硼替佐米联合5-杂氮胞苷抑制JAK/STAT信号通路对T细胞淋巴瘤细胞增殖和凋亡的影响北大核心CSCD

目的研究硼替佐米联合5-杂氮胞苷对T细胞淋巴瘤细胞增殖、凋亡及机制。方法对照组Jurkat细胞以3μmol·L^(-1)5-杂氮胞苷处理,低、中、高剂量实验组以10,30,50 nmol·L-1的硼替佐米+3μmol·L^(-1)5-杂氮胞苷处理,空白组加等量生理盐水。用噻唑蓝(MTT)法及流式细胞术检测细胞增殖、凋亡,用蛋白免疫印迹法检测细胞JAK/STAT信号通路蛋白表达。结果干预72h后,对照组和低、中、高剂量实验组细胞增殖抑制率分别为(39.05±2.63)%,(31.26±2.43)%,(60.12±3.05)%,(72.16±3.64)%。干预24,48,72 h后,中、高剂量实验组细胞增殖抑制率均高于对照组,且随硼替佐米浓度增大及作用时间延长逐渐升高(P<0.05)。干预48 h后,对照组和低、中、高剂量实验组细胞凋亡率均显著高于空白组。对照组和低、中、高剂量实验组细胞增殖指数低于空白组,凋亡率高于空白组(均P<0.05);且实验组增殖指数均低于对照组,细胞凋亡率均高于对照组(均P<0.05)。空白组、对照组和低、中、高剂量实验组Janus激酶1(JAK1)蛋白相对表达量为2.68±0.22,2.15±0.31,1.82±0.25,1.53±0.15,0.89±0.14,TYK2蛋白相对表达量为3.84±0.56,2.25±0.46,2.37±0.39,2.26±0.33,1.28±0.26;对照组和低、中、高剂量实验组Janus激酶1(JAK1)、TYK2蛋白相对表达量均低于空白组(均P<0.05),低、中、高剂量实验组JAK1蛋白及高剂量实验组TYK2蛋白相对表达量低于对照组(均P<0.05)。结论硼替佐米可协同增强5-杂氮胞苷抑制T细胞淋巴瘤细胞的增殖,并促其凋亡,其作用机制与显著抑制JAK/STAT信号通路中蛋白表达有关。     

番茄碱通过AMPK/COX-2通路调控食管癌细胞凋亡的机制研究北大核心CSCD

目的探究番茄碱通过单磷酸腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/环氧合酶-2(COX-2)通路抑制食管癌凋亡的机制研究。方法将人食管癌EC9706细胞随机分为对照组、低剂量实验组、中剂量实验组、高剂量实验组、高剂量+抑制药组;对照组细胞不做处理,低、中、高剂量实验组细胞分别给予1.0、2.0和4.0μmol·L^(-1)的番茄碱处理细胞48 h,高剂量+抑制药组使用4.0μmol·L^(-1)番茄碱和10μmol·L^(-1)AMPK抑制药Dorsomorphin共同处理细胞48 h。用细胞计数试剂盒8(CCK8)法检测细胞存活率;用流式细胞术和TUNEL法检测细胞凋亡情况;用蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞相关蛋白表达情况。结果对照组,低、中、高剂量实验组及高剂量+抑制药组细胞TUNEL阳性细胞率分别为(3.73±0.60)%、(12.48±1.05)%、(17.03±1.29)%、(33.04±2.25)%和(13.99±1.12)%,Ki67蛋白表达水平分别为0.98±0.09、0.79±0.07、0.59±0.09、0.33±0.03和0.71±0.07,胱天蛋白酶(Cl-caspase-3)蛋白表达水平分别为0.30±0.04、0.59±0.05、0.75±0.07、1.00±0.06和0.54±0.05,p-AMPK蛋白表达水平分别为0.28±0.05、0.56±0.06、0.73±0.04、1.09±0.10和0.69±0.04;COX-2蛋白表达水平分别为1.13±0.08、0.74±0.07、0.57±0.07、0.39±0.04和0.72±0.07。低、中、高剂量实验组上述指标与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);高剂量+抑制药组上述指标与高剂量实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论番茄碱可通过激活AMPK/COX-2信号通路抑制食管癌细胞增殖、诱导凋亡。     

