增殖而参与哮喘气道重塑的发生发展。     

JNK/SAPK信号转导通路与支气管哮喘气道重塑

气道炎症和气道重塑（Airway remodelling）是支气管哮喘（以下简称哮喘）的两个主要病理学特征。目前对哮喘的认识及其治疗策略以针对慢性非特异性气道炎症为主。虽然哮喘气道重塑已得到关注，其发生机制的研究也已开始，但确切机制尚未明确。许多研究表明，信号转导通路通过调节炎症细胞、结构细胞、细胞因子和炎症介质的作用，参与哮喘气道重塑的形成，其中JNK／SAPK通路受到极大重视。     

c—Jun氨基末端激酶选择性抑制剂对哮喘小鼠肺组织IL-2表达的影响

目的探讨c-Jun氨基末端激酶选择性抑制剂（SP600125）对哮喘小鼠肺组织白介素-2（IL-2）表达的影响。方法30只BALB／c小鼠随机分为对照组、哮喘组和SP600125组,制作哮喘模型及干预处理后,处死小鼠,取肺组织,采用免疫组织化学方法和Western blot方法检测各组小鼠肺组织内IL-2的表达。结果免疫组化结果显示,哮喘组小鼠肺组织IL-2表达的平均光密度值为0．76＋0．11,显著高于对照组0．25±0．04,P〈0．01;而SP600125组小鼠肺组织IL-2表达的平均光密度值为0．45±0．08,与哮喘组相比明显降低,P〈0．01。Westernblot结果显示,哮喘组小鼠肺组织IL-2表达的平均光密度值为1．26±0．21,显著高于对照组0．36±0．05,P〈0．01;而SP600125组小鼠肺组织IL-2表达的平均光密度值为0．88±0．11,与哮喘组相比明显降低,P〈0．01。结论c．Jun氨基末端激酶选择性抑制剂能降低哮喘小鼠肺组织IL-2的表达。     

大蒜素抑制TGF-β1/SMAD2通路减轻哮喘小鼠气道炎症并调节气道重塑

目的 探究大蒜素对支气管哮喘小鼠气道炎症和气道重塑的作用机制.方法 随机选取健康雌性BALB/c小鼠,分对照组、哮喘模型组和大蒜素处理组,每组8只.采用卵清蛋白(OVA)致敏和激发建立小鼠哮喘模型,取小鼠支气管肺泡灌洗液进行炎细胞计数,HE染色观察肺组织病理学变化、Masson染色观察肺气道重塑情况,免疫组织化学染色法...     

ERK信号转导途径在哮喘大鼠气道重塑中作用的初步探讨

目的：研究支气管哮喘不同时期细胞外信号调节激酶（External signal regulated kinase,ERK）的磷酸化与c-Fos表达,以探讨ERK信号转导途径在支气管哮喘气道重塑中的作用。方法：复制大鼠哮喘模型,随机分为对照组（包括4周、8周及12周对照组）、哮喘组（包括4周、8周及12周哮喘组）,图像分析软件测定支气管壁厚度（Wat）和平滑肌厚度（Wam）,免疫组化测定肺组织磷酸化的ERK（Phospho-ERK,P-ERK）与c-Fos表达,免疫印迹法测定磷酸化的ERK水平,直线相关分析法显示Wat和Wam与P-ERK的相关性。结果：各哮喘组Wat和Wam,P-ERK和c-Fos的平均吸光度均显著高于相应对照组（P均〈0.01）;各哮喘组磷酸化的ERK水平均显著高于相应对照组（其中A12也与C8组比）（P〈0.01）;Wat、Wam与P-ERK平均吸光度均呈显著正相关性（P〈0.01）。结论：ERK磷酸化水平和c-Fos在哮喘大鼠均增加,ERK信号转导途径在支气管哮喘气道重塑中起重要作用。     

