RNA干扰CD147稳定表达前列腺癌PC-3细胞株的建立

目的 为研究CD147分子在前列腺癌PC-3细胞中的生物学功能,通过RNA干扰(RNAi)技术建立稳定低表达CD147分子的前列腺癌PC-3细胞株.方法 利用脂质体2000将靶向CD147干扰质粒导入前列腺癌细胞中,干扰前列腺癌细胞中CD147分子的表达;有限稀释法获取单个细胞克隆,通过G418筛选出抗性克隆并利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术和Western-blot免疫印迹法分别从转录水平和蛋白水平进行鉴定.结果 与转染pSilencer-Scramble对照质粒比较,转染pSilencer-CD147干扰质粒明显抑制CD147基因和蛋白表达水平(P<0.05).结论 靶向CD147的干涉载体能有效沉默PC-3细胞中CD147基因和蛋白的表达,通过G418筛选建立出稳定细胞株,为进一步研究CD147的功能打下基础.     

CD147RNA干扰对前列腺癌PC-3细胞系生物学行为的影响

目的 研究针对CD147 RNA干扰对前列腺癌PC-3细胞系生物学行为的影响.方法 利用针对CD147 RNA干扰片段构建的表达载体转染PC-3细胞,获得稳定表达株.通过RT-PCR和Western blotting 鉴定后进行前列腺癌细胞侵袭力实验和动物实验.结果 RT-PCR和Western blotting结果表明干扰片段可以较好地封闭前列腺癌PC-3细胞CD147分子mRNA和蛋白表达水平;与转染空质粒组相比.CD147干扰组前列腺癌PC-3细胞侵袭力下降,荷瘤裸鼠成瘤力下降(P＜0.05),抑瘤率达32.82%.结论 KNA干扰封闭CD147基因能抑制前列腺癌细胞的侵袭力和成瘤力.有可能成为前列腺癌基因治疗的新途径.     

CD147 RNA干扰对前列腺癌细胞生长的影响

目的观察针对CD147RNA干扰对前列腺癌PC-3细胞生长的影响。方法用针对CD147分子的3个RNA干扰片段构建的表达载体转染PC-3细胞,获得稳定表达株。通过RT-PCR检测转染后CD147分子mRNA的表达水平变化;MTT法检测各组PC-3细胞增殖变化。结果RT-PCR结果发现第1、3干扰片段可以较好的封闭前列腺癌PC-3细胞CD147分子mRNA表达水平;MTT法显示CD147分子封闭后对前列腺癌PC-3细胞的生长无影响(P>0.05)。结论封闭CD147分子对前列腺癌PC-3细胞的生长无影响。     

RNA干扰沉默雄激素受体基因对前列腺癌细胞生长的抑制作用研究

目的设计、合成针对雄激素受体(AR)基因的具有高干扰效率的si RNA,观察其对前列腺癌细胞的生长抑制作用。方法设计、合成多个针对AR的si RNA,转染前列腺癌细胞LNCaP,筛选出对AR基因干扰效率最高的ARsi RNA,用RT-PCR检测AR mRNA水平,并计算细胞生长抑制率。结果采用Silencer si RNA Construction Kit成功合成了ARsi RNA,转染LN-CaP细胞,筛选出一个对其生长抑制作用最强的si RNA,并证实AR mRNA水平显著下降,LNCaP细胞的生长抑制率为78.2%。结论针对雄激素受体的si RNA可沉默雄激素受体基因,并抑制前列腺癌细胞的生长。     

短发卡状PTI-1(PC-3)基因特异性RNA干扰表达载体对PC-3细胞的体外效应

目的:通过基因克隆技术构建人前列腺癌PC-3细胞系PTI-1(PC-3)基因[prostate carcinoma tumor-inducing gene 1(PC-3)]的特异性短发卡shRNA(short-hairpin RNA)真核表达载体,采用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术,体外观察对PC-3细胞系PTI-1(PC-3)基因的沉默作用以及干扰后对PC-3细胞的体外效应. 方法:采用基因克隆技术,将合成的短发卡样特异性PTI-1(PC-3) RNA干扰寡核苷酸序列插入真核表达载体pEGFP/U6,构建PTI-1(PC-3)shRNA的真核表达载体,体外转染人前列腺癌PC-3细胞,48 h后观察细胞生物学变化;提取转染细胞总RNA及总蛋白,行RT-PCR以及Western blot观测胞内PTI-1(PC-3)mRNA及蛋白水平. 结果:①成功构建短发卡样PTI-1(PC-3) shRNA真核表达载体pEGFP/U6-mPs;②转染(脂质体法)PC-3细胞,48 h后细胞大部分死亡;③转染48 h后细胞内PTI-1(PC-3)mRNA水平下降;④转染48 h后下调胞内PTI-1(PC-3)蛋白水平. 结论:本实验成功构建的shRNA真核表达载体通过RNA干扰,能够干扰人前列腺癌PC-3细胞内PTI-1(PC-3)基因的表达,抑制PTI-1(PC-3)蛋白的表达,降低了由PTI-1蛋白可能发挥的"翻译失真性"作用,促进癌细胞的死亡,进一步揭示了PTI-1在前列腺癌发生、发展过程中的显性癌基因作用. 由于RNA干扰的特异性从而为临床上前列腺癌的基因治疗提供了新的可能的方法.     