红车轴草总黄酮通过调控miR-99a-3p/CD36表达对高糖诱导的大鼠胰岛β细胞的保护作用北大核心CSCD

目的研究红车轴草总黄酮对高糖诱导的大鼠胰岛β细胞损伤的影响,及其潜在的分子机制。方法本实验分为对照组,模型组,低、中、高剂量实验组,miR-NC组,miR-99a-3p组,anti-miR-NC,anti-miR-99a-3p组,模型+miR-NC组,模型+miR-99a-3p组,模型+si-NC组,模型+si-CD36组,高剂量实验+anti-miR-NC组和高剂量实验+anti-miR-99a-3p组。对照组给予5.5 mmol·L^(-1)葡萄糖处置;模型组给予25 mmol·L^(-1)葡萄糖处置;低、中、高剂量实验组分别给予12.5,25.0和50.0 mg·L^(-1)红车轴草总黄酮和25 mmol·L^(-1)葡萄糖处置;miR-NC组、miR-99a-3p组、anti-miR-NC组、anti-miR-99a-3p组分别转染miR-NC、miR-99a-3p、anti-miR-NC、anti-miR-99a-3p;模型+miR-NC组、模型+miR-99a-3p组、模型+si-NC组、模型+si-CD36组均给予25 mmol·L^(-1)葡萄糖处理,并分别转染miR-NC、miR-99a-3p、si-NC、si-CD36;高剂量实验+anti-miR-NC组、高剂量实验+anti-miR-99a-3p组均给予50.0 mg·L^(-1)红车轴草总黄酮+25 mmol·L^(-1)葡萄糖,并分别转染anti-miR-NC或anti-miR-99a-3p。用流式细胞术测定细胞凋亡率,用定量实时聚合酶链反应检测细胞中miR-99a-3p和CD36 mRNA的表达水平。结果模型组INS-1细胞中CD36 mRNA(2.74±0.27 vs 1.01±0.08)和细胞凋亡率[(27.63±2.71)%vs(5.69±0.58)%]均较对照组显著升高,miR-99a-3p(0.38±0.03 vs 1.00±0.09)较对照组显著降低,差异均有统计学意义(均P<0.05);与模型组比较,低、中、高剂量实验组的上述结果相反。模型+miR-99a-3p组的细胞凋亡率[(12.48±1.19)%vs(26.84±2.41)%]较模型+miR-NC组显著降低,miR-99a-3p表达量(0.79±0.07 vs 0.34±0.03)较模型+miR-NC组显著升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。模型+si-CD36组INS-1细胞中CD36 mRNA(1.35±0.12 vs 2.81±0.26)及细胞凋亡率[(13.54±1.32)%vs(25.87±2.52)%]均较模型+si-NC组显著降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。高剂量实验+anti-miR-99a-3p组INS-1细胞中miR-99a-3p(0.43±0.14 vs 0.88±0.06)较高剂量实验+anti-miR-NC组显著降低,CD36 mRNA(2.51±0.22 vs 1.41±0.13)及细胞凋亡率[(20.45±2.03)%vs(10.56±1.02)%]均较高剂量实验+anti-miR-NC组显著升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论红车轴草总黄酮可能通过调控miR-99a-3p/CD36以减轻高糖对大鼠胰岛β细胞INS-1的损伤,进而抑制细胞的凋亡。     

Apelin-13对高糖诱导的脐静脉内皮细胞凋亡的保护作用北大核心CSCD

目的探讨Apelin-13对高糖环境下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护机制是否与沉默信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)相关。方法实验分组分为4部分。实验Ⅰ,将HUVECs分为6组,分别为空白组(5.5 mmol·L^(-1)糖)、模型组(33 mmol·L^(-1)高糖)、各实验组(分别用1×10^(-9),1×10^(-8),1×10^(-7)和1×10^(-6)mol·L^(-1)Apelin预处理+33 mmol·L^(-1)高糖)。实验Ⅱ,将HUVECs分为4组,分别为空白组(5.5 mmol·L^(-1)糖)、模型组(33 mmol·L^(-1)高糖)、对照组(1×10^(-8)mol·L^(-1)Apelin)、实验组(用1×10^(-8)mol·L^(-1)Apelin预处理+33 mmol·L^(-1)糖)。实验Ⅲ,将HUVECs分为2组,分别为空载质粒组(1×10^(-8)mol·L^(-1)Apelin预处理+33 mmol·L^(-1)高糖)和APJ低表达组(1×10^(-8)mol·L^(-1)Apelin预处理+33 mmol·L^(-1)高糖)。以上3个实验均用Western blot法检测高糖环境下SIRT1蛋白的表达水平。实验Ⅳ,将HUVECs分为5组,分别为空白组(5.5 mmol·L^(-1))、模型组(33 mmol·L^(-1)高糖)、实验组(用1×10^(-8)mol·L^(-1)Apelin预处理+33 mmol·L^(-1)高糖)、抑制剂组(33 mmol·L^(-1)高糖+1×10^(-5)mol·L^(-1)EX527)、干预组(用1×10^(-8)mol·L^(-1)Apelin预处理+33 mmol·L^(-1)高糖+1×10^(-5)mol·L^(-1)EX527)。用流式细胞术检测HUVECs的凋亡率。结果实验Ⅰ,空白组、模型组和1×10^(-9),1×10^(-8),1×10^(-7)和1×10^(-6)mol·L^(-1)Apelin实验组的SIRT1蛋白相对表达量分别为0.51±0.06,0.30±0.05,1.02±0.07,1.12±0.10,1.14±0.10和1.05±0.10,模型组的SIRT1蛋白相对表达量与4个实验组和空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。实验Ⅱ,空白组、模型组、对照组和实验组的SIRT1蛋白相对表达量分别为0.82±0.09,0.59±0.05,0.77±0.05和0.72±0.06;模型组的SIRT1蛋白相对表达量与实验组和空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。实验Ⅲ,空载质粒组和APJ低表达组的SIRT1蛋白表达水平分别为0.94±0.13和0.71±0.17,差异有统计学意义(P<0.05)。实验Ⅳ,空白组、模型组、实验组、抑制剂组和干预组的细胞凋亡率分别为(13.60±0.92)%,(24.63±1.25)%,(12.73±1.00)%,(25.68±1.42)%和(10.25±2.30)%。模型组的细胞凋亡率与空白组和实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);抑制剂组的细胞凋亡率与干预组相比,差异有统计学意义(P<0.05);干预组的细胞凋亡率与实验组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论Apelin-13减轻高糖诱导的脐静脉内皮细胞凋亡的机制与SIRT1信号通路无关。     

