酪蛋白磷酸肽钙磷复合体对粘性放线菌产酸影响的实验研究

[目的]研究酪蛋白磷酸肽钙磷复合体(Casein phosphopeptide- Amorphic Calcium Phosphate,CPP-ACP)对粘性放线菌产酸的影响,探讨CPP-ACP作为一种生物防龋制剂的可行性. [方法]将粘性放线菌加入含不同浓度CPP-ACP的蔗糖培养基中,厌氧培养48 h,用精密pH计检测培养基上清液的pH值,计算pH的变化值△pH(初始pH值-终末pH值). [结果]随CPP-ACP浓度的升高,培养基上清液的pH值升高,△pH降低,即粘性放线菌的产酸量降低(P＜0.01). [结论] CPP-ACP对粘性放线菌产酸具有抑制作用,且随CPP-ACP浓度的升高抑制作用增强.     

CPP-ACP对发酵乳杆菌生长、黏附影响的实验研究

[目的]研究酪蛋白磷酸肽钙磷复合体(Casein phosphopeptide-Amorphic Calcium Phosphate,CPP-ACP)对发酵乳杆菌生长、黏附的影响,进一步探讨CPP-ACP的防龋机制。[方法]将发酵乳杆菌接种到BHI培养基,实验组中加入不同浓度(0.5%～5.0%(W/V))的CPP-ACP溶液,厌氧培养48h后,采用噻唑蓝(MTT)比色分析法测定细菌浓度的吸光度A值(λ=550nm)。采用唾液包被的羟磷灰石(Saliva-coated hydroxyapatite,S-HA)形成实验性膜,用不同浓度(0.5～5.0%(W/V))CPP-ACP处理S-HA,定量观察发酵乳杆菌在S-HA上的黏附情况。[结果]随CPP-ACP浓度的升高,发酵乳杆菌甲臜产物的二甲亚砜溶液的吸光度值降低,即发酵乳杆菌的活菌数减少(P﹤0.01)。发酵乳杆菌对经各实验浓度的CPP-ACP处理后的S-HA黏附能力明显下降,黏附量(cpm)随CPP-ACP浓度的升高而降低,黏附抑制率达100%。[结论]CPP-ACP对发酵乳杆菌的生长以及在S-HA上的黏附具有抑制作用,随CPP-ACP浓度的升高抑制作用增强。     

酪蛋白磷酸肽钙磷复合体对变形链球菌生长、产酸的影响

目的：研究酪蛋白磷酸肽钙磷复合体（Casein phosphopeptide-Amorphic Calcium Phosphate，CPP-ACP）对变形链球菌生长和产酸的影响，探讨CPP-ACP作为一种生物防龋制剂的可行性。方法：将变形链球菌ATCC 25175（血清型c）在含糖的BHI培养基中厌氧培养，在实验组中加入不同浓度（0．5％～5．0％（W／V）的CPP-ACP溶液，厌氧培养48h，采用MTT法检测细菌浓度的吸光度值A（A=550nm），采用精密pH计检测培养御清液的pH值，计算pH的变化值ApH（初始pH值-终末pH值）。结果：随CPP-ACP浓度的升高，变形链球菌的吸光度值降低，即变形链球菌的活菌数减少（P〈0．01）；培养物上清液的pH值升高，ApH降低，即变形链球菌的产酸量降低（P〈0．01）。结论：CPP—ACP具有抑制变形链球菌生长、产酸作用，随浓度升高抑制作用增强。     

酪蛋白磷酸肽钙磷复合体对变形链球菌粘附影响的实验研究

[目的]研究酪蛋白磷酸肽钙磷复合体(Casein phosphopeptide-Amorphic Calcium Phosphate, CPP-ACP)对变形链球菌粘附的影响,从而进一步探讨CPP-ACP的防龋机制.[方法]采用唾液包被的羟磷灰石(Saliva-coated hydroxyapatite, S-HA)形成实验性膜的体外粘附实验模型,用不同浓度(0.5%～5.0%(W/V)) CPP-ACP处理S-HA,定量观察变形链球菌在S-HA上的粘附情况.[结果]变形链球菌对经各实验浓度的CPP-ACP处理后的S-HA粘附能力明显下降,粘附量(cpm)随CPP-ACP浓度的升高而降低,且粘附抑制率均达100%.[结论]CPP-ACP对变形链球菌在S-HA上的粘附具有抑制作用,随CPP-ACP浓度的升高其抑制作用增强.     

