Upregulation of microRNA-383 influences the PRDX3 expression on human medulloblastoma cell line D341

目的 探讨microRNA-383(miR-383)对人髓母细胞瘤D341细胞系中PRDX3基因的表达及细胞增殖活性与凋亡等细胞功能学的影响.方法 应用实时荧光定量PCR法检测人髓母细胞瘤D341细胞系、正常脑组织中miR-383及PRDX3 mRNA表达水平;采用Western blot法检测人髓母细胞瘤D341细胞系、正常脑组织中PRDX3基因、蛋白表达水平;人工合成miR-383模拟体(mimics)转染MBD341细胞系,采用cck-8法、流式细胞术等实验方法检测转染人髓母细胞瘤D341细胞系后各组D341细胞增殖与凋亡、细胞内活性氧水平、线粒体膜电位水平的变化.结果 人髓母细胞瘤BD341细胞系中miR-383表达水平为正常脑组织的0.524倍,明显下调.而PRDX3基因mRNA表达水平为正常脑组织的5.214倍,蛋白表达水平较正常脑组织明显上调.miR-383 mimics转染D341细胞系24、48 h,实验组miR-383表达水平均明显高于空白对照组,且48 h作用更加明显;而PRDX3基因mRNA、蛋白表达水平48 h较空白对照组降低.cck-8法检测提示实验组中细胞增殖率降低(P<0.05).AnnexinV-FITC法检测转染后24、48 h细胞凋亡结果显示miR-383 mimics实验组细胞早期凋亡率明显增高,且24 h作用较明显(P=0.000).细胞内活性氧水平和线粒体膜电位水平检测结果分别显示,转染后24、48 h实验组较对照组细胞内活性氧水平明显升高,而线粒体膜电位水平较对照组明显降低.结论 与正常脑组织相比,miR-383在人髓母细胞瘤D341细胞系中表达降低,PRDX3基因表达升高.上调miR-383可敲低D341细胞系中PRDX3基因表达,并可抑制D341细胞增殖活性,促进D341细胞凋亡,出现D341细胞内活性氧水平升高、线粒体膜电位水平降低的细胞功能学变化.     

苦参碱对人髓母细胞瘤D341细胞凋亡及相关蛋白表达的影响*

 目的：  探讨苦参碱在体外对人髓母细胞瘤D341细胞凋亡及Bax、Bcl-2、丝氨酸/苏氨酸激酶Akt和磷酸化Akt（p-Akt）表达的影响。方法: 体外培养的D341细胞分为实验组（加不同浓度的苦参碱）和对照组（不加苦参碱）,用CCK-8法检测苦参碱对D341细胞增殖的影响,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,Western blotting检测苦参碱对D341细胞Bax、Bcl-2、Akt和p-Akt蛋白表达的影响。结果: 苦参碱在体外能明显地抑制D341细胞的生长,作用呈量效与时效关系;随着作用药物浓度的增高和作用时间的延长,其凋亡率逐渐升高,在透射电镜下观察,细胞可见染色质趋边固缩,胞浆中空泡增多、变大,并且出现凋亡小体;Western blotting结果表明,随着药物浓度的增加,药物能使瘤细胞Bax蛋白的表达水平增强,却使Bcl-2和p-Akt蛋白的表达水平下降。结论: 苦参碱可诱导D341细胞的凋亡而发挥体外抗肿瘤作用,其诱导瘤细胞的凋亡与上调Bax蛋白、下调Bcl-2及PI3K /Akt 信号通路中p-Akt蛋白的表达水平有关。     

