罗格列酮对高糖刺激后HK-2细胞形态变化及FSP1、E-cad表达的影响

【目的】研究罗格列酮（RGZ）对高糖作用下，人近端肾小管上皮细胞（HK-2）形态变化及成纤维细胞特异蛋白1（FSP1）、E-钙粘蛋白（E-cad）表达的影响。【方法】采用第3代细胞株，同步培养后分为3组：N组为正常对照组（含5．5mmol／L葡萄糖），H组为高糖组（含25mmol／L葡萄糖），HR组为高糖DMEM加RGZ组（H组加入10μmol／LRGZ）。光镜和电镜下分别观察HK-2细胞的基本结构与超微结构；Westernblot法检测细胞FSPl、E-cad蛋白表达。【结果】①与N组比较，H组细胞呈梭形变，电镜下粗面内质网增加，线粒体及微绒毛减少；FSP1蛋白表达增强（P〈0．01），E-cad蛋白表达减弱（P〈0．01）。②与H组比较，HR组细胞恢复为多边形或圆形，电镜下微绒毛和线粒体增加，粗面内质网减少；FSP1表达下降（P〈0.01），E-cad表达增加（P〈0．01）。【结论】①高糖刺激后HK-2细胞出现表型转化。②RGZ能够减弱高糖刺激下HK-2细胞的表型转化。     

吡格列酮对高糖培养的肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1表达和合成的影响

目的观察过氧化物酶体增殖物激活受体激动剂-吡格列酮对肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）表达和合成的影响,探讨其肾脏保护机制。方法体外培养肾小球系膜细胞,随机分组为正常对照糖（NG组）、高糖（HG组）及高糖＋不同浓度吡格列酮（P1、P2、P3组）。培养48小时后收集各组细胞及上清液,应用RT-PCR方法检测细胞MCP-1mRNA含量,采用ELLSA法检测细胞上清液中MCP-1蛋白浓度。结果 （1）肾小球系膜细胞可表达及合成MCP-1;（2）与NG组比较,高糖刺激后肾小球系膜细胞MCP-1mRNA表达以及细胞上清液中MCP-1蛋白含量显著增高（P〈0.05）;（3）加入吡格列酮干预后,肾小球系膜细胞MCP-1mRNA表达以及细胞上清液中MCP-1蛋白含量显著下降,且呈现浓度依赖性。结论吡格列酮可抑制肾小球系膜细胞MCP-1mRNA表达和蛋白合成,且呈现剂量依赖性,该作用可能与其肾脏保护部分有关。     

罗格列酮对肾小管上皮细胞人尿酸盐转运子基因表达的影响

目的：观察不同浓度罗格列酮对肾小管上皮细胞（HK-2细胞）人尿酸盐转运子（hUAT）mRNA表达的影响。方法：根据培养液中所含罗格列酮浓度的不同，将HK-2细胞分为4组，（1）仅使用DMEM组（对照组）；（2）DMEM＋5μmol／L罗格列酮组（R1组）；（3）DMEM＋10μmol／L罗格列酮组（R2组）；（4）DMEM＋15μmol／L罗格列酮组（R3组），每组均培养6瓶细胞。上述细胞在不同培养液中分别培养48h。采用实时荧光定量PCR检测HK-2细胞中hUATmRNA的相对表达量（2^△△O法）。结果：所有标本均能检测到huAT mRNA的表达，且R1、R2、R3组hUAT mRNA表达水平均明显低于对照组．其中R1组（浓度5μmol／L）hUAT mRNA表达水平为对照组的19．6％，R2组（浓度10μmol／L）hUAT mRNA表达水平为对照组的18．8％，R3组（浓度15μmol／L）hUAT mRNA表达水平仅为对照组的9．5％。结论：罗格列酮可能有下调hUAT mRNA表达的作用。[著者文摘]     

血管紧张素Ⅱ对肾小球系膜细胞MCP-1表达的影响

目的观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对大鼠肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）mRNA表达和蛋白合成的影响,并讨论其机制。方法试验分组：10%小牛血清MEM（含糖5.6 mmol/L,未加其他刺激因素）为对照组（C组）;A1组、A2组和A3组分别在培养液中加不同浓度AngⅡ（10-9mol/L、10-7mol/L和10-5mol/L）。培养48 h后收集各组细胞和细胞上清液,RT-PCR检测肾小球系膜细胞MCP-1mRNA表达,采用ELISA检测培养细胞上清中MCP-1蛋白的浓度。结果①肾小球系膜细胞可表达及合成MCP-1;②与C组比较,A1组、A2组和A3组肾小球系膜细胞MCP-1mRNA表达增强（P〈0.01）;③与C组比较,A1组、A2组和A3组细胞培养上清液MCP-1浓度明显增高（P〈0.01）;④与A1组比较,A2和A3组系膜细胞MCP-1mRNA明显增强,上清液MCP-1浓度显著升高（P〈0.01）,其中以A2组最明显。结论 AngⅡ可刺激肾小球系膜细胞MCP-1mRNA表达和蛋白合成增加,并具有一定的浓度依赖性。     