姜黄素对哮喘大鼠肺组织MMP-9与TIMP-1的表达以及气道重构的影响

目的探讨姜黄素对卵清白蛋白致敏哮喘模型大鼠肺组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及其组织抑制物-1(TIMP-1)的表达与气道重构的影响。方法 36只清洁级SD雄性大鼠随机分为对照组、哮喘组和姜黄素组,用卵蛋白作为致敏原制备哮喘大鼠模型,对支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞总数及嗜酸性粒细胞计数,采用动物呼吸机检测各组大鼠气道呼气阻力,HE染色观察各组大鼠肺组织的病理学变化,采用图像分析软件测定肺组织切片中的支气管壁内周长(Pi)、支气管管壁面积(WAt)、支气管平滑肌面积(WAm),Western blot方法检测各组大鼠肺组织MMP-9与TIMP-1的表达。结果姜黄素干预可显著降低哮喘大鼠BALF中细胞总数及嗜酸粒细胞计数、降低哮喘大鼠肺组织的炎性细胞浸润,降低气道炎症,降低WAt/Pi、WAm/Pi的比值(P0.01);肺功能分析结果显示,姜黄素干预可显著降低哮喘大鼠的呼气阻力(P0.01);Western blot结果显示,姜黄素干预可显著降低哮喘大鼠肺组织MMP-9的表达,上调TIMP-1的表达(P0.01)。结论姜黄素降低哮喘大鼠气道炎症及气道阻力,减轻哮喘气道重构,可能与降低MMP-9的表达,上调TIMP-1的表达相关。     

JNK/c-Jun信号通路在大鼠胸主动脉瘤模型中的表达及意义

目的 探讨c -Jun氨基末端激酶(JNK)及c-Jun在实验性大鼠胸主动脉瘤中的表达及其意义. 方法 将20只成年雄性Wistar大鼠随机分为两组,即对照组和手术组.采用氯化钙(CaCl2)诱导法制备胸主动脉瘤模型,于术后4周取外敷CaCl2段胸主动脉.用免疫组织化学和Western blotting方法检测动脉瘤壁JNK和c-Jun的表达. 结果 免疫组织化学显示,磷酸化JNK(p-JNK)和磷酸化c-Jun( p-c-Jun)主要表达于动脉瘤中膜,而对照组表达很弱.Western blotting显示,动脉瘤组织中p-JNK和p-c-Jun表达均强于对照组. 结论 p-JNK和p-c-Jun在动脉瘤中表达强于对照组,JNK/c-Jun信号通路可能在动脉瘤形成过程中起重要作用.     

IL-33/ST2激活人肺成纤维细胞表达纤维黏连蛋白1和1型胶原蛋白参与哮喘气道重塑

目的检测IL-33刺激下人肺成纤维细胞(HLF-1)纤维黏连蛋白1(FN1)及1型胶原蛋白(Col1)的表达。方法选取哮喘组28例,健康对照组25例,ELISA检测血清IL-33的表达;同时对其中8例哮喘患者及8例健康对照者行电子气管镜下气道黏膜活检,HE染色观察哮喘患者气道重塑,免疫组织化学染色观察IL-33在气道黏膜的分布;培养HLF-1人肺成纤维细胞,分别给予不同浓度IL-33细胞因子刺激,通过实时定量PCR和Western blot法分别检测人肺成纤维细胞FN1和Col1的mRNA、蛋白表达。结果 ELISA检测结果显示哮喘病人组血清IL-33表达水平明显高于健康对照组(P0.01);HE染色显示哮喘患者基底膜明显增厚且哮喘患者基底膜厚度与血清IL-33成正相关性(r=0.829,P0.05);免疫组化结果显示IL-33主要来自受损的气道上皮细胞;不同浓度IL-33细胞因子刺激下的HLF-1人肺成纤维细胞FN1、Col1的表达呈浓度依赖性增高(P0.05),丙酸氟替卡松及阻断IL-33受体ST2可以部分抑制FN1和Col1的表达(P0.05)。结论 IL-33/ST2可能通过激活人肺成纤维细胞过度表达FN1和Col1参与哮喘气道重塑。     

姜黄素对阿尔茨海默病大鼠学习记忆及HMGB1和JNK表达的影响

 目的：探讨姜黄素对阿尔茨海默病（AD）大鼠学习记忆能力、海马高迁移率族框蛋白1 （HMGB1）及c-Jun氨基末端激酶（JNK）表达的影响。方法: 36只雄性SD大鼠随机分为4组：空白对照组（A组）、AD模型组（B组, 鹅膏覃氨酸Meynert基底核注射）、AD模型+姜黄素治疗组（C组,腹腔注射100 mg·kg-1·d-1持续6 d）和AD模型+溶剂对照组（D组, 腹腔注射4 mL/kg玉米油持续6 d）。Morris水迷宫测试大鼠平均逃避潜伏期（AEL）,免疫组化和Western blotting法检测海马HMGB1和JNK的表达。结果: 与A组相比,B和D组大鼠造模后各时点AEL明显延长（P＜0.05）,C组大鼠第5天和第6天 AEL较B组相应时点明显缩短（P＜0.05）;B组和D组海马存在HMGB1大量胞浆、胞外释放情况（P＜0.05）,而C组海马区HMGB1胞浆、胞外释放无明显差异（P＞005）。4组大鼠海马总HMGB1表达水平比较差异无统计学意义（P＞0.05）,但B组和D组海马JNK表达水平增高（P＜0.05）。结论: 姜黄素能够改善AD大鼠的学习记忆能力,其机制可能与抑制HMGB1的胞浆、胞外释放及JNK的表达下调有关。     

