肌球蛋白轻链激酶的变化影响严重创伤后急性肺损伤的发展

以往研究报道,肌球蛋白轻链激酶(MYLK)单核苷酸多态性表达是脓毒症诱发急性肺损伤(ALI)和哮喘的危险因素之一。MYLK能对炎症过程中(如细胞凋亡、血管通透性改变和白细胞渗出等)复杂的蛋白亚型进行编码。美国科研人员研究了严重创伤引起ALI发展过程中MYLK的变化。研究共纳入273例严重创伤患者(创伤严重度评分≥16分),由3名临床医生查阅所有X线胸片和临床资料,将ALI归为一类。MYLK中总共有17个标记单核苷酸多态性属于基因型,逐个分析单核苷酸多态性水平,采用复杂的逻辑回归模型调节基线变量,进行2~5个单核苷酸多态性单倍型分析。在创伤发生5 d内,273例受试者中有91例符合ALI标准(33%)。3个编码单核苷酸多态性分别与ALI相关,21位组氨酸(CC基因,比值比=1.87,95%可信区间(CI)1.06~3.33,P=0.022)和147位丝氨酸(TT,比值比=2.13,95%CI 1.14~4.10,P=0.011)频率高于335位苏氨酸(CC基因,比值比=0.42,95%CI 0.20~0.85,P=0.010)。这些关联在遭受创伤的非裔美国人身上更加明显。多元统计分析显示,每个ALI MYLK单...     

肌球蛋白轻链激酶与冠心病的相关性研究

目的:探讨肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)水平与冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病,CHD)间的相关性。方法:将72例行冠状动脉造影术的患者根据造影结果分为对照组及CHD组,CHD组患者根据病情再分为急性冠脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)和稳定性CHD 2个亚组。采集对照组患者入院24 h内及造影后24 h内血样和CHD组患者入院24 h内、造影后24 h内及入院第5天血样,应用双抗体夹心ABC-ELISA法测定其血清MLCK水平。结果:血清MLCK水平与血脂、血糖水平相关,且对CHD有一定诊断价值;院内发生不良事件的CHD患者血清MLCK水平显著升高,且ACS患者血清MLCK水平高于稳定性CHD组,而后者高于对照组(P均<0.05)。同时,血清MLCK与高敏C反应蛋白(hsCRP)间呈显著正相关。结论:血清MLCK水平可能与炎症反应及动脉斑块的不稳定性相关,对CHD的诊断和院内预后评估有一定价值。     

肌球蛋白轻链激酶在支气管哮喘发病中的研究进展

肌球蛋白轻链激酶(MLCK)是最早被发现的作用于肌细胞的蛋白激酶之一,其广泛参与了生物乃至人体疾病发生发展的各个方面,在支气管哮喘的发病中也扮演重要角色。本文通过对MLCK的结构及生物学功能、MLCK在临床中的意义、MLCK与哮喘发病的相关性、MLCK与哮喘防治及其抑制剂等方面的研究,系统的阐述MLCK在支气管疾病研究的进展。并就MLCK在临床方面的相关研究、结构、生物学功能及哮喘之间的关系作一综述。     

烫伤后微血管通透性升高与肌球蛋白轻链激酶有关

以往的研究证明，肌球蛋白轻链磷酸化致使血管内皮细胞收缩可引起微血管通透性增高。肌球蛋白轻链激酶在肌球蛋白轻链磷酸化过程中起关键作用。最近国外医学人员研究了烫伤后血管内皮细胞屏障受损时肌球蛋白轻链激酶的作用。肌球蛋白轻链激酶-210（MLCK-210）主要表达于血管内皮细胞，科研人员采用敲除MLCK-210基因的小鼠造成25％总体表面积（TBSA）Ⅲ度烫伤模型。     

