乙醇对豚鼠单个心房肌细胞L-型钙通道的影响

目的： 采用膜片钳全细胞记录方法，观察乙醇对分离的豚鼠单个心房肌细胞L-型钙电流（ICa.L）的影响。方法： 使用酶解方法获得豚鼠单个心房肌细胞，采用全细胞膜片钳记录技术观察不同浓度乙醇急性干预对ICa.L电流-电压曲线、激活曲线、失活曲线的影响。结果： 急性乙醇干预下，ICa.L的I-V曲线发生了变化，而失活曲线未发生变化，激活曲线仅在80mmol/L的时候发生了变化。在乙醇浓度≤45 mmol/L时可抑制ICa.L，而在≥50 mmol/L时可明显增大ICa.L，在45 mmol/L-50 mmol/L之间这两种作用发生了突然的转换。结论： 乙醇对于ICa.L的影响作用基本为非电压依赖性，但具有浓度依赖性，不同浓度的乙醇可对ICa.L产生不同甚至相反的作用，这有助于解释房颤和房扑之间的关系。     

肾上腺髓质素对豚鼠心室肌细胞L-型钙通道的作用及其信号转导机制

目的: 研究肾上腺髓质素( adrenomedullin, ADM)抑制豚鼠心室肌细胞L-型钙通道的信号转导机制。方法: 应用全细胞膜片钳技术,记录应用ADM(1-100 nmol·L^-1)前后L-型钙电流(I_Ca,L),以及分别记录应用ADM特异性受体拮抗剂ADM_22-52(100 nmol·L^-1)+ADM(100 nmol·L^-1)、蛋白激酶A (PKA) 特异性拮抗剂H-89(10 μmol·L^-1) + ADM(100 nmol·L^-1)、蛋白激酶C (PKC) 特异性拮抗剂PKC_19-36(10 μmol·L^-1)+ADM(100 nmol·L^-1)、PKC特异性激动剂PMA(1 μmol·L^-1)前后I_Ca,L。结果: ADM(1-100 nmol·L^-1)浓度依赖性地抑制豚鼠心室肌细胞I_Ca,L,并可被ADM_22-52(100 nmol·L^-1)完全阻断;H-89(10 μmol·L^-1)对ADM抑制I_Ca,L的作用无影响。PKC_19-36(10 μmol·L^-1)可完全阻断ADM 对I_Ca,L的抑制效应,且PMA(1 μmol·L^-1)可模拟ADM 对I_Ca,L的抑制效应。结论: ADM作用于特异性ADM受体可浓度依赖性地抑制豚鼠心室肌细胞I_Ca,L,此作用有可能与PKC激活相关。     

抗大鼠心室肌细胞L-型钙通道亚单位抗体的制备与验证

目的：用人工合成的大鼠心室肌细胞L-型钙通道4个亚单位的抗原表位短肽免疫家兔，产生可识别该通道不同亚单位的特异性抗体，并进行验证。方法：从大鼠心室肌细胞L-型钙通道4个亚单位的氨基酸序列中筛选出三段短肽，进行人工合成。用化学合成的多肽与破伤风类毒素（TT）以戊二醛法连接，并以此作为抗原免疫家兔制备抗大鼠心室肌细胞L-型钙通道的免疫血清，经分离纯化获得抗体。抗体的验证通过ELISA，Western blot，免疫荧光组织化学技术进行检测。结果：所制备的抗大鼠心室肌细胞L-型钙通道α1c、β2和α2/δ俗亚单位的抗体滴度分别为1：51200—1：102400、1：1280和1：1280，3个抗体结合到大鼠心肌细胞膜蛋白的分子量分别为235、89和162kD。免疫荧光组织化学实验显示，抗体均能特异性的结合在培养大鼠心室肌细胞膜上。结论：所制备的抗大鼠心室肌细胞L-型钙通道亚单位抗体能特异性识别大鼠心室肌细胞膜上L-型钙通道的不同亚单位。     

