不同剂量坎地沙坦治疗大鼠急性胰腺炎的实验研究

目的：探讨选择性血管紧张素Ⅱ受体亚型AT1拮抗剂坎地沙坦不同剂量对大鼠急性胰腺炎（AP）的影响。方法：72只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、AP组、AP＋低剂量坎地沙坦组（2 mg/kg）、AP＋高剂量坎地沙坦组（10 mg/kg）。腹腔注射20%L-精氨酸溶液建立AP动物模型;坎地沙坦用大鼠灌胃针灌注。各组大鼠分别在造模后12 h、24 h、48 h分批次等数量（6只/组/批）心脏取血处死。取胰腺组织观察胰腺病理变化并评分（按Rongione标准）,胰腺/体质量比,检测大鼠血清脂肪酶、TNF-α、IL-10的变化。结果：AP组胰腺炎症评分,胰腺/体质量比,血清脂肪酶、TNF-αI、L-10较对照组明显升高（P〈0.01）。其中胰腺/体质量比于造模后12 h已有明显升高,于48 h达到高峰;而血清脂肪酶和胰腺TNF-αI、L-10于造模后12 h达到高峰,此后有所下降,但仍然保持较高水平。坎地沙坦干预的实验组胰腺炎症评分,胰腺/体质量比,血清脂肪酶、TNF-α以及胰腺TNF-α较AP组降低（P〈0.05）,但低剂量坎地沙坦组与高剂量组间无显著差异（P〉0.05）。本实验中,应用坎地沙坦对AP大鼠血清及胰腺IL-10均无显著影响（P〉0.05）。结论：应用AT1受体拮抗剂坎地沙坦可以明显减轻L-精氨酸诱导大鼠急性胰腺炎的炎症及损伤。     

急性胰腺炎大鼠TNF-α mRNA、IL-10 mRNA表达和胰腺细胞凋亡的研究

目的 探讨大鼠急性胰腺炎早期胰腺组织中TNF－αmRNA、IL－10mRNA的表达和细胞凋亡的变化规律。方法 以牛磺胆酸钠诱导20只大鼠急性水肿性胰腺炎（AEP）模型,20只急性坏死性胰腺炎（ANP）模型,另取10只正常大鼠作为对照。术后12h各处死10只大鼠,检测血清和胰腺组织中的TNF－α和IL－10水平,分析两者在胰腺组织中的mRNA较录水平,检测胰腺细胞的凋亡率。结果 正常、AEP和ANP组的细胞凋亡率分别为2．98％、17．29％和8．39％。制模后TNF－αm和IL－10增强ANP大鼠TNF－α表达增强。结论 急性胰腺炎大鼠胰腺组织中的TNF－α和IL－10的表达与其在血清和胰腺中的浓度成正比,胰腺本身可能就是产生细胞因子的主要器官。胰腺细胞凋亡率与疾病的严重程度呈负相关,凋亡是对胰腺损伤的良好反应。     

急性胰腺炎大鼠TNF-α和IL-10mRNA的表达及其意义

目的:探讨急性胰腺炎大鼠胰腺组织中TNF-αmRNA和IL-10 mRNA的表达及其对疾病发展和转归的意义。方法:以牛磺胆酸钠制备大鼠急性水肿性胰腺炎(AEP)模型20只和急性坏死性胰腺炎(ANP)模型20只,另取10只正常大鼠作为对照。造模12h后各处死10只大鼠,检测血清和胰腺组织TNF-α和IL-10水平及其胰腺组织中的mRNA转录水平,并观察胰腺组织的病理变化。结果:正常组、AEP组和ANP组的血清TNF-α水平分别为126pg/ml、186pg/ml和337pg/ml,组织TNF-α水平分别为118pg/ml、210pg/ml和443pg/ml。正常大鼠血清和胰腺组织中无法检测到IL－10,而AEP和ANP组血清IL－10水平为660pg/ml和124pg/ml,组织IL－10水平为669pg/ml和202pg/ml。AEP大鼠组织中IL-10mRNA表达增强,ANP大鼠TNF-α mRNA表达增强。结论:AP大鼠胰腺组织中TNF-α和IL-10 mRNA的表达与其在血清和胰腺组织中的浓度成正比,而急性胰腺炎时胰腺本身可能就是产生细胞因子的主要器官。     

