恶性肿瘤患者血小板、红细胞黏附分子CD35、CD44、CD62P的表达与肿瘤转移的关系

摘 要 研究血小板以及红细胞CD35、CD44和CD62P分子的表达变化与肿瘤转移的生物学意义。通过流式细胞仪测定正常人和恶性肿瘤患者血小板和红细胞CD35、CD44和CD62P的表达情况。结果显示，恶性肿瘤患者血小板CD35和CD62P平均荧光强度明显高于正常人，转移组明显高于未转移组（P＜0.05）。转移组血小板CD44平均荧光强度明显高于正常人（P＜0.05）。恶性肿瘤患者红细胞CD35（P＜0.05）和CD44（P＜0.01）平均荧光强度均明显低于正常人，转移组红细胞CD44明显低于未转移组（P＜0.05）。提示恶性肿瘤患者血小板CD35、CD44和CD62P分子处于高表达状态，而红细胞CD35、CD44分子表达减少，和红细胞免疫功能下降有关，这些变化可能对肿瘤的生长和转移具有重要意义。     

银屑病与肿瘤患者红细胞CD35定量与淋巴细胞天然免疫活性相关性分析

[目的]探讨银屑病与肿瘤患者红细胞天然免疫分子CD35数量变化与淋巴细胞天然免疫活性变化的相关性状况。[方法]采用流式细胞仪荧光免疫法测定银屑病及肿瘤患者红细胞CD35数量，用淋巴细胞粘附补体调理过的S180癌细胞株的方法测定银屑病及肿瘤患者淋巴细胞的天然免疫活性。[结果]银屑病患者红细胞CD35数量及淋巴细胞粘附活性明显高于正常人，肿瘤患者红细胞CD35数量及淋巴细胞粘附活性明显低于正常人，银屑病患者红细胞CD35数量与淋巴细胞天然免疫活性之间存在正相关性。[结论]银屑病患者红细胞CD35数量与淋巴细胞天然免疫活性明显亢进，而肿瘤患者红细胞CD35数量与淋巴细胞天然免疫功能都低下，两种疾病免疫发病机理明显不同，而且银屑病患者红细胞CD35数量变化与淋巴细胞天然免疫活性变化呈现正相关，红细胞天然免疫活性变化必然影响到淋巴细胞免疫功能。     

妊娠高血压综合征患者红细胞免疫功能的研究

对４０例妊娠高血压综合征患者和３０例正常孕妇进行了红细胞Ｃ３ｂ受体（Ｃ３ｂＲ）花环试验、免疫复合物（ＩＣ）花环试验及红细胞免疫粘附（ＲＩＣＡ）调节因子（ＲＣＩＡ促进因子和ＲＣＩＡ抑制因子）活性的测定。结果：妊高征患者Ｃ３ｂＲ花环率及ＩＣ花环率均低于正常孕妇（Ｐ〈０．０１），ＲＣＩＡ抑制因子活性明显高于正常孕妇（Ｐ〈０．００１）。提示：妊高征患者红细胞免疫功能原发低下。其原因可能与ＲＣＩＡ抑制因子活     

红细胞CD55、CD59流式细胞术检测方法的若干影响因素探讨

目的探讨流式细胞仪测定红细胞表面CD55、CD59试验过程中影响检测的若干因素,建立此项目的标准操作程序。方法利用流式细胞仪对15例非血液病、11例阵发性血红蛋白尿症（PNH）的乙二胺四乙酸（EDTA）外周抗凝血进行红细胞CD55、CD59检测,观察单克隆抗体（mAb）用量、荧光素种类及反应时间对测定结果的影响。结果在未饱和抗原的情况下（〈9μL）,平均荧光强度（MFI）随抗体量的增加而升高。CD55-异硫氰酸荧光素（FITC）的阳性率和MFI均低于CD55-藻红蛋白（PE）,CD59的FITC和PE 2种荧光标记的阳性率间差异无统计学意义,但在MFI方面前者明显高于后者。反应时间对CD55-PE阳性率、CD59-FITC和CD55-PE的MFI有明显影响（P〈0.05）;3 h内2组CD59-FITC的阳性率无明显变化。结论抗体用量、荧光素种类及标记模式和温育时间对流式细胞仪检测红细胞CD55、CD59有明显的影响。本实验室在3个影响因素上分别选择12μL抗体标记1.6×105～2.8×105个红细胞、荧光素组合模式为CD59-FITC、CD55-PE双色标记和40 min的温育时间,这样既确保了反应充分又提高了结果的稳定性。     

