肺腺癌和正常肺组织中抗p21ras单克隆抗体KGH-R1、KGH-R2、KGH-R3的免疫反应性比较

目的比较抗p21ras的单克隆抗体KGH-R1、KGH-R2、KGH-R3在肺腺癌和正常肺组织中的免疫反应性,为该抗体的临床应用奠定基础。方法用本实验室制备的广谱抗p21ras单克隆抗体KGH-R1、KGH-R2、KGH-R3对30例肺腺癌和30例正常肺组织进行免疫组化SP法染色,计算各样本的阳性细胞百分率和HSCORE分值,比较两组间的免疫反应性差异。结果单克隆抗体KGH-R1、KGH-R2、KGH-R3与肺腺癌发生免疫反应的百分率分别为83.33%(25/30)、93.33%(28/30)、63.33%(19/30);阳性样本的平均阳性细胞百分数均为100%;平均HSCORE评分分别为127.50分、280.25分、158.50分。与正常肺组织发生免疫反应的百分率分别为26.67%(8/30)、16.67%(5/30)、33.33%(10/30);阳性样本的平均阳性细胞百分数分别为7.75%、7.50%、8.05%;平均HSCORE评分分别为7.75分、7.50分、8.05分。单克隆抗体KGH-R1、KGH-R2、KGH-R3与肺腺癌免疫反应阳性样本的平均阳性细胞百分数比较,3者之间差异无统计学意义(P>0.05);3者阳性样本的平均HSCORE分值比较:KGH-R2比KGH-R1、KGH-R3有更强的免疫反应性(P<0.05)。结论 KGH-R1、KGH-R2、KGH-R3单克隆抗体与肺腺癌组织的免疫反应性强于正常肺组织,其中KGH-R2免疫反应性最强,可进一步开发为肺腺癌的治疗性抗体。     

抗p21ras单克隆抗体KGH-R1在乳腺癌组织中的免疫反应性

目的 研究p21ras的单克隆抗体KGH-R1对乳腺癌组织的特异性,为临床应用奠定基础.方法 选取56例正常乳腺组织、55例乳腺普通型导管增生、33例乳腺不典型增生、35例乳腺导管原位癌和60例浸润性乳腺癌组织,用本实验室制备的广谱抗p21ras单克隆抗体KGH-R1进行免疫组化染色,计算各样本的阳性细胞百分率和HSCORE分值,比较各组免疫反应性的差异.结果 KGH-R1单克隆抗体与71.67%(43/60)乳腺浸润癌发生免疫反应,阳性样本的平均阳性细胞率66.29%,平均HSCORE评分131.64分,KGH-R1抗体和HSCORE分值与浸润癌患者年龄、性别、淋巴结转移、ER、PR状态无关(P>0.05).与62.86%(22/35)的原位癌发生免疫反应,阳性样本的平均阳性细胞率59.18%,平均HSCORE评分86.75分.与57.58%(19/33)的不典型增生导管上皮发生免疫反应,阳性样本的平均阳性细胞率46.83%,平均HSCORE评分54.86分.与49.09%(27/55)的普通型导管增生组织发生免疫反应,阳性样本的平均阳性细胞率23.15%,平均HSCORE评分21.95分.但KGH-R1单克隆抗体仅与少数(12/56)的正常乳腺组织发生微弱免疫反应(HSCORE<30分).结论 KGH-R1单克隆抗体具有较好的乳腺癌特异性,可以进一步开发为治疗性抗体.     

