应用基因芯片技术评估卡托普利干预后糖尿病性心肌病大鼠基因谱的变化

目的：比较对照组和干预治疗组大鼠心肌组织中基因表达的差异，探讨卡托普利保护心肌组织的作用。方法：①实验于2002—08／2003—12在福建省立医院内分泌科完成。选用雄性SD大鼠12只。在空腹12h后按60mg／kg腹腔注入链脲佐菌素，每天注射1次，连续注射10周。5周后血糖浓度持续〉16．6mmol／L，表明已建立糖尿病模型。②10周后取大鼠部分心肌组织做电镜检查，发现线粒体变性，肌纤维收缩带形成，表明已建立糖尿病性心肌病动物模型。⑧将12只糖尿病性心肌病大鼠随机分为2组：对照组和干预组，每组6只。干预组给予按1．5mg／（kg&;#183;d）给予卡托普利口服治疗15周；对照组正常饲养。两组均干预15周，然后将大鼠处死，取心肌组织作基因芯片检查。④经反转录分别用Cy3-dUTP和Cy5-dUTP标记对照组和干预组mRNA，获得两组动物来源的cDNA探针。cDNA探针与基因表达谱芯片杂交，结果由扫描仪扫描并用ImaGene3．0软件进行分析统计。以比率（Cy5／Cy3）〉2为表达上调基因，以Cy5／Cy3〈1为表达下调基因。结果：大鼠12只均进入结果分析。①线粒体电子质子偶联和氧化磷酸化相关基因（反映心肌的能量供应）——质子泵基因、细胞色素P450，细胞色素C氧化酶亚单位Va、辅酶Qlb亚单位、泛素特异蛋白酶2Cy5与Cy3比率分别为2．684，2．387，3．124，3.213，3．234；肌动蛋白（在心肌收缩过程中起重要作用）基因Cy5与Cy3比率为2．277，线粒体电子质子偶联和氧化磷酸化相关基因、肌动蛋白基因在干预组中表达明显上调。②二甲基精氨酸水解酶（可产生一氧化氮，导致线粒体内氧自由基、过氧亚硝酸阴离了生成增加，导致呼吸链损伤）基因Cy5与Cy3比率为0．271，整合素b1（与心肌间质纤维化有关）基因Cy5与Cy3比率为0．286。二甲基精氨酸水解酶基因．整合素b1基因在干预组中表达明显下调。结论：①卡托普利通过增强线粒体电子质子偶联和氧化磷酸化相关基因的表达，促进ATP的产生，保证了病变心肌的能量供应。②卡托普利町通过上调肌动蛋白基因表达，增强病变心肌的收缩力。⑧卡托普利可下调二甲基精氨酸水解酶基因表达，减少一氧化氮的产生，防止呼吸链的损伤。④卡托普利通过抑制整合素b1的表达，抑制心肌间质纤维化。     

肝癌的基因表达谱研究

以基因表达谱芯片对人正常肝及肝癌组织基因表达的差异进行研究比较.将4096条人cDNA用点样仪点在特制的玻片上制备成表达谱芯片;利用肝和肝癌组织的mRNA通过逆转录方法,将Cy3和Cy5两种荧光分别标记到两种组织的cDNA上,制备成cDNA探针,并与表达谱芯片进行杂交及扫描,重复4次实验,通过计算机数据处理判定基因是否在上述2种组织中有表达差异,筛选出差异表达的基因903条.基因芯片技术可同时定量研究数以千记的基因表达水平,从而鉴定参与肿瘤发生的基因.     