Nkx2．2对髓母细胞瘤细胞恶性表型的调控作用

目的：探究转录因子NKX2．2（NK2 homeobox 2）在小鼠髓母细胞瘤（medulloblastoma, MB）中的表达及其对人源MB细胞系Daoy增殖、迁移能力的影响。方法采用实时定量PCR检测Nkx2．2在MB和野生型小鼠小脑组织中mRNA水平的表达差异,并通过免疫组化进一步检测其差异;设计针对Nkx2．2的小干扰RNA,分别通过实时定量 PCR 和 Western 印迹检测 Nkx2．2的干涉效率;干涉 Daoy 细胞中的Nkx2．2后采用CCK?8、平板克隆形成实验检测Nkx2．2基因沉默对Daoy细胞增殖和迁移能力的影响,流式细胞术检测细胞凋亡,划痕实验评价细胞迁移能力。结果 NKX2．2在小鼠MB中的表达明显低于正常组织;沉默Nkx2．2能显著促进MB细胞的增殖且抑制其凋亡,但不影响细胞迁移。结论 Nkx2．2能抑制MB细胞的增殖并促进其凋亡,其下调可能参与MB的发生。     

携带microRNA-383重组慢病毒的包装及其上调PBMCs中Foxp3mRNA的表达

目的包装携带microRNA-383(miR-383)的重组慢病毒,并观察其对正常人外周血单个核细胞(peripheral bloodmononuclear cells,PBMCs)中Foxp3 mRNA转录的影响。方法将4个串联的miRNA-383前体序列亚克隆入慢病毒转移载体pHAGE-CMV-MCS-IZsGreen,构建重组载体,命名为pHAGE-miR-383。将pHAGE-383、包装质粒psPAX2与包膜质粒pMD2.G共转染入HEK 293T细胞进行重组慢病毒包装。进而分别采用定量PCR和RT-PCR检测慢病毒miR-383和Mock感染48 h后细胞中的miR-383的表达和转录因子Foxp3 mRNA的转录水平。结果定量PCR证实携带miR-383的重组慢病毒包装成功,滴度为1×107 TU/ml。以MOI为5的慢病毒感染HEK 293T细胞后miR-383表达明显增多。RT-PCR结果显示,miR-383能够上调PBMCs中Foxp3 mRNA的表达。结论成功包装出含有miR-383前体序列的重组慢病毒,而且慢病毒miR-383能够上调PBMCs中Foxp3 mRNA的转录水平,为进一步研究其对调节性T细胞的调控作用奠定基础。     

原花青素对髓母细胞瘤Daoy细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨原花青素对髓母细胞瘤Daoy细胞增殖和凋亡的影响及初步机制.方法 不同浓度原花青素处理Daoy细胞24、48和72 h,CCK-8检测细胞增殖,Hoechst33258荧光染色法及流式细胞仪分析细胞凋亡,Western blot检测细胞Akt、p-Akt和NF-κB的表达.结果 原花青素对肿瘤细胞的增殖抑制效应呈浓度时间依赖性,72 h的半数抑制浓度IC50为0.25 mmol/L.0.2 mmol/L原花青素处理细胞24、48和72 h后,可见较多的凋亡细胞,明显的核固缩;细胞凋亡率分别为21.16％±2.49％、36.02％±0.71％、63.79％±1.47％.细胞总Akt水平无明显变化,但p-Akt和NF-κB蛋白表达水平明显降低.结论 原花青素可能通过降低p-Akt和NF-κB的表达,在体外抑制Daoy细胞增殖,并促进其凋亡.     

水飞蓟宾对髓母细胞瘤Daoy细胞迁移和侵袭的影响

目的 探讨水飞蓟宾对髓母细胞瘤Daoy细胞侵袭和迁移能力的抑制作用。方法 不同浓度的水飞蓟宾作用髓母细胞瘤Daoy细胞24h和48 h,应用CCK-8和平板克隆形成实验检测Daoy细胞活力;应用细胞划痕实验检测Daoy细胞的迁移能力;应用Transwell实验检测Daoy细胞的侵袭能力。结果 0.1mM,0.2mM以及0.4mM水飞蓟宾作用Daoy细胞24h和48h后,水飞蓟宾组细胞活力显著低于对照组（P<0.05）,并以剂量和时间依赖方式抑制细胞增殖,Daoy细胞克隆集落形成能力、细胞迁移率与细胞侵袭能力显著降低（P<0.05）。结论 水飞蓟宾抑制髓母细胞瘤Daoy细胞的迁移和侵袭。     