维生素E对动脉粥样硬化兔动脉肌球蛋白轻链激酶活性及内膜通透性的影响

目的 :探讨维生素 E(Vit E)对动脉粥样硬化兔动脉肌球蛋白轻链激酶 (ML CK)活性及内膜通透性变化的影响。方法 :复制兔动脉粥样硬化模型 ,用γ 32 P掺入法检测动脉 ML CK活性 ,免疫荧光检测内膜通透性 ,同时用苏木精伊红 (HE)染色观察动脉壁的形态结构。结果 :在喂饲胆固醇膳食 4周的动物组 ,动脉 ML CK活性与正常对照组比较显著升高 (P<0 .0 5 ) ;但在喂饲胆固醇膳食 12周或同时添加 Vit E后 ,动脉 ML CK活性与正常对照组比较升高不明显 (P>0 .0 5 )。荧光显微镜下观察显示 ,兔动脉内膜通透性在喂饲胆固醇膳食后 4周有所增加 ,12周后显著增加 ;12周组膳食中同时加 Vit E后 ,通透性有所下降。结论 :在动脉粥样硬化早期 ,内膜屏障完整性的改变可能与 ML CK活性增强有关 ,Vit E可能是降低动脉内膜 ML CK活性的因素 ,并能降低动脉粥样硬化模型兔动脉内膜通透性。     

Rho／Rho激酶系统在缺血性脑血管病中的作用

Rho作为Ras同源物于1985年首先被克隆出来，此后的研究发现Rho作为信号转导调节分子联系细胞表面受体与肌动蛋白细胞骨架，在细胞代谢过程中发挥重要作用。近年来，越来越多的研究发现Rho／Rho激酶系统在多种脑血管意外的发生发展中扮演了重要的角色，也成为脑血管病药物治疗的新靶点。     

非钙依赖性调节肌球蛋白活性对维持平滑肌张力的影响

目的：揭示肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase，MLCK)的一个活性片段对肌球蛋白功能的非钙依赖性调节作用，进一步完善平滑肌收缩的非钙依赖性调节机制研究，并为平滑肌系统疾病的治疗以及新药开发提供理论基础。方法：实验于2004-01／05在大连医科大学生化药理实验室完成。用胰蛋白酶(trypsin)水解MLCK，再经离子交换层析分离纯化而获得MLCK的活性片段(myosin light chain kinase fragment,MLCKF.61 ku)；用western blot检测MLCKF与完整MLCK的同源性：用SDS—PAGE及Scoin lmage扫描软件检测肌球蛋白轻链的磷酸化程度；用分光光度法测定肌球蛋白Mg^2 —ATP酶的活性。结果：在无Ca^2 ／CaM条件下，61 ku MLCKF能轻度磷酸化20ku肌球蛋白轻链，并提高肌球蛋白Mg^2 -ATP酶活性；其磷酸化效力强于无Ca^2 ／CaM时MLCK的磷酸化效力．但弱于有Ca^2 ／CaM时MLCK的磷酸化效力，且持续时间长，较稳定，不易被MLCK抑制剂ML-9抑制结论：MLCKF能以非钙依赖性方式轻度磷酸化肌球蛋白轻链．并提高肌球蛋白Mg^2 -ATP酶活性，对低钙时平滑肌张力的维持可能起一定作用。     

原肌球蛋白、丙酮酸激酶在急性早幼粒细胞白血病耐药细胞中表达上调

目的应用蛋白质组学方法筛选人急性早幼粒细胞白血病（APL）维甲酸敏感细胞株（NB4细胞株）和维甲酸耐药细胞株（NB4-R1细胞株）的耐药相关蛋白。方法利用双向凝胶电泳技术检测，比较NB4和NB4-R1细胞株的总蛋白，建立二维凝胶电泳（two-dimensional gel ectmphoresis，2-DE）图谱。从多个差异蛋白质点中选择出2个在NB4-R1细胞株中表达明显上调的蛋白质点进行MALDI-TOF-MS生物质谱分析，并用Mascot软件在SwissProt和NCBInr数据库中进行同源比较和分析鉴定。结果确定表达明显上调的两个蛋白质分别为原肌球蛋白（tmpomyosin，TM）和丙酮酸激酶（Pymvate kinase，PK）。结论本研究表明维甲酸耐药细胞中原肌球蛋白和丙酮酸激酶表达上调，提示它们在肿瘤耐药中有重要作用。     