抗p21Ras单克隆抗体KGH-R1在大肠良恶性病变中的免疫反应性比较

目的:评价抗p21Ras单克隆抗体(mAb)KGH-R1在大肠良恶性病变及正常黏膜组织中的免疫反应性,为该抗体的临床应用奠定基础。方法:用本实验室制备的广谱抗p21 ras mAb KGH-R1对正常大肠黏膜、大肠炎息肉、大肠低级别上皮内瘤变、大肠高级别上皮内瘤变、浸润性大肠癌及癌旁病变组织进行免疫组化染色,计算各样本的阳性细胞百分率和组织学评分(HSCORE)分值,比较各组免疫反应性的差异。结果:mAb KGH-R1与64.89%(61/94)的浸润性大肠癌发生免疫反应,阳性样本的平均阳性细胞数为97.28%,平均HSCORE评分178.98分;与60.24%(50/83)的高级别上皮内瘤变组织发生免疫反应,阳性样本的平均阳性细胞数为95.08%,平均HSCORE评分156.38分;与64.58%(31/48)的低级别上皮内瘤变组织发生免疫反应,阳性样本的平均阳性细胞数为82.52%,平均HSCORE评分103.03分;与39.97%(29/73)的炎性息肉组织发生免疫反应,阳性样本的平均阳性细胞率17.78%,平均HSCORE评分18.66分。虽然mAb KGH-R1也与46.67%(21/45)的正常大肠黏膜上皮发生免疫反应,但阳性样本的平均阳性细胞数为2.64%,平均HSCORE评分为2.64分。大肠癌与癌旁高级别上皮内瘤变组织比较,mAb KGH-R1反应阳性细胞数和HSCORE评分无统计学意义,但高于癌旁低级别上皮内瘤变组织。20/85例(23.53%)癌旁正常黏膜组织与mAb KGH-R1呈微弱阳性反应。结论:mAb KGH-R1与大肠癌具有较强的免疫反应性,有开发为治疗性抗体的可能。     

癌基因蛋白cyclinD1,p21,ras在大肠癌和腺癌组织中的表达

为探讨ｃｙｃｌｉｎＤ１与ｐ２１ｒａｓ癌基因蛋白表达失调在大肠癌发生机制中的作用并尝试以ｃｙｃｌｉｎＤ１作为大肠癌早期诊断的肿瘤标记,本研究用免疫组化法检测大肠良、恶性病变中ｃｙｃｌｉｎＤ１和ｐ２１ｒａｓ蛋白的表达,现报道如下。１材料和方法１．１材料收...     

p53、ras p21、c-erbB-2和nm23在肺癌组织中的表达

目的：探讨癌基因与肺癌临床病理特征及预后的关系。方法：应用免疫组化ＳＰ法对５８ 例肺癌行ｐ５３、ｒａｓｐ２１、ｃｅｒｂＢ２和ｎｍ２３ 的检测。结果：癌组织中阳性反应检出率分别为４６－６％ 、２４－１ ％ 、５０－０ ％ 和５３－４ ％ ,腺癌和差分化癌ｒａｓ ｐ２１ 、ｃｅｒｂＢ２表达高于鳞癌和分化好的癌（ Ｐ＜ ０－０５） ,术后长期生存患者ｒａｓｐ２１ 、ｃｅｒｂＢ２ 表达低于短期死亡患者（Ｐ＜ ０－０５ ,Ｐ＜ ０－０１）,吸烟患者ｒａｓ ｐ２１ 表达高于不吸烟患者（Ｐ＜ ０－０５） ,淋巴结癌转移阴性组ｎｍ２３ 表达高于淋巴结癌转移阳性组（ Ｐ＜ ０－０１）,ｐ５３ 与ｒａｓ ｐ２１、ｃｅｒｂＢ２ 阳性表达具有协同性（ Ｐ＜ ０－０５） 。结论：肺癌发生发展和转移与ｒａｓｐ２１ 、ｃｅｒｂＢ２ 的激活和ｐ５３ 、ｎｍ２３ 的失活密切相关,部分基因的改变存在协同性,ｒａｓ ｐ２１ 基因的激活与吸烟有关,ｒａｓ ｐ２１、ｃｅｒｂＢ２ 的检测对判断肺癌预后有价值。     

癌基因蛋白cyclinD1、p21 ras在大肠癌和腺瘤组织中的表达

为探讨cyclinD1与p21ras癌基因蛋白表达失调在大肠癌发生机制中的作用并尝试以cyclinD1作为大肠癌早期诊断的肿瘤标记,本研究用免疫组化法检测大肠良、恶性病变中cyclinD1和p21 ras蛋白的表达,现报道如下.     

