瘤内注射树突状细胞联合放疗对小鼠肾癌TNF-α表达的影响

目的 研究放疗增强DC疫苗治疗小鼠肾癌的作用机理.方法 Renca肾癌细胞制作BALB/c小鼠皮下移植瘤模型,分别用单纯放疗、单纯DC和Dc瘤内注射联合放疗等方法治疗,第28天牺牲小鼠.体外培养2×106Renca肾癌细胞,经20 Gy X射线单次照射培养24 h后,收获细胞.提取细胞和肿瘤组织蛋白,免疫组化和免疫印迹法检测治疗后肿瘤组织中TNF-α、CD3、CD11和F4/80蛋白的表达水平.结果 DC瘤内注射联合放疗有效抑制肾癌细胞在BALB/c小鼠体内生长,局部放疗明显增加了肿瘤组织内TNF-α表达水平,体外培养的Renca肾癌细胞经放射线处理后TNF-α表达明显上调.结论 放射线能够促进肿瘤细胞分泌TNF-α,瘤内注射DC联合放疗的增效作用与肿瘤局部产生的TNF-α表达上调密切相关.     

放射治疗对小鼠肾癌移植瘤效应的观察

目的:观察放射治疗对BALB/c小鼠肾癌的抑瘤作用.方法:采用Annexin-Ⅴ-FITC/PI法检测不同剂量放疗后Renca细胞的凋亡率,建立BALB/c小鼠的肾癌细胞移植瘤放射治疗的模型.采用ELISA试剂盒检测小鼠脾淋巴细胞的细胞因子IL-2、IFN-γ分泌水平.结果:①在一定照射剂量范围内,Renca细胞的凋亡率随剂量的增加而升高.②放疗组小鼠移植瘤生长速度较对照组明显减慢.③放疗组小鼠脾细胞分泌IL-2及IFN-γ明显较肿瘤对照组升高.结论:放疗组小鼠肿瘤生长受到明显抑制,与放疗引发的Renca细胞凋亡和小鼠脾细胞分泌IL-2及IFN-γ能力增强有关.     

放射治疗荷肾癌小鼠肿瘤生长抑制与脾细胞及肿瘤组织IL-2，IFN-γ和IL-10的关系

目的：观察放射治疗对BALB／c小鼠肾癌移植瘤的抑瘤作用与细胞因子IL-2,IFN-γ和IL-10表达分泌的关系．方法：建立BALB／c小鼠的Renca肾癌细胞移植瘤放射治疗的模型;采用ELISA试剂盒检测小鼠脾淋巴细胞的细胞因子IL-2,IL-10和IFN-γ分泌水平．RT—PCR法检测肿瘤组织IL-2,IL-10和IFN-γ基因的表达水平．结果：治疗组小鼠肾癌移植瘤生长速度较肿瘤对照组明显减慢．放疗组小鼠脾细胞分泌IL-2,IFN-γ及肿瘤组织IL-2,IFN-γ的表达较肿瘤对照组明显升高,IL-10较肿瘤对照组降低．结论：经放射治疗后,小鼠肿瘤生长受到明显抑制,与放疗引发小鼠脾细胞分泌IL-2,IFN-γ和肿瘤组织IL-2,IFN-γ表达分泌增强,IL-10细胞因子降低有关．     

放疗诱导BALB/c小鼠肾癌细胞的凋亡

目的研究放射治疗诱发BALB/c小鼠Renca肾癌细胞凋亡的特点及其调控机制,为肿瘤放射治疗提供实验依据。方法采用Annexin-V-FITC/PI法流式细胞仪检测不同剂量放疗后细胞凋亡率,建立BALB/c小鼠肾癌细胞肿瘤种植模型,采用PV免疫组织化学法检测肿瘤石蜡切片P53的表达及ELISA试剂盒检测细胞因子IL-2、IFN-γ的表达。结果①在一定照射剂量范围内,Renca细胞的凋亡率随剂量的增加而升高。②放疗组突变型P53蛋白表达率为(30.17±0.88)%,肿瘤组为(24.22±0.68)%,两组间有显著的统计学差异。③放疗组小鼠脾细胞分泌IL-2为(167.56±13.13)pg/mL,为肿瘤组小鼠分泌量(83.69±1.37)pg/mL的2倍,两组间有显著的统计学差异。放疗组小鼠脾细胞分泌IFN-γ为(1482.47±47.91)pg/mL,约为肿瘤组小鼠分泌量(211.02±35.98)pg/mL的7倍,两组间有显著的统计学差异。结论放疗可诱发Renca细胞凋亡,P53蛋白可能涉及本实验中的细胞凋亡通路。     

