Livin反义寡核苷酸对骨肉瘤MG-63细胞活性的影响

目的 探讨Livin在骨肉瘤细胞中的表达及Livin反义寡核苷酸（ASODN）对骨肉瘤细胞活性及功能的影响。方法 设计针对Livin的ASODN序列,根据转染效率评价结果,选择下调作用最强的ASODN序列制备脂质体-寡核苷酸复合物并转染 MG-63 细胞。采用免疫细胞染色法及Western blotting检测转染24 h后MG-63 细胞中Livin的表达情况,CellTiter-Glo法检测转染72 h后MG-63 细胞的增殖情况,划痕法检测ASODN对MG-63细胞迁移能力的影响,流式细胞仪检测转染24 h后 MG-63 细胞的凋亡情况和细胞周期。结果 Livin蛋白主要表达于MG-63细胞的胞质。选用下调作用最强的ASODN转染MG-63细胞后,Livin蛋白表达显著下降;不同浓度Livin ASODN 对 MG-63细胞的增殖及迁移有剂量依赖抑制作用;而ASODN 组的凋亡率明显高于空白对照组和阴性对照组（P＜0.05）。结论 靶向Livin的ASODN可以显著抑制骨肉瘤细胞增殖和侵袭能力并促进其凋亡。     

靶向SATB1基因的短发夹RNA诱导肺癌A549细胞凋亡

目的:探讨靶向SAT B1(special AT-rich sequence-binding protein-1)基因的短发夹RNA (short hairpinRNA,shRNA)对肺癌A549细胞凋亡的影响及其可能的机制.方法:构建靶向SATB1基因的shRNA重组质粒SATB1-shRNA,采用脂质体法将其转染至A549细胞;分别采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测A549细胞中SATB1、Bcl-2、Bax mRNA和SATB1、Bcl-2、Bax、caspase 3蛋白的表达水平FCM检测A549细胞的凋亡率.结果:成功构建了SATB1-shRNA重组质粒;SATB1-shRNA转染A549细胞后,SATB1、Bcl-2 mRNA及其蛋白表达下调,Bax mRNA和Bax、caspase 3蛋白表达上调(p＜0.05).SATB1-shRNA转染组细胞凋亡率[(14.18±1.59)％]较对照组[(1.84±0.57)％]明显增加(P＜ 0.01).结论:SATB1-shRNA可显著下调肺癌A549细胞中SATB1基因的表达水平并诱导细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2基因表达所引起的级联效应有关.     

Survivin反义寡核苷酸协同Taxol诱导肺癌细胞株凋亡

[目的]研究Survivin反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASODN)单独或联合Taxol对肺癌细胞株Survivin mRNA和蛋白表达,细胞凋亡,生长抑制率的影响.[方法]Survivin ASODN经脂质体介导转染人小细胞肺癌细胞株NCI-H446,用RT-PCR法、Western blot法检测Survivin表达;Survivin ASODN单独、联合Taxol作用NCI-H446细胞后,用MTT法检测细胞生长抑制率,台盼兰拒染实验检测细胞死亡率,流式细胞仪检测细胞凋亡并计算两药相互作用指数(CDI).[结果]Survivin ASODN转染NCI-H446细胞后,Survivin mRNA表达和蛋白表达明显下调,其中SurvivinASODN 500nM作用72h时Survivin mRNA抑制率达62.72%,效果最佳;Survivin ASODN单独或联合Taxol作用NCI-H446细胞后发现Survivin ASODN联合Taxol作用的效果明显优于两药单独应用(P＜0.01).其联用时细胞凋亡率达73.3%,而单用时分别为43.6%和23.8%.其联用时细胞生长抑制率达80.1%,而单用时抑制率分别为50.4%和30.5%(P均＜0.01).两药联用组细胞死亡率达69.9%,高于两药单用时的41.4%和24.8%(P均＜0.01);CDI值为0.43,表明两药具有显著协同作用.[结论]Survivin ASODN能够抑制肺癌细胞株Survivin mRNA和蛋白表达并诱导肺癌细胞凋亡;Survivin ASODN能够增加Taxol的敏感性.     

乙酰肝素酶反义寡核苷酸对肺癌A549细胞黏附、侵袭和凋亡的影响

目的:探讨乙酰肝素酶(heparanase,HPSE)反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)对人肺癌A549细胞黏附、侵袭和凋亡的影响。方法:设计并合成HPSE特异性ASODN(HPSE-ASODN),脂质体介导转染A549细胞。West-ern blotting检测A549细胞中HPSE蛋白的表达。黏附实验和侵袭实验检测HPSE-ASODN对A549细胞黏附和侵袭的影响,Hoecht 3222染色法检测HPSE-ASODN对A549细胞凋亡的影响。结果:与对照组和脂质体组相比,HPSE-ASODN转染下调A549细胞中HPSE蛋白的表达,且显著抑制A549细胞的黏附和侵袭(P<0.01);HPSE-ASODN转染可诱导A549细胞凋亡,凋亡率明显高于未转染组和脂质体组[(44.7±18.9)%vs(1.2±3.3)%、(5.8±20.1)%,P<0.01]。结论:HPSE-ASODN能下调肺癌A549细胞中HPSE蛋白的表达,抑制A549细胞的黏附和侵袭,诱导其凋亡。     