雷公藤内酯醇对高糖时人肾小球系膜细胞MC P-1表达的影响

目的探讨高糖及雷公藤内酯醇（TP）对人肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）表达的影响。方法将培养的人肾小球系膜细胞分为6组：正常对照组（5 mmol/L 葡萄糖）、高糖组（30 mmol/L 葡萄糖）、甘露醇组（5 mmol/L 葡萄糖＋25 mmol/L甘露醇）、TP甲组（30 mmol/L 葡萄糖＋5μg/L TP）、TP 乙组（30 mmol/L 葡萄糖＋10μg/L TP）、TP丙组（30mmol/L 葡萄糖＋15μg/L TP）,分别在24 h、48 h、72 h采用 RT-PCR法检测TP对高糖条件下系膜细胞内 MCP-1 mRNA 及蛋白表达的影响。结果高糖组人肾小球系膜细胞 MCP-1 mRNA及蛋白较正常对照组增加,且差异有显著性（P＜ 0.01）;TP各组比高糖组有明显下降（P＜ 0.01）;不同浓度的TP对高糖诱导的系膜细胞 MCP-1的表达抑制程度不同（P ＜ 0.05）。结论 TP可抑制高糖诱导的人肾小球系膜细胞 MCP-1的表达,且呈时间、剂量依赖关系,其可能对延缓糖尿病肾病中肾小球硬化有一定作用。     

Src酪氨酸激酶抑制剂Ⅱ对膀胱尿路上皮癌T24细胞钙黏附蛋白E表达的影响

【目的】探讨Src酪氨酸激酶抑制剂Ⅱ对膀胱移行细胞癌T24细胞Src蛋白下游信号钙黏附蛋白E（E-Cadherin）的作用。【方法】应用半定量RT—PCR法检测0μmol／L、0．2μmol／L、1．0μmol／L、5．0μmol／L Src酪氨酸激酶抑制剂Ⅱ处理后的人膀胱癌T24细胞各浓度组的E—Cadherin表达情况。【结果】Src酪氨酸激酶抑制剂Ⅱ处理后,E-Cadherin表达呈上调趋势;人膀胱癌T24细胞E-Cadherin mRNA表达水平随加入Src Kinase Inhibitor Ⅱ浓度增加呈上调趋势,0．2μmol／L、1．0μmol／L、5．0μmol／L浓度组OD比值显著高于0μmol／L浓度组,组间比较差异均具有统计学意义（P〈0．05）。【结论】Src酪氨酸激酶抑制剂Ⅱ对C-Src蛋白下游信号E-Cadberin具有上调作用,进一步证实了c-Src蛋白及其下游信号E-Cadherin作为膀胱移行细胞癌分子靶向治疗的可能性。     

罗格列酮对3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的作用

【目的】探讨罗格列酮对脂肪细胞胰岛素抵抗的影响。【方法】培养3T3-L1前脂肪细胞,采用地塞米松诱导3T3-L1脂肪细胞建立胰岛素抵抗模型,检测细胞培养基中葡萄糖浓度,同时观察罗格列酮对脂肪细胞葡萄糖转运子4（GLUT4）mRNA表达的影响。【结果】在DMEM高糖培养基中,罗格列酮能明显增加胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞培养基中的葡萄糖消耗量,并可使GLUT4 mRNA表达升高,增强对胰岛素的敏感性。【结论】罗格列酮明显上调抵抗脂肪细胞GLUT4的表达,改善胰岛素抵抗。     