恶性肿瘤患者白细胞膜上CD35定量测定的临床意义

目的 建立流式细胞仪检测恶性肿瘤患者白细胞上CD35分子表达的实验方法.方法 选择36例恶性肿瘤患者及25例健康人血标本,流式细胞仪检测其粒细胞及淋巴细胞上CD35的表达.结果 恶性肿瘤患者粒细胞、B细胞及辅助T淋巴细胞上CD35的表达比健康人明显降低(P＜0.01);而抑制T淋巴细胞上CD35的表达比健康人明显升高(P＜0.01).结论 建立流式细胞仪检测恶性肿瘤患者白细胞上CD35分子表达的实验方法,为恶性肿瘤的诊断、疗效观察及判断预后提供科学而先进的检测手段.     

流式细胞术细胞因子分析法检测乙型肝炎患者特异性细胞免疫功能的初步研究

目的运用流式细胞术胞内细胞因子（CFC）分析法检测乙型肝炎患者外周血特异性细胞免疫功能,探讨该技术检测乙型肝炎病毒（HBV）特异性细胞免疫功能的临床应用价值。方法采用HBV核心抗原表位肽core18-27设计CFC分析法,检测急、慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞（PBMC）中γ-干扰素（IFN-γ）分泌细胞的数量。结果19例急性乙型肝炎、54例慢性乙型肝炎患者PBMC中IFN-γ分泌细胞的数量差异有统计学意义（P〈0．01）。结论CFC分析法能在体外直接检测乙型肝炎患者PBMC中IFN-γ分泌细胞的数量,其水平在一定程度上反映了机体特异性细胞毒性T淋巴细胞应答状况。急性乙型肝炎患者特异性细胞免疫功能明显强于慢性乙型肝炎患者,     

流式细胞术检测用于贫血患者血细胞CD55、CD59中的临床意义

采用流式细胞术分别对健康对照组47例和2014年11月~2016年11月笔者所在医院收治的47例贫血患者外周血红细胞和中性粒细胞膜表面的抗原CD55及CD59的表达水平进行检测。其中47例贫血患者中有17例缺铁性贫血(IDA)患者、3例阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)患者、10例再生障碍性贫血(AA)患者、6例巨幼细胞性贫血(MA)患者、4例骨髓增生异常综合征(MDS)患者、自身免疫溶血性贫血(AIHA)患者。对检测结果进行回顾性分析。结果健康对照组的正常人外周血细胞CD55、CD59检测结果均95%。IDA、MA、AIHA和MDS患者的外周血细胞CD55、CD59检测结果也均95%。有4例AA患者的检测结果在80%~95%。而PNH患者CD55检测结果在31.34%~71.45%,CD59检测结果在42.28%~72.62%,PNH患者CD55和CD59检测结果均明显低于健康对照组和IDA、MA、MDS、AA及AIHA组患者的检测结果,差异均有统计学意义(P0.05)。应用流式细胞术检测贫血患者血细胞CD55、CD59中PNH患者差异显著,AA患者有一定程度的改变,因此可以用作为PNH的早期诊断指标及PNH、AA患者的长期监测指标,对贫血疾病临床诊断与预后具有着重要的意义。     

流式细胞术联合检测骨髓细胞CD271、CD133、CD34的表达与分析

本研究检测骨髓细胞的CD271、CD133和CD34的表达,分析细胞表达CD271与CD133及CD133与CD34的相关性。根据不同设计组合用CIN5-PerCP、CD271-PITC、CD133-PE和CD34-FITC标记骨髓细胞,获得细胞后以FSC、SSC和CD45反复对细胞群进行定位和筛选,然后用流式细胞术检测骨髓细胞和骨髓单个核细胞（MNC）的上述表达。结果表明,骨髓细胞CD271^＋、CD133^＋和CD34^＋表达率分别为0．16％、0．20％和0．43％,骨髓单个核细胞分离后CD271^＋、CD133^＋和CD34^＋表达率分别0．49％、0．47％和1．07％;骨髓细胞的CD271^＋CD133^共表达率为0．02％,单个核细胞分离后的CD271^＋CD133^＋的共表达率为0．03％。90％CD133^＋细胞表达CD34,40％CD34^＋细胞表达CD133。结论：建立的三色荧光联合检测方法可作为检测骨髓中CD271^＋,CD133^＋和CD34^＋细胞的方法。CD271阳性细胞与CD133和／或CD34阳性细胞是不同的细胞群,CD271可能在评价和指导骨髓间充质干细胞的临床治疗中有重要意义。     