澳洲茄胺盐酸盐对体外HeLa细胞培养生长抑制作用的研究

[目的]探索SBHL对体外培养HeLa细胞生长抑制影响,了解SBHL抗肿瘤活性. [方法]用细胞生长计数法观察SBHL对HeLa细胞生长抑制作用;MTT法测定SBHL抗肿瘤活性;流武细胞仪检测HeLa细胞DNA合成率和凋亡率. [结果]细胞生长计数法证实SBHL对HeLa细胞生长有抑制作用,且随药物浓度增加给药时间延长,其抑制作用增强;MTT法证实SBHL对HeLa细胞集落形成有抑制作用,并随SBHL浓度增加其抑制率也随之增强;流式细胞仪检测证实不同浓度SBHL对HeLa细胞DNA合成抑制率和凋亡率产生不同影响,且随药物浓度增加和给药时间延长,其抑制作用增强. [结论]SBHL能抑制HeLa细胞生长增殖作用,能抑制HeLa细胞DNA合成和诱导HeLa细胞凋亡.     

血清物质对人肝癌Bel-7402细胞存活及白蛋白mRNA表达的影响

目的 研究血清物质对人肝癌Bel-7402细胞生长抑制率及白蛋白(ALB)mRNA表达的影响.方法 用重型肝炎合并Ⅱ期肝性脑病患者血清对Bel-7402细胞进行干预,四氮唑蓝比色分析法(MTT法)染色后测出A值,根据A值计算出细胞生长抑制率.根据细胞培养上清中ALT、乳酸脱氢酶(LDH)释放率推断细胞膜的受损情况.细胞培养24 h后提取细胞内总mRNA,反转录成cDNA,用PCR法扩增得到ALB mRNA的特异电泳带,通过凝胶成像系统,测得电泳带光密度和面积,计算AIB mRNA的相对量.结果 (1)MTT实验表明,实验组血清对Bel-7402细胞的生长抑制率随血清浓度升高而增加,当血清浓度高达50.0%时培养48 h后细胞生长抑制率为73.14%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).(2)25.0%血清浓度作用下,不同时间段检测细胞培养上清液中ALT、LDH释放率,实验组与对照组差异均无统计学意义(P>0.05).(3)25.0%血清浓度作用24 h后,用RT-PCR法测得实验组血清培养后细胞内ALB mRNA表达明显减少(P<0.01).结论 发生Ⅱ期以上肝性脑病的重型肝炎患者血清对肝细胞的生长有抑制作用,可能通过抑制肝细胞内ALB mRNA的表达使肝细胞的生长受到抑制,但在肝细胞生长过程中对细胞膜无直接破坏作用.     

血清物质对人肝癌Bel-7402细胞存活及白蛋白mRNA表达的影响

目的 研究血清物质对人肝癌Bel-7402细胞生长抑制率及白蛋白(ALB)mRNA表达的影响.方法 用重型肝炎合并Ⅱ期肝性脑病患者血清对Bel-7402细胞进行干预,四氮唑蓝比色分析法(MTT法)染色后测出A值,根据A值计算出细胞生长抑制率.根据细胞培养上清中ALT、乳酸脱氢酶(LDH)释放率推断细胞膜的受损情况.细胞培养24 h后提取细胞内总mRNA,反转录成cDNA,用PCR法扩增得到ALB mRNA的特异电泳带,通过凝胶成像系统,测得电泳带光密度和面积,计算AIB mRNA的相对量.结果 (1)MTT实验表明,实验组血清对Bel-7402细胞的生长抑制率随血清浓度升高而增加,当血清浓度高达50.0%时培养48 h后细胞生长抑制率为73.14%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).(2)25.0%血清浓度作用下,不同时间段检测细胞培养上清液中ALT、LDH释放率,实验组与对照组差异均无统计学意义(P>0.05).(3)25.0%血清浓度作用24 h后,用RT-PCR法测得实验组血清培养后细胞内ALB mRNA表达明显减少(P<0.01).结论 发生Ⅱ期以上肝性脑病的重型肝炎患者血清对肝细胞的生长有抑制作用,可能通过抑制肝细胞内ALB mRNA的表达使肝细胞的生长受到抑制,但在肝细胞生长过程中对细胞膜无直接破坏作用.     

