-80℃冰箱降温-液氮冻存脐血造血干细胞

为脐血造血干细胞 (CBHSC)的冻存建立简便有效的方法 ,采用 5 %二甲基亚砜 (DMSO)加 6 %羟乙基淀粉 (HES)为冷冻保护剂 ,不用程控降温装置 ,直接置CBHSC于 -80℃冰箱中降温 ,次日移至液氮液中保存 1周、1个月、3个月、6个月。结果冻存 6个月后 ,单个核细胞 (MNC)、粒 -单系造血祖细胞 (CFU -GM )和CD+34 细胞的回收率及MNC的台盼蓝拒染率分别为 90 .5± 1.7% ,87.6± 19.5 % ,91.9± 2 .9% ,75 .8± 1.8%。认为这一简便的方法能很好地保存CBHSC的造血潜能 ,因此它能为脐血移植冻存CBHSC。     

简易法冻存脐血造血干细胞的研究

目的 :为脐血造血干细胞 (CBHSC)的冻存建立简便、经济且有效的方法。方法 :采用 5 %二甲基亚砜 (DMSO)加6 %羟乙基淀粉 (HES)为冷冻保护剂 ,不用程控降温装置 ,直接置 CBHSC于 - 80℃冰箱中降温 ,后分 - 80℃冰箱组和液氮组保存 1周至 3个月。结果 :冻存 3个月后 ,单个核细胞 (MNC)和粒 -单系造血祖细胞 (CFU- GM)的回收率及台盼兰拒染率在 - 80℃冰箱保存组分别为 (92 .9± 0 .8) % ,(82 .2± 19.6 ) % ,(82 .1± 1.4) % ;在液氮保存组分别为 (93.0± 1.2 ) % ,(93.6± 2 2 .2 ) % ,(85 .6± 1.5 ) %。结论 :这两种简便、经济的方法能很好地保存 CBHSC的造血潜能 ,能为脐血移植冻存CBHSC。     

不同冻存条件对造血干细胞保存效果的影响

目的:探讨不同冻存条件对造血干细胞(HSC)的保存效果. 方法: 在脐血HSC中加入冷冻保护液A[100 g/L二甲基亚砜( DMSO) 120 g/L HES 80 g/L人血清白蛋白]或B(50 g/L DMSO 120 g/L HES 80 g/L人血清白蛋白),分别做以下处理:-80℃直接冻存(Ⅰ组); 程控降温后-80℃冻存(Ⅱ组);程控降温后-196℃冻存(Ⅲ组),时间12 mo.比较在不同冷冻条件及不同DMSO浓度的条件下对HSC保存效果. 结果: 脐血HSC加冷冻保护液后在Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ组冷冻条件下,在12 mo期限内保存效果相当. 采用含25 g/L DMSO组成的联合冷冻保护液可在冷冻时间不超过3 mo的条件下对HSC进行冷冻保存. 结论: 在冷冻时间不超过3 mo的条件下,采用含25 g/L DMSO组成的联合冷冻保护液对HSC进行冷冻保存,既可满足移植的需要,又可减少DMSO的输入量. 长期保存HSC,则需要用含50 g/L DMSO的冷冻保护液.     

-80℃冻存外周血造血干细胞的应用研究

目的:探求一种操作简便实用、造血干细胞回收率和存活率高、成本低的外周血造血干细胞的冻存方法。方法:CP-1和5%白蛋白作保护剂在?80℃条件下直接冻存,并检测冻存前后外周血干细胞的活性,单个核细胞(MNC)和CFU-GM、CD34 细胞的回收率。结果:冻存前后外周血干细胞活性,单个核细胞(MNC)和CFU-GM、CD34 细胞的回收率无明显差异(P>0.05),输注后造血均重建。结论:CP-1和5%白蛋白作保护剂在?80℃条件下直接冻存干细胞是一种简便、可靠、安全、成本低的外周血干细胞冻存方法,具有广泛的临床推广价值。     

-80℃简易冻存外周造血干细胞临床应用观察

目的:探索一种简便易行、安全有效、成本低的干细胞的冻存方法。方法:6份外周造血干细胞以1640培养液和二甲基亚砜、10%白蛋白作保护剂在-80℃条件下直接冻存,检测冻存前后外周血干细胞的活性、单个核细胞(MNC)数和CD34+细胞数及回收率。结果:冻存前后外周血干细胞活性、MNC和CD34+细胞的数量及回收率满足移植要求,输注后造血均重建。结论:1640培养液和二甲基亚砜、10%白蛋白作保护剂在-80℃条件下直接冻存干细胞是一种简便、可靠、安全、成本低的外周血干细胞冻存方法。     