雅施达治疗大鼠急性胰腺炎的实验研究

为观察雅施达（ACE－1）对实验大鼠急性胰腺炎（AP）的生化指标及胰腺组织结构的影响，探讨ACE－I在治疗AP中的作用和意义。笔者将70只健康SD大白鼠随机分为对照组（n=10)、AP组（n=30)和治疗组（n=30)。监测各组大鼠的血清淀粉酶、血清脂肪酶、全血黏滞度，并观察胰腺光镜和电镜下病理学改变。结果：（1）治疗组与AP组比较，血清淀粉酶、血清脂肪酶和全血黏滞度明显下降，差异有显著性（P＜0．05）；（2）治疗组胰腺病理改变较AP组轻。提示雅施达可使AP的血清淀酶、血清脂肪酶降低及全血黏滞度降低，对胰腺微循环障碍可能有一定的改善作用，对大鼠AP有治疗作用。     

实验性胰腺炎鼠转染人体白介素(IL)-10基因的治疗

作者观察用人体细胞因子调节基因（IL－10）转染鼠胰腺后的转基因表达期限,以及对正常胰腺的影响和实验性急性胰腺炎时的抗炎作用。已知IL－1β和肿瘤坏死因子（TNF）－α是急性胰腺炎发展过程中的有害介质,阻滞这些细胞因子将有助于减轻胰腺炎的严重程度。先制备pMP6－IL－10质粒和阳离子脂质体／DNA。取20只雄性NIH鼠（20～25g）,腹腔内注射脂质体,内含100μgpMP6－hIL－10质粒,转染后1、2、7和14天处死鼠,收集血清作淀粉酶和脂肪酶测定。收获胰腺,游离其中总RNA,用10％缓冲甲醛固定后作组织学和原位多聚酶键反应（PCR…     

1型血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂抑制大鼠胰腺纤维化形成

目的探讨1型血管紧张素Ⅱ受体(AT1)拮抗剂洛沙坦对大鼠实验性胰腺纤维化形成的抑制作用。方法胰管内注射2％三硝基苯磺酸(TNBS)诱导大鼠胰腺纤维化模型。于制模后第2天，治疗组给予洛沙坦(10mg／kg体重)灌胃，每日1次，对照组给予等容积的无菌蒸馏水。于制模后3，7，14，21．28d分别处死两组大鼠(每时点各6只)，并留取血清和胰腺组织。通过HE染色和Van Gieson(V-G)染色观察胰腺组织病理学改变和细胞外基质胶原纤维分布。分别应用放射免疫法和酶动力法测定血清透明质酸(HA)和淀粉酶。胰腺组织AT1受体蛋白和mRNA表达分别采用免疫组化和逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法。结果洛沙坦可抑制TNBS诱导的大鼠胰腺纤维化形成，降低胰腺组织炎症细胞浸润、腺泡细胞坏死及纤维化程度，并且能降低血清HA和淀粉酶水平、下调AT1受体基因和蛋白的表达。结论1型血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂对TNBS诱导的大鼠胰腺纤维化形成具有抑制作用，表明肾素-血管紧张素系统(RAS)在慢性胰腺炎胰腺纤维化的发生发展过程中起重要的介导调节作用。     

TNF,IL-6在急性胰腺炎发病中的作用

目的探讨炎症介质在急性胰腺炎（AP）发病机制中的作用.方法观察AP大鼠血清TNF,IL-6与胰腺的病理组织学变化的关系.结果（1）假手术组动物始终存活,胰腺炎组生存时间明显缩短（P＜0.05）;24h死亡率显著升高（P＜0.05）;（2）胰腺炎组24h死亡率与TNF-α浓度呈正相关（γ=0.9972,P＜0.05）,TNF-α浓度越高,大鼠死亡率越高;（3）胰腺炎组的TNF-α和IL-6浓度随AP后时间的延长进行性升高,与假手术组相比有极显著性差异（P＜0.01）.各时间点假手术组的胰腺病理评分均显著低于胰腺炎组（均P＜0.05）.结论TNF,IL-6的激活在胰腺炎的发生和发展过程有重要作用.     