TRAF 6在肿瘤恶病质骨骼肌炎症反应中的作用研究

目的 研究肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)在肿瘤恶病质骨骼肌炎症反应中的作用.方法 小鼠结肠腺癌细胞接种BALB/c小鼠诱导肿瘤恶病质模型,每天监测各组小鼠体质量,于第7、13和19天检测左侧腓肠肌组织的质量、纤维横切面积,PCR和Western blotting检测TNF-α、IL-6、TRAF6 mRNA和蛋白表达水平.结果 与对照组比较,随着接种细胞时间的延长,荷瘤小鼠体质量和去瘤体质量减轻(P＜0.05);腓肠肌组织的质量减轻(P＜0.05),纤维横切面积减小(P＜0.05),TNF-α、IL-6和TRAF6的mRNA和蛋白水平均显著升高(P＜0.05),且TRAF6的水平与腓肠肌的消耗呈正相关(P＜0.05),与TNF-α和IL-6的水平正相关(P＜0.05).结论 TRAF6可能在肿瘤恶病质骨骼肌组织的炎症反应过程中起到重要的作用.     

肿瘤坏死因子上调人视网膜色素上皮细胞c-jun的表达

目的:检测肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF)-α对培养人视网膜色素上皮(Retinal pigment epithelium,RPE)细胞c-jun表达的影响.方法:40 ng/ml TNF-α作用于体外培养人RPE细胞不同时间(0、10、20、40、60 min),采用免疫荧光染色法和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)观察c-jun蛋白和mRNA的表达变化.结果:在未受刺激的RPE细胞中,c-jun表达微弱或不表达,细胞浆和部分细胞核为浅黄绿色荧光.40 ng/ml TNF-α刺激后,RPE细胞的荧光强度逐渐增强并出现核移位.随着TNF-α的作用,c-jun mRNA的表达开始逐渐增强,于40min时达峰值,随后表达略有减低.结论:TNF-α可在短期内迅速上调体外培养人RPE细胞c-jan蛋白和mRNA的表达,且蛋白表达出现核移位现象,提示TNF-α可引起RPE细胞c-jan的活化.     

苦参碱对小鼠H22细胞抗肿瘤作用的实验研究

目的:观察苦参碱在体内和体外的抗肿瘤作用.方法:MTT法检测苦参碱对小鼠腹水瘤细胞H22的体外杀伤作用;Annexin V-FITC/PI双标记法检测苦参碱对体外培养的H22细胞的诱导凋亡作用;在BALB/C小鼠H22移植瘤模型上观察苦参碱的体内抑瘤活性,透射电镜观察苦参碱治疗后荷瘤小鼠肝癌细胞的超微结构改变;免疫组化法检测荷瘤小鼠肝癌组织中Bcl-2、Bax蛋白表达.结果:苦参碱在体外能够明显抑制H22细胞的生长和增殖,并可诱导细胞凋亡;对小鼠肿瘤生长也有明显抑制作用,高、低浓度组抑瘤率分别为60.71%和62.53%;用药组小鼠肿瘤组织中,电镜下可见较为典型的细胞凋亡的形态学改变;肿瘤组织中Bcl-2蛋白表达明显降低,Bax蛋白表达增强,与荷瘤对照组相比有显著性差异(P＜0.01).结论:苦参碱在体内外对H22肿瘤细胞生长均有抑制作用,同时可促进肿瘤细胞表达Bax蛋白,抑制Bcl-2表达,诱导肿瘤细胞凋亡.     