－80℃低温冷冻保存人外周血造血干细胞

采用６％羟乙基淀粉（ＨＥＳ）和５％二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）为冷冻保护剂，不用程控降温装置和液氨，直接于一８０℃冰箱中冻存外周血造血干细胞（ＰＢＳＣ）。于冻存前和冻存后１周、１个月、２个月和３个月分别取样分析。冻存３个月后，外周血单核细胞（ＭＮＣ）回收率为８９．８±６．６％；胎盼蓝拒染存活率为８０．２±５．４％；粒一单系造血祖细胞（ＣＦＵ一ＧＭ）回收率为７１．１±８．２％。说明冻存效果好，ＤＭＳＯ用量减少，为ＰＢＳＣ的冷冻提供了一种简单而有效的方法。     

人脐血粒-单系造血祖细胞冻存研究

目的:观察人脐血在不同温区保存时粒-单系造血祖细胞(CFU-GM)的损伤情况及有效地长期深低温保存的可行性。方法:采用传统的室温制备—程序降温—液氮保存方法,观察脐血造血细胞活力及 CFU-GM 产率。结果:在室温存放12 h 不受影响,而-8℃、-20℃温区存放12 h 其活力及产率下降,产率分别比冻存前减少了15.5%和38.1%,-30℃温区继续下降,而-80%温区未再进一步降低。液氮中不同时间-80℃保存不会进一步降低 CFU-GM 产率。结论:-8℃～-30℃之间是冻存损伤造血祖细胞主要的危险区,而液氮中长期深低温保存不会进一步损伤脐血造血祖细胞。故-80℃冻存脐血比较合适。     

非程控降温,—80℃冻存自体外周血干细胞的研究

目的：观察非程控降温、－80℃冻存的方法对自体外周血十细胞（APBSC）的保存效果。方法：以6％羟乙基淀粉（HES）、5％二甲基亚砜（DMSO）及4％人血白蛋白（ALB）的混合物为冷冻防护剂，将APBSC直接置于－80℃下保存，冻存前反复苏后测定APBSC的CFU－GM、BFU－E；观察移植后造血功能重建情况。结果：13例患者白细胞在十3～＋7天下降至（0．0～0．1）×10／L，白细胞（0．0～0．2）×109／L持续时间3～6天，于＋9～＋11天恢复至1．0X109／L以上．中性粒细胞绝对值（ANC）于＋9～＋11天达到0．5X109／L。血小板在＋3～＋7天下降至（2．0～21）×109／L，于＋8～＋15天恢复至20×109／L以上。CFU－GM、BFU－E回大率分别为76．5％、78．4％。结论：非程控降温、－80℃冻存是一简便、经济、有效的自体外周血于细胞保存方法。     

脐血造血干细胞冻存和纯化的研究

为观察脐血造血干细胞—80℃保存以及脐血CD34~ 细胞的纯化效果,采用-80℃深低温冰箱冻存脐血干细胞,结果表明保存1个月脐血单个核细胞(MNC)数量、锥虫蓝拒染率、粒一单祖细胞集落(CFU—GM)数回收率分别为85.17％±5.38％、91.67％±3.22％、60.50％±4.42％。保存1、3、6个月动态观察3项指标除锥虫蓝拒染率1个月与6个月外均无显著性差异{均P>0.05)。用Isolex50免疫磁珠分离系统,可从脐血中获得高纯度CD34~ 细胞。上述研究为脐血造血干细胞移植的临床应用提供了实验依据。     