川芎嗪对子宫内膜异位症细胞侵袭和凋亡的影响北大核心CSCD

目的 探讨川芎嗪调控长链非编码RNA(lncRNA)UBOX5-AS1对子宫内膜异位症细胞侵袭、凋亡和基质金属蛋白酶9(MMP-9)/基质金属蛋白酶组织抑制因子3(TIMP-3)信号通路的影响。方法 分离人子宫内膜异位症细胞,分成对照组、实验低剂量组(12μmol·L^(-1)川芎嗪处理)、实验中剂量组(24μmol·L^(-1)川芎嗪处理)、实验高剂量组(48μmol·L^(-1)川芎嗪处理)、实验高剂量+NC组(48μmol·L^(-1)川芎嗪、阴性对照载体处理)、实验高剂量+UBOX5-AS1组(48μmol·L^(-1)川芎嗪、UBOX5-AS1过表达载体处理)。以实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)方法检测UBOX5-AS1表达,以细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞增殖情况,以流式细胞术测定细胞凋亡情况,以蛋白质印迹法检测B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)、上皮钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、MMP-9、TIMP-3蛋白表达,以Transwell小室检测细胞侵袭。结果 对照组、实验低剂量组、实验中剂量组、实验高剂量组、实验高剂量+NC组、实验高剂量+UBOX5-AS1组子宫内膜异位症细胞中UBOX5-AS1表达水平分别为1.00±0.07,0.84±0.14,0.67±0.05,0.45±0.06,0.44±0.06和0.92±0.09;细胞存活率分别为(100.00±4.38)%,(83.87±5.45)%,(68.86±2.85)%,(52.17±4.64)%,(51.15±3.54)%和(79.92±5.99)%;凋亡率分别为(2.41±0.27)%,(9.60±0.93)%,(14.89±1.15)%,(17.54±0.96)%,(17.27±1.71)%和(9.75±1.28)%;Bax蛋白表达水平分别为0.26±0.04,0.33±0.03,0.40±0.02,0.53±0.03,0.54±0.04和0.34±0.03;细胞侵袭数目分别为105.32±5.66,79.05±7.80,64.59±4.09,51.50±3.28,50.61±5.13和72.08±9.37;上述指标之间比较,实验低、中、高剂量组和对照组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05);实验高剂量+UBOX5-AS1组与实验高剂量+NC组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 川芎嗪下调UBOX5-AS1抑制子宫内膜异位症细胞侵袭,诱导细胞凋亡,抑制MMP-9/TIMP-3信号激活。     

JQ-1联合小豆蔻明对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响北大核心CSCD

目的探讨JQ-1与小豆蔻明(CAR)联用对乳腺癌细胞MCF-7增殖和细胞凋亡的影响。方法将MCF-7细胞实验分为空白组(不给药)、对照组(10.00μmol·L^(-1)CAR)、实验组(25.00μmol·L^(-1)JQ-1)及联合组(10.00μmol·L^(-1)CAR+25.00μmol·L^(-1)JQ-1)。4组细胞均培养48 h。用CCK-8法检测细胞的增殖能力,用Annexin-V FITC/PI双染法检测细胞的凋亡情况,用蛋白质印迹法检测磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)和活化后胱天蛋白酶7(Cleaved Caspase7)的表达水平。结果联合组、实验组、对照组和空白组的增殖率分别为(47.79±11.27)%、(66.75±26.56)%、(74.57±13.59)%和(100.00±0)%,细胞晚期凋亡率分别为(24.17±1.27)%、(7.07±0.80)%、(14.70±3.12)%和(4.98±2.98)%,p-PI3K蛋白相对表达水平分别为0.87±0.02、1.11±0.06、1.09±0.03和1.00±0.00,p-AKT蛋白相对表达水平分别为0.31±0.05、0.96±0.06、0.96±0.16和1.00±0.00,Cleaved Caspase7蛋白相对表达水平分别为2.70±0.04、1.51±0.03、1.28±0.01和1.00±0.00。联合组的上述指标与空白组、对照组、实验组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论JQ-1与CAR联用对乳腺癌细胞MCF-7具有增强抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的作用,其作用机制可能与调控PI3K/AKT通路相关。     