p38 MAPK抑制剂对急性肺损伤的治疗作用

目的 观察p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂SB203580对LPS诱导的兔急性肺损伤(ALI)的保护作用及其机制.方法 用大肠杆菌内毒素(LPS)制备兔ALI模型;测定不同时间点的动脉血气分析、血清TNF-α和ICAM-1浓度;测量肺干/湿质量比值(肺D/W)及观察肺组织病理学改变.结果 动物注射内毒素1 h后P_(A-a)O_2、血浆TNF-α和ICAM-1水平、肺损伤评分均明显升高(P＜0.05),肺D/W下降(P＜0.05);应用SB203580治疗后,P_(A-a)O_2、血浆TNF-α和ICAM-1水平、肺损伤评分均明显下降(P＜0.05),肺D/W升高(P＜0.05).结论 本研究结果 表明,p38 MAPK抑制剂SB203580对内毒素诱导的ALI,可以明显减轻低氧血症、减轻肺水肿、改善组织病理学和减轻炎症反应.     

氨溴索对急性肺损伤的保护作用

目的 通过建立急性肺损伤大鼠模型和体外肺泡巨噬细胞培养体系,观察急性肺损伤中,肺泡巨噬细胞在氨溴索干预前后细胞因子表达的情况,探讨氨溴索可能的肺损伤保护机制.方法 一、体内实验:大鼠24只,随机分成3组,每组8只:(1)正常对照组;(2)急性肺损伤组:采用腹腔注射酵母悬液方法复制大鼠急性肺损伤模型;(3)氨溴索治疗组:建立ALI大鼠模型后用氨溴索干预.观察指标主要有:肺部病理学改变、测量大鼠肺系数、血氧分压,肺泡巨噬细胞TNF-α、IL-10、IL-24 mRNA的表达则采用通过逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测.二、体外实验:收集肺泡巨噬细胞后分3组:(1)正常对照组:肺泡巨噬细胞中加无菌生理盐水;(2)LPS组:予LPS 10 mg/L刺激肺泡巨噬细胞;(3)LPS+氨溴索组:予LPS10 mg/L和氨溴索180 μmol/L刺激肺泡巨噬细胞.分别于刺激前(0 h),刺激后(6、12、24 h)留取细胞.通过RT-PCR技术检测肺泡巨噬细胞TNF-α、IL-10、IL-24 mRNA的表达变化.结果 氨溴索治疗组在病理改变,肺系数,动脉血氧分压等各项指标均优于急性肺损伤组,氨溴索干预治疗组,TNF-α、IL-10、IL-24 mRNA表达水平均明显下降,与急性肺损伤组比较差异有统计学意义(P＜0.05),但仍高于正常对照组.体外实验也得出了相同的结论.结论 氨溴索可抑制急性肺损伤或LPS刺激的肺泡巨噬细胞TNF=α、IL-10、IL-24细胞因子mRNA的表达水平.     