氯化钴对神经型一氧化氮合酶在人神经母细胞瘤细胞表达的影响

目的研究CoCl2刺激后nNOS及其产物在人神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH细胞中的表达变化。方法培养SK-N-SH细胞,用CoCl刺激细胞,Real-TimePCR检测nNOS mRNA表达变化,Western-blot检测蛋白表达,荧光法检测NO产量的变化。结果 CoCl2刺激后nNOS mRNA和蛋白在SK-N-SH细胞表达水平从刺激后12h开始表达增强,持续到48h,同时NO的生成量也明显升高。结论 CoCl2刺激引起SK-N-SH细胞nNOS表达水平及其产物NO明显升高。     

多发性硬化中microRNA-55对中枢神经系统细胞的影响

多发性硬化(MS)是一种慢性炎症自身免疫性脱髓鞘疾病,其发病机制复杂,相关中枢神经系统细胞的功能状态与MS发病过程的不同阶段息息相关.miR-155作为炎症介质常见的转录调控因子,通过影响中枢神经系统细胞的增殖、迁移、活化以及信号交流等过程在MS的发病机制中发挥作用.笔者围绕近年来星形胶质细胞、小胶质细胞、少突胶质细胞...     

维生素D3及其类似物对人树突状细胞表达CSF-1及其受体的作用

目的 探讨维生素D3[1，25(OH)2D3]及其类似物抑制人树突状细胞分化，但保持细胞生存是否通过调节集落刺激因子(CSF-1)及其受体来实现。方法 在体外将人外周血单核细胞分化成树突状细胞。采用流式细胞术、RT-PCR和ELISA法分析1，25(OH)2D3及其类似物对树突状细胞表达和产生GSF-1及其受体的作用。结果 1，25(OH)2D3和他骨化醇(taealeitol)以剂量依赖的方式显著上调树突状细胞对CSF-1 mRNA的表达，并增高其蛋白分泌水平，而细胞表面CSF-1受体以及mRNA的表达均受到抑制。溶剂乙醇和24，25(OH)2D3对CSF-1及其受体均无调节作用。1，25(OH)2D3对树突状细胞表达GM-CSF受体mRNA无影响。结论 1，25(OH)2D3对树突状细胞分化的抑制与其特异性地调节CSF-l及其受体有关。     

Upregulation of ATF-3 is correlated with prognosis and proliferation of laryngeal cancer by regulating Cyclin D1 expression

Objective: This study aimed to investigate the expression and significance of ATF-3 in laryngeal squamous cell carcinoma (LSCC). Methods: Expression of ATF-3 was examined using immunohistochemistry methods in samples from 83 cases of LSCC carcinoma. MTT assay was used to detect proliferation of Hep-2 cells after ATF-3 knocked down by siRNA lentivirus. A mouse model was used to investigate the inhibitive role of ATF-3 siRNA in LSCC xenografts. Realtime RCR was used to detect Cyclin D1 expression after ATF-3 downregulation in Hep-2 cells. Results: The expression of ATF-3 was positively detected in all the 83 cases of LSCC cancer tissues while Only 4 cases of adjacent non-neoplastic tissues were detected with positive ATF-3 expression. The ATF-3 expression was statistically related with T stage, neck nodal metastasis, clinical stage and prognosis of LSCC. Both cell proliferation in vitro and tumor growth in vivo were suppressed after ATF-3 knockdown. Furthermore, the expression of Cyclin D1 was decreased after ATF-3 downregulation in Hep-2 cells. Conclusion: ATF-3 is involved in the progress of LSCC, and may provide clinical information for evaluation of prognosis of LSCC. The oncologic role of ATF-3 may be correlated with Cyclin D1 regulation.     