CD45设门在流式细胞术检测急性白血病中的应用

流式细胞术 (Ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ)为急性白血病免疫分型诊断提供了一项重要依据 ,但由于传统的前向角 /侧向角光散射设门法 (ｆｏｒｗａｒｄｓｃａｔｔｅｒ/ｓｉｄｅｓｃａｔｔｅｒ,又称ＦＳＣ/ＳＳＣ)不能将白血病细胞与正常细胞特别是正常淋巴细胞区别开来 ,因此一般要求样本中原始幼稚细胞占全部有核细胞 70 %以上 ,才可对检测结果做出准确判断。近年白细胞共同抗原ＣＤ4 5 的发现和应用为流式细胞术开辟了一种新的设门方法 ,恰好可以弥补这一弱点 ,本文对此进行了探讨和研究。1　对象和方法1 1　对象　急性白血病组 56例 ,全部…     

优化流式细胞术测定保存血小板CD62p表达

CD62p阳性率是保存血小板质量监测的重要指标之一。为在静脉全血内血小板CD62p测定方法的基础上优化建立流式细胞术(FCM)测定保存血小板表达CD62p的方法，在血小板检测标本内加入0．1mmol/L潘生丁稳定血小板；对TBS溶液进行了改良，添加了1．1mmol/L的EDTA和100μmol/L潘生丁，用以代替PBS；采用新鲜富含血小板血浆(FPRP)制备的阴、阳性对照；进行方法学评价。结果表明：加入0．1mmol/L潘生丁和1．1mmol/L的EDTA可以有效防止实验过程中的血小板人为激活；采用新鲜富含血小板血浆(FPRP)制备的阴、阳性对照既可优化FCM分析方法，还可用于检验所购荧光抗体的质量，保证实验结果的有效性。采用泛血小板特异性标志物CD61可灵敏特异地识别血小板，提高了实验抗干扰能力。制备保存血小板时采用的是专用大号采血针，抽血流畅，对血小板CD62p表达测定人为影响很小，明显优于用注射器采集患静脉全血的做法。CD62p测定灵敏度可达1％，制备的标本可稳定48小时。结论：利用该流式细胞术可以灵敏而特异地测定保存血小板的CD62P表达率；该方法简便易行，提高了结果的准确性，具有良好的稳定性和重复性。     

流式细胞术检测红细胞相关抗体方法

目的:建立以全血为标本的流式细胞仪(FCM)检测抗红细胞相关抗体方法,探讨实验过程中各因素对检测结果的影响。方法:多参数、半定量FCM分析。结果:在细胞数稳定在(1.6～2.0)×105/μl时,稀释度为2∶1的抗-DIgG抗体即可使红细胞表面抗原饱和。随着加入的人抗-DIgG浓度逐渐增加,红细胞阳性率无变化;EDTA二钾、肝素钠和柠檬酸钠这3种抗凝剂之间各项指标差异无统计学意义;不同反应温度对阳性模型与二抗的反应无影响;抗体与样本反应时间在组内各时间段之间的比较中,反应时间>5min时平均荧光强度(MFI)、阳性率均无统计学差异;标本放置在室温与4℃下储存时,各时间段阳性细胞比例无明显差异,而标本放置时间超过2h后,MFI降低,标本在室温和4℃下存储24h内各时间段各项指标相比均无明显差异;二抗稀释度在≥1∶1时MFI即可达平台期;红细胞表面IgG抗体的参考范围:阳性细胞比例<0.33%,MFI<27.7;FCM法的重复性高。结论:全血法FCMFSC-SSC可特异地设置细胞门,无需指定特殊抗凝剂,不同反应温度对阳性模型与二抗的反应没有影响。反应时间>5min即可,存储温度在25℃及4℃时标本均应在2h内进行检测。二抗稀释度在1∶1时即可饱和红细胞表面抗体。FCM法的重复性较高。     