血清物质对人肝癌Bel-7402细胞存活及白蛋白mRNA表达的影响

目的 研究血清物质对人肝癌Bel-7402细胞生长抑制率及白蛋白(ALB)mRNA表达的影响.方法 用重型肝炎合并Ⅱ期肝性脑病患者血清对Bel-7402细胞进行干预,四氮唑蓝比色分析法(MTT法)染色后测出A值,根据A值计算出细胞生长抑制率.根据细胞培养上清中ALT、乳酸脱氢酶(LDH)释放率推断细胞膜的受损情况.细胞培养24 h后提取细胞内总mRNA,反转录成cDNA,用PCR法扩增得到ALB mRNA的特异电泳带,通过凝胶成像系统,测得电泳带光密度和面积,计算AIB mRNA的相对量.结果 (1)MTT实验表明,实验组血清对Bel-7402细胞的生长抑制率随血清浓度升高而增加,当血清浓度高达50.0%时培养48 h后细胞生长抑制率为73.14%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).(2)25.0%血清浓度作用下,不同时间段检测细胞培养上清液中ALT、LDH释放率,实验组与对照组差异均无统计学意义(P>0.05).(3)25.0%血清浓度作用24 h后,用RT-PCR法测得实验组血清培养后细胞内ALB mRNA表达明显减少(P<0.01).结论 发生Ⅱ期以上肝性脑病的重型肝炎患者血清对肝细胞的生长有抑制作用,可能通过抑制肝细胞内ALB mRNA的表达使肝细胞的生长受到抑制,但在肝细胞生长过程中对细胞膜无直接破坏作用.     

视黄酸受体特异性激动剂对脐血T淋巴细胞细胞因子的影响

[目的]研究体外培养中视黄酸受体(RAR)特异性激动剂四氢-四甲基萘丙烯苯甲酸(TTNPB)对脐血T淋巴细胞IFN-γ和IL-4产生的影响,初步探究其作用机制,为脐血运用于今后临床研究奠定基础.[方法]采用体外细胞培养体系,从足月正常分娩新生儿脐血中分离T淋巴细胞,加入不同浓度TTNPB(10-4 mol/L,100 mol/L,10-6 mol/L,10-7 mol/L,10-8 mol/L和空白对照组)体外培养,提取上清液,用EUSA法测定IFN-γ、IL-4的OD值,用单因素方差检验分析各剂量对IFN-γ、IL-4产生的影响.[结果]TTNPB在10-4 mol/L,IFN-γ的浓度为(12.11±5.57)pg/ml(P<0.05),IL-4的浓度为(2.937 1±0.076 6)pg/ml(P<0.05).[结论]TTNPB在10-4 mol/L下对IFN-γ有明显抑制作用,对IL-4有明显促进作用,这种调节可能是通过RAR选径起作用.     

用脱纤维人血水代替冻溶羊血培养淋病奈瑟菌现场效果考核

[目的] 为分离培养N.gonrrhoeae(淋病奈瑟菌)寻找一条便捷的血源途径.[方法] 用脱纤维巧克力人血水和冻溶羊血制成两种巧克力培养基分别对100例可疑淋病标本进行分离培养,对两者在淋病奈瑟菌阳性培养率,生长情况及生物学状态进行比较.[结果] 淋病奈瑟菌在两种培养基上生长情况及生物学状态基本一致,阳检率无明显差异:人血巧克力培养基阳性率33%,冻溶羊血培养基上阳性率为34%(P＞0.05).[结论] 人血水巧克力培养基可作为淋病奈瑟菌分离培养.     

The effect of ascorbic acid deficiency on leukocyte phagocytosis and killing of actinomyces viscosus

The ascorbic acid content of guinea pig leukocytes is reduced by a factor of 16:1 between normal and scorbutic guinea pigs. Ascorbic acid deficiencies do not appear to affect phagocytic activity but do change leukocyte morphology. A deficiency of this vitamin appears to significantly interfere with the in vitro bactericidal effectiveness of circulating leukocytes against ingested, cell-associated, and extracellular bacterial cells of the oral pathogen, Actinomyces viscosus. Leukocytes from scorbutic guinea pigs killed 13% of ingested and cell-associated Actinomyces viscosus compared to 83% killed by normal leukocytes by both acridine orange staining and viable count. Degranulation resulted in extracellular killing in normal but not scorbutic leukocytes. This decreased bactericidal activity can be reversed by adding supplements of the vitamin to the diet of scorbutic animals. Chemotactic responses were much lower in vivo and absent in vitro in scorbutic leukocytes. The acridine orange staining technique is an excellent indicator of leukocyte health. This study supports the important role for ascorbic acid in leukocyte function and also discusses its probable protective and bactericidal activities related to oral pathogens.     