大潮气量机械通气对大鼠肺组织白介素-1β表达的影响

目的研究大潮气量机械通气对大鼠肺组织白介素-1β(IL-1β)表达的影响。方法健康SD大鼠24只随机分为3组,对照组(A组)不行机械通气,常规通气组(B组)VT为8ml/kg,大潮气量通气组(C组)VT为40ml/kg。机械通气2h后处死动物,采用考马斯亮蓝染色法测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中总蛋白的水平,光镜下行白细胞计数,同时测定肺湿干重比值(W/D)和中性粒细胞髓过氧化物酶(MPO)活性;采用ELISA法检测IL-1β水平,RT-PCR法检测IL-1βmRNA含量。结果通气2h后,与对照组相比,大潮气量通气组BALF中总蛋白、白细胞计数、肺W/D、MPO、IL-1β和IL-1βmRNA表达均显著增加(P0.05或P0.01),而B组上述各项指标的变化均无统计学意义(P0.05)。结论大潮气量机械通气可引起大鼠急性肺损伤,诱导IL-1β表达增加。     

麻杏石甘汤对哮喘模型小鼠气道重塑及肺组织MMP-9和TIMP-1表达的影响

目的:观察麻杏石甘汤对哮喘模型小鼠气道重塑及肺组织基质金属蛋白酶9(MMP-9)和金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP-1)表达的影响,探讨其治疗哮喘的可能机制。方法:将72只健康雌性BALB/c小鼠随机分为:空白对照组,模型组,麻杏石甘汤低剂量组、中剂量组和高剂量组,阳性对照组。采用卵清蛋白致敏激发建立小鼠哮喘模型。空白对照组和模型组于激发前30 min以生理盐水灌胃;麻杏石甘汤低剂量组、中剂量组和高剂量组分别于激发前30 min以麻杏石甘汤按5.0 g/kg、10.0 g/kg和20.0 g/kg剂量灌胃;阳性对照组于激发前30 min以地塞米松按0.005 g/kg剂量灌胃。连续给药7 d后,观察气道反应性、支气管肺泡冲洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞(EOS)计数、杯状细胞百分比和胶原沉积的变化;ELISA法检测MMP-9和TIMP-1水平;Western blot法检测MMP-9和TIMP-1的蛋白表达;RT-qPCR法分析检测MMP-9和TIMP-1的mRNA表达。结果:与空白对照组比较,模型组的气道反应性、杯状细胞百分比、胶原沉积、BALF中EOS计数及肺组织MMP-9和TIMP-1的mRNA和蛋白水平均显著升高(P 0.01);与模型组比较,麻杏石甘汤低剂量组、中剂量组和高剂量组及阳性对照组上述指标则明显降低(P 0.05或P 0.01)。结论:麻杏石甘汤可能通过降低MMP-9和TIMP-1的表达改善哮喘模型小鼠气道重塑状态。     

支气管哮喘伴发抑郁大鼠血液及肺组织IL-1β、IL-6含量的变化

目的:建立支气管哮喘伴发抑郁的动物模型,探讨支气管哮喘伴发抑郁时机体免疫功能的变化。方法:选择Wistar大鼠,随机分为对照组、哮喘组、哮喘伴发抑郁组,采用经典的卵蛋白(ovalbumin,OVA)激发法略加改进建立哮喘模型,在此基础上给予慢性轻度不可预见性应激刺激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)28d复制抑郁模型,综合评价动物模型是否成功,酶联免疫技术测定各组大鼠血液及肺部组织IL-1β、IL-6的含量。结果:支气管哮喘伴发抑郁大鼠模型建立成功;哮喘伴发抑郁组大鼠血液及肺部组织IL-1β含量,与对照组比较明显升高(P0.05),与哮喘组比较亦有增高趋势;哮喘伴发抑郁组大鼠血液及肺部组织IL-6含量,与对照组比较明显升高(P0.05),与哮喘组比较亦有增高趋势。结论:OVA激发加CUMS可成功制备支气管哮喘伴发抑郁大鼠模型,该模型血液及肺部组织IL-1β、IL-6的含量明显升高。     