锌对异丙肾上腺素致损豚鼠心室肌细胞钙通道电流的影响

本实验应用全细胞膜片钳技术从离子通道水平研究锌对心肌细胞保护作用机理。结果显示 (1)异丙肾上腺素 (ISO) 10 - 8mol L可使正常豚鼠心室肌细胞钙电流 (Ica)从 1383± 2 6 5pA增至 16 10± 2 70pA(P <0 0 5 ,n =6 )。 (2 )锌0 2mmol L可使正常豚鼠心室肌细胞Ica从 1383± 2 6 5pA减小到 70 7± 10 8pA(P <0 0 5 ,n =6 )。 (3)先加锌 0 2mmol L再加ISO 10 - 8mol L ,Ica幅值增加到 10 30± 2 5 0pA ,与ISO组相比差异显著 (P <0 0 5 ,n =6 )。提示微量元素锌可抑制因ISO引起的豚鼠心室肌Ica的增加。     

花生四烯酸对家兔心室肌细胞动作电位和L-型钙电流的影响

目的：研究花生四烯酸(AA)对家兔单个心室肌细胞动作电位和L-型钙电流的影响。方法：酶解法分离家兔单个心室肌细胞，用全细胞膜片钳技术记录其动作电位和L-型钙电流。结果：①AA明显缩短动作电位时程（APD），而对静息电位（RP）和动作电位幅值（APA）无明显影响。②AA使L- 型钙电流峰电流密度从(10.21±3.15) PA/PF减少到（6.53±2.17）PA/PF(n=6,P＜0.05）,I-V关系曲线上移，其形状和峰值电压保持不变。结论：花生四烯酸能抑制L-型钙电流，缩短动作电位时程，这可能是其心血管作用的重要机制之一。     

病毒感染大鼠心室肌细胞钙通道基因表达及功能改变的研究

目的：研究大鼠心室肌细胞感染柯萨奇病毒B3（CVB3）后L型钙通道mRNA表达量及其电生理特性的变化。 方法: 用CVB3感染培养的SD大鼠心室肌细胞，采用半定量逆转录-聚合酶链式反应技术，检测病毒感染心室肌细胞L型钙通道各亚单位mRNA表达量的变化；用全细胞膜片钳技术，观察病毒感染前后心室肌细胞L型钙电流（ICa-L）的变化。结果: 病毒感染组心室肌细胞L型钙通道α1和β亚单位mRNA的表达量显著高于正常对照组（4.00±0.07 vs 2.21±0.41, P<0.01; 2.06±0.06 vs 1.22±0.30, P<0.05），而α2/δ亚单位mRNA表达量的改变不明显（4.12±0.19 vs 4.13±0.27, P>0.05）；感染组细胞ICa-L的平均电流密度明显大于正常组细胞［（-8.66±0.99) pA/pF vs (-6.97±1.75) pA/pF, P<0.01］，且前者的电流-电压曲线下移，峰电流密度增加25.74%（P<0.05）。结论: CVB3感染心室肌细胞后，使其L型钙通道α1和β亚单位mRNA的表达量增加，ICa-L增大，可能是病毒感染导致心肌出现异常电生理活动的细胞和分子机制之一。     

冬虫夏草对豚鼠心室肌细胞胞浆钙浓度及L-型钙电流的影响

目的 :冬虫夏草 (CodycepsSinensis ,CS)为麦角科真菌 ,是我国传统的名贵药材。它已被研究证明具有抗多种心律失常的作用 ,尤其适用于难治性缓慢型心律失常、传导阻滞。本实验旨在研究冬虫夏草水提液对豚鼠单个心室肌细胞内钙信号及L型钙电流的影响 ,从而探讨其抗心律失常的机制。方法 :急性分离 (使用胶原酶Ⅱ )豚鼠单个心室肌细胞 ,将细胞以Fluo - 3/AM做荧光标记 ,在激光扫描共聚焦显微镜timeseries程序下对细胞XY平面进行扫描 ,以荧光强度值变化表示 [Ca2 + ]i变化。进一步应用全细胞膜片钳技术测定单个心室肌细胞L -型钙电流 ,实…     

蛋白激酶G在调节血管通透性信号转导中的进展

蛋白激酶G(PKG)在微血管通透性升高的细胞内信号转导中是一个重要的信号分子 ,其组成的Ca2 + NO cGMP PKG级联反应在微血管通透性的调节中起重要作用。PKG的作用底物有血管扩张剂刺激的磷蛋白(VASP)、热休克蛋白 2 7(HSP2 7)等     