RNA 干扰bcl-2基因对人卵巢癌细胞株SKOV3增殖影响的实验研究

目的探讨RNA干扰bcl-2基因对人卵巢癌细胞体外增殖及凋亡的调控作用.方法选用人卵巢癌细胞进行体外培养,以siRNA分别处理SKOV3细胞24～72h后,MTT法检测细胞增殖,SABC免疫组织化学法检测细胞内bcl-2、bcl-xl、bax、caspase-3蛋白表达水平.结果 RNA干扰bcl-2基因对SKOV3细胞增殖有抑制作用.bcl-2表达下调,Caspase-3蛋白表达水平上调.结论 RNA干扰bcl-2对人卵巢癌细胞的增殖具有明显的抑制作用.下调bcl-2的表达,上调Caspase-3蛋白表达水平.特异性地降解抗凋亡基因bcl-2的mRNA是其作用机制.     

GnT-V RNAi对人前列腺癌PC-3细胞侵袭能力的影响

目的 通过研究GnT-V基因的表达变化对人前列腺癌PC-3细胞迁移、侵袭能力的影响,观察RNAi对PC-3细胞GnT-V表达的抑制效应,寻求较高抑制率的靶点。方法 设计针对GnT-V基因的siRNA靶序列,构建shRNA表达载体并转染PC-3细胞,采用趋化运动和侵袭实验评价GnT-V shRNA对人前列腺癌PC-3细胞迁移及侵袭能力的影响。结果 成功构建了siRNA表达载体GnT-V siRNA,趋化运动实验表明下调GnT-V表达可显著抑制PC-3细胞的趋化运动性(P＜0.01);侵袭实验显示,抑制GnT-Ⅴ表达可显著抑制PC-3细胞的侵袭能力,PC-3 GnT-Ⅴ/1079组较对照组明显减少（P＜0.05）。结论 RNAi可以显著降低人前列腺癌PC-3细胞的GnT-V的表达,从而有效抑制PC-3细胞的迁移和侵袭能力,因此,具有较高抑制效率的GnT-V的siRNA可能成为治疗前列腺癌的有效靶点。     

siRNA沉默PRL-3基因对前列腺癌PC-3细胞生物学行为的作用

目的探讨小干扰RNA沉默PRL-3基因对前列腺癌PC-3细胞侵袭及增殖的影响。方法化学合成PRL-3基因的特异性siRNA,脂质体转染法转染PC-3细胞;24及48小时行real-time PCR和Western blotting验证其沉默效果;Tran-swell侵袭实验检测其体外侵袭力的改变;CCK8检测其增殖能力。结果转染siRNA后,与对照组相比较,siRNA干扰组mRNA水平抑制率达60%以上,蛋白水平抑制率达90%以上,且在48h达到最佳抑制效果(P<0.05,P<0.05);PC-3细胞穿过基膜数明显减少(P<0.05),但是对细胞生长抑制作用不明显。结论应用RNA干扰技术沉默人前列腺癌PC-3细胞中的PRL-3基因,可以抑制PC-3细胞的侵袭能力,为进一步探讨前列腺癌的发病机制奠定一定的实验基础。     

RNA干扰PLK1基因诱导人前列腺癌细胞PC-3的凋亡研究

目的探讨质粒表达载体介导的RNA干扰抑制PLK1基因表达对人前列腺癌细胞PC-3增殖与凋亡的影响。方法构建靶向人PLK1基因的RNA干扰表达质粒（psh—PLK1）。将该干扰质粒转染到人前列腺癌细胞PC-3中，应用RT—PCR技术分析RNA干扰后各组细胞PLK1基因mRNA表达水平的变化。采用MTT法和细胞形态学分析检测PLK1基因表达受到抑制后PC-3细胞的增殖情况的变化，通过流式细胞分析技术以及PI染色技术进行对各组细胞进行细胞凋亡检测。结果RT—PCR结果显示，转染RNA干扰表达质粒（psh-PLK1）24h和48h后，实验组PC-3细胞较对照组的PLK1基因mRNA表达分别降低了74．6％和91．2％；转染了psh-PLK的PC-3细胞与对照组相比生长受到明显抑制（P〈0．05），而各对照组之间差异无显著性（P〉0．05）；流式细胞仪检测发现转染了psh-PLK1的PC-3细胞较对照组细胞产生了更强的细胞凋亡（39．2％），PI荧光染色可见实验组细胞呈现出典型的细胞凋亡形态学变化。结论RNA干扰PLK1基因能够有效地抑制PC-3细胞中PLK1基因的表达，从而抑制PC-3细胞的生长与增殖，并诱导PC-3细胞产生凋亡。     