p53、p21ras和connexin43蛋白在卵巢浆液性囊腺癌中的表达及意义

卵巢癌的发生是多基因联合作用的结果,其中包括癌基因、抑癌基因、细胞一细胞间信息交流基因的改变等。本实验旨在分析上述基因和蛋白在卵巢浆液性肿瘤中的表达变化及其相互关系,以探讨肿瘤发生过程中不同分子的联合作用。     

高低转移肺腺癌细胞系中肿瘤抑制基因p16、p21和p53表达研究

目的 探讨肿瘤抑制基因对肺腺癌细胞生长的抑制作用。方法 利用FuGene转染方式分别将p21和p16基因的表达质粒转入－对肺腺癌细胞系Anip973和AGZY83－a中,同时用含野生型p53 基因的腺病毒感染p16基因转染前后的这一对细胞系。对P16和P21蛋白过表达的细胞系进行了细胞生长曲线、克隆形成率、原位末端标记分析和流式细胞仪分析。结果 p16基因的过表达只能使细胞系的G1期细胞比例提高,但细胞生长曲线,克隆形成率均未出现改变,未检测到凋亡信号。P21蛋白过表达的一对细胞系细胞生长曲线斜率降低,克隆形成能力下降,并出现明显的G1期阻滞,但未检测到凋亡信号。p53基因感染AGZY83－a,Anip973及经过p16基因转染的细胞AGZY83－ap16和Anip973p16后呈现时间依赖性表达,细胞生长曲线和四唑盐比色法分析提高,野生型p53基因的大量表达明显抑制以上4种细胞的生长,Anip973和Anip973p16的生长抑制率高于AGZY83－a和AGZY83－ap16;Anip973p16和AGZY83-ap16的生长抑制率高于Anip973和AAGZY83－a。这4种细胞在感染p53后出现典型的凋亡信号。结论p16基因的过表达并不能抑制细胞系的生长,而p21基因的过表达通过G1期阻滞抑制这1对肺腺癌细胞的生长;野生型p53基因在AGZY83－a和Anip973中高效表达可产生明显的细胞生长抑制效应;野生型p53基因对肺腺癌高转移细胞系Anip973抑制作用更为明显。     

卵巢浆液性腺癌中SP1、KLF4和p21表达及其预后意义

目的探讨不同级别卵巢浆液性腺癌中SP1、KLF4和p21蛋白表达的差异和预后意义。方法应用免疫组化EliVision法检测卵巢低级别和高级别浆液性腺癌中SP1、KLF4和p21蛋白的表达,Kaplan-Meier单因素和Cox多因素生存分析其与患者预后的关系。结果 SP1、KLF4和p21蛋白在高级别浆液性腺癌中的阳性率分别为74.5%、17.0%和11.7%,低级别浆液性腺癌中的阳性率分别为65.2%、34.8%和26.1%,与对照组相比,SP1表达均明显升高(P0.05),而KLF4和p21表达均明显降低(P0.05)。三者在高、低级别液性腺癌中的表达差异无显著性(P0.05)。SP1、KLF4和p21蛋白表达与高级别液性腺癌FIGO分期密切相关,且SP1还与术后有无残留灶密切相关(P0.05)。卵巢高级别液性腺癌中SP1表达与KLF4、p21的表达均呈显著负相关(P0.05)。高级别液性腺癌中SP1蛋白阳性者的5年生存率明显低于阴性者,而KLF4和p21蛋白阳性者的5年生存率明显高于阴性者(P0.05)。Cox多因素分析显示,FIGO分期和SP1高表达是影响高级别浆液性腺癌预后的独立因素。结论 SP1蛋白过表达以及KLF4和p21蛋白低表达,参与了高、低级别浆液性腺癌的发生,三者表达与高级别浆液性腺癌的预后有关,且SP1是独立预后因素。     