脑缺血再灌注损伤对大鼠海马神经元L-型钙通道的影响

目的： 观察脑缺血再灌注损伤后，不同时点大鼠海马CA1区锥体细胞L-型钙通道特性的变化。方法: 采用改良Pulsinelli 4血管闭塞法复制大鼠全脑缺血模型，随机分为7组：正常组；模型组共分为6个时点，各时点为1组。按实验分组，在上述时点急性分离出成年大鼠海马CA1区锥体细胞后，采用膜片钳技术的细胞贴附模式记录同一钳制电压下L-型钙通道活动情况。结果: 在本研究观察的时点内，再灌注24 h时开放概率升高为0.005667±0.001560，显著高于正常组，其余时点与正常组相比较无差异；再灌注0 h（缺血组）、6 h、12 h、24 h时通道平均开放时间分别为(28.043±9.152) ms、(34.850±7.864) ms、(21.205±4.921) ms、(32.980±7.228) ms,显著高于正常组，其余各组与正常组相比无显著差异；再灌注0.5 h，通道电流幅度明显高于正常组，有统计学意义，其余各组与正常组相比较无明显差异。结论: 脑缺血再灌注损伤后，神经细胞出现钙超载可能与损伤后L-型钙通道开放时间延长、开放概率增加和通道电流幅度增大有关。     

钙拮抗剂对高血压大鼠心房肌L-型钙通道和钠-钙离子交换器mRNA的影响

目的:观察钙拮抗剂地尔硫卓对Goldblatt高血压大鼠模型心房肌L-型钙通道α_1C亚单位(CaL-α_1C)和Na^＋-Ca²⁺交换器(NCX)mRNA的变化影响,在基因水平探讨其潜在的意义。方法:Sprague-Dawley大鼠,高血压组用U型银夹夹住左肾动脉,右肾保留;假手术组(S组)只分离左肾动脉,不夹银夹,套尾法监测尾动脉血压。高血压组术后1周开始治疗,分为高剂量地尔硫艹卓组(HD组)、低剂量地尔硫艹卓组(LD组)和对照组(C组),分别于治疗后4周与S组同时处死动物(各6只),RT-PCR半定量分析CaL-α_1C和NCXmRNA的表达量(以GAPDH为内参照)。结果:C组心房肌CaL-α_1C的mRNA水平分别是S组、HD组、LD组的2.5倍、2.4倍、2.1倍(P＜0.01),S组、HD组、LD组之间无显著差别。C组心房肌NCX的mRNA水平分别是S组、HD组、LD组的1.9倍、1.6倍、2.1倍(P＜0.01),S组、HD组、LD组之间无显著差别。结论:肾性高血压大鼠心房肌CaL-α_1C、NCX的mRNA水平均表现为上调,应用钙拮抗剂能够抑制其上调,抑制作用不依赖于血压水平的降低。     

cGMP facilitates calcium current via cGMP-dependent protein kinase in isolated rabbit ventricular myocytes

 The effect of guanosine 3′,5′-cyclic monophosphate (cGMP) on L-type Ca current (I _Ca) was investigated in a study of rabbit ventricular myocytes using the whole-cell patch-clamp technique. Intracellular application of cGMP (100 μM) increased I _Ca in the absence of isoprenaline or forskolin. 8-Bromo-cGMP (100 μM) and 8-(4-chlorophenylthio)-cGMP (8-pCPT-cGMP, 400 μM), relatively specific stimulators of cGMP-dependent protein kinase (cGMP-PK), also increased I _Ca. The stimulatory effect of 8-pCPT-cGMP was suppressed by Rp-8-chlorophenylthio-cGMP (400 μM), a phosphodiesterase-resistant cGMP-PK inhibitor. When I _Ca was increased by bath application of the non-specific phosphodiesterase inhibitor 3-isobutyl-1-methylxanthine (IBMX, 100 μM), 8-pCPT-cGMP (400 μM) resulted in additional stimulation of I _Ca. In the presence of 8-pCPT-cGMP, additional applications of isoprenaline (1 μM) or forskolin (1 μM) induced a further increase in I _Ca. From these results, it could be concluded that the activation of cGMP-dependent protein kinase is involved in the facilitation of I _Ca by cGMP in rabbit ventricular myocytes. Received: 17 March 1997 / Received after revision: 28 August 1997 / Accepted: 16 September 1997     