Aurora-A激酶的研究进展

Aurora-A激酶家族是一组新近发现的调节中心体、微管功能的丝氨酸/苏氨酸激酶,在细胞中心体的成熟、纺锤体的建立以及染色体的正常分离过程中起着重要的调控作用。Aurora激酶家族包括     

慢病毒载体介导RNA干扰对乳腺癌MDA-MB-231细胞LOX基因表达的影响

目的:观察慢病毒干扰载体(LOX-RNAi-LV)转染对乳腺癌高侵袭转移潜能MDA-MB-231细胞LOX基因表达的影响.方法:设计合成特异性的LOX RNA干扰慢病毒载体,稳定转染至MDA-MB- 231细胞中,实时定量PCR、Western blot检测LOX mRNA和蛋白的表达情况.结果:稳定转染慢病毒RNAi...     

RNA干扰EGFR基因对卵巢癌细胞化疗敏感性的影响

目的 构建表皮生长因子受体(EGFR)基因的小干扰RNA(siRNA)质粒,转染人卵巢癌细胞株skov3后检测RNA干扰(RNAi)对EGFR基因表达及细胞对化疗药物敏感性的影响.方法 体外构建EGFR小发卡状RNA(shRNA)的表达质粒,脂质体法介导将其转染入skov3细胞.实验分为正常对照组、非特异性转染组和特异性转染组.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测EGFR mRNA的表达,使用免疫细胞化学法(ICC)检测EGFR蛋白的表达.使用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)测定EGFR shRNA转染skov3细胞后细胞对顺铂敏感性的改变.结果 EGFR shRNA转染组细胞EGFR mRNA的表达与其他两组相比明显减弱(F=87.73,q=16.81、15.33,P＜0.01),EGFR蛋白表达明显下调(F=69.29,q=14.71、13.57,P＜0.01);顺铂敏感性比正常对照组提高了约3倍.结论 靶向EGFR基因的序列特异性shRNA可有效抑制skov3细胞中EGFR基因的表达,增强skov3细胞对顺铂的敏感性.     

鹤草酚介导caspase 3相关凋亡抑制前列腺癌细胞在体内外的增殖

目的 探讨鹤草酚对前列腺癌细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响。 方法 通过细胞计数、菌落形成试验、细胞周期试验、细胞凋亡试验等检测细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的变化。通过蛋白印迹法（western blotting）检测细胞凋亡相关蛋白的表达。通过小鼠异种移植瘤模型研究了鹤草酚在体内对肿瘤发生的影响。 结果 鹤草酚抑制了DU145细胞和PC-3细胞的增殖,降低了细胞存活率。与对照组相比,经鹤草酚处理后,S期DU145细胞和PC-3细胞的比例增加,而G2/M期的细胞比例降低。鹤草酚通过激活caspase 3相关的线粒体依赖性凋亡通路,促进DU145细胞和PC-3细胞凋亡。体内实验证实,鹤草酚能减缓前列腺癌细胞的形成,延长移植瘤小鼠的生存时间。 结论 鹤草酚是一种潜在抗癌药物,它通过激活凋亡通路,来抑制前列腺癌细胞的增殖和细胞周期进展。     

RNA干扰技术用于白血病基因治疗的研究进展

许多类型白血病的发病和进展与基因突变有关。 RNA干扰技术作为一种高效、特异的基因沉默技术正被广泛应用于白血病的相关致病基因功能及基因治疗研究中,为人类探索白血病的根治方法开辟了一条新途径。本文对RNA干扰技术用于白血病基因治疗的研究作一综述。     