辛伐他汀对脂多糖诱导人THPL-1单核细胞MCP-1表达的影响

【目的】研究辛伐他汀对脂多糖（LPS）诱导人THP-1单核细胞表达单核细胞趋化蛋白-1（MCP1）的影响，探讨辛伐他汀的抗炎作用。【方法】体外培养人THP-1单核细胞，分为对照组、LPS组、辛伐他汀低、中、高浓度组，辛伐他汀三组加入不同浓度辛伐他汀预孵2h与LPS组均加入LPS刺激24h，应用Western blot与ELISA法分别检测各组细胞蛋白与培养基上清中MCP-1水平。【结果】LPS诱导人THP-1单核细胞MCP-1表达显著增加，辛伐他汀呈浓度依赖性显著抑制LPS诱导人THP-1单核细胞MCP-1表达。【结论】辛伐他汀能够抑制LPS诱导人THP-1单核细胞MCP-1表达，提示其具有抗炎作用。     

罗格列酮对高糖及间歇性高糖诱导NRK-52E细胞NF-κB及肿瘤坏死因子-α上调的影响

目的:探讨罗格列酮对高糖及间歇性高糖诱导大鼠肾小管导管上皮细胞株NRK-52E中NF-kB及肿瘤坏死因子-а(TNF-а)表达的抑制作用.方法:作用72 h后,Westem blot检测空白组(0 mmol/L葡萄糖)、正常葡萄糖组(5 mmol/L葡萄糖)、高糖干预组(25 μmol/L葡萄糖)、间歇性高糖干预组(5 mmol/L葡萄糖/25 mmol/L葡萄糖交替)、罗格列酮干预组(20 μmol/L罗格列酮)、罗格列酮高糖干预组(20 μmol/L罗格列酮预处理后在高糖培养)、罗格列酮间歇性高糖干预组(20 μmol/L罗格列酮预处理后在间歇性高糖培养)中NF-kB及TNF-а及在NRK-52E细胞的表达.细胞ROS含量应用CM2H2DCFDA试剂盒检测.结果:高浓度葡萄糖及间歇性高糖均上调NF-kB及TNF-а表达,ROS含量显著上升,其中在间歇性高糖作用更显著.应用罗格列酮干预后可以下调高糖或间歇性高糖中NF-kB及TNF-а表达,细胞ROS含量下降.结论:罗格列酮可下调高糖及间歇性高糖诱导NRK-52E细胞NF-kB及TNF-а表达.     

高糖对大鼠肾小球系膜细胞LPA3（edg-7）表达影响及姜黄素的干预作用

目的探讨高糖对大鼠肾小球系膜细胞增殖及其LPA3（edg-7）表达和姜黄素的干预作用。方法体外培养大鼠肾系膜细胞,同步后采用高浓度的葡萄糖（30mmol/l）联合不同浓度姜黄素进行干预处理。应用MqT测量高糖及不同浓度姜黄素干预后肾小球系膜细胞增殖活力。应用RT-PCR检测正常培养及高糖作用后大鼠肾小球系膜细胞LPA3（edg-7）的表达及不同浓度姜黄素对其表达的影响。结果高糖促进大鼠系膜细胞增殖,上调LPA3（edg-7）的表达。姜黄素可抑制高糖刺激引起的系膜细胞增殖,下调LPA3（edg-7）表达。当姜黄素浓度大于或等于10／μmol／L时,系膜细胞增殖明显受到抑制（P〈0．05）,且表现为浓度依赖性。在基础状态下,系膜细胞表达一定量的LPA3（edg-7）,经高糖刺激后,LPA3（edg-7）基因表达上调;姜黄素可下调高糖刺激引起的LPA3（edg-7）mRNA高表达,当姜黄素浓度为20μmol／L时能明显下调高糖刺激引起的系膜细胞LPA3（edg-7）基因表达（P〈0．05）,且随其浓度增高,抑制作用有增强趋势。结论姜黄素能抑制高糖刺激大鼠肾系膜细胞增殖并可下调高糖刺激引起的LPA3（edg-7）基因表达。LPA3（edg-7）基因表达与肾小球系膜细胞增殖成正相关,下调LPA3（edg-7）表达,可能为姜黄素抑制肾小球系膜细胞增殖的作用途径之一。     

缬沙坦对高糖环境中小鼠肾小球系膜细胞炎症介质的影响

目的 观察缬沙坦对高糖环境中小鼠肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)及细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达的影响,探讨缬沙坦对糖尿病肾病的防治作用.方法 高糖环境中培养小鼠肾小球系膜细胞,于培养12、24、48小时,应用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测细胞增殖程度,分别应用免疫细胞化学和蛋白质印迹法检测系膜细胞MCP-1、ICAM-1蛋白表达水平,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清Ⅳ型胶原浓度.结果 高糖环境中小鼠肾小球系膜细胞MCP-1及ICAM-1表达增强,细胞增殖明显(0.815±0.007)A,细胞上清液中Ⅳ型胶原浓度升高(17.29±1.95)μg/L,缬沙坦干预后MCP-1及ICAM-1表达减弱,细胞增殖受抑制(0.652±0.004)A,Ⅳ型胶原浓度降低(13.19±0.89)μg/L.结论 缬沙坦可下调MCP-1及ICAM-1表达,抑制系膜细胞增殖及系膜外基质积聚,发挥其独立于降压之外的肾脏保护作用.     