急性胰腺炎时IL-6、TNF-α的变化及大黄干预的研究

目的:探讨大黄对大鼠急性胰腺炎治疗作用的机理。方法:通过胰胆管逆行注射5 %牛磺胆酸钠制作大鼠急性胰腺炎模型,检测血清TNF -α、IL - 6水平及大黄治疗后的变化。结果:大黄治疗后AP大鼠血清TNF -α、IL - 6明显降低。结论:大黄通过降低血清TNF -α、IL - 6水平,可以对实验性急性胰腺炎的治疗产生一定的有益帮助     

PGE2对大鼠急性胰腺炎肺超微结构与TNF-α、IL-10水平的影响

目的：探讨前列腺素E2（PGE2）免疫干预对急性坏死性胰腺炎（ANP）大鼠肿瘤坏死因子（TNF－α）和白介素－10（IL－10）与肺组织超微结构改变的影响。方法：SD大鼠91只分成4组：手术对照组（n=7）、ANP组、PGE2前干预组和PGE2后干预组(每组n=28），后3组又随机分1h、3h、6h、12h时段，每时段7只。大鼠ANP模型用5％牛磺胆酸钠诱导制作，PGE2前干预组和后干预组分别在ANP模型制作前2h和模型完成时肌肉注射150μg/kg和150μg/kg PGE2。采用ELISA检测各时段大鼠血清的TNF－α与IL－10含量，观察PGE2前干预、后干预对大鼠血清TNF-α与IL－10含量动态变化，同时随机取NAP组和PGE2干预组6h和12h时段肺组织，电镜下观察超微结构改变。结果：PGE2前、后干预组IL－10含量峰值分别在3h和6h时段，比ANP组显升高（P＜0．001），所有时段（1h、3h、6h、12h）TNF－α均比ANP组大鼠显降低（P＜0．001），IL－10上升幅度随PGE2给予的早晚而不同，TNF－α亦随IL－10上升而下降。PGE2免疫干预组与ANP组相比，6h时段的肺组织病变有所减轻，12h时段明显改善。结论：PGE2在上调大鼠血清IL－10、降低TNF－α含量的同时，使肺组织损伤得到改善。     

磷脂酶A2与NF-κB活化在大鼠急性坏死性胰腺炎肺损伤中的作用

目的:探讨磷脂酶A2 (PLA2 )与NF -κB活化在大鼠急性坏死性胰腺炎肺损伤中的作用。方法:Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、PLA2 抑制剂组。每组按不同时点(3h、6h、12h) ,分别测定血清淀粉酶、脂肪酶、PLA2 、TNFα、IL - 1、IL -6水平;测定肺组织MPO、PLA2 、TNFα、IL - 1、IL - 6水平;行肺、胰腺组织病理学检查;化学发光ELISA法检测肺泡灌洗液巨噬细胞NF -κB(P65)表达情况;每组12只用于观察2 4h死亡率。结果:PLA2 抑制剂组血清淀粉酶、脂肪酶、PLA2 ,肺组织及血清TNFα、IL - 1、IL - 6水平显著低于模型组(P值均小于0 0 1) ;肺组织MPO、PLA2 水平亦降低;肺泡灌洗液巨噬细胞NF -κB活性显著下降,同时肺脏及胰腺病理损害明显减轻;2 4h死亡率明显降低。结论:PLA2 可通过激活肺组织NF -κB ,上调多种细胞因子的表达而产生肺损害作用;阻断磷脂酶A2 可有效地减轻胰腺炎肺损伤     

