UPLC-MS结合网络药理学及实验验证罗欧咳祖帕对哮喘气道重塑的作用

目的 基于超高效液相色谱-质谱联用（UPLC-MS）、网络药理学及实验验证探讨罗欧咳祖帕干预哮喘气道重塑的作用研究。方法 基于UPLC-MS指认罗欧咳祖帕中化学成分信息;借助中药系统药理学数据库和分析平台（TCMSP）的口服利用度（OB）和类药性（DL）、SwissADEM的Lipinski五规则及查阅文献筛选罗欧咳祖帕潜在有效成分;通过SwissTargetPrediction数据库筛选罗欧咳祖帕的成分靶点;利用在线人类孟德尔遗传目录（OMIM）、GeneCards、DrugBank及DisGeNET数据库获取哮喘气道重塑的相关靶点;利用STRING数据库对主要靶点进行蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）分析,通过DAVID数据库进行基因本体（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析;最后构建卵蛋白（OVA）诱导小鼠建立哮喘气道重塑模型,采用苏木素-伊红（HE）染色、过碘酸雪夫染色（PAS）染色、马松（Masson）染色观察肺组织病理情况,检测小鼠肺泡灌洗液（BALF）中炎症细胞,并用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测小鼠肺组织中蛋白的表达水平,进一步验证关键的信号通路。结果 UPLC-MS检测负离子模式下82个成分,正离子模式下74个成分;通过网络药理学研究共得到罗欧咳祖帕36个候选成分和578个预测靶点,并得到与哮喘气道重塑共同靶点173个,包括癸二酸、柳穿鱼黄素、柚皮素、芹菜素等关键化合物和蛋白激酶B1（Akt1）、低氧诱导因子1α重组蛋白（HIF1A）等潜在的作用靶点;KEGG富集分析预测罗欧咳祖帕主要通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）、HIF-1α、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）等信号通路发挥抗哮喘气道重塑作用;动物实验表明,复方可减少哮喘小鼠气道杯状细胞增生,改善气道上皮下胶原沉积情况,降低小鼠因OVA致敏激发而上调的磷酸化（p）-Akt/Akt、HIF-1α的相对表达水平（P<0.05,P<0.01）,与网络药理学结果相符。结论 采用UPLC-MS结合网络药理学的方法,初步明确了罗欧咳祖帕的化学组成及其干预哮喘气道重塑的潜在作用机制,罗欧咳祖帕可能通过以Akt1、HIF-1α为代表的核心靶点及以PI3K/Akt、HIF-1α通路为代表的多通路,起到协同干预哮喘气道重塑的作用,为罗欧咳祖帕后续进一步研究提供思路。     

治咳川贝枇杷滴丸提取物中化学成分分离

目的:研究治咳川贝枇杷滴丸提取物中的化学成分。方法:通过正相硅胶、反相硅胶、聚酰胺、Sephadex LH-20等柱色谱方法以及制备型HPLC对治咳川贝枇杷滴丸提取物中的化学成分进行分离纯化,应用谱学技术鉴定化合物结构。结果:从治咳川贝枇杷滴丸提取物中分离得到24个化合物,分别鉴定为橙花叔醇-3-O-{α-L-吡喃鼠李糖基-(l→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(l→2)-[α-L-吡喃鼠李糖基-(l→6)]-β-D-吡喃葡萄糖苷}(1),橙花叔醇-3-O-[α-L-吡喃鼠李糖基-(l→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(l→6)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(2),橙花叔醇-3-O-{α-L-吡喃鼠李糖基-(l→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(l→2)-[4-反-阿魏酰-α-L-吡喃鼠李糖基-(l→6)]-β-D-吡喃葡萄糖苷}(3),(6S,7E,9R)-6,9-dihydroxy-4,7-megastigmadien-3-one 9-O-β-D-apiofuranosyl-(l→6)-β-D-glucopyranoside(4),4-咖啡酰奎尼酸(5),绿原酸(6),(6S,7E,9R)-9-hydroxy-4,7-megastigmadien-3-one 9-O-β-Dglucopyranoside(7),枇杷苷Ⅱ(8),3,4-二羟基苯甲酸(9),(6R,7E,9R)-9-hydroxy-4,7-megastigmadien-3-one 9-O-β-Dglucopyranoside(10),(+)南烛木树脂酚9'-O-β-D-吡喃木糖苷(11),(-)南烛木树脂酚9'-O-β-D-吡喃木糖苷(12),反丁烯二酸(13),2,6-dimethoxy-4-(2-propenyl)phenol 1-O-β-D-glucopyranoside(14),(+)南烛木树脂酚(15),山柰酚(16),对羟基苯酚(17),对羟基苯甲酸(18),对羟基肉桂酸(19),(6S,7E,9R)-6,9-dihydroxy-4,7-megastigmadien-3-one(20),蔷薇酸(21),乌苏酸(22),3-呋喃甲酸(23),香草酸(24)。结论:24个化合物包括8个倍半萜类(1,2,3,4,7,8,10,20),4个苯丙素类(11,12,14,15),9个有机酸类(5,6,9,13,17,18,19,23,24),2个三萜类(21,22),1个黄酮类(16)。这些化合物均首次从治咳川贝枇杷滴丸提取物中分离获得。     