乌司他丁对肝缺血-再灌注后急性肺损伤的保护作用

目的 :观察肝缺血再灌注后急性肺损伤的发病机制及乌司他丁的干预作用。方法 :建立大鼠部分肝缺血再灌注模型 ,随机分为手术对照组 (对照组 ) ,肝缺血 90 min组 (缺血组 ) ,肝缺血 90 m in、再灌注 12 0 m in组 (再灌注组 ) ,缺血前 30 m in静脉注射乌司他丁 +肝缺血 90 min、再灌注 12 0 min组 (乌司他丁组 )。检测支气管肺泡灌洗液 (BAL F)中总蛋白含量、肺组织干 /湿质量比 (D/ W)、肺组织髓过氧化物酶 (MPO)含量及血浆中丙二醛 (MDA)含量。结果 :1与对照组比较 ,肝缺血再灌注损伤后各组大鼠 BAL F中总蛋白含量均明显升高(P<0 .0 5或 P<0 .0 1) ,再灌注组总蛋白升高更为明显 ,乌司他丁能干预其升高 ;肺 D/ W则均明显降低(P均 <0 .0 1) ,乌司他丁能干预其降低程度。 2随着肝缺血再灌注的发生 ,肺组织 MPO与血浆 MDA含量均逐渐升高 ,以再灌注组升高更明显 (P均 <0 .0 1) ,乌司他丁能干预 MDA和 MPO的升高。结论 :肝缺血再灌注后急性肺损伤的主要病理生理过程是氧化抗氧化系统的失衡 ,中性粒细胞是肺组织急性损伤的主要炎性细胞 ;乌司他丁通过抑制中性粒细胞在肺组织中的渗出及其抗氧化作用显著减轻急性肺损伤的程度。     

大黄对内毒素诱导致急性肺损伤的保护作用

目的：探讨内毒素在急性肺损伤（ＡＬＩ０中的作用机制及大黄,地塞米松对ＡＬＩ的保护作用。方法：在Ｗｉｓｔａｒ大鼠舌下静脉注射内毒素（ＬＰＳ）复制ＡＬＩ动物模型。动物分为４组：ＬＰＳ致伤组,对照组（生理盐水）,地塞米松治疗组,大黄治疗组。肉眼观察肺大体标本;普通光镜检查肺组织病理变化;电镜观察肺组织超微结构;测定ＡＬＩ的生物学指标;肺湿重与干重比,肺泡灌洗液中中性粒细胞比例和蛋白含量,肺泡通透指数和肺     

大黄对家兔内毒素性急性肺损伤的保护作用研究

目的:观察大黄对家兔内毒素性急性肺损伤(ALI)的保护作用。方法:12只雄性新西兰兔待氧合指数(PaO2/FiO2)≤300mmHg(1mmHg=0.133kPa)时,将动物随机分为两组,每组6只。生理盐水对照组注入等量生理盐水;大黄组胃内注入大黄20g/kg。观察基础值,ALI时以及ALI后1、2、3、4、5和6h各时间点两组胃肠黏膜内pH值(pHi)、PaO2/FiO2、肺动态顺应性(Cdyn),测定ALI的生物学指标超氧化物歧化酶(SOD)活性,以及支气管肺泡灌洗液(BALF)中蛋白的含量。实验结束后,开胸取肺行组织学检查。结果:生理盐水对照组pHi在ALI后4、5和6h均较基础值时降低(P均<0.05),在ALI后5h和6h较ALI时降低(P均<0.05);大黄组pHi在ALI后4h和5h较生理盐水对照组升高(P均<0.05),而在6h较生理盐水对照组同时间点显著升高(P<0.01)。两组PaO2/FiO2在ALI后均有不同程度下降,且两组PaO2/FiO2在ALI后5h和6h差异有显著性(P<0.05和P<0.01)。两组Cdyn在ALI后均有不同程度的下降,但大黄组下降幅度较小,且两组Cdyn在ALI后5h和6h差异有显著性(P均<0.05)。两组SOD活性大黄组显著高于生理盐水对照组(P<0.01)。大黄组BALF中蛋白含量低于生理盐水对照组(P<0.05)。肺组织切片显示大黄组肺组织损伤明显较生理盐水对照组轻。结论:胃内注入大黄对兔内毒素性ALI有保护作用。     