心肌肽素对豚鼠心室肌细胞钠通道的影响

目的： 研究心肌肽素对豚鼠心室肌细胞钠通道的影响，探讨心肌肽素在离子通道水平的作用机制。 方法： 用急性酶解分离法获得豚鼠心室肌细胞，标准全细胞膜片钳技术记录钠电流(I_Na)。 结果： 心肌肽素1、5、10、50、100、500 mg/L使豚鼠心室肌细胞I_Na分别减少(0±1)%、(6±2)%、(10±2)%、(15±1)%、(22±9)%、(30±6)%，呈浓度依赖性抑制I_Na。心肌肽素50 mg/L使I_Na激活时间(TTP)从(2.8±0.7) ms延长至(3.0±0.8) ms (P<0.05)；使I_Na电流密度-电压曲线上移，但不改变激活电位、峰电位、反转电位和I-V曲线的形状；不影响稳态激活曲线、稳态失活曲线和稳态失活后恢复曲线。 结论： 心肌肽素浓度依赖性抑制豚鼠心室肌细胞I_Na，可能是其抗心律失常作用的机制之一。     

线粒体KATP通道开放对培养成年大鼠心肌细胞PKC epsilon转位激活的影响

目的：探讨MitoKATP通道特异性开放剂二氮嗪(DZ)预处理对PKCε的转位激活作用及其与活性氧生成的关系。 方法： 采用免疫荧光和Western blotting等技术检测培养成年大鼠心室肌细胞PKCε的表达。 结果： ①MitoKATP通道特异性开放剂DZ预处理能引起PKCε向心肌细胞肌丝样结构转位；②活性氧清除剂2-巯基丙酰氨基乙酸(MPG)能抑制DZ预处理引起的PKCε转位；③PKC特性抑制剂氯化白屈菜赤碱(CH)能完全消除DZ预处理引起的PKCε转位。 结论： MitoKATP通道开放能够激活PKCε向肌丝样结构转位。MitoKATP通道开放过程中生成的ROS是引起PKCε转位激活的重要原因。     

灯盏花素对大鼠心室肌细胞钠通道的影响

目的： 研究灯盏花素对大鼠心室肌细胞膜钠通道的影响,在离子通道水平探讨灯盏花素的抗心律失常作用机制。方法： 用急性酶解法获得单个大鼠心室肌细胞,标准的全细胞膜片钳技术记录钠通道电流(INa)。结果： (1) 灯盏花素呈浓度依赖性抑制INa,在-30 mV时,含1、3、30、100 mg·L-1灯盏花素的细胞外液分别灌流细胞3 min,分别阻断INa峰电流(7.98±0.60)%、(37.73±2.31)%、(65.58±2.90)% 和(88.09±5.60)%。INa激活电位为-70 mV,最大峰电位为-30 mV,翻转电位为5 mV,激活和失活过程呈电压和时间依赖性。30 mg·L-1灯盏花素使电流电压曲线明显上移,峰值电流从（13.49±1.25）pA/pF 减少至（4.78±0.85）pA/pF,n=8,P<0.05,冲洗后可以不完全恢复。（2）灯盏花素能使钠电流失活曲线明显左移。（3）灯盏花素使钠电流激活曲线明显右移。（4）灯盏花素使钠电流复活明显减慢。结论： 灯盏花素能够抑制心肌细胞钠通道电流,并呈浓度依赖性。     

山莨菪碱对兔缺血再灌注心室肌细胞钠离子通道电流的影响

目的:建立兔心肌缺血再灌注动物模型,研究山莨菪碱对兔在体缺血再灌注后心室肌细胞钠离子通道电流(INa)的影响,探讨山莨菪碱抗再灌注心律失常的细胞学离子机制。方法:45只新西兰大耳白兔随机分为3组:缺血再灌注动物模型组(I/R组,结扎冠脉左前降支30min后再开放120min);山莨菪碱治疗组(Ani+I/R组,手术前1min给予动物耳缘静脉注射山莨菪碱5mg/kg);假手术对照组(只开胸不结扎血管)。观察缺血再灌注期间室性心律失常(室早、室速和室颤)的发生率及持续时间。采用酶解的方法分离缺血部位心室肌外膜单个心室肌细胞,应用全细胞膜片钳技术记录INa。结果:(1)心律失常发生率:与I/R组比较,Ani+I/R组兔室速、室颤发生率及持续时间明显下降,其心律失常的评分明显低于I/R组(2.6±0.7vs3.6±0.8,P0.05)。对照组、I/R组和Ani+I/R组INa电流密度峰值(-30mV)分别为-42.78±5.48(n=16)、-22.46±5.32(n=12)和-38.89±5.24pA/pF(n=13),I/R组明显低于对照组(P0.01),Ani+I/R组明显高于I/R组(P0.01)。结论:山莨菪碱可降低心肌缺血再灌注期间心律失常的发生率。心肌缺血再灌注后,INa明显下降,山莨菪碱预处理可使下降的INa上调,逆转电重构,可能为山莨菪碱降低再灌注心律失常发生率的细胞学离子机制。     