寒喘祖帕颗粒治疗哮喘的潜在物质基础及作用机制的网络药理学研究

目的:运用网络药理学方法探究寒喘祖帕颗粒治疗哮喘的作用机制.方法:利用TCMSP数据库和中国知网检索寒喘祖帕颗粒中9个药物的化学成分,利用TCMSP数据库的靶点预测功能搜集9个药物所含化学成分的潜在作用靶点,运用Cytoscape 3.7.2构建寒喘祖帕颗粒的药物-成分-靶点-疾病网络图,并对潜在的疾病靶点进行蛋白相互...     

基于TRPV1/NRF-1/mtTFA通路研究射干麻黄汤对寒性哮喘大鼠的改善作用

研究射干麻黄汤对寒性哮喘大鼠的改善作用及其作用机制。将72只无特定病原体(specific pathogen free, SPF)的健康雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、阳性药(地塞米松,0.4 mg·kg^-1)组以及射干麻黄汤低、中、高剂量组(3.2、6.4、12.8 g·kg^-1)。除空白组予生理盐水,其他组均采用卵清蛋白(ovalbumin, OVA)制成的溶液腹腔注射致敏;之后将大鼠放入0～2℃可调节的寒冷箱中,同时予OVA溶液超声雾化激发,建立寒性哮喘大鼠模型。给药3周后,观察大鼠的一般行为学,苏木素-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色观察大鼠肺组织的病理变化,过碘酸希夫(periodic acid-Schiff, PAS)染色观察大鼠肺组织的黏液变化,马松(Masson)染色观察大鼠肺组织的胶原沉积变化,酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测血清及支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)中炎症因...     

肥大细胞在哮喘发生发展中的作用机制及中医药调控作用

哮喘在中医学中属于哮病、喘症的范畴,是以气道平滑肌收缩、免疫细胞浸润和气道重塑等为特征的气道炎症疾病。肥大细胞为非特异性免疫细胞,在哮喘的形成和发展中扮演关键角色。中医药对哮喘的防治具有独特优势,但具体机制尚不明确。通过对相关研究综述后发现,肥大细胞活化后释放的组胺、蛋白酶、细胞因子等介质在哮喘气道损伤及重塑的病理过程中起重要作用。此外,中药复方制剂、单味中药及其活性成分、中成药及中医外治法等中医药方法可通过调节肥大细胞活化,抑制多种炎症介质和细胞因子的表达,进而发挥对哮喘的治疗作用。     

基于网络药理学探寻淫羊藿治疗哮喘的关键靶标及作用机制

目的:基于网络药理学与分子对接方法,系统挖掘淫羊藿治疗哮喘的关键靶标及作用机制.方法:利用多种数据库寻找淫羊藿的活性成分与作用靶标,建立预测模型并利用分子对接技术对靶标进行筛选与验证;查找疾病数据库得到哮喘相关靶标;构建靶标互作网络筛选关键靶标;利用数据库进行GO功能富集分析与KE GG通路富集分析;构建生物网络并进行...     

黄芪多糖对哮喘小鼠气道高反应性及气道重塑的影响

目的 观察黄芪多糖对哮喘小鼠气道高反应性及气道重塑的影响。方法 通过腹腔注射和雾化吸入卵蛋白(OVA)制备哮喘缓解期小鼠模型。使用黄芪多糖治疗2月后,末次给药后24 h观察小鼠气道反应性、肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞总数和细胞分类以及肺脏病理学变化。结果 黄芪多糖可以降低模型小鼠的气道高反应性,降低BALF中炎性细胞总数及嗜酸性粒细胞和中性粒细胞比例,改善支气管周围炎性细胞浸润、减轻气道壁胶原沉积和黏液分泌,减轻气道重塑。结论 黄芪多糖降低气道高反应性、减轻支气管周围嗜酸性粒细胞浸润以及改善气道重塑可能是其治疗哮喘的主要作用机制。     

