妊娠期肝内胆汁淤积症胎盘OATP1A2和OATP1B3的表达及其多态性研究

目的:探讨胎盘OATP1A2和OATP1B3的表达水平及OATP1B3基因多态性与妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)的关系。方法:收集42例ICP胎盘和42例正常妊娠胎盘标本及母体静脉血,RT-q PCR和Western blot法分析OATP1A2和OATP1B3的mRNA及蛋白水平,测序法分析OATP1B3 c.334TG和c.699GA多态性位点基因型。结果:ICP胎盘中OATP1A2和OATP1B3的mRNA及蛋白表达水平均显著低于正常妊娠组(P0.05)。ICP组和正常妊娠组中,OATP1B3 c.334CT多态性纯合突变频率分别为50.0%和47.6%(P0.05),c.699GA多态性纯合突变频率分别为54.8%和45.2%(P0.05);两组的两种多态性的突变等位基因频率比较,差异均无统计学意义(70.2%vs 70.2%和73.8%vs 67.9%,P0.05)。ICP组OATP1B3不同基因型对其mRNA及蛋白的表达无显著影响(P0.05)。结论:ICP胎盘中OATP1A2和OATP1B3表达下调可能与ICP高胆汁酸的发生有关,而OATP1B3 c.334TG和c.699GA多态性不影响OATP1B3表达。     

妊娠期肝内胆汁淤积症孕妇胎盘合体滋养细胞OATP8基因表达及意义的研究

目的:探讨有机阴离子转运多肽8(OATP8)在妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)孕妇胎盘组织中的表达及其意义。方法:研究对象分为ICP轻度组(8例)、ICP重度组(8例)和正常对照组(8例)。采用免疫组化链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(SABC)法检测胎盘组织中OATP8蛋白定位表达;采用逆转录(RT)-PCR技术检测OATP8mRNA表达;蛋白印迹法检测OATP8蛋白表达水平。结果:①OATP8蛋白定位在胎盘合体滋养细胞膜上。②3组孕妇胎盘组织中OATP8mRNA的表达:ICP重度组明显高于对照组和ICP轻度组,差异均有统计学意义(P<0.05),ICP轻度组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);③3组孕妇胎盘组织中OATP8蛋白的表达:ICP重度组高于轻度组,差异有统计学意义(P<0.05),ICP轻度组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:ICP孕妇胎盘合体滋养细胞OATP8基因表达水平上调,可能有助于胎盘对胆汁酸或胆红素的清除作用。     

胎盘胆盐输出泵蛋白的表达及其与妊娠期肝内胆汁淤积症的关系

目的：探讨胎盘组织中胆盐输出泵（bile salt export pump,BSEP）的表达水平及其与妊娠期肝内胆汁淤积症（intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP）的关系。方法：选取2012年2月—2013年8月在苏州市立医院本部产科住院分娩的ICP孕妇30例作为研究组（ICP组）,同期分娩的健康妊娠晚期孕妇30例作为对照组,采用免疫组化（SP）法和蛋白质印迹（western blotting）法测定2组孕妇胎盘组织中BSEP蛋白的表达。结果：BSEP蛋白表达于胎盘滋养细胞的细胞质中。ICP患者胎盘组织BSEP的表达低于正常胎盘组织,差异有统计学意义[（0.197 7±0.111 8） vs. （0.616 0±0.384 9）,P＜0.001]。结论：BSEP蛋白在胎盘组织中表达的降低可能与ICP有关。     

胎盘MDR3的表达及其与妊娠期肝内胆汁淤积症关系的研究

目的探讨妊娠期肝内胆汁淤积症(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)胎盘中胆盐载体磷脂输出泵(multidrug resistance p-plycoprotein,MDR3)的表达,以及母、胎血中总胆汁酸(total bile acids,TBA)和甘胆酸(cholylglycine,CG)水平的变化;进一步分析胎盘胆盐载体对胆汁酸水平的调节作用及其与ICP的关系。方法ICP(ICP组)及正常妊娠(对照组)孕妇各20例。母血、胎儿脐静脉血中TBA、CG水平的测定分别采用放射免疫法和速率法;胎盘组织中胆盐载体MDR3 mRNA的表达采用荧光定量PCR法。结果(1)ICP组母血、脐血中的TBA、CG水平均高于对照组(P<0.05)。ICP组母血TBA水平高于脐血(25.8±16.6和8.6±5.5)μmol/L,CG水平高于脐血(3416.1±1986.0和821.8±673.2)μg/dL(P<0.05);对照组母血和脐血TBA水平(3.4±2.5和4.4±3.3)μmol/L,CG水平(342.7±234.9和309.3±145.2)μg/dL比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)ICP和正常妊娠各期胎盘组织中均有MDR3 mRNA的表达。ICP组MDR3 mRNA表达量低于对照组(0.80±0.67和162.63±334.33)拷贝/ng(P<0.05)。(3)ICP组、对照组胎盘中MDR3 mRNA表达量与母血、脐血中TBA和CG水平均无相关性(r=-0.60~0.165,P>0.05)。结论ICP胎盘胆盐载体MDR3 mRNA表达降低,可能引起ICP胎盘对胆汁酸的转运障碍、胎儿体内胆汁淤积,可能是引起ICP胎儿窘迫的原因。     