制备人Ⅱ型多巴胺受体cRNA探针检测帕金森病大鼠模型纹状体内Ⅱ型多巴胺受体基因表达的变化

目的：获得单链、杂交结果稳定的人Ⅱ型多巴胺受体基因正义和反义RNA探针，检测人Ⅱ型多巴胺受体在帕金森病大鼠模型中表达的变化。方法：实验于2002-10／2003-06在首都医科大学神经科学研究所内完成。选出2，6，12周帕金森病大鼠模型60只，每组各20只，用来做原位杂交的组织处理；将已制备的pGEM-T-Easy-D2R质粒载体分别经ClaI、Xba I限制性酶切反应得到线形质粒，再分别以17和SP6聚合酶制备了人Ⅱ型多巴胺受体基因的反义和正义探针，通过斑点杂交检测探针的浓度；将反义和正义探针分别作等梯度稀释，分别与组织切片杂交，强度洗脱后，观察使对照正义链探针没有杂交信号，而反义探针杂交后也无本底的最适宜浓度，从而降低内缘性其他多巴胺受体亚型的干扰作用；用制备的最适宜浓度探针分别杂交帕金森病大鼠模型2，6，12周的组织切片，杂交后冲洗，免疫检测及呈色，观察帕金森病大鼠模型纹状体中Ⅱ型多巴胺受体表达。结果：①实验标记的人Ⅱ型多巴胺受体探针属cRNA探针，其特点为单链探针，杂交过程不需变性，可合成最可靠的反义链探针，杂交结果稳定，体外转录合成的cRNA探针长度也比较一致，其浓度分别为150．120mg／L。②将反义和正义探针分别等梯度稀释，分别与组织切片杂交，强度洗脱后，结果证明25mg／L浓度最适宜，对照正义链探针没有杂交信号，而反义探针杂交后也无本底。③原位杂交证实，反义探针能够与帕金森病大鼠模型纹状体中Ⅱ型多巴胺受体mRNA杂交。用反义探针标记的细胞中可见蓝色颗粒沉积，左右半球纹状体中标记细胞数在2周时没有变化，帕金森病大鼠损伤侧和健侧Ⅱ型多巴胺受体mRNA表达没有明显变化；6周时，损伤侧较健侧表达明显上调，12周时，损伤侧与健侧表达都下降且没有明显差别。结论：实验获得了人Ⅱ型多巴胺受体基因反义和正义cRNA探针，并得出无本底的最适宜浓度；制备的人Ⅱ型多巴胺受体cRNA探针可以检测帕金森病大鼠模型纹状体内Ⅱ型多巴胺受体基因变化情况，并说明了帕金森病大鼠纹状体Ⅱ型多巴胺受体mRNA表达水平随模型日期增长而发生相应变化。     

内皮差异表达基因消减文库的构建及在创伤修复中的应用

目的：建立人脐静脉内皮细胞内毒素刺激后差异表达基因的消减cDNA文库。方法：提取培养人脐静脉内皮细胞内毒素刺激6h后mRNAs，反转录合成cDNA，与对照组间进行抑制消减杂交富集差异表达基因，亚克隆入T／A质粒并转化感受态大肠杆菌。结果：成功构建了人脐静脉内皮细胞内毒素刺激后上调和下调差异表达基因两个消减cDNA文库，为进一步筛选新的内皮细胞活化相关基因打下基础。结论：经抑制消减杂交建立的消减cDNA文库富集并均一化了内毒素刺激后不同丰度的差异表达基因，对深入理解内皮细胞活化机制及参与组织修复的过程具有重要意义。     

丙型肝炎病毒1b亚型诊断芯片的制备与实验室研究

目的建立一种简单有效的制备、筛选丙型肝炎病毒(HCV)1b亚型cDNA基因芯片探针的技术。方法应用cDNA文库法制备芯片探针，限制性内切酶Sau3AI消化HCV-1b全长cDNA。所得的酶切片段在72℃补平加单个碱基A，然后与pMD18-T载体连接，AT克隆，用载体引物进行PCR初步鉴定，并测序。将筛选出的片段打印在氨基修饰的玻片上制备成cDNA芯片并进行杂交验证分析。样品标记采用限制性显示PCR(Restriction Display PCR RD—PCR)技术。结果应用cDNA文库法，共得到22大小相对一致(250—750bp)的基因片段，序列分析表明，均属于HCV—1b基因，可以作为诊断芯片探针；芯片杂交结果显示，样品和诊断基因芯片杂交的敏感性和特异性均佳。结论用cDNA文库法收集片段是一种快速、简便制备芯片探针的实用方法；制备的诊断芯片可以用于检测HCV-1b RNA，具有敏感、检测结果较为可靠的优点。     