SIRS发展在胰腺坏死、继发感染致胰腺炎病变加重中的作用

目的 探讨全身炎症反应综合征（SIRS）在胰腺坏死、继发感染致胰腺炎病变加重中的作用.方法 健康雄性SD大鼠46只,随机分为四组：SO组仅翻动胰腺,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组经胰管逆行注射1％、3％、5％牛磺胆酸钠＋104/mL大肠杆菌混合液.8 h后处死大鼠,检测胰腺组织细菌培养、脂肪酶、磷脂酶A2、c反应蛋白、TNF-α、IL-1β、IL-6水平,进行胰腺组织病理学检查及Schmidt评分.结果 ①SO、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组胰腺组织细菌培养阳性率分别为0 （0/10）、0（0/12）、25％ （3/12）、90％ （9/10）,其中Ⅲ组与SO、Ⅰ、Ⅱ组比较有统计学差异（P＜ 0.01）.②SO、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组血清脂肪酶、C反应蛋白、TNF-α、IL-1β、IL-6、Schmidt评分逐渐升高,各组间差别有统计学意义（P＜0.05）.③Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组血清磷脂酶A2水平较SO组有显著性升高（P＜0.01）,Ⅲ、Ⅱ组比Ⅰ组亦有显著性升高（P＜0.01）.④病理学检查结果：SO组未见明显病变;Ⅰ组可见胰腺水肿,炎性细胞浸润;Ⅱ组腺泡水肿,炎性细胞浸润,血管内充血,散在坏死灶与出血点;Ⅲ组可见凝固性坏死灶,大量炎性细胞浸润,微血管破裂,片状出血,甚至可见微脓肿.结论 ①胰腺坏死程度越重,其继发感染的概率越大;②SIRS可能是胰腺坏死、继发感染致胰腺炎病变加重的共同机制,抑制SIRS有助于SAP的治疗.     

PI3K／PKB信号转导通路在重症急性胰腺炎胰腺损伤中的作用

目的 探讨磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B（PI3K/PKB）信号转导通路对重症急性胰腺炎胰腺损伤的作用。方法 健康成年雄性SD大鼠30只，随机分为对照组、SAP组（S组）和SAP＋wortmannin（S＋W）组，每组10只。胆胰管内逆行注射法制作SAP模型。制模6h后取胰腺组织，检测各组含水量、MPO水平及病理改变；采用酶联免疫吸附法（ELISA）及RT-PCR技术检测胰腺组织TNF-α和IL-1β的蛋白及mRNA的变化、蛋白印迹（Western Blot）法检测p-PKB的活性变化。结果 制模6h后S组和S+W组较对照组胰腺组织含水量增加（P<0.01），MPO水平明显升高（P<0.01）；病理学发现胰腺明显出血、坏死和炎性细胞浸润；胰腺组织TNF-α和IL-1β的蛋白及mRNA水平明显增加（P<0.01），p-PKB水平明显升高（P<0.01）。S＋W组较S组胰腺组织水肿及病理改变减轻（P<0.01）、MPO水平降低（P<0.01），同时TNF-α和IL-1β的蛋白含量及mRNA表达减少（P<0.01），p-PKB水平降低（P<0.01）。结论 PI3K/PKB信号传导通路被激活是重症急性胰腺炎胰腺损伤的重要发病机制之一。     

早期肠内营养联合锦红汤对重症急性胰腺炎患者血浆中炎性介质的影响

目的：探讨早期肠内营养联合锦红汤对重症急性胰腺炎患者血浆中炎性介质的影响。方法：选取2010年1月—2013年3月本院收治的60例SAP患者,随机分为肠外营养（PN）组（20例）、肠内营养（EN）组（20例）、锦红汤＋EN组（20例）3组,分别测定治疗前1 d及治疗后3 d和8 d的血浆炎症介质TNF-α、IL-6、降钙素原、C-反应蛋白和血浆淀粉酶与脂肪酶的水平。结果：3组治疗后血浆各炎症介质及淀粉酶、脂肪酶均较治疗前明显改善（P〈0.05）。EN组治疗后3 d及8 d血浆IL-6、TNF-α、降钙素原、C-反应蛋白、淀粉酶、脂肪酶均较PN组显著降低（P〈0.05）,锦红汤＋EN组治疗后3 d、8 d血浆IL-6、TNF-a、降钙素原、C-反应蛋白、淀粉酶、脂肪酶亦均较PN组和EN组显著降低（P〈0.05）。结论：早期肠内营养联合锦红汤能降低重症急性胰腺炎患者血浆中炎性介质的水平,促进患者康复,具有一定的临床价值。     

Enzymatic and histologic investigations into the course of pancreatic alterations induced by anti-acinar-cell-antiserum.