哮喘豚鼠MMP-9、TIMP-1免疫反应的变化及与气道重塑的关系

目的　观察实验性哮喘豚鼠气道平滑肌基质金属蛋白酶 9(MMP 9)及其抑制剂 (TIMP 1)的表达以及气道平滑肌厚度的变化。方法　用免疫组织化学结合显微图像分析测定气道平滑肌MMP 9、TIMP 1免疫反应的变化及气道平滑肌厚度。结果　MMP 9、TIMP 1广泛分布于气道平滑肌。哮喘组MMP 9平均灰度值(10 5 94± 6 0 9)明显低于对照组 (12 0 2 5± 3 6 6 ) (P <0 0 1) ;哮喘组TIMP 1平均灰度值 (99 36± 5 71)明显低于对照组 (12 3 4 5 7) (P <0 0 1) ;哮喘组气道平滑肌厚度 (6 45± 1 83μm2 / μm)明显高于对照组 (3 17± 0 85 )(P <0 0 5 )。结论　MMP 9、TIMP 1可能参与哮喘时气道重塑。     

支气管哮喘患儿血清sICAM-1、MMP-9水平与气道炎症、重塑的关系探讨

目的 探讨支气管哮喘患儿血清可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平与气道炎症、重塑的关系.方法 选取2018年2月至2020年9月于本院接受治疗的支气管哮喘患儿62例作为观察组,同期体检健康的40例儿童作为对照组,收集两组血常规资料及外周血2 mL,检测血清sICAM-1、MM...     

哮喘小鼠气道重塑中α平滑肌肌动蛋白的表达

目的:用屋尘螨提取液(House DustMite Extract,HDM)构建哮喘小鼠气道重塑模型,检测肺组织中α平滑肌肌动蛋白(Smooth Muscle Actin-α,α-SMA)的表达。方法:BALB/c小鼠随机分为空白组、HDM低、高剂量三组,每组再分为3、6、9周3个亚组。用不同浓度的HDM皮下/腹腔致敏,滴鼻激发。用医学图像软件分析气道重塑的病理改变,分别用qRT-PCR和IH检测肺组织中α-SMAmRNA和蛋白的表达。结果:与空白组对比,HDM高、低剂量组肺组织病理炎症计分增加,气道内外径比值降低,α-SMA蛋白及其mRNA表达增加,随激发时间延长改变越来越显著;高剂量组较低剂量组更显著。结论:HDM诱导BALB/c小鼠支气管哮喘气道重塑中,α-SMA随气道重塑的加剧而表达增加。     

Wnt/β-catenin信号通路调控哮喘气道重塑的机制研究

目的:探讨Wnt/β-catenin信号通路调控哮喘气道平滑肌细胞(ASMC)的功能和参与哮喘气道重塑的机制。方法:建立大鼠哮喘模型,提取大鼠ASMC。Western blot法检测哮喘组和正常组大鼠ASMC中β-连环蛋白(β-catenin)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、原癌基因c-Myc和细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的蛋白表达。抑制哮喘组和对照组ASMC中β-catenin和转录辅助因子p300/CBP间的相互作用后,采用CCK-8法和流式细胞术检测ASMC的细胞活力和周期变化。抑制P38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)活性后,采用Western blot法检测c-Myc和cyclin D1的蛋白表达变化。结果:Western blot法显示哮喘组ASMC中β-catenin、c-Myc和cyclin D1的蛋白表达水平均明显高于对照组(P0.05),同时GSK-3β的蛋白表达水平则低于对照组(P0.05)。抑制β-catenin和p300/CBP间相互作用后,哮喘组ASMC的细胞活力下降幅度和细胞周期改变程度均较对照组更为明显(P0.05)。抑制P38 MAPK活性后,哮喘模型大鼠及对照大鼠ASMC中Wnt/β-catenin信号通路的靶蛋白c-Myc和cyclin D1的表达均下调,差异有统计学意义(P0.05)。结论:Wnt/β-catenin信号通路可能通过上调c-Myc和cyclin D1的表达、与P38 MAPK信号通路相互作用以及调控ASMC的生长和分化等途径,影响ASMC的功能,参与哮喘气道重塑。