人类白细胞抗原G蛋白在胎盘组织中的表达及其基因多态性与妊娠肝内胆汁淤积症发病的关系

目的探讨人类白细胞抗原G（HLA-G）蛋白在胎盘组织中的表达及其基因多态性与妊娠肝内胆汁淤积症（ICP）发病的关系。方法选取2004年4月至10月间,在四川大学华西第二医院产科及四川省妇幼保健院产科行剖宫产分娩的晚孕妇女60例,其中ICP孕妇30例（ICP组）,根据妊娠期是否接受过地塞米松治疗又将ICP组分为治疗组（15例）和非治疗组（10例,因未治病例少）;正常晚孕妇女30例为对照（根据检测指标不同分为对照1组,15例;对照2组,30例）。采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接（SP）法,检测HLA-G蛋白在对照1组、治疗组及非治疗组孕妇胎盘组织中的表达情况（以平均吸光度值表示）;同时采用聚合酶链反应-序列特异性引物（PCR-SSP）法,检测HLA-G基因外显子8上14bp缺失多态性在ICP组及对照2组孕妇外周血及新生儿脐血中的分布。结果（1）非治疗组胎盘组织中,HLA-G蛋白的平均吸光度值为56±8,明显低于对照1组的70±10及治疗组的66±9,分别比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）;治疗组与对照1组胎盘组织中HLA-G蛋白的平均吸光度值比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。（2）HLA-G基因外显子8上14bp缺失多态性检测结果显示,对照2组及ICP组母儿的等位基因频率及基因型频率比较,差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论ICP患者胎盘组织中HLA-G蛋白表达下调可能是ICP发病机制之一;地塞米松对胎盘组织中HLA-G蛋白的表达具有上调作用;HLA-G基因外显子8上14bp缺失多态性可能与ICP的发病无关。     

SAMe对雌激素诱导的肝内胆汁淤积症孕鼠的胎盘多药耐药相关蛋白-谷胱甘肽共转运体系的影响

目的:探讨S-腺苷蛋氨酸(SAMe)对雌激素诱导的肝内胆汁淤积症(ICP)孕鼠的胎盘多药耐药相关蛋白(MRP)-谷胱甘肽(GSH)共转运体系的影响。方法:将妊娠第13天的大鼠随机分成对照组(孕15～19天腹腔注射生理盐水)、EE(孕15～19天皮下注射17-α-乙炔雌二醇溶液)组、EE+SAMe组(孕15～19天皮下注射17-α-乙炔雌二醇溶液,孕17～19天腹腔注射SAMe溶液)。17-α-乙炔雌二醇诱导孕鼠发生肝内胆汁淤积,建立ICP模型,测定3组血清总胆酸(TBA)、甘胆酸(CG)、血清丙氨酸转氨酶(ALT)、门冬氨酸转氨酶(AST);ELISA检测GSH,逆转录实时荧光定量PCR和免疫组化法检测MRP1、MRP2、MRP5的表达。结果:EE组的TBA、CG、ALT、AST水平显著增高,胚胎存活率显著降低(P0.001);经SAMe治疗,TBA、CG、ALT、AST水平显著下降,增加了胚胎存活率(P0.01)。EE组胎盘的MRP1 mRNA和蛋白表达显著上调(P0.05),而胎盘MRP2、MRP5 mRNA和蛋白的表达显著下调(P0.01),GSH显著下降(P0.001);经SAMe治疗,胎盘MRP1 mRNA和蛋白表达显著下调(P0.05),胎盘MRP2、MRP5 mRNA和蛋白的表达显著上调(P0.05),GSH显著上升。结论:胎盘存在MRP-GSH共转运体系;SAMe可通过调节胎盘MRP-GSH共转运体系影响胆汁酸的转运,从而治疗大鼠妊娠期ICP。     