A model of acute pancreatitis (AP) was developed by application of anti-acinar-cell-antiserum in rats. Within 24 h postoperatively the binding of antibodies to the pancreas, histological findings, and the activities of lipase and a-amylase in serum and pancreas were analyzed. While after intraaortic administration morphological alterations could not be observed, after single dose intraductal injection, typical macroscopical and histological signs of AP were found. This pancreatic injury was characterized by a mild and protracted course favoring investigations of the early phase of pathogenesis. As soon as 2 h after intraductal application of antiserum, serum amylase and lipase were already increased and microscopic examination of the pancreatic tissue revealed pancreatic edema, inflammatory infiltration and parenchymal necrosis. Intra- and extrapancreatic fat necrosis occurred at 16 h post injectionem. The results suggest that parenchymal damage plays an essential role in the manifestation of this experimental AP and that fat necrosis seems to be a secondary event.     

Beneficial effects of recombinant platelet-activating factor acetylhydrolase and BN 52021 on bacterial translocation in cerulein-induced pancreatitis

BACKGROUND: Bacterial translocation (BT) has been suggested to be responsible for the high incidence of infections occurring after acute pancreatitis (AP). The aim of this study was to investigate the effects of the platelet-activating factor (PAF) inactivator, recombinant PAF-acetylhydrolase (rPAF-AH), and the PAF receptor antagonist, BN 52021, in AP. METHODS: Forty-eight male Wistar rats were divided into 4 groups: the sham group received saline intraperitoneally every hour for 6 h; the control group received cerulein 50 g/kg i.p. every hour for 6 h; the rPAF-AH group received AP plus rPAF-AH (5 mg/kg i.v. bolus), and the BN52021 group received AP plus BN 52021 (5 mg/kg i.v. bolus). The animals were sacrificed 12 h after the first cerulein injection. RESULTS: Supramaximal cerulein stimulation induced an increase in serum pancreatic enzymes, interleukin (IL)-6, pancreatic edema, and produced histologic evidence of AP. Compared with the control group, the addition of PAF receptor antagonists had a significant effect on serum pancreatic enzymes, pancreatic edema, and the histologic score of the pancreatitis. AP caused significant increases in BT in mesenteric lymph nodes (MLNs), pancreas, liver, spleen and blood. Compared with the control group, both rPAF-AH and BN 52021 decreased BT in the pancreas and blood. In addition, rPAF-AH decreased BT in the MLNs. We also found that PAF receptor antagonists suppressed the elevation in IL-6 levels. CONCLUSION: PAF antagonists attenuated the severity of experimental AP and reduced pancreatitis-induced BT to distant sites.     

MCP-1在SAP大鼠胰腺及肠黏膜组织中的表达

目的 观察单核细胞趋化蛋白-1 （MCP-1）在重症急性胰腺炎（severe acute pancreastitis,SAP）大鼠血清、胰腺及肠黏膜组织中的表达并探讨其机理。方法 24只SD大鼠随机均分为对照组和SAP组。对照组大鼠开腹后仅翻动肠管,SAP组以3%牛磺胆酸钠按0.05 mL/100 g逆行注入大鼠胆胰管（注射时间1 min） 复制SAP模型。2组大鼠分别于制模后12及24 h采集血标本和胰腺及回肠组织标本,进行如下指标检测：①ELISA法测定血清中MCP-1及IL-10水平;②比色法测定淀粉酶（amylase,AMY）水平及二胺氧化酶（diamine oxydase,DAO）水平;③RT-PCR法检测胰腺及回肠组织中MCP-1 mRNA的表达;④观察胰腺及回肠组织的病理学改变。结果 SAP组血清中MCP-1、IL-10、AMY和DAO水平均较对照组升高（P＜0.01）;SAP组胰腺及回肠组织中MCP-1 mRNA表达较对照组上调（P＜0.01）,胰腺组织的病理学评分明显增高（P＜0.01）。结论 MCP-1在SAP大鼠血清、胰腺及回肠组织中的表达均上调,且加重了胰腺和肠道组织的损伤。     