霍乱弧菌多重PCR检测方法的建立及优化

[目的]建立一种快速检测样品中霍乱弧菌的多重PCR方法,优化霍乱弧菌多重PCR的反应体系和循环参数.[方法]根据霍乱毒素ctxA、toxR、O139群特异性基因、O1群特异性基因序列,设计特异性引物,对引物浓度、PCR缓冲液的浓度、Mg2+浓度、退火温度及其延伸时闻等条件进行优化.[结果]4对引物在不同血清型霍乱弧菌DNA模板中能特异扩增出不同的条带.在同一反应体系中,较低的延伸温度可以提高霍乱弧菌多重PCR检测的灵敏度.[结论]通过对霍乱毒素多重PCR反应体系不同因素的优化,建立了稳定可靠的霍乱弧菌多重PCR检测平台.     

血清铁蛋白纸片测定法与常规方法的比较

目的　建立早期、敏感、准确的铁评价方法。方法　采用常规方法与滤纸斑点法(纸片法 )对 41例健康成人血清铁蛋白含量进行对比研究。结果　两方法所得结果的几何均数分别为 32 .2 μg/L和 30 .5μg/L,差异无显著性 (P>0 .0 5) ;在铁蛋白含量为 2 .5～ 371 .6μg/L范围内呈高度相关 (r=0 .999,P=0 .0 0 0 1 ) ;纸片法的测定结果与常规法的相符程度高 ;以血清铁蛋白<1 5μg/L为诊断标准 ,纸片法对铁缺乏诊断的敏感性 (sensitivity)为 94.6% ,特异性 (specificity)达 1 0 0 %。结论　纸片法不需冷冻设备 ,血样可在室温下保存与运送 ,血清用量少 ,毛细血管采血即可满足要求 ,具有简便、可靠、实用等优点 ,便于血清铁蛋白在现场铁营养状况评价中的应用。     

金雀异黄素对U251MG的抑制作用及对癌基因表达的影响

[目的]探讨金雀异黄素(Genistein)对胶质瘤细胞株U251MG增殖的影响及可能的作用机制。[方法]用MTT比色法观察不同浓度Genistein在不同作用时间下对U251MG细胞增殖的影响,并通过流式细胞仪和免疫细胞化学染色检测p53(突变型)、c-erbB1、c-myc、cyclinD1蛋白表达。[结果]当Genistein在达到一定浓度或(和)一定时间后,对U251MG细胞增殖均有不同程度的抑制作用,且呈时间剂量依赖性。U251MG细胞经Genistein作用48h后,p53(突变型)、c-myc基因蛋白表达均较对照组明显下降(F=25.766,P﹤0.01;F=22.974,P﹤0.01),且呈剂量依赖性,而c-erbB1、cyclinD1基因蛋白表达无明显变化(F=0.984,P﹥0.05;F=2.416,P﹥0.05)。[结论]Genistein对U251MG细胞的增殖有明显的抑制作用,其抗肿瘤的机制可能与p53(突变型)和c-myc蛋白表达降低有关。     

21三体综合征产前基因诊断的研究

[目的]建立一种准确、快速、简便的21三体综合征即唐氏综合征产前诊断技术,探讨应用串联重复序列信息进行21三体定性诊断的可行性。[方法]抽取109例高风险孕妇羊水,提取DNA,PCR扩增特异性STR片段,并对其进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染分析,通过电泳带型特征诊断21三体。同时选择17号染色体D17S953作为质控,排除羊水被母血污染造成对结果的影响。[结果]发现异常5例,其中D21S11异常2例,D21S1270异常3例。[结论]基于短串联重复序列（short tandem repeat,STR）的聚合酶链反应技术是一种简单、快速和可靠的21三体定性基因诊断技术,可应用于21三体的基因诊断和遗传筛查。     