人眼眶横纹肌肉瘤动物模型的建立

目的:探讨建立人眼眶横纹肌肉瘤动物模型的方法. 方法:培养人胚胎型横纹肌肉瘤细胞株RD细胞,取对数生长期细胞分别接种于4周龄SCID鼠和60Co照射 (1 Gy) 后1 d 的BALB/c裸小鼠;选用成瘤BALB/c裸小鼠的瘤块移植入另一批4周龄BALB/c裸小鼠胁部皮下(组织块接种法).观察各组动物肿瘤生长情况,绘制肿瘤生长曲线;肿瘤组织行常规病理H-E染色并镜检. 结果:60Co照射后1 d裸小鼠成瘤时间约6～8周,SCID鼠组约3～4周,组织块接种法移植2周后裸小鼠瘤体较明显,3组动物的成瘤率均为100%;成功绘制出肿瘤生长曲线,肿瘤均呈进行性生长;病理检查示各组移植性横纹肌肉瘤与人体肿瘤标本所见类似.结论:成功建立了裸小鼠和SCID鼠人眼眶横纹肌肉瘤模型,组织块接种法可以缩短BALB/c裸小鼠成瘤时间,为进一步研究人眼眶横纹肌肉瘤奠定了基础.     

脂多糖活化小鼠大脑小胶质细胞后炎性细胞因子的表达

目的采用细菌脂多糖（LPS）对原代培养的BALB/c小鼠大脑皮质小胶质细胞进行刺激,检测小胶质细胞IL-1bI、L-6和TNF-α等细胞因子的基因表达情况。方法分离纯化小胶质细胞,采用1μg/ml LPS刺激24h,再采用RT-PCR检测IL-1bI、L-6和TNF-a mRNA表达水平。结果体外培养的小胶质细胞经LPS刺激后,细胞因子IL-1bI、L-6和TNF-a mRNA表达水平明显上调。结论 LPS活化的小胶质细胞可产生大量的炎性细胞因子。     

人肝癌细胞在不同免疫缺陷小鼠中的生长特点

为探讨人类肝癌细胞9724在不同免疫缺陷小鼠的生长特点,将体外培养人类肝癌细胞9724接咱不同免疫力小鼠（B细胞缺陷的CBA/N,T细胞缺陷的BALB/c-nu,T、B细胞缺陷的SICD小鼠及免疫重建的SCID小鼠,免疫正常的BALB/c小鼠作为对照组）皮下、肝内、腹腔,观察其生长特性。结果是BALB/c小鼠和用BALB/c小鼠外周淋巴细胞免疫重建的SCID（B-PBL-SCID)小鼠不成瘤;CBA/N小鼠随种数量和途径不同而有不同的表现;裸小鼠、SCID小鼠和用CBA/N小鼠外周淋巴细胞重建的SCID（C-PBL-SCID）小鼠100%成瘤。提示SCID小鼠是建立肝癌模型的最佳小鼠,也是进行肿瘤免疫研究的最佳模型动物;T细胞在异种瘤移植排斥中起主要作用。     

TNF-α对大鼠牙乳头细胞中BMP2及相关蛋白的表达调节研究

目的:在大鼠牙乳头间充质细胞中探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)对骨形态发生蛋白2(BMP2)及矿化相关蛋白的表达调控。方法:体外分离培养SD新生大鼠牙乳头间充质细胞,在添加TNF-α梯度的血清培养基中诱导培养,RT-PCR、WB及ELISA方法检测骨形态发生蛋白2(BMP2)表达情况;添加TNF-α不同时间梯度,RT-PCR、WB检测成骨分化标志蛋白碱性磷酸酶(ALP)、骨涎蛋白(BSP)表达变化。结果:TNF-α处理后,大鼠牙乳头间充质细胞中BMP2表达上调,ALP、BSP表达有所提高。结论:在大鼠牙乳头细胞中,TNF-α能够上调BMP2表达,进而诱导成牙骨质细胞矿化相关蛋白ALP,BSP表达,对牙齿发育矿化可能起到促进作用。     