单宁酸对高糖及AGEs引起肾小球系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原生成的影响

目的观察单宁酸(tannic acid,TA)对高糖及糖化终产物(AGEs)引起的肾小球系膜细胞(GMC)增殖和Ⅳ型胶原生成的影响。方法体外培养肾小球系膜细胞,分别用高浓度葡萄糖(30 mmol/L)、不同浓度AGEs(25、50、100、200及400 mg/L)处理,同时用不同浓度单宁酸(10、20、40及80μmol/L)进行干预,设立相应对照组,于不同时间段(24、48 h)用MTT法检测肾小球系膜细胞的增殖情况,ELISA法检测培养48 h后条件培养基中Ⅳ型胶原的含量。结果葡萄糖及AGEs均能明显促进系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原的生成,与对照组比较具有显著差别。单宁酸可明显抑制高糖或AGEs引起的系膜细胞增殖,能减少Ⅳ型胶原的生成,并呈一定浓度依赖关系。结论单宁酸能抑制高糖或AGEs引起的GMC增殖,并能减少Ⅳ型胶原生成。     

虫草肾茶胶囊对人肾小球系膜细胞分泌转化生长因子β1及细胞外基质的影响

目的研究虫草肾茶胶囊对培养在高糖条件下系膜细胞(HMC)分泌转化生长因子β1(TGF-β1)及细胞外基质(ECM)的影响,探讨其在糖尿病肾病(DN)防治中的意义。方法应用血清药理学方法,制备虫草肾茶胶囊及福辛普利药物血清,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定经体外培养的HMC在各种处理因素的作用下上清液中TGF-β1、纤维连接蛋白和层粘连蛋白的表达情况,并以福辛普利为对照。结果高糖能明显促进HMC分泌TGF-β1、纤维连接蛋白和层粘连蛋白(P<0.05或P<0.01)。而虫草肾茶胶囊能抑制HMC分泌TGF-β1、纤维连接蛋白和层粘连蛋白,并呈一定量效关系(P<0.05或P<0.01),且某些方面明显优于福辛普利。结论高糖可促进HMC TGF-β1及ECM分泌,虫草肾茶胶囊能明显抑制高糖条件下HMC分泌TGF-β1及ECM,有助于预防糖尿病肾小球硬化的发生和发展。     

益气养阴活血方对肾小球系膜细胞增殖及ERK通路的影响

目的 观察益气养阴活血方含药血清对高糖条件培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖及胞外信号调节激酶(ERK)通路的影响.方法 制备益气养阴活血方和福辛普利含药血清.将大鼠肾小球系膜细胞分为正常对照组、高糖培养组、高糖培养+福辛普利含药血清组和高糖培养+三个不同浓度益气养阴活血方含药血清组.培养6 h、12 h、24 h、48 h、72 h后用Western-blot法对系膜细胞中磷酸化ERK1/2(pERK1/2)的表达进行半定量分析,用4-甲偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖.结果 与正常对照组相比,高糖组早期(24 h、48 h)能显著促进系膜细胞增殖,福辛普利和高浓度中药含药血清组均可抑制高糖引起的系膜细胞增殖(P<0.05),两组间无统计学差异(P>0.05).高糖刺激6 h后系膜细胞中pERK1/2蛋白的表达即明显增高,24 h达到高峰,后逐渐减弱,福辛普利和不同浓度中药含药血清干预后,pERK1/2蛋白水平显著下降(P<0.05),中药组和西药组间无统计学差异(P>0.05).结论 益气养阴活血方能抑制肾小球系膜细胞增殖和ERK通路的磷酸化,这可能是其临床肾脏保护作用机制所在.     