鸦胆子苦醇通过Toll样受体4介导对尖锐湿疣角质形成细胞免疫调节的研究北大核心CSCD

目的探究鸦胆子苦醇(BRU)对尖锐湿疣(CA)角质形成细胞免疫调节的机制。方法收集本院尖锐湿疣组织,并分离CA角质形成细胞。用0、5.0、10.0和20.0 nmol·L^(-1)的BRU处理CA角质形成细胞,分别标记为空白组和低、中、高剂量实验组。将本院分离的CA角质形成细胞分为对照组(正常培养的CA角质形成细胞)、高剂量实验组(用20.0 nmol·L^(-1)的BRU处理细胞)、BRU+pcDNA-NC组(转染pcDNA-NC+20.0 nmol·L^(-1)的BRU)、BRU+pcDNA-TLR4组(转染pcDNA-TLR4+20.0 nmol·L^(-1)的BRU)。用CCK-8法和EdU法检测细胞的增殖情况,用实时荧光定量聚合酶链反应法检测Toll样受体4(TLR4)mRNA表达量,用蛋白质印迹法检测各组细胞TLR4和细胞核相关抗原Ki67(Ki67)的表达水平,用酶联免疫吸附试验法检测各组细胞γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-8(IL-8)含量。结果高剂量实验组和空白组的TLR4 mRNA表达量分别为0.32±0.03和1.00±0.08,TLR4蛋白相对表达水平分别为0.36±0.04和1.07±0.11,差异均有统计学意义(均P<0.05)。对照组、高剂量实验组、BRU+pcDNA-NC组和BRU+pcDNA-TLR4组的EdU阳性细胞率分别为(42.36±3.92)%、(21.70±2.42)%、(20.89±1.85)%和(40.43±4.07)%,TLR4蛋白相对表达水平分别为1.02±0.09、0.34±0.03、0.38±0.04和0.79±0.09,Ki67蛋白相对表达水平分别为0.99±0.11、0.44±0.05、0.46±0.04和0.88±0.06,IFN-γ分别为(98.79±7.68)、(165.53±11.57)、(168.01±12.73)和(119.93±8.03)pg·mL^(-1),IL-8分别为(116.41±11.89)、(243.72±19.60)、(248.42±28.17)和(128.11±13.19)pg·mL^(-1)。对照组的上述指标与高剂量实验组比较,BRU+pcDNA-NC组的上述指标与BRU+pcDNA-TLR4组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论BRU可通过调控TLR4的表达,进而抑制CA角质形成细胞增殖,从而参与调控CA的进展。     

防己诺林碱对宫颈癌HeLa细胞的作用及其机制研究北大核心CSCD

目的探索防己诺林碱(FAN)对宫颈癌He La细胞的作用及分子机制。方法人宫颈癌He La细胞随机分为空白组(0μmol·L^(-1)FAN)和低、高剂量实验组(7.5,15μmol·L^(-1)FAN)。通过CCK-8法、细胞划痕和Transwell检测FAN对宫颈癌He La细胞增殖、迁移和侵袭的影响,采用流式细胞术检测FAN对细胞周期和凋亡的作用。用Western Blot法检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1),P27,P53,B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl2),细胞外调节蛋白激酶(ERK)和磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)的表达。结果FAN对宫颈癌He La细胞有明显抑制作用,呈现浓度和时间依赖关系(P<0.05)。给药48 h后,空白组、低、高剂量实验组划痕愈合率分别为(48.10±5.19)%,(22.68±3.36)%,(12.31±2.79)%;侵袭细胞数量分别为(248.60±33.34),(186.60±24.58),(53.00±13.04)个。给药24 h后,空白组、低、高剂量实验组G0/G1期细胞比例分别为(68.67±2.32)%,(77.43±3.51)%,(85.90±1.31)%;细胞凋亡率分别为(4.07±0.40)%,(5.48±1.36)%,(10.25±1.88)%;Cyclin D1蛋白相对表达量分别为0.75±0.07,0.45±0.07,0.20±0.03;P27蛋白相对表达量分别为0.01±0.00,0.17±0.02,0.55±0.04;P53蛋白相对表达量分别为0.08±0.01,0.12±0.03,0.34±0.08;Bcl-2蛋白相对表达量分别为0.40±0.03,0.17±0.02,0.06±0.01;p-ERK蛋白相对表达量分别为0.61±0.03,0.34±0.03,0.15±0.04;低、高剂量实验组的上述指标与空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论FAN能抑制宫颈癌He La细胞的增殖、迁移及侵袭能力,同时阻滞细胞周期并促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制ERK信号通路有关。     