TNFR2基因敲除小鼠H22移植瘤生长特点和Treg数量与功能检测

目的 观察tmTNF-α/TNFR2信号轴对荷瘤鼠肿瘤生长影响及其机制.方法 采用Western blot检查H22荷瘤鼠肿瘤微环境中Treg细胞TNFR1及TNFR2的表达.TNFR2敲除BALB/c小鼠和野生型鼠各10只,在TNFR2敲除的BALB/c小鼠皮下接种H22肝癌细胞株,观察肿瘤直径及肿瘤微环境中Treg的募集数量,同时以野生型小鼠做对照.用tmTNF-α刺激Treg细胞,ELISA检测上清IL-10和TGF-β的含量.结果 荷瘤鼠微环境中Treg细胞TNFR2表达明显高于野生型小鼠脾脏Treg细胞(P＜0.05),而TNFR1表达未见明显变化;TNFR2基因敲除鼠肿瘤直径明显低于野生型小鼠(P＜0.05),且肿瘤微环境中Treg细胞数量也明显少于野生型小鼠(P＜0.05).在体外tmTNF-α可以促进Treg细胞产生IL-10和TGF-β(P ＜0.05).结论 TNFR2基因敲除小鼠肿瘤生长减缓,肿瘤局部微环境中Treg细胞减少,同时tmTNF-e能够刺激Treg细胞释放抑炎因子IL-10和TGF-β,增强其免疫抑制功能.     

微波消融联合瘤体内注射树突状细胞治疗小鼠骨髓瘤的实验研究

目的评价微波消融后瘤体内注射树突状细胞对荷瘤小鼠免疫功能的影响以及治疗肿瘤的效果。方法建立BALB/C小鼠皮下骨髓瘤模型。微波消融肿瘤后瘤体内注射同种异体树突状细胞,24 h后于注射树突状细胞相同位置注射肿瘤坏死因子-α（TNF-α）,分别于治疗前1天、治疗后第3、5、7天测量肿瘤体积,第7天流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞亚群和肿瘤切片组织病理。与对照组比较免疫功能和肿瘤体积的变化。结果联合治疗小鼠的外周血CD8＋淋巴细胞比例比对照组和消融组增高（P〈0.05）,并且肿瘤组织病理切片可见T淋巴细胞浸润增加;治疗组肿瘤体积比对照组明显减小（P〈0.05）。结论恶性肿瘤经微波热消融后可以暴露肿瘤抗原,联合体外培养的功能完善的树突状细胞可以有效建立肿瘤细胞免疫应答,并有效抑制肿瘤生长。     

ALD-DNA对巨噬细胞株RAW264.7的刺激作用

目的 体外观察Con A活化淋巴细胞来源的DNA（ALD-DNA）对BALB／c小鼠巨噬细胞株RAW264．7的刺激作用。方法 将ALD-DNA及未活化淋巴细胞来源的DNA（UnALD-DNA）分别与BALB／c小鼠来源的巨噬细胞株RAw264．7孵育48h,然后以四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞的增殖情况,流式细胞仪测定细胞表面分子的表达,ELISA检测白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素12（IL-12）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的分泌情况。结果 ALD—DNA在体外能够明显刺激细胞发生增殖,上调细胞表面主要组织相容性复合体（MHC）Ⅱ类分子以及共刺激分子CD40、CD80和CD86的表达,并能够诱导细胞分泌IL-6、IL-12和TNF-α 。结论 ALD-DNA对RAW264．7细胞具有免疫刺激作用。     