不同肺腺癌细胞系N－ras、p53基因突变核酸测序分析

应用聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎＰＣＲ）和ｄｓＤＮＡｃｙｃｌｅｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｓｙｓｔｅｍ技术对体外培养的人肺腺癌细胞系ＬＴＥｐ－ａ＿２和ｈＬＡ中Ｎ－ｒａｓ癌基因及ｐ５３抑癌基因外显子５、７进行核酸序列测定分析。结果表明Ｎ－ｒａｓ突变热点第１２、１３、６１密码子未见异常。ｐ５３抑癌基因第１５４密码子均发现ＧＧＣ→ＧＴＣ突变（Ｇｌｙ→Ｖａｌ变异）。经光盘检索（美国Ｓｉｌｖｅｒｐｌａｔｔｅｒ公司提供的ＣＯ－ＲＯＭＭＥＤＩＬＩＮＥ）分析了１９８８～１９９３年间的专题文献，尚未见肺癌ｐ５３基因第１５４密码子突变的报道。     

肺腺癌同源正常组织中差异表达基因的克隆

目的 从与肺腺癌同源的正常组织中筛选差异表达基因，以期从分子水平阐明机体抑制肿瘤发生的机制。方法 利用抑制性消减杂交分别肺癌组织及肺腺癌同源正常组织cDNA片段，并建立相应的cDNA文库。用肺腺癌组织及与其同源的正常组织cDNA片段作为探针，分别进行逆向和正向斑点杂交，筛选与同源正常组织探针杂交而不与肺腺癌组织探针杂交的阳性克隆并测序，测序结果与GenBank中的序列进行同源性分析。结果 在肺腺癌同源正常组织中，获得12个差异表达基因片段，其中4个与细胞凋亡相关基因有较高的同源性；8个与人类不同染色体的不同区域有较高的同源性，功能不详。结论 推测肺腺癌同源正常组织中存在凋亡相关基因等，它们可能通过多种途径促进细胞凋亡而抑制细胞异常增殖，从而达到抑制肿瘤发生的目的。     

胃癌组织中p21、p27、p53和Rb的表达及临床意义

目的 探讨p21、p27、p53和Rb蛋白表达在胃癌发生、发展中的作用.方法 应用免疫组化EnVision法检测111例胃癌,38例不典型增生、47例肠上皮化生、25例慢性萎缩性胃炎和53例正常胃黏膜组织中p21、p27、p53和Rb蛋白的表达.结果 p21和p27蛋白表达水平在不典型增生组织最高,其次是胃癌组织,与正常胃黏膜组织相比差异均有显著性(P<0.001).在胃癌组织中p21、p27、p53和Rb蛋白表达均高于正常胃黏膜组织(P均＜0.01).p21、p27蛋白表达与胃癌的类型和分化相关(P均＜0.01),p53表达水平与患者的年龄、性别、胃癌的类型和患者的生存率相关.女性患者Rb蛋白表达明显高于男性,差异有显著性(P<0.05).p21、p27、p53和Rb蛋白表达水平之间均呈正相关.结论 p21、p27、p53和Rb蛋白表达可以作为胃癌的辅助诊断指标,四种蛋白在判断胃癌的生物学行为上具有协同作用.     

p21ras在食管鳞癌中表达的意义

采用免疫组织化学方法研究ｐ２１ｒａｓ在食管鳞癌中的表达。探讨ｐ２１ｒａｓ表达与病理分级、临床分期及淋巴结转移的关系。１材料和方法１．１标本收集兰州军区乌鲁木齐总医院１９９０～１９９６年经病理证实为食管鳞癌的手术标本８０例。男性４８例，女性３２例，平均...     