吴茱萸碱介导线粒体凋亡途径保护H_(2)O_(2)所致L-O2肝细胞损伤北大核心CSCD

目的探究吴茱萸碱对过氧化氢(H_(2)O_(2))所致L-O2肝细胞损伤的保护作用及其作用机制。方法将L-O2肝细胞分为对照组、H_(2)O_(2)组、低剂量实验组、中剂量实验组、高剂量实验组;对照组细胞为正常培养的L-O2细胞,H_(2)O_(2)组细胞用120μmol·L^(-1)的H_(2)O_(2)处理细胞6 h,低、中、高剂量实验组细胞分别用4、8和16μmol·L^(-1)的吴茱萸碱处理细胞24 h后,再用120μmol·L^(-1)的H_(2)O_(2)继续处理细胞6 h。用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测各组细胞存活率,用流式细胞术法检测各组细胞凋亡情况,用JC-1染色法检测各组细胞线粒体膜电位,用化学发光仪检测三磷酸腺苷(ATP)水平,用蛋白质印迹法检测各组细胞相关蛋白表达水平。结果对照组、H_(2)O_(2)组、高剂量实验组细胞存活率分别为(100.00±3.92)%、(64.09±2.69)%和(94.89±5.78)%,细胞凋亡率分别为(3.05±0.27)%、(19.75±1.47)%和(5.58±0.34)%,JC-1红/绿荧光比值分别为2.55±0.37、0.55±0.03和2.11±0.11,裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cl Caspase-3)蛋白表达水平分别为0.34±0.02、1.07±0.05和0.40±0.04,细胞色素(Cyt C)蛋白表达水平分别为0.30±0.02、0.91±0.09和0.35±0.03,磷酸化C-Jun氨基端激酶(p-JNK)蛋白表达水平分别为0.32±0.03、1.04±0.04和0.52±0.05,线粒体裂变因子(Mff)蛋白表达水平分别为0.31±0.04、0.94±0.15和0.45±0.05。以上指标,H_(2)O_(2)组与对照组比较,高剂量实验组与H_(2)O_(2)组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论吴茱萸碱预处理可通过改变线粒体膜电位介导线粒体凋亡途径,抑制细胞凋亡,从而减轻H_(2)O_(2)所致的L-O2肝细胞损伤,这可能与JNK/Mff通路有关。     

鸦胆子苦醇联合长波紫外线辐射对人恶性黑色素瘤A375细胞凋亡的影响研究北大核心CSCD

目的观察鸦胆子苦醇联合长波紫外线(UVA)辐射对人恶性黑色素瘤A375细胞凋亡的影响及机制。方法人恶性黑色素瘤A375细胞分为空白组、对照组和实验组。空白组细胞不做任何处理,对照组用75 k J·m^(-2)长波紫外线处理,实验组在75 k J·m^(-2)长波紫外线处理2 h后分别加入10,20,50,100,200nmol·L^(-1)的鸦胆子苦醇。检测各组细胞活性、细胞周期及凋亡率,检测人转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)通路及线粒体凋亡途径相关蛋白表达情况。结果对照组和实验组细胞活性均显著低于空白组,50,100,200 nmol·L^(-1)实验组细胞活性均显著低于对照组,且随鸦胆子苦醇作用浓度增大而逐渐降低(P<0.05或P<0.01)。对照组和10,20,50,100,200 nmol·L^(-1)实验组细胞凋亡率分别为(3.21±0.24)%,(3.45±0.26)%,(5.86±0.42)%,(12.62±1.12)%,(13.02±2.24)%,(16.15±2.78)%,均显著高于空白组的(0.89±0.12)%,20,50,100,200 nmol·L^(-1)实验组细胞凋亡率均明显高于对照组(均P<0.01)。对照组和实验组与空白组比较,人恶性黑色素瘤A375细胞G0/G1期细胞比例逐渐升高,G2/M和S期细胞比例逐渐降低(P<0.05或P<0.01)。空白组、对照组和50 nmol·L^(-1)实验组Nrf2蛋白相对表达量分别为1.69±0.23,1.23±0.24,1.03±0.15,谷胱甘肽S转移酶P1(GSTP1)蛋白相对表达量分别为2.43±0.16,2.89±0.18,2.78±0.21,B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(Bax)蛋白相对表达量分别为0.59±0.14,1.05±0.21,1.59±0.24,胱天蛋白酶-3(caspase-3)蛋白相对表达量分别为2.63±0.15,2.71±0.26,2.63±0.28。与空白组比较,对照组和实验组人恶性黑色素瘤A375细胞Nrf2蛋白表达相对量降低,Bax和GSTP1蛋白表达相对量升高,caspase-3无明显变化。结论鸦胆子苦醇联合UVA辐射可抑制人恶性黑色素瘤A375细胞增殖,且存在一定的量效关系,与抑制Nrf2信号通路及激活线粒体凋亡途径相关蛋白,加速细胞凋亡有关。     