肿瘤相关线粒体蛋白12对移植瘤细胞增殖的影响

目的 探讨肿瘤相关线粒体蛋白12(TAMP12)对小鼠移植瘤细胞增殖的影响.方法 采用脂质体法将TAMP12基因及空载体转染肝癌细胞系SMMC-7721,经CA18筛选获得稳定高表达TAMP12细胞株(SMMC-7721-TAMPl2)及对照细胞(SMMC-7721-pcDNA3.1),实时定量PCR和蛋白印迹检测TAMP12在这两组细胞中的表达.将SMMC-7721-TAMP12和对照SMMC-7721、SMMC-7721-pcDNA3.1三组细胞分别接种于BALB/cnu/nu小鼠的前肢腋下,连续观察荷瘤小鼠中肿瘤的生长状况.接种4周后处死小鼠,取瘤块分别测量瘤体质量和体积,应用实时定量PCR和免疫组化方法检测三组移植瘤中TAMP12的表达;透射电镜观察移植瘤细胞中亚细胞器形态;并应用基因芯片技术检测三组移植瘤肿瘤细胞中的基因差异表达.结果 将经实时定量PCR和蛋白印迹检测显示高表达TAMP12的SMMC-7721和对照细胞分别接种裸鼠后,三组荷瘤小鼠中肿瘤的生长曲线呈现明显差异,转染TAMP12的荷瘤小鼠中肿瘤生长速度明显快于对照组荷瘤小鼠.肉眼观察可见实验组肿瘤组织中血管较对照组丰富;电镜观察发现实验组的细胞分裂增殖明显.基因芯片显示,该基因的高表达可促进多个与细胞增殖相关的基因表达上调.结论 TAMP12基因具有促进细胞增殖的作用,其机制可能与调节细胞增殖的胰岛素样受体介导的信号转导通路有关.     

Caspase-3在小鼠肿瘤恶病质肌肉蛋白消耗中的作用

目的：探讨半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）在小鼠肿瘤恶病质状态下骨骼肌中的表达,阐明Caspase-3与细胞凋亡及肿瘤恶病质骨骼肌蛋白消耗的关系。方法：小鼠结肠腺癌Colon26（CT26）细胞接种BALB/c小鼠诱导肿瘤恶病质模型为肿瘤组,同时设对照组,每组24只。每天监测各组小鼠体质量,并分别在第8、14和20天各处死8只小鼠,检测小鼠左侧腓肠肌组织质量、纤维横切面积、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）水平和Caspase-3蛋白表达水平及腓肠肌细胞凋亡率。结果：第14天肿瘤组小鼠出现恶病质症状,去瘤体质量下降大于对照组小鼠体质量的20%(P<0.05),小鼠进入肿瘤恶病质期。与同期对照组比较,随着接种细胞时间的延长,肿瘤组小鼠体质量、去瘤体质量、腓肠肌组织质量及纤维横切面积均减小（P<0.05）,TNF-α、IL-6水平和Caspase-3蛋白表达水平及骨骼肌细胞凋亡率均显著升高（P<0.05）。Caspase-3蛋白表达水平与腓肠肌质量及横切面积呈负相关关系（r=－0.716,P<0.05;r=－0.694,P<0.05）,与TNF-α和IL-6水平呈正相关关系（r=0.742,P<0.05;r=0.675,P<0.05）。结论：Caspase-3可能是肿瘤恶病质促进骨骼肌组织蛋白消耗的关键性因子。     

加味四君子汤对小鼠CT26大肠癌移植瘤的抑制作用及肿瘤相关巨噬细胞CD68、CD206蛋白表达的影响

目的:观察加味四君子汤对小鼠CT26大肠癌移植瘤的抑制作用及肿瘤相关巨噬细胞CD68、CD206蛋白表达的影响。方法:取大肠癌CT26细胞体外培养,建立BALB/C小鼠大肠癌皮下移植瘤模型。取造模成功的BALB/C小鼠随机分为模型组和加味四君子汤低、中、高剂量组,每组5只。加味四君子汤各组小鼠分别灌胃给予0.035、0.07、0.14 g/g药液,模型组小鼠灌胃给予等体积0.9%NaCl溶液,连续21 d。末次给药后,剥离瘤体,测量移植瘤体积并计算抑瘤率;免疫组化检测各组小鼠瘤体组织中肿瘤相关巨噬细胞CD68和CD206的蛋白表达。结果:药物干预21 d后,与模型组相比,加味四君子汤中剂量组小鼠的移植瘤体积显著减小(P0.05),肿瘤生长抑制率显著升高(P0.05),且其抑瘤效果明显优于低、高剂量组(P0.05)。免疫组化观察显示,与模型组相比,加味四君子汤中剂量组小鼠瘤体组织内肿瘤相关巨噬细胞CD68和CD206表达显著降低(P0.01);且中剂量组对CD68和CD206表达的抑制作用明显强于低、高剂量组(P0.05,P0.01)。结论:加味四君子汤能有效抑制小鼠CT26大肠癌移植瘤生长,其作用机制可能与下调肿瘤相关巨噬细胞CD68和CD206的表达有关。     