脂质体介导c-myc反义寡核苷酸对乳腺癌MCF-7细胞生物学行为的影响

目的研究c-myc反义寡核苷酸(ASODN)经脂质体LipfectAMINETM(LR)介导转染对MCF-7细胞中c-myc蛋白表达及细胞增殖、凋亡的影响。方法用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)评价脂质体介导c-myc ASODN对细胞增殖的影响;免疫细胞化学ABC方法检测转染前后c-myc蛋白表达;流式细胞仪(FCM)定量分析细胞凋亡。结果ASODN/LR转染与正义、错义寡核苷酸相比,显著抑制MCF-7细胞增殖(P<0.01)。FCM分析结果显示,转染后可见明显细胞凋亡峰,72h相点细胞凋亡率达(28.76±2.09)%。免疫细胞化学显示c-myc蛋白水平明显降低,阳性表达率为(21.40±1.16)%。结论LR介导c-myc ASODN能明显抑制MCF-7细胞增殖、诱导细胞凋亡和下调c-myc蛋白水平。     

蟾蜍灵对人非小细胞肺癌A549细胞增殖与凋亡的影响

背景与目的蟾蜍灵是从中药蟾酥中提取出来的有效成分,其抗肿瘤作用已经在许多体外肿瘤细胞中得到证实,本研究旨在探讨蟾蜍灵对人非小细胞肺癌细胞的增殖抑制、诱导凋亡作用及其机制.方法采用MTT法测定细胞活力,绘制细胞增殖抑制曲线;瑞氏-吉姆萨染色法观察细胞形态学的变化;流式细胞仪通过PI染色进行细胞周期分析及凋亡判定;Western blot法检测Livin及Caspase-3蛋白的表达.结果蟾蜍灵以时间、剂量依赖方式抑制A549细胞增殖,48 h、72 h及96 h抑制细胞增殖50%的药物浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)分别为(56.14±6.72)nmol/L、(15.57±4.28)nmol/L及(7.39±4.16)nmol/L;蟾蜍灵能诱导肺癌细胞凋亡,形态学表现为出现凋亡小体及流式细胞仪榆测到的亚二倍体凋亡峰,凋亡率与对照组比较差异有统计学意义(均P<0.01);蟾蜍灵诱导细胞凋亡过程中,下调Livin蛋白表达(P<0.01),同时活化Caspase-3蛋白.结论蟾蜍灵能够抑制肺癌细胞A549的增殖,并诱导其凋亡;抑制凋亡抑制蛋白Livin的活性及活化Caspase-3可能在其抑癌机制中发挥重要作用.     

survivin反义脱氧寡核苷酸对胃癌细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨survivin反义脱氧寡核苷酸(ASODN)对胃癌细胞株BGC-823凋亡、增殖的作用及分子机制.方法 分别以survivin ASODN-1、survivin ASODN-2和survivin ASODN-3转染人胃癌BGC-823细胞株,采用共聚焦显微镜检测转染率,四甲基偶氮唑蓝(MTF)法检测细胞生长活性,流式细胞术检测细胞凋亡指数、增殖指数和细胞周期分布及survivin、血管内皮生长因子(VEGF)、Smac/DIABLO蛋白表达改变,逆转录聚合酶链反应检测survivin、VEGF、Smac/DIABLO mRNA表达改变.结果 转染各序列survivin ASODN均可下调survivin蛋白的表达,且以ASODN-2作用最为显著.以600 nmol/L survivin ASODN-2转染BGC-823细胞48 h后,G0/G1期细胞比例[(72.25±2.95)%]明显高于空脂质体对照组[(56.25±0.75)%,均P＜0.05],凋亡指数[(11.31±0.38)%]明显高于空脂质体对照组[(1.62±0.36)%,均P＜0.05],增殖指数[(27.77±2.97)%]低于空脂质体对照组[(43.80±0.80)%,均P＜0.05].转染后survivin mRNA及蛋白表达(0.523±0.091,0.733±0.009)低于空脂质体对照组(0.861±0.047,0.997±0.233;均P＜0.05),VEGF mRNA及蛋白表达(0.519±0.076,0.75±0.006)低于空脂质体对照组(0.779±0.059,1.000±0.01;均P＜0.05),Smac/DIABLOmRNA及蛋白表达(0.899±0.113,1.637±0.023)高于空脂质体对照组(0.558±0.041,1.000±0.049;均P＜0.05).结论 survivin ASODN具有诱导胃癌细胞凋亡、抑制细胞增殖的作用,其作用是通过下调survivin和VEGF、上调Smac/DIABLO基因表达实现的.