二甲基亚砜联合羟乙基淀粉的非程控降温法低温冻存脐血来源不成熟树突状细胞的实验研究

目的：联合使用二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide,DMSO）和羟乙基淀粉（hydroxyethyl starch,HES）作为冷冻保护剂并使用非程控降温冷冻技术,研究脐血来源的不成熟树突状细胞低温冻存前后所表现的生物特性,为不成熟树突状细胞的临床应用提供保存方法.方法：GM-CSF（granulocyte-macrophage clonoy-stimulatingfactor）和IL-4（interleukin-4）体外诱导单个核细胞产生不成熟树突状细胞,5%DMSO＋6%HES作为保护剂,-80℃冰箱降温,-196℃保存,37～40℃水浴复温,检测方法：台盼蓝拒染回收率,观察细胞形态,鉴定免疫表型,进行混合淋巴细胞反应,观察其诱导未致敏T淋巴细胞增殖情况.结果：冻存不成熟树突状细胞的台盼蓝拒染回收率为88.6%,其细胞形态,免疫表型及刺激未致敏T淋巴细胞的能力与新鲜DC相比无显著性差异.结论：冻存不成熟树突状细胞具有DC的显著特征,其细胞免疫表型和细胞功能实验上仍然保持了不成熟特征,联合使用二甲基亚砜和羟乙基淀粉作为冷冻保护剂对不成熟树突状细胞有良好的保护作用.     

造血干细胞采集、分离与冻存的研究

目的 :研究外周血造血干细胞的采集、分离、冻存及干细胞活性的检测。方法 :用封闭式动脉采血法采集 10例脐血 ,经Ficoll溶液分离获得干细胞 ,分成 3组 ,分别用 10 %二甲亚矾 (DMSO)、自配的 5 % DMSO+6 %羟乙基淀粉 (HES) +4 %人体白蛋白及 CP- 13种不同的冷冻保存液冻存于 196℃的液氮和 80℃的低温冰箱中 ,对冷冻后的样本进行单个核细胞 (MNC)计数。锥虫蓝拒染试验及流式细胞仪 CD+ 34 细胞计数。结果 :采集的血量平均数为 (72 .2± 17.3) ml,3种不同冷冻保存液对造血干细胞的保存效果在 1、3、6个月差异无显著性 (P>0 .0 5 )。随着冷冻时间的延长 ,特别是 6个月后 ,流式细胞仪对 CD+ 34 细胞检测的相对数逐渐增高。在 6个月内 ,80℃低温冰箱中的冻存与 196℃液氮内的冻存相比 ,对造血干细胞的影响差异无显著性 (P>0 .0 5 )。结论 :自配的冷冻保存液效果良好 ,短期造血干细胞的冻存可以在 80℃低温冰箱内进行 ,冷冻保存造血干细胞 1、3、6个月对细胞的活性影响不大。     

人外周血造血干细胞低温保存方法的实验研究

目的：观察－196℃程控降温冻存方法和－80℃直接冻存方法中单用二甲基亚砜（DMSO）与DMSO加羟乙基淀粉（HES)两种浆存保护剂对人外周血造血干细胞体外冻存的效果。方法：对5例经Cs-3000Plus血细胞分离机分离所得的外周血单个核细胞分别加入10％DMSO和5％DMSO加6％HES冻存保护剂。并分别以－196℃程控降温冻存方法和－80℃直接冻存方法保存15d，以快速复温法复苏细胞，检测冻存前后细胞活率及有核细胞、CD34^ 细胞、粒单系集落形成单位（CFU－GM）、红系集落形成单位（CFU－E）回收率。结果：在－196℃程控降温冻存方法时，单用DMSO和DMSO加HES两组在细胞活率、有核细胞回收率、CD34^ 细胞回收率、CFU－E回收率方面差别无显著性意义；在－80℃直接冻存方法时，MDSO加HES组有核细胞回收率、CFU－E回收率高于单用DMSO组。结论：－196℃程控降温冻存时10％DMSO和5％DMSO加6％HES两种冻存保护剂均可有效应用于外周血造血干细胞保存；一80℃直接冻存方法适合5％DMSO加6％HES冻存保护剂，也可有效用于外周血造血干细胞保存。     