肿瘤坏死因子对体外培养三叉神经节细胞的影响

目的 体外培养完整三叉神经节(TG)组织,建立一种能够易于控制的类似于TG的体内活性体系.探讨肿瘤坏死因子(TNF)-α对体外培养TG细胞中降钙素基因相关肽(CGRP)的影响.方法 将SD大鼠麻醉后取双侧TG,将一部分样本用4%多聚甲醛固定,然后通过HE染色观察其与体外培养TG的神经元之间形态学差异.其余的TG分为常规培养组和添加TNF-α培养组,再通过免疫组化和Western blot观察常规培养组和添加TNF-α培养组TG细胞中CGRP的水平变化,分析TNF-α对体外培养TG细胞的影响.结果 与新鲜分离组相比,体外培养的TG神经元细胞未发生明显的组织细胞水肿、变性、坏死和细胞凋亡等病理学改变.TNF-α培养组与常规培养组相比,TNF-α可使CGRP表达水平上调,且CGRP阳性反应细胞数表达水平显著增高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 细胞形态学分析结果显示离体培养的TG组织方法可行,且易于实施形态学和分子生物学研究;TNF-α可使离体培养的TG细胞CGRP表达水平显著增加.     

白细胞介素-18与白细胞介素-12协同增强肿瘤浸润淋巴细胞对胃癌细胞的杀伤作用

目的:研究白细胞介素-18(IL-18)与白细胞介素-12(IL-12)对肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)杀伤功能的影响.方法:IL-18与IL-12共同刺激的TIL与人的胃癌细胞系SGC-7901共孵育后接种于BALB/c SCID小鼠皮下,测定小鼠肿瘤的生长大小并观察荷瘤小鼠的生存时间,酶联免疫吸附试验(ELISA方法)检测小鼠血清中Th1型细胞因子TNF-α、IFN-γ及Th2型细胞因子IL-10、IL-4的表达水平,同时体外测定NK细胞及CD8+T细胞的肿瘤杀伤活性.结果:IL-18与IL-12共同作用于TIL后,与对照组相比,SGC-7910细胞的荷瘤小鼠皮下肿瘤生长明显减慢,小鼠生存率明显延长;同时,两种细胞因子联合处理组荷瘤小鼠血清中细胞因子TNF-α、IFN-γ的水平明显增高,而IL-10与IL-4水平明显降低;体外LDH杀伤实验证实IL-18联合IL-12处理组NK细胞及CD8+T细胞杀伤活性明显提高.结论:IL-18与IL-12协同刺激能增强TIL对胃癌胞的杀伤功能.     

抗4-1 BB单克隆抗体诱导肿瘤细胞致敏的小鼠腹股沟淋巴结T细胞在体外表达IFN-γ

目的　研究肾癌细胞致敏的小鼠腹股沟淋巴结T细胞在体外经抗4 - 1BB(肿瘤坏死因子受体家族成员)单克隆抗体诱导刺激后IFN γ的表达水平。方法　以BCG和高聚生作为佐剂,用6 0 Co射线灭活的小鼠肾癌细胞Renca刺激小鼠腹股沟淋巴结,致敏后的淋巴结(肿瘤引流淋巴结tumor draininglymphnode,TDLN)T淋巴细胞在体外联合使用IL 2、抗CD3、抗CD2 8、抗4 1BB小鼠单克隆抗体激活,然后利用流式细胞术(FACS)检测细胞内IFN γ(干扰素Ⅱ型)的表达水平。结果　应用4 - 1BB单抗刺激的实验组有抗瘤活性的T细胞比例明显提高,其中T淋巴细胞分泌IFN γ的水平达到4 8.2 3% (P <0 .0 1)。结论　抗4 1BB单抗体外刺激肿瘤细胞致敏的小鼠腹股沟淋巴结T细胞后,T淋巴细胞内表达IFN γ水平提高。该工作为肾癌的肿瘤疫苗研制提供了实验依据