pSilencer-VEGF-siRNA诱导骨肉瘤细胞系MG63凋亡并上调caspase-3表达

目的 研究pSilencer-VEGF-siRNA转染骨肉瘤细胞系MG63后诱导其凋亡以及对capase-3表达能力的影响。 方法 体外常规培养骨肉瘤细胞系MG63并构建人类特异性的pSilencer-VEGF-siRNA;分为pSilencer-VEGF-siRNA转染组和空载体组。转染后48~72 h,流式细胞仪Annexin V-FITC/PI 染色检测细胞凋亡、分析细胞周期;Western blotting法测定caspase-3表达。 结果 MG63转染pSilencer-VEGF-siRNA表达质粒后,早期出现细胞凋亡及明显的G1期阻滞以及G1期细胞数增加;pSilencer-VEGF转染组caspase-3的表达较空载体组和对照组明显上调。 结论 pSilencer-VEGF-siRNA可诱导MG63细胞早期凋亡;并可上调caspase-3的表达。     

RNA干扰GPC3基因表达影响肝癌细胞Huh-7凋亡的机制研究

目的观察RNA干扰GPC3基因表达对人肝癌细胞Huh-7凋亡的影响,并探讨其初步机制。方法设计并合成靶向GPC3的特异性siRNA片段,通过脂质体转染法瞬时转染肝癌细胞Huh-7,48h后验证siRNA的干扰效率;Annexin V/PI染色法观察GPC3基因沉默对细胞凋亡的影响;通过Western blot和定量PCR来检测caspase3的蛋白水平和核酸水平表达。结果设计合成的GPC3siRNA转染后,能够有效抑制Huh-7细胞中GPC3的表达;流式细胞仪检测结果显示,GPC3干扰组细胞在转染后48、72h的凋亡率显著高于空白对照组（P〈0.01）,96h后两组凋亡率差异无统计学意义（P〉0.05）。GPC3干扰组的caspase3在转染后48、72h的表达高于未转染组,96h后两组间caspase3水平差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 siRNA静默GPC3基因能促进肝癌细胞凋亡,其机理可能与上调caspase3有关。进而推测,GPC3基因可能成为肝癌靶向治疗的一个新靶点。     

上调miR-143表达对CasKi人宫颈鳞癌细胞系增殖与凋亡的影响

目的探讨miR-143对CasKi宫颈鳞癌细胞增殖与凋亡活性影响。方法应用荧光定量RT-PCR法检测miR-143在人宫颈鳞癌组织中表达水平,以及miR-143在CasKi细胞株中表达水平与变化;人工合成miR-143模拟体转染CasKi宫颈鳞癌细胞系,采用流式细胞技术、MTT等实验方法探讨上调miR-143表达对CasKi癌细胞增殖活性与凋亡影响。结果宫颈鳞癌组织与宫颈鳞癌细胞株CasKi中miR-143表达水平较正常宫颈组织明显下调,其中2例鳞癌组织未能检测出miR-143表达。miR-143 mimics转染组miR-143表达显著高于空白对照组;MTT检测结果表明miR-143 mimics转染组中细胞增殖抑制明显,且抑制效应自转染48 h开始显现。细胞周期检测结果显示miR-143 mimics转染组G0/G1期细胞明显增多,S期细胞减少,组间差异有统计学意义(P0.05)。荧光TUNEL检测结果亦显示miR-143 mimics转染组细胞凋亡率增加(9.45±2.31)%,高于阴性对照组(4.03±1.35)%与空白对照组(3.85±1.61)%,组间差异具有统计学意义(P0.05)。结论上调miR-143表达可抑制宫颈鳞癌细胞增殖活性,影响宫颈鳞癌细胞周期和诱导宫颈鳞癌细胞凋亡。