红景天苷对过氧化氢诱导SHSY-5Y细胞氧化应激损伤的影响北大核心CSCD

目的探究红景天苷通过沉默信息调节因子2相关酶1(sirtuin 1,Sirt1)抑制过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的神经母细胞瘤细胞SHSY-5Y氧化应激损伤的机制。方法将对数生长期的人神经母细胞瘤细胞SHSY-5Y随机分为空白组、模型组和低、中、高剂量实验组。空白组给予生理盐水处理,模型组给予100μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)处理,低、中、高剂量实验组先分别用1,10,100μmol·L^(-1)红景天苷处理后,再用100μmol·L^(-1)过氧化氢处理。用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,以流式细胞术检测细胞凋亡率,以酶联免疫吸附(ELISA)法检测一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平,以实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)、免疫荧光技术及蛋白质印迹(Western blot)法检测Sirt1 mRNA和蛋白的表达水平。结果空白组、模型组和低、中、高剂量实验组的细胞活力分别为(100.00±5.99)%,(22.89±4.17)%,(30.75±6.01)%,(60.69±9.37)%,(80.81±4.38)%;凋亡率分别为(6.77±0.72)%,(68.53±11.07)%,(57.01±6.33)%,(46.41±8.54)%,(20.12±3.60)%;NOS水平分别为(0.41±0.08),(4.99±0.32),(4.24±0.24),(2.95±0.19),(2.33±0.25)ng·mL^(-1);SOD水平分别为(24.15±1.92),(10.65±0.78),(13.62±1.52),(17.01±1.63),(21.38±0.54)U·mg^(-1);MDA水平分别为(6.31±0.89),(15.40±1.03),(11.77±0.90),(9.95±1.01),(7.51±1.13)ng·mL^(-1);8-OHdG水平分别为(3.67±0.30),(10.99±1.04),(9.72±1.35),(6.89±0.33),(4.62±0.66)μmol·mg^(-1);模型组和空白组的上述指标比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);低、中、高剂量实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论红景天苷对过氧化氢诱导SHSY-5Y细胞氧化应激损伤具有保护作用,其机制可能与Sirt1蛋白激活相关。     

阿司匹林对人胃癌细胞SGC-7901、BGC-823生长和自噬的影响

目的:研究阿司匹林对人胃癌细胞SGC-7901、BGC-823生长和自噬的影响。方法:以SGC-7901、BGC-823细胞为研究对象,磷酸盐缓冲液(PBS)为阴性对照组,作用时间为48 h,采用MTT法检测1、2、4、6、8、10 mmol/L阿司匹林以及5 mmol/L阿司匹林单用和分别与2.5μmol/L氯喹、2.5μmol/L 3-甲基腺嘌呤(3-MA)联用对胃癌细胞存活率的影响;采用流式细胞术检测2、5mmol/L阿司匹林以及5 mmol/L阿司匹林单用和分别与2.5μmol/L氯喹、2.5μmol/L 3-MA联用对胃癌细胞凋亡率和细胞周期分布的影响;采用Hoechst33258染色观察5 mmol/L阿司匹林对胃癌细胞核形态学的影响;采用Transwell小室试验检测5 mmol/L阿司匹林对胃癌细胞迁移的影响;采用激光共聚焦扫描显微镜观察5 mmol/L阿司匹林对胃癌细胞内自噬体形成的影响;采用Western blot法检测2、5 mmol/L阿司匹林对胃癌细胞内自噬标志物LC3-Ⅱ蛋白表达的影响。结果:与阴性对照组比较,阿司匹林能明显抑制SGC-7901、BGC-823细胞的存活率,且呈浓度依赖性,但对SGC-7901、BGC-823细胞的凋亡率没有明显影响,能够诱导细胞周期阻滞在G_1期。与阿司匹林单用组比较,阿司匹林+氯喹和阿司匹林+3-MA作用后SGC-7901、BGC-823细胞存活率明显升高,G_1期细胞分布率明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与阴性对照组比较,阿司匹林作用后SGC-7901、BGC-823细胞均未见明显的DNA裂解片段、凋亡小体以及碎块状的浓密亮蓝色,迁移数量明显减少(P<0.001),自噬体明显增加,LC3-Ⅱ蛋白表达明显增强(P<0.05)。结论:阿司匹林能够显著抑制胃癌细胞SGC-7901、BGC-823的生长,使其细胞周期停滞在G_1期,其作用机制可能与激活细胞自噬有关。     

壁虎粗多肽对SH-SY5Y细胞增殖和凋亡的影响

目的研究壁虎粗多肽(GCPs)对人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞增殖、凋亡能力的影响。方法用不同浓度GCPs(0,0.08,0.12,0.16,0.20,0.24,0.32 mg·mL^-1)分别处理SH-SY5Y细胞24,48,72 h,用噻唑蓝(MTT)比色法检测SH-SY5Y细胞增殖能力的变化,根据MTT结果分组。将SH-SY5Y细胞分为空白组和低、中、高剂量实验组(GCPs:0,0.12,0.16,0.20 mg·mL^-1)。用流式细胞仪检测SH-SY5Y细胞的凋亡率,用Hoechst 33258荧光染色检测细胞核变化,用蛋白质印迹法检测胱天蛋白酶-3(Caspase-3)和Caspase-9蛋白的表达水平。结果GCPs作用SH-SY5Y细胞24,48,72 h的半数抑制浓度(IC₅₀)值分别为(0.23±0.01),(0.20±0.01)和(0.17±0.01)mg·mL^-1。空白组和低、中、高剂量实验组的细胞凋亡率分别为(10.21±0.73)%,(20.93±2.07)%,(32.90±1.07)%和(57.71±8.51)%,低、中、高剂量实验组的凋亡率与空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。在荧光显微镜下观察,低、中、高剂量实验组蓝色荧光分布不均,细胞核缩小,有较强荧光团出现。空白组和低、中、高剂量实验组的Caspase-3与GAPDH灰度值比值分别为0.25±0.05,0.43±0.06,0.52±0.07和0.59±0.06,低、中、高剂量实验组与空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01);Caspase-9与GAPDH灰度值比值分别为0.17±0.01,0.19±0.02,0.23±0.02和0.26±0.02,高剂量实验组与空白组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论GCPs可抑制SH-SY5Y细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与激活Caspase凋亡途径相关。     