宫颈扩张过程中单核细胞趋化蛋白-1表达的意义

目的:观察单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)在分娩期宫颈扩张不同程度时母血、子宫肌层组织和胎盘组织中的表达,探讨MCP-1在宫颈扩张过程中的作用。方法:选择临产后急诊行剖宫产终止妊娠的初产妇42例,根据术前30min宫颈扩张程度分为A组10例(宫颈口开大<2cm),B组10例(宫颈口开大2~4cm),C组10例(宫颈口开大4~6cm),D组12例(宫颈口开大>6cm)。酶联免疫吸附法测定产妇血清中MCP-1水平;用半定量RT-PCR法测定子宫下段肌层及胎盘组织中MCP-1mRNA的表达。结果:C组和D组血清MCP-1水平和组织中MCP-1mRNA含量显著高于A组和B组(P<0.01),B组组织中MCP-1mRNA含量显著高于A组(P<0.05);4组产妇MCP-1的表达量与宫颈扩张程度呈正相关。结论:MCP-1在宫颈扩张过程中表达增加,在宫颈扩张过程中起重要作用。     

胎盘法尼醇X受体的表达及其与妊娠期肝内胆汁淤积症关系的研究

目的:探讨法尼醇X受体(FXR)在正常晚孕胎盘和妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)胎盘的表达,及其与母血、脐血总胆汁酸(TBA)水平的关系,分析胎盘FXR在ICP病理机制中的作用.方法:收集ICP患者(ICP组)及正常晚孕妇女(对照组)胎盘组织及母血、脐血各33例,并将ICP患者根据母血血清TBA是否≥40 μmoL/L将ICP组分为轻度ICP组和重度ICP组.并测定母血、脐血TBA水平和胎盘组织中FXR mRNA的相对表达量.结果:①羊水胎粪污染的发生率:ICP组羊水污染发生率高于对照组(χ~2:7.543,P=0.013);重度ICP组高于轻度ICP组(χ~2=7.637,P=0.013);②胎盘组织中FXR mRNA的表达情况:ICP组胎盘FXR mRNA表达量高于对照组(z=-2.391,P=0.017);重度ICP组胎盘FXR mRNA表达量高于轻度ICP组(z=-2.391,P=0.017);③ICP组胎盘FXR mRNA表达量与母血、脐血TBA呈正相关(r_s=0.348,P=0.047;r_s=0.284,P=0.027);对照组胎盘FXR mRNA表达量与母血、脐静脉血TBA无相关性(r_s=-0.068,P=0.716;r_s=0.010,P=0.959).结论:ICP时增高的胆汁酸水平上调胎盘FXRmRNA的表达,胎盘FXR表达增加可能为ICP时胎盘的一种对抗胎儿胆汁淤积的保护性机制.     

胎盘组织COMT的表达及其与子痫前期发病的关系

目的：检测子痫前期患者胎盘组织儿茶酚氧位甲基转移酶（COMT）的表达,探讨其与子痫前期发病的关系.方法：收集15例子痫前期患者（子痫前期组）及15例健康妊娠妇女（对照组）的临床资料及产后胎盘组织,采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）技术检测2组妊娠妇女胎盘组织COMT mRNA的水平.结果：子痫前期组胎盘组织COMT mRNA水平明显低于对照组（P＜0.001）,且胎盘组织COMT mRNA水平与血清尿酸、24 h尿蛋白定量、平均动脉压呈负相关（均P＜0.001）.结论：COMT在子痫前期妊娠妇女胎盘组织中呈低表达,可能与子痫前期的发病有关.     