高效液相色谱-电喷雾多级质谱法分析鸢尾中黄酮和酚酸类成分

目的：建立高效液相色谱-电喷雾多级质谱法（HPLC-DAD-ESI-MSn）,鉴定鸢尾根茎中的黄酮和酚酸类成分。方法：利用样品的色谱的保留时间以及多级质谱分析,对其中的黄酮和酚酸类成分的结构进行了鉴定。结果：十个黄酮分别鉴定为鸢尾苷元7-O-β-葡萄糖-4＇-O-β-葡萄糖双糖苷（3）,鸢尾苷（5）,鸢尾新苷B（6）,鸢尾新苷A（7）,野鸢尾苷（8）,染料木素（11）,鸢尾苷元（12）,鸢尾甲黄素A（14）,鸢尾甲黄素B（16）和野鸢尾苷元（17）。两个二氢黄酮,一个黄酮醇和一个二氢黄酮醇暂时分别鉴定为橙皮素（9）,5,7,3＇-三羟基-6,4＇-二甲氧基二氢黄酮（10）,鼠李柠檬素（13）和二氢山奈酚（15）。此外三个酚酸类成分为草夹竹桃双糖苷（1）,草夹竹桃苷（2）和夹竹桃麻素（4）。结论：所建立的高效液相色谱-电喷雾多级质谱法可以用于快速鉴定鸢尾根茎中的活性成分。并首次在该植物中鉴定出橙皮素（9）、5,7,3＇-三羟基-6,4＇-二甲氧基二氢黄酮（10）。     

慢性阻塞性肺疾病的发病机制及中医药治疗进展

慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)属呼吸系统的常见病,其发病率、死亡率均高。本文对有关COPD发病机制及中医药研究文献进行分析,结合自身科研结果,总结COPD发病机制主要与肺部炎症、气道黏液过度分泌、氧化/抗氧化失衡、蛋白酶/抗蛋白酶失衡、细胞凋亡/组织重构等有关;基于发病机制,探寻防治COPD新的药物作用靶点,中医药因多途径、多靶点作用,治疗COPD凸显优势,与此相关的COPD基础和临床研究在不断深入。     

加减三子养亲汤辅助治疗支气管哮喘对患者肺功能及气道重塑的影响

目的:探讨加减三子养亲汤辅助治疗支气管哮喘及对患者肺功能和气道重塑的影响。方法:选取2016年1月至2017年6月新疆医科大学附属中医医院收治的支气管哮喘患者78例,随机分为观察组和对照组,每组39例。2组入院后均给予常规对症支持治疗,观察组同时加用三子养亲汤加减治疗,2组均连续治疗10 d。比较2组临床疗效及治疗前后中医证候积分变化,并比较2组治疗前后肺功能及气道重塑情况的变化,观察治疗期间2组药物不良反应发生情况。结果:治疗后观察组总有效率(89.74%)较对照组(71.79%)高(P0.05),观察组出院后6个月复发率低于对照组(P0.05)。治疗后2组鼻塞、咳嗽、咽痒、气急评分均较治疗前降低(P0.05),且观察组低于对照组(P0.05)。治疗后2组第1秒用力呼气容积(FEV1),每分钟最大通气量(MVV)较治疗前高,且观察组高于对照组(P0.05),剩余75%用力肺活量时的呼气流速(FEF75%)、气管内壁厚度(Wai)、气道平滑肌厚度(Wam)及支气管总管壁厚度(Wat)较治疗前低,且观察组低于对照组(P0.05)。2组不良反应发生率差异无统计学意义(P0.05)。结论:三子养亲汤加减联合西医治疗支气管哮喘可有效缓解患者临床症状,抑制气道重塑的发生及进展,提高患者肺功能,且复发率低,近远期疗效显著。     

甘草酸对哮喘小鼠气道炎症及磷脂酶A2活性的影响

目的观察甘草酸对哮喘小鼠气道炎症及磷脂酶A2活性的影响。方法建立小鼠卵蛋白哮喘模型,测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数及嗜酸粒细胞(EOS)计数及用盐酸滴定法测定肺组织和血清中磷脂酶A2活性。结果甘草酸能显著降低小鼠BALF中炎性细胞总数、EOS数量及磷脂酶A2活性。结论甘草酸具有抗气道炎症及降低磷脂酶A2活性的作用。     