Abstract：

Objective To explore the effects of antisense oligodeoxynucleotides (ASODN)on proliferation and apoptosis in gastric cancer cell line BGC-823 cells and the molecular mechanisms induced by ASODN.Methods survivin ASODN-1, survivin ASODN-2 and survivin ASODN-3 were transfected into BGC-823 cells by LipofectamineTM 2000 transfection reagent.The growth activity of BGC-823 cells was detected by MTT assay.Apoptosis index (AI), proliferation index ( PI), cell cycle and expressions of survivin, VEGF and Smac/DIABLO proteins were detected by flow cytometry (FCM).The changes of survivin mRNA, VEGF mRNA and Smac/DIABLO mRNA were detected by RT-PCR.Results The expression of survivin was down-regulated by the three ASODN sequences, especially the ASODN-2 was best.At 48 hours after transfection with 600 nmol/L survivin ASODN-2, the cells in G1/G0 phase were significantly increased [(72.25 ± 2.95 ) %], apoptotic index increased [( 11.31 ± 0.38 ) %], proliferation index decreased [(27.77 ± 2.97 ) %], compared with those in the control group [( 56.25 ± 0.75 ) %,(1.62 ±0.36)%, (43.80 ±0.80)%, all P ＜ 0.05].The survivin mRNA and protein levels (0.523 ±0.091,0.733 ±0.009) were down-regulated compared with those in the control group (0.861 ±0.047,0.997 ± 0.233 ), VEGF (0.519 ± 0.076, 0.75 ± 0.006) were down-regulated compared with those in the control group (0.779 ± 0.059, 1.000 ± 0.01 ), while those of Smac/DIABLO (0.899 ± 0.113, 1.637 ±0.023) were up-regulated compared with those in the control group (0.558 ± 0.041, 1.000 ± 0.049, all P＜0.05).Conclusions Survivin ASODN can induce apoptosis and inhibit the proliferation of gastric cancer cell line BGC-823 cells.Those effects are induced through up-regulation of Smac/DIABLO and downregulation of survivin and VEGF expression simultaneously.     

小细胞肺癌组织Livin基因表达与细胞增殖及凋亡相关性的研究

目的:探讨凋亡抑制蛋白(IAP)家族中的新成员Livin在小细胞肺癌(SCLC)组织中的表达及其与细胞增殖、凋亡的关系.方法:采用RT-PCR技术检测SCLC组织中Livin mRNA的表迭,并用蛋白质印迹法分析Livin蛋白的表达.应用流式细胞术检测小细胞肺癌细胞的增殖活性和凋亡水平.结果:30例SCLC组织中有19例Livin表达,阳性率为63.33%;而16例癌旁正常肺组织中Livin低表达,阳性率为12.5%,P<0.01.30例SCLC组织中,19例SCLC组织Livin表达阳性者,细胞增殖指数(PI)为(35.50±4.08)%;11例Livin表达阴性者,PI为(22.92±3.01)%,两者比较差异有统计学意义,P<0.01.19例SCLC组织Livin表达阳性者,肿瘤细胞早期细胞凋亡率为(2.77±0.34)%;11例Livin表达阴性者,肿瘤细胞早期细胞凋亡率为(4.04±0.51)%,两者比较差异有统计学意义,P<0.01.结论:Livin在SCLC组织中异常表达,有望成为SCLC诊断和基因治疗的新靶点.SCLC组织Livin基因表达与肿瘤细胞增殖和凋亡有关.     

Survivin反义寡核苷酸抑制EC9706细胞增殖并诱导细胞凋亡

目的 观察Sunrivin反义寡核苷酸(ASODN)对人食管癌细胞系EC9706细胞增殖和凋亡的影响.方法 人工合成Survivin基因反义和正义ODN,并进行硫代磷酸化修饰,通过脂质体途径分别转染 EC9706 细胞;应用 RT-PCR 和 Western Blot 检测 SurvivinmRNA和蛋白表达;应用MTT法检测 Survivin ASODN 对 EC9706 细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期变化及细胞凋亡比率.结果 体外培养的 EC9706 细胞可表达较强的 Survivin mRNA 和蛋白;Survivin ASODN 可呈浓度依赖性地抑制 Survivin mRNA 和蛋白表达,50μmoL/L ASODN 几乎可以完全抑制.MTT 研究结果表明,Survivin ASODN 可呈浓度依赖性地抑制 EC9706 细胞增殖,50μmol/L ASODN 对细胞生长的抑制率可达78.5%,诱导细胞凋亡,使细胞阻滞于G2/M 期.Survivin SODN 对 Survivin mRNA 和蛋白以及 EC9706 细胞的增殖和细胞周期无明显的抑制作用.结论 脂质体介导转染 Survivin 反义寡核苷酸可抑制细胞增殖、诱导细胞G2/M 期阻滞而促进细胞凋亡.