肺腺癌中p16基因外显子2的突变分析

为了解肺腺癌ｐ１６基因外显子２的突变情况，应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）及ＰＣＲ双链ＤＮＡ循环测序技术分析了２２例肺腺癌中的ｐ１６基因，结果显示：２２例肺腺癌中存在２例纯合缺失，３例点突变。其中病例１密码子５６由ＣＴＧ→ＣＡＧ的突变，编码的氨基酸由亮氨酸变为谷氨酰胺；病例１２密码子１２１由ＴＡＣ→ＴＧＣ的突变，编码的氨基酸由酪氨酸变为半胱氨酸；病例１０密码子８０由ＧＡＧ→ＡＡＧ的突变，编码的氨基酸由谷氨酸变为赖氨酸，同时这例密码子７９存在一个由ＣＧＧ→ＡＧＧ的同义突变。另外还发现１例由单碱基缺失导致的移码突变。ｐ１６基因在２２例肺腺癌中纯合缺失频率为９．１％，基因突变频率为２７．３％。可见，多重肿瘤抑制基因ｐ１６与肺腺癌的发生发展密切相关并在其演进过程中起着一定的作用。     

卵巢黏液性交界性肿瘤中K-ras基因突变及p21 ras蛋白的表达

目的：观察卵巢黏液性交界性肿瘤中K-ras基因突变及p21 ras蛋白的表达,探讨卵巢黏液性交界性肿瘤的发病机制及靶基因治疗的可能。方法采用PCR-RFLP法和免疫组化EliVision法分别检测40例卵巢黏液性交界性囊腺瘤、40例卵巢黏液性囊腺癌和20例卵巢黏液性囊腺瘤中K-ras基因突变和p21 ras蛋白的表达。结果 K-ras基因在卵巢黏液性囊腺瘤、黏液性交界性囊腺瘤和黏液性囊腺癌中的突变率分别为0、37.5%、7.5%,交界组突变率明显高于其他两组,差异有统计学意义( P<0.01)。 K-ras基因突变在卵巢黏液性交界性肿瘤年龄分组中突变,差异有统计学意义(P<0.05)。 p21ras蛋白在卵巢黏液性囊腺瘤、黏液性交界性囊腺瘤和黏液性囊腺癌中阳性率分别为5%、45%、10%,交界组阳性率明显高于其他两组,差异有统计学意义(P <0.01)。结论 K-ras基因突变及p21ras蛋白表达可能是卵巢黏液性交界性肿瘤形成的原因之一,有利于卵巢黏液性交界性肿瘤的判断,还可为临床作为靶向治疗药物分析提供病理学基础。     

早期肺腺癌中TGF-β1、p53、E-cadherin的表达及其相关性

目的探讨TGF-β1、p53、E-cadherin蛋白在早期肺腺癌中的表达及其相关性。方法采用免疫组化MaxVision法检测16例肺部不典型腺瘤样增生(atypical adenomatous hyperplasia, AAH)、33例原位腺癌、22例微浸润性腺癌、26例附壁生长为主型的浸润性肺腺癌(lepidic predominant adenocarcinoma, LPA)组织中TGF-β1、p53、E-cadherin蛋白的表达,并复习相关文献。结果早期肺腺癌中随着组织病理学分级的增高TGF-β1、p53蛋白阳性率升高,E-cadherin蛋白阳性率降低(P0.05)。在微浸润性腺癌及LPA浸润成分中TGF-β1、p53阳性率高于非浸润成分,E-cadherin阳性率低于非浸润成分(P0.05)。AAH、原位腺癌中TGF-β1与E-cadherin表达呈负相关,微浸润性腺癌和LPA的非浸润成分中TGF-β1与E-cadherin表达呈负相关(P0.05)。结论 TGF-β1、p53、E-cadherin蛋白在早期肺腺癌组织中存在异常表达,检测TGF-β1、p53、E-cadherin蛋白的表达有可能为早期肺腺癌的诊断提供依据。     