Effects of the protein kinase A inhibitor H-89 on Ca2+ regulation in isolated ferret ventricular myocytes

 We investigated the effects of a protein kinase A (PKA) inhibitor, H-89 {N-[2-(p-bromocinnamylamino)ethyl]-5-iso-quinolinesulphonamide}, on Ca²⁺ regulation in Fura-2-loaded ferret myocytes. H-89 (10 μmol/l) decreased the amplitude of the Fura-2 transient to 28.2±4.3% (P<0.001) of control and prolonged its duration, characterized by a decrease in the rate of decline of Ca²⁺ to diastolic levels: t _1/2 increased from 311±35 ms to 547±43 ms (P<0.001, n=7). Reduced Ca²⁺ uptake by the sarcoplasmic reticulum (SR) in the presence of H-89 was also indicated by a decrease in the SR Ca²⁺ content, as assessed with caffeine. The apparent slowing of the SR Ca²⁺-ATPase was not caused by changes in phosphorylation of phospholamban (PLB). However, Ca²⁺ uptake in microsomal vesicles prepared from canine hearts and fast-twitch rat skeletal muscle (which lacks PLB) was decreased by 34.1 and 46.8% (n=3), respectively, suggesting that H-89 has a direct inhibitory effect on the SR Ca²⁺-ATPase. In electrophysiological experiments, 5.0 μmol/l H-89 decreased the L-type Ca²⁺ current (I _Ca) by 39.5% (n=6) and slowed the upstroke of the action potential and, in some cases, caused loss of excitability without changes in the resting membrane potential. In summary, data show that [Ca²⁺ ]_i regulation, and hence contraction, is sustained by PKA-mediated phosphorylation, even in the absence of β-agonists. However, the use of H-89 as a tool to study the role of this signalling pathway is limited by the non-specific effects of H-89 on the SR Ca²⁺-ATPase. Received: 4 September 1998 / Received after revision: 19 October 1998 / Accepted: 20 October 1998     

氧化苦参碱对豚鼠心室肌细胞膜钠通道的影响

目的：研究氧化苦参碱(Oxy)对豚鼠心室肌细胞膜钠通道电流的影响，探讨Oxy在离子通道水平的作用机制。 方法: 用急性酶解法分离豚鼠心室肌细胞，应用膜片钳全细胞记录技术，观察不同浓度的Oxy对钠通道的影响。 结果: 用Oxy 1、10、100、1 000 μmol/L可浓度依赖性地抑制钠电流。在100 μmol/L时，给药后电流密度抑制约40％（P<0.01），可使心肌细胞钠电流－电压曲线上移，但激活电位、峰电位及反转电位无改变；Oxy使失活曲线向负电位方向变化，并使灭活后恢复过程延迟；对激活曲线无明显影响。 结论: Oxy可通过浓度依赖性和电压依赖性地抑制心肌细胞膜钠通道电流。     

Effects on L-type calcium current of agents interfering with the cytoskeleton of isolated guinea-pig ventricular myocytes

We studied the effects of an external acute 10 min application of cytoskeletal interfering agents on cardiac L-type calcium current (ICa,L). We found that colchicine, taxol and cytochalasin D had no direct effect on the L-type calcium channel as indicated by the absence of effect on voltage-dependent parameters. Phalloidin induced a shift in the I-V curve which renders it difficult to use in excitation-contraction coupling studies. Microfilaments of actin did not seem to regulate cardiac ICa,L as indicated by the lack of effect of cytochalasin D on ICa,L amplitude and inactivation kinetics. On the contrary, microtubules seem to be involved in the calcium-dependent inactivation of ICa,L. This involvement might be direct, i.e. a physical link between the microtubules and some part of the channel protein, or it could be indirect, i.e. the calcium chelating properties and physical obstacle of microtubules in the space between the sarcolemma and the SR.