左金方通过上调Bax/Bcl-2下调MMP诱导人胃癌细胞SGC-7901的凋亡

目的研究左金方诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡的作用机制。方法采用MTT比色法观察左金方对SGC-7901的生长抑制情况;流式细胞仪PI单染亚二倍体峰分析细胞凋亡率;Hoechst 33258染色观察细胞形态学变化;Western blot方法检测Bcl-2、Bax蛋白表达以及JC-1试剂盒测定细胞膜电位。结果左金方能抑制细胞活性,与时间-剂量呈依赖关系。0.1、0.5和1.0 mg·m L-1左金方作用于SGC-7901细胞48 h后,细胞凋亡率分别为(11.60±1.24)%、(21.80±0.28)%、(36.40±1.59)%,与对照组(2.66±1.33)%比较差异均有统计学意义(P<0.01);Hochest染色细胞出现核固缩状和颗粒状荧光等典型的凋亡学特征;左金方可降低SGC-7901细胞Bcl-2基因表达和增加Bax基因表达;左金方作用SGC-790l 4 h后,可以明显引起细胞MMP的下降;1.0 mg·m L-1左金方组的作用尤其明显。结论左金方通过上调Bax/Bcl-2比率,下调MMP诱导了人胃癌细胞SGC-7901的凋亡。     

巴西苏木素通过激活Wnt/β-catenin通路调控卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的研究

目的 探讨巴西苏木素对人卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法 体外培养人卵巢癌SKOV3细胞,随机分为空白组及低、中、高剂量实验组和联合组。低、中、高剂量实验组分别用20、30和40μmol·L^-1巴西苏木素处理细胞,联合组用40μmol·L^-1巴西苏木素和10 ng·mL^-1 DKK1共同处理细胞,空白组给予常规培养。用流式细胞术检测细胞的凋亡率,用细胞划痕、Transwell小室实验分别检测细胞的迁移、侵袭能力,用蛋白质印迹法检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白的表达水平。结果 中、高剂量实验组和空白组的凋亡率分别为(15.24±1.20)%、(25.13±1.46)%和(3.26±0.78)%,划痕愈合率分别为(20.55±3.16)%、(9.58±1.92)%和(45.76±2.24)%,侵袭细胞数分别为(100.00±4.00)、(44.66±10.44)和(207.66±15.11)个,Bax蛋白相对表达水平...     

牡荆素通过调控磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路抑制人骨肉瘤细胞生长的研究

目的 研究牡荆素如何影响骨肉瘤细胞的生长以及所涉及的机制。方法 将143B细胞分为空白组(不给予任何处理，正常培养细胞)、对照组(0.1%二甲基亚砜)和低、中、高剂量实验组(20,40和60μmol·L^-1牡荆素)。用噻唑蓝法检测细胞的增殖情况，用蛋白质印迹法检测磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白的表达水平。结果 干预24 h后，中、高剂量实验组和对照组、空白组的细胞增殖率分别为(51.34±4.69)%、(33.16±3.67)%、(99.32±2.66)%和(100.00±3.26)%,p-PI3K蛋白相对表达水平分别为0.34±0.03、0.27±0.03、0.87±0.05和0.87±0.03,p-Akt(ser473)蛋白相对表达水平分别为0.35±0.03、0.22±0.04、1.02±0.07和0.97±0.06,p-Akt(thr308)蛋白相对表达水平分别为0.33±0.02、0.31±0.03、0.93±0.04和0.93±0.02。中、高剂量实验组的上述指标与对照组和空白组比较，差异均有统计学意义(均...     

地黄中松果菊苷对皮质酮诱导PC-12细胞凋亡的抑制作用及机制研究北大核心CSCD

目的观察松果菊苷对于皮质酮诱导的PC-12细胞损伤的保护作用及机制。方法将PC-12细胞分为6组:正常组,模型组(皮质酮500μmol·L^(-1)),阳性对照组(氟西汀0.3μmol·L^(-1))和低、中、高3个剂量实验组(松果菊苷:5,10,20μmol·L^(-1))。24 h后,用噻唑蓝法检测细胞存活率,用流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位水平,用蛋白质印迹法检测细胞内胱天蛋白酶3(Caspase-3)、剪切的胱天蛋白酶3(Cleaved Caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和B细胞淋巴瘤-2蛋白相关X蛋白(Bax)的蛋白表达水平。结果正常组、模型组、阳性对照组和低、中、高3个剂量实验组的细胞存活率分别为(100.0±3.1)%,(88.7±1.9)%,(94.3±3.4)%,(101.3±3.1)%,(102.1±1.9)%和(104.3±1.6)%。选择松果菊苷中剂量进行后续实验研究。正常组、模型组、阳性对照组和中剂量实验组的凋亡水平分别为(10.7±0.9)%,(25.5±1.3)%,(17.7±1.7)%和(19.7±0.8)%;这4组的JC-1单体比例分别为(18.7±0.6)%,(52.1±1.4)%,(25.6±0.9)%和(22.6±1.0)%;这4组的Cleaved caspase 3/Caspase 3比值分别为1.01±0.17,1.98±0.29,1.43±0.29和1.34±0.12;这4组的Bax/Bcl-2比值分别为1.23±0.21,3.01±0.81,1.64±0.39和0.91±0.29。上述指标:模型组与正常组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);阳性对照组和中剂量实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论松果菊苷可能是通过抑制线粒体凋亡信号通路降低凋亡水平来改善皮质酮诱导的PC-12细胞损伤。松果菊苷可能是地黄发挥抗抑郁作用的物质基础之一。     