血管内皮细胞生长因子内—自分泌环在恶性血液病发病中的意义

血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factors，VEGFs)是一组具有重要生物学作用的血管生成肽，调节新生血管生成、造血干细胞发育、细胞外基质重建和炎症因子释放等。最近的研究发现，某些恶性血液病细胞不仅可以分泌VEGF，而且还选择性地表达功能性的血管内皮细脆生长因子受体(VEGF receptors VEGFs)，形成一个自身的内分泌环，促进这些恶性血液病细胞的存活、增殖和漫润。     

血管内皮生长因子的研究进展

血管内皮生长因子(VEGF)是血管生成的主要调控因子,特异性地作用于血管内皮细胞。VEGF受体特异性地分布于血管内皮细胞,促进内皮细胞的增殖和迁移。本文就VEGF的分子特征、VEGF受体及信号转导、VEGF及受体的表达调控作一综述。     

成纤维细胞生长因子-10对3种与修复有关内源性生长因子表达的调控作用

目的：观察成纤维细胞生长因子(FGF-10)对人角朊细胞表达转化生长因子-α(TGF-α)、血小板源性生长因子-AB(PDGF—AB)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)的作用。方法FGF-10工作浓度为4、16、125和500μg／L，不含EGF和含EGF的无血清角朊细胞培养液分别作为阴性和阳性对照。细胞接种密度为2500和375000细胞／cm^2，24、48和72h进行培养上清中的细胞计数，TGF—α、PDGF—AB和VEGF的含量用酶联免疫吸附法(ELISA)测定。结果:①低接种密度、细胞处于未融合生长状态时，各组24h培养上清中TGF—α含量均较低，48h的16μg／L以上组及72h各浓度组培养上清中TGF—α的分泌量均显著高于阴性对照组单个细胞的TGF—α分泌量。高接种密度、细胞处于融合生长状态时，24h的培养上清中未检测到PDGF-AB；48和72h的培养上清中，125和500μg／L的FGF-10组PDGF-AB浓度及每10^6细胞的分泌量显著高于阴性对照组，且PDGF—AB的分泌呈FGF-10剂量依赖性。②低接种密度时，FGF-10各组VEGF浓度及每10^6细胞VEGF分泌量在各时间点均与阴性对照组无明显差异，而阳性对照EGF组VEGF分泌显著高于其它各组。结论FGF-10上调角朊细胞分泌PDGF—AB、TNF—α可能与FGF-10间接作用于成纤维细胞、血管内皮细胞进而促进肉芽组织的形成有关。     

移植肾慢性排异反应与肾内微淋巴管的增生

背景：在慢性肾移植排斥反应中，随着排斥的加重，微淋巴管增生程度亦随之增高，排斥反应时，组织间浸润的巨噬细胞分泌血管内皮细胞生长因子C、D，激活血管内皮细胞生长因子受体3，从而引起微淋巴管增生。但尚无实验证实该理论。 目的：采用肾小球足细胞膜黏蛋白及血管内皮生长因子受体、CD68分别双重免疫组织化学染色方法，量化移植肾组织中的微淋巴管密度、血管内皮细胞生长因子受体及CD68密度，探讨3者关系及内在意义。 设计、时间及地点：以细胞为对象的观察实验，于2005-09／2007—05在解放军南京军区福州总医院器官移植中心完成。 材料：50份移植肾切除组织标本来自福州总院器官移植中心1998／2005手术切除标本存档蜡块，慢性排斥25份，急性排斥17份，尿瘘致移植肾带功切除8份。 方法：双重免疫组织化学染色法检测50份移植肾切除组织标本存档蜡块切片中肾小球足细胞膜黏蛋白及血管内皮细胞生长因子受体、CD68表达，并量化微淋巴管密度、血管内皮细胞生长因子受体及CD68密度。 主要观察指标：结合临床病理资料分析微淋巴管密度、血管内皮细胞生长因子受体及CD68密度表达及与肾移植排斥反应之间的相互关系。 结果：急性排斥组中肾小球足细胞膜黏蛋白多伴随肾内动脉的大分支零星分布在动脉周围的细胞间质内，血管内皮细胞生长因子受体基本为零星染色。慢性排斥组可见有大量微淋巴管增生，主要集中在间质内浸润的局灶性单核细胞群周围，并且深入到肾小管周边的间质内，管腔扩张，扭曲，微淋巴管周围可见血管内皮细胞生长因子受体高表达。随着肾小球足细胞膜黏蛋白在不同肾组织表达的高低，血管内皮细胞生长因子受体阳性率亦随之变化，两者之间呈正比（P〈0．05）；慢性排斥组中血管内皮细胞生长因子受体的强阳性率明显增高，与其他两组比较差异显著（P〈0.05）。肾小球足细胞膜黏蛋白染色显示在慢性排异反应组中，随着排异程度的加重，淋巴管密度也增加（P〈0．05）。 结论：移植肾组织中的微淋巴管密度与血管内皮细胞生长因子受体及CD68密度密切相关，分析：肾移植后微淋巴管增生与单核细胞的浸润互为因果，导致移植肾组织局部单核细胞的大量堆积，最终致使移植物失功。     