黄芪对兔内毒素性急性肺损伤的保护作用

目的:探讨中药黄芪对兔内毒素性急性肺损伤(ALI)的保护作用.方法:将12只雄性新西兰兔采用压力控制辅助通气模式后静脉注射脂多糖,当氧合指数(PaO2/FiO2)≤300 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)时认为ALI模型制备成功.此时将动物随机分为黄芪组和对照组,每组6只.黄芪组静脉注射黄芪注射液8 g/kg;对照组静脉注射等量生理盐水.观察ALI时以及ALI后1、2、3、4、5和6 h肺动态顺应性(Cdyn)、平均动脉压(MAP)的变化.于ALI后6 h活杀动物取肺组织,观察过氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量的变化以及肺组织病理变化.结果:对照组ALI后各时间点肺Cdyn较基础值显著降低,ALI后5 h和6 h MAP较基础值显著下降,差异均有显著性(P＜0.05或P＜0.01);但两组间肺Cdyn和MAP的变化差异无显著性.黄芪组肺Cdyn及MAP组内比较差异无显著性;黄芪组SOD活性较对照组升高,MDA含量较对照组降低,差异均有显著性(P＜0.01和P＜0.05);光镜下黄芪组肺损伤组织病理变化较对照组减轻.结论:黄芪对兔内毒素性ALI有明显的保护作用.     

阻断toll样受体对脂多糖致急性肺损伤的保护作用

目的：本文旨在探讨阻断toll样受体（TRL4）对脂多糖（LPS）致急性肺损伤（ALI）的保护作用。方法将60只健康雄性清洁级SD大鼠分为正常组、损伤组和阻断组,每组20只。损伤组大鼠采用尾静脉注射LPS（6mg/kg）复制ALI模型;阻断组同时注射TLR4抗体（10mg/mL）;正常组给予等容积生理盐水。3h后处死大鼠,采用凝胶滞留法检测核因子-κB（NF-κB）活性;Westernblot印记分析法检测抑制蛋白（IκB-α）水平;检测肺组织匀浆肿瘤坏死因子α细胞因子（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）和白细胞介素-10（IL-10）水平。结果与正常组相比,损伤组和阻断组肺组织湿质量/干质量比值增高,NF-κB活性升高,IκB-α、TNF-α、IL-1β水平升高（P＜0．05）,而IL-10水平降低（P＜0．05）。而比较损伤组与阻断组发现,阻断组肺组织湿质量/干质量比值降低,NF-κB活性降低,IκB-α、TNF-α、IL-1β水平明显低于损伤组（P＜0．05）,IL-10水平高于损伤组（P＜0．05）。结论采用抗TLR4单克隆抗体阻断TLR4介导的信号传导可明显降低NF-κB活性和IκB-α、TNF-α、IL-1β水平,同时提高IL-10水平阻断TLR4,对LPS致ALI有一定的保护作用。     

盐酸戊乙奎醚联合地塞米松对大鼠内毒素性急性肺损伤的保护作用

目的探讨盐酸戊乙奎醚(PHC)联合地塞米松(DXM)对大鼠急性肺损伤(ALI)的保护作用。方法40只SD大鼠随机分为对照组、内毒素(LPS)组、PHC组、DXM组、PHC+DXM组,每组8只。采用尾静脉注射内毒素制备大鼠内毒素性ALI模型后,PHC组和DXM组分别给予PHC和DXM进行干预,PHC+DXM组同时给予PHC和DXM进行干预。各组大鼠于上述处理后6 h留取标本,测定各组肺湿/干值(W/D值)、支气管肺泡灌洗液(BALF)蛋白浓度、中性粒细胞(PMN)计数以及TNF-α和IL-1β的含量,计算肺通透指数,检测肺匀浆髓过氧化物酶(MPO)的活性和丙二醛(MDA)含量。结果LPS组动脉血气指标PH、PaO2、PaCO2均较Ctrl组明显降低(P<0.01或0.05),经DXM、PHC或DXM+PHC干预后各指标不同程度升高,DXM+PHC组的PH值、PaO2均不同程度高于DXM组和PHC组,而明显高于LPS组(P<0.01)。LPS组肺W/D比、肺通透指数和BALF中PMN计数、MPO、MDA、TNF-α和IL-1β与Ctrl组比较差异有统计学意义(P<0.01),经DXM、PHC或DXM+PHC干预后各项指标明显改善,与LPS组比较差异有统计学意义(P<0.01或0.05),而DXM+PHC组的各项指又明显好于DXM组或PHC组(P<0.01或0.05)。结论PHC联合DXM对大鼠LPS性ALI具有明显的保护作用,其效果优于单用PHC或DXM。     