柴胡皂苷D通过NOB1影响血管瘤内皮细胞凋亡北大核心CSCD

目的研究柴胡皂苷D对血管瘤内皮细胞凋亡的影响和机制。方法将人血管瘤内皮细胞分成对照组、实验组、pcDNA-NC组、pcDNA-NOB1组、实验组+pcDNA-NC组、实验组+pcDNA-NOB1组。对照组细胞正常培养;实验组在0 h时给予80μmol·L^(-1)的柴胡皂苷D处理;pcDNA-NC组、pcDNA-NOB1组在实验前24 h分别转染pcDNA-NC、pcDNA-NOB1;实验组+pcDNA-NC组、实验组+pcDNA-NOB1组转染后在0 h时用80μmol·L^(-1)的柴胡皂苷D处理。以MTT实验检测细胞增殖,以流式细胞术检测凋亡,以蛋白质印迹法(Western blot)检测NOB1、细胞色素C(Cyt C)蛋白表达。结果对照组、实验组血管瘤内皮细胞中NOB1蛋白表达量分别为0.78±0.10和0.40±0.05,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组、实验组、实验组+pcDNA-NC组、实验组+pcDNA-NOB1组血管瘤内皮细胞增殖活力(OD值)分别为0.53±0.06,0.26±0.04,0.27±0.03和0.34±0.02;这4组的凋亡率为(6.35±0.58)%,(20.34±2.62)%,(19.87±1.94)%和(8.61±1.05)%;这4组的胞浆中Cyt C蛋白表达量分别为0.22±0.03,0.45±0.05,0.42±0.05和0.30±0.03。上述指标,实验组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);实验组+pcDNA-NOB1组与实验组+pcDNA-NC组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论柴胡皂苷D通过下调NOB1激活线粒体凋亡途径诱导血管瘤内皮细胞凋亡。     

银莲花素A对结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响

目的 探究银莲花素A(RA)对结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡及β-连环蛋白(β-catenin)/c-Myc通路的影响。方法 体外培养人结肠癌HCT116细胞,将细胞分为对照组和低、中、高剂量实验组。低、中、高剂量实验组分别用5、10和20μmol·L^-1 RA处理细胞。用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测RA对结肠癌HCT116细胞增殖的抑制作用;用荧光显微镜观察细胞核的形态学改变;用流式细胞术检测细胞凋亡率;用蛋白质印迹法检测细胞β-catenin/c-Myc信号通路相关蛋白的表达情况。结果 对照组和低、中、高剂量实验组的细胞抑制率分别为0、(19.15±0.65)%、(35.11±0.40)%和(49.93±1.13)%,细胞凋亡率分别为(0.16±0.18)%、(9.26±0.42)%、(17.87±2.54)%和(38.10±2.70)%,β-catenin蛋白相对表达水平分别为0.74±0.03、0.69±0.01、0.33±0.02和0.16±0.04,c-Myc蛋白相对表达水平分别为0.89±0.01、0.54±0.03、0.29±0.03和0.1...     

艾塞那肽通过抑制内质网应激减少脂肪酸诱导肝细胞凋亡的作用北大核心CSCD

目的研究艾塞那肽(EXE)是否通过抑制内质网应激来减少棕榈酸诱导的肝细胞凋亡。方法将人肝细胞株L-02分为对照组、模型组(棕榈酸500μmol·L^(-1)处理24 h)、3个剂量实验组(以棕榈酸500μmol·L^(-1)和EXE 25,50,100 nmol·L^(-1)分别处理24 h)和联合组(以棕榈酸500μmol·L^(-1)、EXE 100nmol·L^(-1)和衣霉素2μg·L^(-1)处理24 h)。用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测细胞活力;以脱氧核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)染色及半胱天冬酶(Caspase)-3活性检测观察细胞凋亡;以实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测内质网应激标志物C/EBP同源蛋白(CHOP)表达及Caspase-12活性以观察细胞内质网应激水平。结果与模型组比较,EXE能剂量依赖性增加棕榈酸处理后L-02细胞的活力,减少凋亡细胞数,降低Caspase-3和Caspase-12活性,并下调CHOP表达(均P<0.05)。与高剂量实验组比较,联合组的CHOP表达、细胞凋亡数及Caspase-12活性均显著升高,细胞活力显著下降[(78.58±1.78)%vs(87.78±3.66)%](均P<0.05)。结论 EXE可能通过抑制内质网应激减少脂肪酸诱导肝细胞凋亡。