移植脾组织血管神经生成规律的动态观察

目的：观察自体脾组织大网膜内移植后，移植脾组织血管神经再生过程中血管内皮细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子受体及神经肽Y表达的动态变化，分析自体移植脾组织血管神经生成规律。方法：实验于2004—09／2006—10在解放军第三军医大学基础部外科应用解剖与手术学教研室实验室完成。①选用Wistar大鼠70只，按随机数字表法分为7个时相组，每组10只。②行脾切除自体脾组织大网膜内移植，分别于术后7，14，30，60，90，120，180d，采用免疫组化血管内皮细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子受体、神经肽Y阳性神经纤维抗体染色方法，应用光镜、电镜、图像分析观测自体移植脾组织。结果：70只大鼠全部进入结果分析，无脱失。①自体脾组织移植术后7d即有血管长入移植脾组织，180d再生血管接近正常；术后30d神经开始再生，180d趋于正常。②术后7，14d血管内皮细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子受体阳性染色细胞密度迅速升高，60d达高峰，随后逐渐降低；术后30d。出现神经肽Y阳性神经纤维。术后180d血管内皮细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子受体阳性染色细胞密度趋于正常；术后120，180d神经肽Y阳性神经纤维广泛分布。结论：自体移植脾组织再生过程中移植脾组织再生血管神经来源于大网膜内的神经。自体移植再生脾组织内血管内皮细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子受体表达量早期开始升高，移植脾组织先出现血管再生，后出现神经再生。     

Gene therapy of murine solid tumors with T cells transduced with a retroviral vascular endothelial growth factor--immunotoxin target gene

Solid tumor growth can be inhibited by targeting its neovasculature with vascular endothelial growth factor (VEGF)-toxin fusion proteins (FPs), but these agents have been limited by their inability to localize at the tumor site. In this study, we devised a gene therapy approach intended to deliver VEGF-toxin directly to tumor. Antigen-specific cytotoxic T lymphocytes (CTLs) served as vehicles to deliver a retroviral VEGF-toxin fusion protein to its specific leukemia cell target in vivo. A retroviral vector was constructed for gene therapy with VEGF positioned downstream of its 27-amino acid leader sequence, which promoted secretion of a catalytic immunotoxin containing either truncated diphtheria toxin or Pseudomonas exotoxin A. VEGF was chosen on the basis of the expression of VEGF receptor on endothelial cells in the tumor neovasculature. The VEGF FP was first expressed and secreted by mammalian NIH 3T3 cells. Intracellular expression of both VEGF and toxin was verified by immunofluorescence. In vitro, supernatants collected from transfected cells specifically inhibited the growth of VEGF receptor-expressing human umbilical vein endothelial cells (HUVECs), but not a control cell line. In vivo findings correlated with in vitro findings. A retroviral vector containing the target gene and a nerve growth factor receptor (NGFR) reporter gene was used to transiently transduce T15, a CD8(+) CTL line that specifically recognizes C1498, a lethal C57BL/6 myeloid tumor. Transduced T15 cells injected intravenously significantly inhibited the growth of subcutaneous tumor, whereas nontransduced controls did not. Together, these data indicate that gene therapy of T cells with retrovirus containing a VEGF-immunotoxin target gene may be a valid means of inhibiting a broad range of solid tumors dependent on angiogenesis.     