脐血造血干细胞不同温度长期冻存效果的实验研究

目的通过观察在不同温度条件下长期冻存的效果,以探讨脐血造血干细胞适宜的保存时间。方法以终浓度为5%二甲基亚砜(DMSO)、3%羟乙基淀粉(HES)和4%人血白蛋白(HSA)作为细胞冷冻保护剂,分别采用-80℃冰箱直接冻存和程控降温-196℃液氮冻存,冻存前及冻存3、6及12个月后,应用全自动血细胞分析仪测定脐血单个核细胞(MNC)计数,台盼蓝拒染法显微镜下计数细胞存活率及流式细胞仪测定CD34 细胞计数。结果在-80℃冰箱冻存3个月后,脐血MNC计数、台盼蓝拒染率及CD34 细胞计数冻存前后比较差异均无显著性。冻存6个月后,脐血台盼蓝拒染率较冻存前差异有显著性(P<0.05)。冻存12个月后,脐血各项指标较冻存前差异均有显著性,其中台盼蓝拒染率差异存在非常显著性(P<0.01)。在-196℃液氮冻存3、6及12个月后,脐血MNC计数、台盼蓝拒染率及CD34 细胞计数冻存前后比较均无显著差异。结论以终浓度为5%二甲基亚砜(DMSO)、3%羟乙基淀粉(HES)和4%人血白蛋白(HSA)作为细胞冷冻保护剂,脐血造血干细胞在-80℃冰箱中可以有效保存3个月,6个月后存在部分细胞损害,此时的脐血不适合作干细胞移植。脐血经程控降温-196℃液氮冻存12个月后,造血干细胞仍保存完好,适宜长期保存。     

不同冻存液对人羊膜间充质干细胞-80 ℃冻存与复苏效果的影响

目的:观察不同冻存液对人羊膜间充质干细胞冻存复苏后的存活率及再培养情况的影响,并探索简单有效的冻存与复苏方法.方法:将含有血清培养基短期体外培养的人羊膜间充质干细胞分为4组,分别加入不同冻存液(体积分数):A组10%二甲基亚砜 40%胎牛血清 50%DMEM/F12,B组10%二甲基亚砜 90%胎牛血清,C组5%二甲基亚砜 4.5%羟乙基淀粉 20%胎牛血清 70.5%DMEM/F12,D组10%胎牛血清 90%DMEM/F12.以相同方法冻存并复苏细胞,比较4组细胞回收率及再培养情况.结果:A、C 2组细胞复苏后回收率高于另外2组(P均<0.05),且于复苏后再培养24 h内出现较多贴壁细胞.结论:以5%二甲基亚砜 4.5%羟乙基淀粉 20%胎牛血清 70.5%DMEM/F12作冻存液冻存羊膜间充质干细胞效果好.     

-80 ℃冰箱冷冻保存恶性血液病患者自体外周血造血干细胞的临床应用

自体干细胞移植(autologous peripheral blood stem cell trans-plantation,APBSCT)是治愈某些恶性血液病的有效手段之一.     

-80℃冻存外周血干细胞21例分析

目的：探索一种操作简单、干细胞回收率和存活率高、成本低廉的外周血浆存方法。方法：采用终浓度为5％二甲基亚砜（DMSO），3％羟乙基淀粉（HES）和4％人血白蛋白（HSA）的干细胞保护剂直接－80℃冰箱冰存外周血干细胞，并检测不同时相点（1、3、6、9、12个月）外周血干细胞的细胞活性，单个核细胞（MNC）和CFU－GM、CD34^ 细胞的回收率。结果：随着保存时间的延长，观察到12个月时，冻存干细胞的细胞活性、MNC回收率和CD34^ 细胞回收率分别为86．46％、88．58％、87．65％，与冻存1个月相比无统计学差异（P＞0．05），足以保障干细胞移植后造血重建的成功。结论：5％DMSO，3％HES和4％HAS作为干细胞冷冻保护剂直接－80℃冰箱冻存外周血干细胞是一种简便、实用、安全、可靠、成本低的外周血干细胞冻存方法，具有广泛的临床推广价值。     

外周血造血干细胞的检测及冻存技术

0　引言　化疗是治疗恶性肿瘤的有效方法 [1 ,2 ] ,自体外周血干细胞移植 (APBSCT)治疗实体瘤是技术 .利用流式细胞术(FACS)检测采集的自体外周血干细胞 (APBSC)中 CD34+ 细胞及其亚群 ,对准确及时判断干 /祖细胞数量有重要意义 [3] ,分离液的冻存更是 APBSCT中的关键技术 .我们通过对临床2 4例肿瘤患者 APBSCT中干细胞的检测及冻存技术的研究 ,制定标准技术方法 ,稳定临床治疗效果 .1　对象和方法1.1　对象　肿瘤患者 2 4例 ,男 13例 ,女 11例 ;年龄 2 9～ 73(中位 4 9)岁 .肿瘤类型 :乳腺癌 8例 ,肺癌 9例 ,精原细胞癌 2例 ,…