CD59-siRNA对人卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的作用

目的探讨针对CD59的siRNA(CD59-siRNA)对人卵巢癌裸鼠移植瘤CD59的沉默效应及其抑瘤作用。方法采用脂质体转染法将CD59干扰质粒(T组)和空质粒(V组)转染A2780细胞,获得稳定表达细胞株,将T组、V组A2780细胞和未转染(C组)的A2780细胞分别接种于裸鼠皮下建立肿瘤模型,通过绘制肿瘤生长曲线、RT-PCR和免疫组织化学法研究其抑瘤效应和对CD59基因及蛋白的沉默效应。结果与V组和C组比较,T组肿瘤体积和质量明显减小(F=301.88、5.39,q=4.01~30.41,P<0.05),CD59基因及蛋白表达减少(F=817.77、247.71,q=26.59~52.25,P<0.05)。结论特异性沉默CD59基因的siRNA表达载体可以明显抑制CD59的表达及卵巢癌在体内的生长。     

姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞凋亡影响

目的 观察姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3细胞增殖和凋亡的影响.方法 分别用0、10、20、30和40 μmol/L姜黄素作用PC-3细胞48 h后,Cell Counting Kit-8(CCK8)法检测细胞存活率;选用0、5、10、20 μmol/L姜黄素作用PC-3细胞48 h后, Hoechst染色观察PC-3细胞形态的变化,Annexin V/PI检测细胞凋亡率.结果 姜黄素能显著抑制PC-3细胞的增殖(F=36.82,q=4.88～15.36,P<0.01);除0与5 μmol/L姜黄素组细胞凋亡率比较差异无显著性外,不同浓度姜黄素组之间细胞凋亡率比较差异有显著性(F=7.88,q=4.15～6.54,P<0.05).20 μmol/L 姜黄素作用PC-3细胞48 h后,倒置显微镜下可观察到部分凋亡细胞出现染色质凝集、核固缩、核碎裂等形态学改变.结论 姜黄素能显著抑制体外PC-3细胞的增殖,诱导细胞凋亡,为其应用于临床雄激素非依赖性前列腺癌的治疗提供了实验依据.     

BCL2（Ala43Thr）多态对前列腺癌PC3细胞迁移的影响

目的：：研究BCL2(Ala43Thr)多态对前列腺癌PC3细胞迁移的影响。方法：选用前列腺癌PC3细胞作为目的细胞,实验分为4组：(1)空白对照(CON)组：正常目的细胞、未感染任何病毒的细胞组;(2)阴性对照(NC)组：正常目的细胞、加阴性对照病毒感染的细胞组;(3)过表达-野生型(OE-wt)组：正常目的细胞、加目的基因 BCL2野生型病毒感染的细胞组;(4)过表达-突变型(OE-mu)组：正常目的细胞、加目的基因BCL2突变型病毒感染的细胞组。通过质粒构建和 PC3细胞转染以后进行细胞划痕实验,比较各组的迁移率,在6 h和24 h分别观察细胞形态学和测量每组的迁移距离并计算迁移率。结果：(1)从形态学上观察,4个组的细胞形态没有区别,生长良好。(2)细胞克隆形成率测定：CON 组为30%,NC 组为20%,OE-wt 组为12%, OE-mu组为14%。(3)在6 h时 OE-wt组、OE-mu组与CON组迁移率比较差异有统计学意义(P =0.004,P =0.005),但OE-wt组与 OE-mu组相比差异无统计学意义(P>0.05)。24 h 划痕均愈合,迁移率为1。结论：BCL2(Ala43Thr)过表达的野生型和突变型均对前列腺癌PC3细胞的迁移无影响。     

靶向抑制肝癌耐药细胞多药耐药基因表达的实验研究

目的：构建含多药耐药基因MDR1的短发夹状RNA（shorthairp in RNA,shRNA）表达质粒,并观察其对肝癌耐药细胞Bel-7402/R的MDR1 mRNA的抑制作用。方法：利用分子克隆技术,将含MDR1的双链DNA,与经双酶切后的载体PGE-1连接,构建pshRNA-MDR1重组质粒,在脂质体的介导下转染肝癌耐药细胞株BEL-7402/R,RT-PCR分析MDR1mRNA的表达,流式细胞仪检测细胞P-gp的表达。结果：PCR和DNA测序证实了表达质粒构建成功,并能明显地抑制MDR1mRNA的表达;P-gp的表达阳性率降低了57.3%,P〈0.05。结论：构建的pshRNA-MDR1表达质粒能靶向抵制肝癌耐药细胞MDR1mRNA和P-gp的表达。     

c-myc反义RNA对NIH/3T3、人胃癌细胞生长及生物大分子合成的影响

采用c-myc反义RNA表达质粒与pSV_2neo质粒经电击穿孔技术共转染了NIH/3T3细胞和人胃癌823细胞,经适当浓度G418筛选后,获得其相应的转染细胞株。实验表明,该转染细胞在一定浓度Cd~(2 )诱导c-myc反义RNA表达后,细胞形态有所改变,生长速度受到抑制,DNA、RNA及蛋白质生物合成均有不同程度的变化。