脐血干细胞向巨核细胞分化后信号转导基因的表达

背景:造血干细胞具有多向分化的潜能,在合适的造血生长因子和系特异性生长因子的诱导下,可分化成巨核细胞。在体外诱导CD34~ 造血干细胞向巨核细胞分化可导致许多基因尤其是信号转导基因表达的变化。目的:观察脐血干细胞向巨核细胞分化后信号转导基因的表达,拟从基因水平验证其对巨核细胞分化发育的调控。设计:开放性实验。单位:福建省肿瘤医院肿瘤免疫学研究室。材料:无菌条件下应用血袋采集法收集足月正常分娩的胎儿脐带血60～145 mL,产妇及家属自愿捐献。VarioMACS免疫磁性吸附柱分离装置,CD34 Isolation Kit;SCGM无血清培养基;CD单抗;细胞因子。人类全基因组寡核苷酸微阵列芯片V2.0;LuxScan 10K/A双通道激光扫描仪。实验经医院伦理委员会批准。方法:实验于2005-07/2006-06在福建省肿瘤医院肿瘤免疫研究室及北京博奥生物芯片有限公司完成。分别收集同一份脐血分化培养前CD34~ 细胞和培养后CD41~ 细胞,提取总RNA。逆转录合成和纯化cDNA探针,以Cy3-dCTP标记培养前CD34~ 细胞,以Cy5-dCTP标记培养后CD41~ 细胞标记的DNA溶于30μL杂交液中,42℃过夜。主要观察指标:应用基因芯片技术比较造血干细胞与分化的巨核细胞信号转导相关的基因表达差异。根据基因芯片结果,选定17个表达差异基因用RT-PCR作进一步验证。结果:芯片分析结果显示,共筛选出3522个差异基因,其中上调基因1705个,下调基因1817个。3522个差异基因中,与细胞信号相关的基因有343个,与转录调节相关的有150个,与分化相关的有21个。其中,CD61基因的表达增加了369.83倍,CD41基因的表达增加27.38倍,PF4基因的表达增加24.06倍;促分裂原活化蛋白澈酶s、G蛋白偶联受体、RAS家族相关的基因多数表达上调;与STAT通路相关的基因中,SOCS1、JANUS激酶表达上调,STAT5A表达下调。对选定的17个表达差异基因用RT-PCR作进一步验证,以GAPDH为内对照,结果与芯片检测完全一致。结论:血小板生成素等造血生长因子可能主要通过G蛋白偶联受体-Ras-促分裂原活化蛋白激酶途径,促进脐血干细胞向巨核细胞系增殖、分化。     