藻黄合剂含药血清体外培养人肾小球系膜细胞结缔组织生长因子的表达

背景：结缔组织生长因子是转化生长因子β1的下游效应因子,其异常表达在肾小球硬化及纤维化发生、发展中起重要作用。目的：观察藻黄合剂含药血清对肾小球系膜细胞结缔组织生长因子表达的影响。方法：血清药理学方法制备藻黄合剂低、中、高剂量,空白对照及海昆肾喜阳性对照大鼠含药血清．分别用体积分数10％各含约曲l清培养基孵育高糖作用下肾小球系膜细胞48h,另设低糖组为对照。免疫细胞化学和RT．PCR方法检测各组系膜细胞结缔组织生长因子蛋白及mRNA的表达。结果与结论：结缔组织生长因子蛋白及mRNA表达在高糖组较低糖组明显升高（P〈O.01）：藻黄合剂各剂量组结缔组织生长因子蛋白及mRNA表达均低于高糖组,且具有剂量依赖性：藻黄合剂高剂量组与海昆肾喜组比较结缔组织生长因子蛋白及mRNA表达差异无疑著性意义（P〉0.05）。提示高糖可诱导肾小球系膜细胞中结缔组织生长因子的表达,而藻黄合剂可抑制高糖条件下肾小球系膜细胞中结缔组织生长因子蛋白及mRNA的表达。     

藻黄合剂含药血清体外培养人肾小球系膜细胞结缔组织生长因子的表达

背景:结缔组织生长因子是转化生长因子β1的下游效应因子,其异常表达在肾小球硬化及纤维化发生、发展中起重要作用。目的:观察藻黄合剂含药血清对肾小球系膜细胞结缔组织生长因子表达的影响。方法:血清药理学方法制备藻黄合剂低、中、高剂量,空白对照及海昆肾喜阳性对照大鼠含药血清,分别用体积分数10%各含药血清培养基孵育高糖作用下肾小球系膜细胞48h,另设低糖组为对照。免疫细胞化学和RT-PCR方法检测各组系膜细胞结缔组织生长因子蛋白及mRNA的表达。结果与结论:结缔组织生长因子蛋白及mRNA表达在高糖组较低糖组明显升高(P<0.01);藻黄合剂各剂量组结缔组织生长因子蛋白及mRNA表达均低于高糖组,且具有剂量依赖性;藻黄合剂高剂量组与海昆肾喜组比较结缔组织生长因子蛋白及mRNA表达差异无显著性意义(P>0.05)。提示高糖可诱导肾小球系膜细胞中结缔组织生长因子的表达,而藻黄合剂可抑制高糖条件下肾小球系膜细胞中结缔组织生长因子蛋白及mRNA的表达。     

C肽对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

目的:探讨C肽对体外高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞系HBZY-1生长的影响。方法:对照组仅含低糖MEM培养液;实验组:高糖MEM培养液含不同浓度的C肽,分别培养24h,48h,72h,用四甲基偶氮唑盐光吸收法(MTT)检测细胞系HBZY-1的增殖情况。结果:高糖诱导大鼠系膜细胞系HBZY-1的增殖;不同浓度的C肽对高糖诱导的细胞系HBZY-1增殖影响程度不同。10,50,300nmol/LC肽作用24h可明显抑制细胞增殖(P<0.05),而0.5,900nmol/L作用不显著。结论:C肽可抑制高糖诱导的大鼠系膜细胞系HBZY-1的增殖;呈时间、剂量依赖效应。C肽可能对糖尿病肾病的防治起到有益的作用。     

渥曼青霉素阻断罗格列酮对人ACAT-1表达的影响

摘 要 目的：研究过氧化体增殖物激活型受体-γ (peroxisome proliferator activated receptors-γ，PPAR-γ)配体罗格列酮对巨噬细胞酰基辅酶A：胆固醇酰基转移酶-1 (Acyl-CoA：cholesterol acyltransferases，ACAT-1) 表达的影响及可能机制。方法：在RPMI1640培养基中培养人单核细胞系（THP-1），加入佛波酯 (phorbol myristate acetate，PMA) 培养48 h，细胞贴壁呈巨噬细胞样分化。再给予PPAR-γ配体罗格列酮和磷酯酰肌醇三磷酸激酶(phosphatidylinosjtol 3-kinase，PI3K) 的特异性抑制剂渥曼青霉素 (wortmannin，WT)，运用实时定量PCR和Western Blot，观察巨噬细胞ACAT-1mRNA和蛋白表达水平的变化。结果：罗格列酮可明显抑制ACAT-1mRNA和蛋白的表达，且呈浓度依赖性；加入PI3K信号途径抑制剂wortmannin后ACAT-1表达较罗格列酮组明显增加，较巨噬细胞对照组降低。结论：PPAR-γ配体罗格列酮通过PI3K途径抑制ACAT-1表达发挥其抗动脉粥样硬化的作用。