五虎汤联合穴位贴敷对支气管哮喘患者气道重塑及MMP-9因子的影响

目的:探讨五虎汤联合穴位贴敷对支气管哮喘患者的疗效及对气道重塑、MMP-9因子的影响。方法:选取2017年1—12月新疆医科大学附属中医医院收治的支气管哮喘患者80例作为研究对象。按照随机数字表法随机分为对照组和观察组,每组40例。对照组采用布地奈德福莫特罗粉吸入剂联合硫酸沙丁胺醇治疗,观察组在对照组基础上给予中药五虎汤联合穴位贴敷治疗。比较2组患者治疗前、治疗后肺功能(FEV1%、PEFR、MMEF)、支气管黏膜基底膜厚度(TRBM)、支气管上皮黏膜肌纤维母细胞计数、MMP-9及TGF-β1水平变化情况及临床疗效。结果:2组治疗前FEV1%、PEFR、MMEF、TRBM、支气管上皮黏膜肌纤维母细胞计数、MMP-9及TGF-β_1水平比较,差异无统计学意义(P 0. 05);治疗后2组FEV1%、PEFR及MMEF水平均显著升高,支气管上皮黏膜肌纤维母细胞计数、TRBM、MMP-9及TGF-β_1水平显著降低,差异有统计学意义(P 0. 05);观察组FEV1%、PEFR及MMEF水平均显著高于对照组,支气管上皮黏膜肌纤维母细胞计数、TRBM、MMP-9及TGF-β_1水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P 0. 05)。观察组总有效率为95. 00%(38/40),对照组总有效率为90. 00%(36/40),2组比较差异无统计学意义(P 0. 05)。结论:五虎汤联合穴位贴敷可显著改善支气管哮喘患者肺功能指标,降低患者支气管上皮黏膜肌纤维母细胞计数、TRBM、MMP-9及TGF-β_1水平,疗效显著,且用药安全无不良反应,在临床支气管哮喘的治疗中具有重要的应用价值。     

龙脷平喘膏抗哮喘大鼠气道炎症作用及机制

目的:探讨龙脷平喘膏对发作期小儿哮喘气道炎症的影响。方法:48只大鼠按体重均衡随机分为空白对照组、模型组、地塞米松组(1 mg·kg-1)、龙脷平喘膏高、中、低剂量组(74.8,37.4,18.7 g·kg-1),每组8只。采用卵清蛋白(OVA)复制哮喘大鼠模型,连续给药1周,记录大鼠过敏性鼻炎症状,取鼻黏膜和肺组织,观察鼻黏膜及肺组织病理形态变化,并检测肺组织炎症细胞凋亡率和原癌基因Fas(Fas mRNA),B细胞淋巴瘤/白血病2基因(Bcl-2 mRNA)的表达。结果:除空白组外,其他各组在引发过敏性哮喘的同时均诱发了不同程度的过敏性鼻炎症状,且模型组鼻黏膜和肺组织均见嗜酸粒细胞浸润及相似的病理形态学改变;与空白组比较,模型组大鼠搔鼻和喷嚏的次数显著增多(P<0.01);与模型组比较,龙脷平喘膏能明显减少哮喘大鼠搔鼻和喷嚏的次数(P<0.01)。与空白组比较,模型组大鼠肺组织中炎症细胞凋亡率显著降低(P<0.01);与模型组比较,龙脷平喘膏高、中剂量组大鼠肺组织中炎症细胞凋亡率明显升高(P<0.05),且肺组织中促炎症细胞凋亡的调控基因Fas mRNA阳性表达率显著升高(P<0.01),抑制炎症细胞凋亡的调控基因Bcl-2 mRNA阳性表达率则显著下降(P<0.01)。结论:龙脷平喘膏能明显抑制哮喘大鼠气道炎症,机制可能与其逆转Fas/Bcl-2失衡,促进炎症细胞凋亡有关。     

止嗽散对咳嗽变异性哮喘大鼠气道炎性反应及外周血Th1/Th2平衡的影响

目的:探讨止嗽散对咳嗽变异性哮喘大鼠气道炎性反应及外周血Th1/Th2平衡的影响.方法:48只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、地塞米松组(0.2 mg/kg)、止嗽散高(12.6 g/kg)、中(6.3 g/kg)、低(3.1 g/kg)剂量组,每组8只.以卵白蛋白(OVA)致敏激发法制备大鼠咳嗽变异性哮喘...