羊水干细胞分泌细胞因子及其对人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的影响

背景:关于细胞移植的功效,重点在于其分泌的促增殖或抗凋亡的细胞因子,羊水干细胞能否分泌相关细胞因子有必要深入分析.目的:观察分离培养的羊水于细胞分泌细胞因子情况,及其对人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的作用.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-12/2009-06在南昌大学第一附属医院高血压病研究所完成.材料:10例剖宫产孕妇足月羊水,50 mL/例,用于分离培养羊水干细胞,同时留取其产后脐静脉用于分离培养内皮细胞,取前均获孕妇知情同意.方法:①贴壁法分离培养羊水干细胞,达80%融合时胰酶消化传代,取传至第3代细胞,调整细胞密度为5×10~8L~(-1),分为2组:缺氧羊水干细胞组通入体积分数为2%O_2+体积分数为5%CO_2+体积分数为93%N_2,常规羊水干细胞组通入体积分数为5%CO_2+体积分数为95%空气,两组细胞37℃培养24 h,收集各自培养上清液及细胞以备分析.②取体外分离培养的第2代人脐静脉内皮细胞,以2×10~4细胞/孔的密度接种于12孔板,分为3组:对照组加入含体积分数为5%胎牛血清的EBM-2新鲜培养液2 mL,常规羊水干细胞组加入含体积分数为5%胎牛血清的EBM-2新鲜培养液1 mL+羊水干细胞培养液1 mL,缺氧羊水干细胞组加入含体积分数为5%胎牛血清的EBM-2新鲜培养液1 mL+缺氧诱导羊水干细胞培养液1 mL,培养3d,加入10 μg/L肿瘤坏死因子α诱导细胞凋亡.主要观察指标:流式细胞仪测定羊水干细胞表面抗原表达,ELISA法测定羊水干细胞分泌血管内皮细胞生长因子、肝细胞生长因子情况,RT-PCR法测定细胞因子mRNA的表达,检测内皮细胞增殖率及凋亡率.结果:培养7 d后羊水干细胞呈长梭形,以漩涡状、辐射状排列,第3代羊水干细胞呈CD29~+,CD105~+,CD34~-.常规培养的羊水干细胞可分泌血管内皮细胞生长因子、肝细胞生长因子;缺氧诱导条件下血管内皮细胞生长因子水平明显增加(P＜0.01),其mRNA表达明显上调(P＜0.05),而肝细胞生长因子含量及mRNA的表达均无明显变化(P＞0.05).与对照组比较,培养3 d后常规羊水干细胞组、缺氧羊水干细胞组内皮细胞数均明显增加(P＜0.05),肿瘤坏死因子α诱导凋亡24 h后内皮细胞凋亡率均明显降低(P＜0.05),且缺氧羊水干细胞组变化幅度大于常规羊水干细胞组(P＜0.05).结论:羊水干细胞可分泌血管内皮细胞生长因子、肝细胞生长因子,羊水干细胞培养液能促进内皮细胞增殖,抑制内皮细胞凋亡.经缺氧处理后,羊水干细胞分泌血管内皮细胞生长因子的能力增加,对内皮细胞的增殖和凋亡干预作用增强.     

Taspine downregulates VEGF expression and inhibits proliferation of vascular endothelial cells through PI3 kinase and MAP kinase signaling pathways

Taspine is an active component isolated from Radix et Rhizoma Leonticis with inhibiting tumor angiogenic properties. The molecular mechanism(s) of taspine on tumor angiogenic inhibition have not been well documented. The aim of this study was to elucidate in detail the effects of taspine on genetic expressions of VEGF in human umbilical vein endothelial cells, and on VEGFR2-mediated intracellular signaling of human umbilical vein endothelial cells. The genetic expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) in the human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) treated with taspine in vitro was measured by the ELISA and RT-PCR methods. The effects of taspine on cell proliferation of HUVECs and HUVECs induced by VEGF165 were considered by using MTT assay. And also, a western blot was used to detect Akt and Erk1/2 expressions and their phosphorylation levels in HUVECs treated with taspine. Our results show that VEGF protein and mRNA expressions in the cells treated with taspine were significantly decreased. Taspine also significantly inhibited cell proliferation of HUVECs induced by VEGF165. HUVECs treated with taspine showed decreased Akt and Erk1/2 activities.     

Arteriolar and venular patterning in retinas of mice selectively expressing VEGF isoforms

The murine VEGF gene is alternatively transcribed to yield the VEGF(120), VEGF(164), and VEGF(188) isoforms, which differ in their potential to bind to heparan sulfate and neuropilin-1 and to stimulate endothelial growth. Here, their role in retinal vascular development was studied in mice selectively expressing single isoforms. VEGF(164/164) mice were normal, healthy, and had normal retinal angiogenesis. In contrast, VEGF(120/120) mice exhibited severe defects in vascular outgrowth and patterning, whereas VEGF(188/188) mice displayed normal venular outgrowth but impaired arterial development. It is noteworthy that neuropilin-1, a receptor for VEGF(164), was predominantly expressed in retinal arterioles. These findings reveal distinct roles of the various VEGF isoforms in vascular patterning and arterial development in the retina.     