乌司他丁对大鼠胰腺缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨乌司他丁对大鼠胰腺缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法SD大鼠72只随机分为假手术组（C）、缺血再灌注组（I）和乌司他丁组（U）。采用ELISA和免疫组化方法检测大鼠血清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1B（IL-1β）、胰腺组织bcl-2蛋白和热休克蛋白70（HSP70）表达的变化;并观察胰腺病理组织学改变。结果缺血再灌注组的各时点TNF-α含量明显高于假手术组和乌司他丁组（P〈0．05）;缺血再灌注组和乌司他丁组的IL－1β含量在6,12,24h较假手术组明显增加（P〈0．05）,但乌司他丁组增高水平明显低于缺血再灌注组（P〈0．05）;乌司他丁组在再灌注6,12,24h时bcl-2蛋白表达明显高于缺血再灌注组和假手术组（P〈0．05）．后两组各时点表达水平比较差异无统计学意义（P〉0．05）;缺血再灌注组和乌司他丁组HSP70的表达在12,24h较假手术组明显增加（P〈0．05）。病理组织学观察：乌司他丁组炎症反应较缺血再灌注组明显减轻。结论鸟司他丁能降低大鼠胰腺缺血再灌注损伤时血清TNF—α、IL-1β水平和上调胰腺组织bcl-2蛋白的表达,对大鼠胰腺缺血再灌注损伤有明显保护作用。     

Effects of heparin in experimental models of acute pancreatitis and post-ERCP pancreatitis

BACKGROUND: Acute pancreatitis (AP) is a complication of diagnostic or therapeutic endoscopic retrograde cholangiopancreatography (ERCP). In a recent clinical trial, a decreased rate of post-ERCP pancreatitis was shown after prophylactic heparin treatment. The aim of this study was to evaluate the effects of prophylactic heparin application in various experimental models of AP and pancreatic duct obstruction and to assess the underlying mechanisms. METHODS: In various experimental models, pancreatic injury of graded severity was induced in Wistar rats: (1) mild pancreatitis by IV cerulein infusion over 6 hours; (2) severe pancreatitis by infusion of glycodeoxycholic acid into the pancreatic duct plus IV cerulein application over 6 hours. The clinical ERCP situation was imitated in groups (3) obstruction of the pancreatic duct and (4) infusion of contrast medium into the pancreatic duct plus obstruction. In every group the animals received either no heparin (n=six per group) or continuous IV heparin (n=six per group) starting before pancreatic injury. Histologic changes, amylase, and lipase in plasma were evaluated 12 hours after induction of pancreatic injury. Additional animals were treated to investigate pancreatic microcirculation by intravital microscopy (n=six per group). RESULTS: In groups 1, 3, and 4 (mild AP/duct obstruction/duct obstruction plus contrast medium), IV heparin-treated animals showed reduced edema, inflammation, and peak amylase values compared with the corresponding non-heparin-treated animals (P<.05). Moreover, mean erythrocyte velocity was significantly higher and leukocyte-endothelium interaction was reduced in these groups after prophylactic administration of heparin. In contrast, group 2 (severe AP) did not show any difference between control animals and animals that received heparin as assessed by histology and intravital microscopy. CONCLUSIONS: Prophylactic systemic application of heparin provides a protective effect in mild AP and in experimental post-ERCP pancreatitis. The mechanism of the protective effects of heparin seems to be the reduction of leukocyte-endothelium interaction and the normalization of pancreatic microcirculation.