Incorporating method recovery uncertainties in stochastic estimates of raw water protozoan concentrations for QMRA

The impact of incorporating recovery data on protozoan concentration estimates was investigated for Cryptosporidium and Giardia using a large dataset (n=99) of [oo]cyst assay results with paired recovery estimates. Stochastic [oo]cyst concentration was estimated using three approaches: I-no availability/consideration of recovery, II-limited recovery data, where sample recovery was considered as an independent random variable, and III-every [oo]cyst assay result was adjusted for a concurrently derived recovery estimate. Critically, Approach I underestimated [oo]cyst concentrations by about 100% compared to Approaches II and III, which were similar. The impact of dataset size on statistical uncertainty about the concentration estimate for Approach II was investigated; little improvement in parameter uncertainty was achieved beyond n=20. It is suggested that recovery data be incorporated into source water concentration estimates, especially when used to infer health risks to consumers, so as not to underestimate the risk. Where none is available, conservatively low recoveries should be assumed. When designing monitoring programmes, recovery data should be collected as a pair with [oo]cyst count data for an initial period at least, so that site-specific relationships between those parameters may be ascertained and incorporated into source water concentration estimates.     

辐射羊膜的遗传毒性研究

[目的]研究辐射羊膜的遗传毒性。[方法]采用Ames试验、小鼠骨髓微核试验和CHL细胞染色体畸变试验综合评价辐射羊膜的遗传毒性。以辐射羊膜的浸提液进行试验,最高剂量均采用6cm^2/ml。[结果]三项试验均为阴性结果。[结论]辐射羊膜无遗传毒性。     

神经肽Y对大鼠心肌细胞肌浆网钙的影响

目的观察神经肽Y（NPY）刺激对大鼠心肌细胞肌浆网（Sarcoplasmic Reticulum,SR）内钙含量的影响。方法用100nmol·L^-1NPY刺激Sprague-Dawley乳鼠心肌细胞24h,用荧光染料Fluo-4AM负载胞浆钙,并用咖啡因诱导的胞浆钙瞬变（Caffeine-induced Ca2＋ transient,CCT）幅度来反映肌浆网内总钙负荷;用荧光染料Fluo-5NAM直接标记心肌细胞肌浆网内游离钙离子。所有钙影像均由LeicaSP2激光共聚焦显微镜记录。结果经100nmol·L^-1NPY刺激24h后,心肌细胞肌浆网内游离钙含量明显低于对照组（p〈0.01）;咖啡因诱导下钙瞬变幅度也低于对照组。结论长时间的NPY刺激可导致肌浆网内钙含量减少。     

艾滋病高危人群中传染性疾病检测情况分析

[目的]了解艾滋病高危人群中HIV、HBV、HCV和TP4种病原体的感染状况。[方法]于泰安市内采集4类高危人群血清，通过酶联免疫吸附实验、明肢颗粒凝集实验和肢体金实验来检测血清中的这4种传染病原体的相应抗体。[结果]在艾滋病高危人群2257例标本中，检测出HIV感染者0例；其他3种病原体在高危人群中的感染状况分别是：HCV感染者206例（9．13％），乙肝携带者174例（7．71％），梅毒感染者70例（3．10％）。[结论]在本市的艾滋病高危人群中HCV、HBV和TP都有较高的感染率。     

维生素C和谷胱甘肽对离体肺泡巨噬细胞超微弱发光的影响

目的　研究外源维生素 C(VC)和谷胱甘肽 (GSH)对家兔离体肺泡巨噬细胞(AM)超微弱 (自主 )发光的影响。方法　将 AM悬浮在含有 VC或 GSH的 DMEM培养介质中 ,放入一特制恒温箱的培养盒内 ,连续通入不同浓度的氧气 ,用发光仪检测培养 AM的超微弱发光。结果　浓度超过 0 .3mmol/L的 VC能明显增强有氧培养细胞超微弱发光和加速细胞死亡 ,对无氧培养细胞的影响不明显。低浓度 (0 .0 3mmol/L) VC与 GSH相同 ,能降低由高浓度 (99.1 % )氧暴露引起的细胞发光增强。结论　细胞在含氧气体中的自发氧化是产生超微弱发光的重要原因 ;高浓度 VC能促进离体细胞氧化损伤 ,GSH则有抗氧化作用。