妊娠肝内胆汁淤积症孕鼠肝细胞中水通道蛋白8的表达

目的 探讨孕鼠妊娠肝内胆汁淤积症(ICP)时其肝细胞中水通道蛋白8(AQP8)蛋白及mRNA的表达情况.方法 将20只孕鼠(孕15 d)分成ICP组和对照组,每组10只.ICP组孕鼠皮下注射17-α-乙炔雌二醇2.5 mg·kg-1·d-1,连续5 d,建立ICP模型,对照组孕鼠皮下注射1,2-丙二醇2.5 ml·kg-1·d-1,连续5 d.采用免疫组化法检测两组孕鼠肝细胞AQP8的蛋白相对表达量和定位;RT-PCR技术检测肝细胞AQP8的mRNA相对表达量.结果 孕鼠ICP模型成功建立.两组孕鼠肝细胞均有AQP8蛋白和mRNA的表达.ICP组孕鼠肝细胞AQP8的蛋白相对表达量为10.8±2.4,对照组为17.1±2.2,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);ICP组孕鼠肝细胞AQP8的mRNA相对表达量为1.07±0.11,对照组为0.80±0.11,两组比较,差异也有统计学意义(P＜0.05).结论 ICP孕鼠肝细胞中AQP8的蛋白表达下调,mRNA表达上调,可能与ICP发病有关.     

Alteration in placental expression of bile acids transporters OATP1A2, OATP1B1, OATP1B3 in intrahepatic cholestasis of pregnancy

Purpose

To investigate whether bile acids transporters organic anion transporting polypeptides 1A2 (OATP1A2), organic anion transporting polypeptides 1B1 (OATP1B1), organic anion transporting polypeptides 1B3 (OATP1B3) were differently expressed in placenta of intrahepatic cholestasis of pregnancy (ICP).

Methods

Thirty pregnant women with ICP were recruited and 30 normal pregnant women served as control. The expression of mRNA and protein were analyzed by real-time PCR and Western blotting. The localization of OATP1A2, OATP1B1, OATP1B3 were investigated by immunohistochemistry.

Results

The expression of mRNA and protein of both OATP1A2 and OATP1B3 were significantly lower in ICP placenta than normal placenta (P?Conclusions The expression of OATP1A2 and OATP1B3 in placenta decreased in ICP. The down-regulation of these transporters may be involved in the pathophysiology of ICP.     

"GT-4A导乐分娩镇痛工作站"的临床效果观察

目的探讨不同分娩镇痛方法的临床效果和对产妇及新生儿的影响.方法将130例产妇随机分为三组A组(50例)为使用"GT-4A导乐分娩镇痛工作站"进行镇痛;B组(40例)为吸入含50%笑气与50%氧气的混合气体镇痛;C组(40例)为空白对照.观察镇痛效果、产程时间、分娩方式、产后出血等.结果A组、B组均有镇痛作用,与C组比较差异均有统计学意义(P＜0.01),A组镇痛效果好于B组,差异有统计学意义(P＜0.01).A组活跃期为[(206.7±15.4)min]、第二产程[(28.8±2.4)min],均明显短于B组[(254.7±13.9)min和(49.8±3.8)min]、C组[(259.4±14.8)和(50.4±4.4)min](P值均＜0.05),A组总产程(654.2±35.1)min短于C组(759.5±25.7)min(P＜0.05).结论"GT-4A导乐分娩镇痛工作站"具有良好的镇痛效果,对母儿均无不良影响,操作简单方便,产妇乐于接受,不失为一种理想的分娩镇痛方法,适于在基层单位推广使用.     

Nitrofurantoin transport by placental choriocarcinoma JAr cells: involvement of BCRP, OATP2B1 and other MDR transporters

Objective  

To determine the role of BCRP in nitrofurantoin (NF) transport in JAr cells and the possible contribution of OATP2B1, P-gp and MRPs to this transport.     

八聚体结合转录因子4与蛋白激酶B1基因在卵巢浆液性肿瘤组织表达及耐药相关性研究

目的 研究八聚体结合转录因子4（OCT4）和蛋白激酶B1（AKT1）基因在卵巢浆液性肿瘤组织中的表达,探讨两者之间相关性及在化疗耐药中发挥的作用。 方法 全部病例来自中国医科大学附属盛京医院2004年1月至2010年10月。采用免疫组织化学SP法对67例卵巢浆液性腺癌（化疗耐药30例,化疗敏感37例）、10例卵巢交界性浆液性囊腺瘤、10例卵巢良性浆液性囊腺瘤和10例正常卵巢组织中OCT4和AKT1的表达情况进行检测。 结果 OCT4的阳性表达率在卵巢浆液性腺癌、卵巢交界性浆液性囊腺瘤、卵巢良性浆液性囊腺瘤和正常卵巢组织中依次降低,差异具有统计学意义（P=0.002）;在耐药组和敏感组的阳性表达率分别为83.33%和45.95%,差异有统计学意义（P=0.002）。AKT1蛋白在正常组、良性组、交界性组和恶性组的阳性表达率分别为0、40.00%、70.00%、62.69%,差异具有统计学意义（P=0.001）;在耐药组和敏感组的阳性表达率分别为76.67%和51.35%, 两组比较,差异有统计学意义（P=0.033）。OCT4蛋白与卵巢浆液性癌临床病理因素无关,AKT1蛋白与卵巢浆液性癌的临床分期呈正相关（P<0.05）。OCT4与AKT1蛋白在耐药组中呈正相关（r=0.388,P=0.034）;在敏感组无明显相关性（r=0.246,P=0.142）。     