缺氧时内皮细胞中血管内皮生长因子受体的表达

目的 探讨脐带静脉内皮细胞在缺氧条件培养下血管内皮生长因子特异受体的表达，为进一步研究血管内皮生长因子及其受体在新血管生成中的作用提供理论依据。方法 体外培养脐带静脉内皮细胞，不同缺氧时间处理及血管活性因子刺激，提取组织总RNA，应用Northern杂交和逆转录聚合酶连扩增反应（RT－PCR）等方法，观察基因表达的变化。结果 内皮细胞无缺氧和缺氧3h均未见flt-1表达，缺氧6h可见flt-1摸板核糖核酸（mRNA)的表达。内皮细胞缺氧6h，内皮素（ET）、一氧化氮（NO）、LNNA对flt-1表达有影响。ET促进flt-1 mRNA的表达，NO抑制其表达，而LNNA部分恢复其表达。在无缺氧和缺氧3，6h KDR基因均有表达。内皮细胞缺氧6h，ET、NO、LNNA对KDR无影响。LNNA阻断了内源性NO后，明显促进KDR mNRA的表达，其他无作用。结论 在缺氧条件下血管内皮细胞生长因子的受体flt-1表达明显增加并受血管活性因子调节，KDR有表达且部分受血管活性因子调节。     

siRNA沉默FOXO3a对三氧化二砷抑制内皮细胞增殖的影响

背景：课题组前期已证实As2O3可以促进乳腺癌细胞中FOXO3a因子的表达,并抑制肿瘤细胞中血管内皮生长因子的表达,但As2O3对血管内皮细胞增殖的影响,以及对血管内皮细胞中FOXO3a、血管内皮生长因子的影响尚未证实。目的：观察siRNA沉默FOXO3a对As2O3抑制人脐静脉内皮细胞增殖及血管生成的影响。方法：实验分为4组：①As2O3组：待人脐静脉内皮细胞贴壁,在含4μmol/LAs2O3的RPMI-1640培养基中培养。②control siRNA组：转染无关序列control siRNA后,细胞在含4μmol/LAs2O3的RPMI-1640培养基中培养。③FOXO3a siRNA组：转染FOXO3a siRNA后,细胞在含4μmol/LAs2O3的RPMI-1640培养基中培养。④对照组：与实验药物等体积PBS作为对照,细胞在完全培养基条件下培养。应用CCK-8方法检测细胞增殖情况,采用免疫细胞化学方法观察人脐静脉内皮细胞中FOXO3a、血管内皮生长因子蛋白的表达情况。结果与结论：与对照组相比,FOXO3a siRNA明显减弱了As2O3抑制人脐静脉内皮细胞增殖的作用,As2O3促进人脐静脉内皮细胞中FOXO3a蛋白的表达并抑制血管内皮生长因子蛋白的表达,FOXO3a siRNA处理后明显抑制FOXO3a蛋白表达且增加血管内皮生长因子蛋白表达。结果提示FOXO3a可能成为As2O3抑制肿瘤细胞增殖及血管生成治疗的重要靶点。     

VEGF 在妊娠期糖尿病产妇分娩新生儿脐血中的表达研究

目的：探讨 VEGF 在妊娠期糖尿病产妇分娩新生儿的脐静脉血及动脉血中的表达及价值。方法对80例妊娠期糖尿病产妇分娩的新生儿及80例健康产妇分娩的新生儿的脐静脉和动脉血的 VEGF 水平进行放射免疫分析检测。结果观察组新生儿的脐动脉血 VEGF 水平为（24．06±8．79）pg/mL,脐静脉血 VEGF 水平为（20．69±7．78）pg/mL,均显著高于对照组;同时,观察组低血糖新生儿脐动脉血的 VEGF 水平显著高于对照组及观察组血糖正常的新生儿。结论妊娠期糖尿病产妇分娩新生儿的脐静脉和动脉血的 VEGF 水平明显高于健康产妇分娩的新生儿,新生儿脐动脉血的 VEGF 水平可以在一定程度上反映出妊娠期糖尿病对于胎儿的影响。