维生素C对脂多糖急性肺损伤大鼠的保护作用

目的 观察维生素C对大鼠脂多糖性急性肺损伤的保护作用及其机制。方法 健康成年Sprague—Dawley（SD）大鼠24只,雌雄不拘,体重180—200g,随机分成三组：0．9％氯化钠注射液组（NS组）、脂多糖组（LPS组）和维生素C治疗组（VitC组）,每组8只大鼠。三组大鼠分别在脂多糖或0．9％氯化钠注射液注入后4h放血处死,测定肺组织丙二醛含量、髓过氧化物酶活性（myeloperoxiase,MPO）及肺湿干重比值（W／D）,留少许肺标本固定切片观察病理变化。结果 与NS组比较,LPS组肺组织MDA含量显著增加、MPO活性显著升高,W／D显著增加（t分别=0．01、6．54、6．19,P均〈0．05）;与LPS组比较,VitC组肺组织MDA含量减少、MPO活性明显降低、W／D显著下降（t分别=0．02、7．73、4．61,P均〈0．05）。LPS组肺组织病理切片可见明显急性肺损伤病理改变,维生素C治疗组显示损伤较轻。讨论 大剂量维生素C对脂多糖所致的大鼠急性肺损伤具有保护作用。     

N-乙酰半胱氨酸对高氧肺损伤保护机制与p38丝裂素活化蛋白激酶途径的相关性研究

目的 观察p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)信号途径在高氧肺损伤中的表达,探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)在高氧肺损伤中的保护作用及机制.方法 将30只幼年Wistar大鼠按随机数字表法分为空气对照组(A组)、高氧暴露组(B组)、高氧+NAC干预组(C组)、高氧+p38MAPK特异性抑制剂(SB203580)干预组(D组)、高氧+NAC+SB203580联合干预组(E组),每组6只.实验7 d后,光镜下观察肺组织病理改变,并行肺损伤评分;测定肺湿/干重(W/D)比值、支气管肺泡灌洗液(BALF)中总蛋白(TP)含量、肺通透系数;采用免疫组化法检测磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)在肺组织中的分布;用蛋白质免疫印迹法检测p-p38MAPK蛋白含量.结果 与A组比较,高氧各组均有不同程度的肺损伤,但药物干预各组(C、D、E组)肺损伤均较B组有所减轻.免疫组化显示,高氧各组p-p38MAPK阳性表达较A组明显增强,尤高表达在炎性浸润细胞;药物干预后(C、D、E组)p-p38MAPK阳性细胞较B组明显减少.蛋白质免疫印迹法显示,B组p-p38MAPK蛋白含量明显高于A组(0.20±0.03比0.11±0.01,P<0.05);干预后C、D、E组p-p38MAPK蛋白含量低于B组(0.16±0.02、0.15±0.01、0.14±0.02比0.20±0.03,均P<0.05),但仍高于A组(均P<0.05),而C、D、E组间则无明显差异.各组肺W/D比值、BALF中TP含量、肺通透系数改变与p-p38MAPK蛋白含量变化趋势一致.结论 高氧应激可激活损伤肺组织p38MAPK活性;NAC抗氧化肺保护作用机制可能是通过下调高氧诱导p38MAPK的激活而对肺损伤起保护作用.