Prenatal diagnosis and molecular cytogenetic characterization of an interstitial deletion of 18q12.1-q12.3 encompassing DTNA,CELF4 and SETBP1

Objective

We present prenatal diagnosis and molecular cytogenetic characterization of an interstitial deletion of 18q12.1-q12.3.

SDF-1/CXCR4对卵巢上皮性癌细胞增殖和侵袭的影响

目的:研究SDF-1/CXCR4在卵巢癌细胞生物学活性中的作用。方法:用RT-PCR方法检测卵巢癌细胞株SW626及Anglne中的SDF-1和CXCR4的表达。细胞经外源性SDF-1或者抗CXCR4单克隆抗体干预后,用MTT法检测细胞增殖,PI测细胞凋亡,Annexin-V/PI法检测细胞早期凋亡,Transwell小室检测细胞的迁移侵袭活性。结果:两株卵巢癌细胞株中,SW626细胞既表达SDF-1又表达CXCR4,Anglne细胞则两者均不表达。在SW626细胞中,SDF-1作用于无血清状态下培养的细胞(吸光度A值为0.911±0.01),与对照组(吸光度A值为0.506±0.01)相比,差异有统计学意义(P<0.01),而加入抗CXCR4单克隆抗体作用后(10μg/ml A值为0.725±0.01,20μg/ml A值为0.650±0.02),与SDF-1组相比,差异均有统计学意义(分别为P<0.05和P<0.01);抗CXCR4单克隆抗体作用于无血清状态下培养的细胞(10μg/ml A值为0.655±0.11和20μg/ml A值为0.520±0.04),与对照组(A值为0.724±0.03)相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。加入外源性SDF-1后,SW626细胞在无血清状态下的早期凋亡数为15.6%,相对于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。抗CXCR4单克隆抗体可增加SW626细胞中的PI阳性细胞数(P<0.01)。并且,与对照组相比,SDF-1促进SW626细胞的迁移和侵袭能力增强(P<0.01),而此活性可被抗CXCR4单克隆抗体阻断。结论:SDF-1/CXCR4可能通过促进细胞增殖、迁移、侵袭及抑制其凋亡,使卵巢癌细胞获得进展。     

UGT1A1基因启动子多态性与伊立替康化疗毒性作用的关系

目的 初步了解宫颈癌和卵巢癌患者血中尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A1( UGT1 A1)基因启动子的多态性情况,并研究其多态性与伊立替康化疗的毒性作用(延迟性腹泻、中性粒细胞减少)的关系.方法 收集64例使用伊立替康联合顺铂方案化疗的宫颈癌和卵巢癌患者的全血标本,提取基因组DNA,PCR扩增UGT1A1基因启动子,用毛细管电泳等位基因片段分析方法分析UGT1A1基因启动子的多态性,并与化疗毒性作用进行相关性分析.结果 64例患者中UGT1 A1基因启动子的野生纯合型(TA 6/6基因型)最为常见,共44例,占69％ (44/64);其次为突变杂合型(TA 6/7基因型),共17例,占27％ (17/64);突变纯合型(TA 7/7基因型)仅3例,占5％(3/64).UGT1A1基因启动子基因型是发生延迟性腹泻的独立影响因素(OR=4.228,95％ CI为1.065～16.785,P=0.040),但不是中性粒细胞减少发生的独立影响因素(OR=3.659,95％ CI为0.911～14.700,P=0.068);TA 6/7和TA 7/7基因型比TA 6/6基因型患者发生中性粒细胞减少、延迟性腹泻的风险高(P均=0.001).结论 在宫颈癌、卵巢癌患者中,UGT1 A1基因启动子以TA 6/6基因型较常见.UGT1A1基因启动子多态性是伊立替康所致延迟性腹泻的独立影响因素,TA 6/7和TA 7/7基因型患者发生延迟性腹泻的风险高于TA 6/6基因型.