三株肺腺癌单克隆抗体的筛选和初步鉴定

目的:制备肺腺癌单克隆抗体,筛选具有较高肺癌亲和性的单克隆抗体。方法:通过杂交瘤技术制备一组肺转移腺癌H2009细胞特异性单克隆抗体,以一定通量的细胞ELISA正、负筛选,初步确定抗体的肺癌特异性,经过色谱技术获得高纯抗体,免疫印迹确定抗体识别细胞膜蛋白分子量大小,应用流式细胞分析和免疫组化进一步分析对肺癌组织结合的特异性。结果:筛选出19株高结合肺腺癌细胞系,弱结合或不结合正常肺上皮细胞的杂交瘤,类别鉴定均为Ig M,通过亲硫色谱纯化杂交瘤培养上清获得高纯度抗体,其中三株抗体7C1、9H4和11C10均识别细胞膜蛋白,分子量介于20~110 k D,条带清晰,经病理组织验证7C1和9H4具有较好的肺癌组织亲和性,而对正常肺上皮阴性或弱染色;单抗11C10除结合肺癌上皮组织外,对肺正常上皮和乳腺正常上皮细胞也呈一定阳性反应,结合蛋白低水平泛表达于上皮来源细胞。结论:通量筛选出三株杂交瘤,初步确定具有较好的肺腺癌特异性,为深入探讨它们识别的抗原及相关的肺癌免疫研究奠定了基础。     

c─erbB─2、ras p21及p53在大肠癌表达的免疫组化研究

对４８例大肠癌连续切片进行ｃ─ｅｒｂＢ─２、ｒａｓｐ２１及ｐ５３３种癌相关基因产物的免疫组化ＡＢＣ法及ＡＰＡＡＰ－ＩＧＳＳ双重标记研究，结果表明：（１）癌相关基因ｃ─ｅｒｂＢ─２、ｒａｓｐ２１和ｐ５３阳性表达率在癌组织分别为５０．２％（２５／４８）、４３．８％（２１／４８）和５４．２％（２６／４８）；癌旁粘膜分别为２５％（１２／４８）、１８．８（９／４８）和２０．８％（１０／４８）；而在＂正常＂结肠粘膜则分别为１２．５％（６／４８）、６．３％（３／４８）和０．（２）有２种以上癌相关基因产物同时表达者在癌组织中有２６例（５４．２％）．在癌旁粘膜有５例（１０．５％），而在正常粘膜则未见有２种癌相关基因同时表达，（３）癌组织中ｃ─ｅｒｂＢ─２＋ｐ２１、ｃ─ｅｒｂＢ─２＋ｐ５３、ｐ２１＋ｐ５３及ｃ─ｅｒｂＢ─２＋ｐ２１＋ｐ５３同时表达者分别为２．１％、１２．５％、１６．７％及２２．９％，（４）ＡＰＡＡＰ－ＩＧＳＳ双重免疫标记结果表明，单一癌细胞可同时表达２种癌基因产物。上述结果提示：ｃ─ｅｒｂＢ─２、ｒａｓｐ２１及ｐ５３可能与大肠病的发生有关，三者在大肠病的发生中可能起协同作用。     

ras p21基因蛋白产物在胃肝样腺癌细胞内表达的研究

目的：探讨胃肝样腺癌及普通型胃癌ｐ２１基因蛋白产物表达情况，进一步判断肿瘤的恶性程度。方法：应用免疫组化ＡＢＣ法，对２８例胃肝样腺癌进行检测。结果：２８例胃肝样腺癌Ｐ２１基因表达阳性率９６．４％，其中染索状１８例，团块状１０例，共阳性表达明显高于普通型胃癌。结论：检查胃肝样腺癌Ｐ２１基因蛋白产物表达，为临床治疗及判断预后提供重要依据。     

人类膀胱癌和大肠癌含有活化的ras p21蛋白

等均系原癌基因ras家族的成员。它们的编码产物是几种结构域大体相同,分子量均为2 000道尔顿的蛋白质,合称为P21S。研究发现这些蛋白质为正常的细胞分化和细胞增殖过程所必需。当任何一上述原癌基因在其蛋白编码区域发生了点突变而使正常的P21蛋白质不能形成时,原癌基因就转变成为癌基因,细胞就向恶性方向转化。最近,有人运用聚合酶涟反应(PCR)技术结合位点特异的寡聚核苷酸探针杂交方法分