2型糖尿病患者红细胞CD35、CD44s和CD58分子含量的变化及临床意义

目的研究2型糖尿病(T2DM)患者红细胞补体受体1型分子(CR1,即CD35)、CD44s和CD58含量变化及临床意义。方法应用完整细胞酶免疫定量分析法对75名健康对照人及66名T2DM患者进行比较。结果T2DM患者红细胞CD35、CD58含量明显低于正常对照人群,2组差异具有非常显著意义(P<0.0001);CD44s下降不明显(P>0.05);身高和体重影响CD35含量变化。结论红细胞CD35、CD44s和CD58含量减低可能导致T2DM患者红细胞免疫功能低下,它们可能共同参与T2DM的发生发展过程。     

肝硬化患者ECD35数量变化与肝功能损伤程度的关系研究

[目的]研究肝硬化患者红细胞ECD35（红细胞CD35）数量变化与肝脏功能损伤程度的关系。[方法]采用ECD35“一步定量法”对108例肝硬化患者进行研究。测定方法如下：将戊二醛固定的2％红细胞悬液定量“液相包被”到V型板中，加入10μl的b-CRlAb＋SA／AP酶标复合体，温浴、洗板、加底物显色，移显色液于比色孔，在405nm比色，计算ECD35相对数量。同时采用AU5400全自动系列化仪检测ALT、CHE、ALB、GLO、TBIL、GAM。[结果]肝硬化患者ECD35的数量明显低于正常人群。以ECD35的数量200为界将研究对象分成两组，比较发现：ECD35的数量较少的肝硬化患者其血清CHE活性和ALB含量相应较低，血清GLO、TBIL、GAM则随着ECD35数量的减少而增加。ALT与ECD35数量的变化没有明显的相关性。[结论]肝硬化患者ECD35的数量变化与肝脏功能损伤的严重程度密切相关，该方法可作为临床评估肝硬化肝脏功能损伤的重要指标之一。     

细胞粘附分子在糖尿病病人外周血单个核细胞上的表达及临床意义

目的　通过检测1型和2型糖尿病病人外周血单个核细胞上细胞粘附分子的表达,探讨细胞粘附分子在两型糖尿病中表达的不同及其临床意义。方法　使用流式细胞术(FCM)检测1型糖尿病(T1DM)病人2 0例和2型糖尿病(T2DM)病人4 5例,正常健康体检者(CONTROL) 2 0例外周血单个核细胞上CD5 4和CD6 2L的阳性表达率,进行两两比较。结果　T1DM组CD5 4和CD6 2L的阳性率(% )分别为6 9.32±11.0 3;和6 6 .2 1±7.79;T2DM组为6 5 .4 3±10 .5 4和6 8.4 3±6 .0 3;CONTROL组分别为6 0 .98±9.13和4 5 .4 9±5 .4 1。T1DM和T2DM糖尿病病人组和正常对照组比较有显著差异(t=7.4 4～9.77～7.0 7～14 .5 9,P <0 .0 1) ;但两型DM组比较,两种粘附分子差异不显著(t=1.35～1.2 5 ,P >0 .0 5 ) ;在T2DM组中单纯糖尿病组和合并大血管病变组CD5 4和CD6 2L ,差异显著(t=2 .0 1～3.4 1,P <0 .0 5～0 .0 1)。结论　细胞粘附分子CD5 4、CD6 2L在T1DM和T2DM病人外周血单个核细胞上的表达显著升高,推测两者可能与糖尿病的发生和发展有关;T2DM组中单纯糖尿病病人和合并大血管病变者有显著差异,说明CD5 4和CD6 2L参与了大血管病变的发生     

类风湿关节炎患者红细胞CD35的表达及其意义

目的　研究红细胞Ⅰ型补体受体 (CD3 5)在类风湿关节炎 (rheumaoidarthritis,RA)患者血液中的表达水平及其影响因素 ,探讨红细胞CD3 5在RA发病过程中的意义。方法　采用流式细胞术 (FCM)测定 37例RA患者 (其中早期 12例、中晚期 2 5例 )和 12名健康对照者血液中红细胞CD3 5的表达水平 ,并同期测定RA患者的相关实验室指标 (IgG、IgA、IgM、C3、C4、RF、α 1 AGP、CRP、ESR、RBC等 ) ,分析各指标之间的关系。结果　37例RA患者红细胞CD3 5的表达水平为 (16 .6 7± 13.2 1) % ,健康对照组为 (2 9.94± 2 3.5 3) % ,两组比较差异有显著性意义 (P =0 .0 17)。早期与中晚期RA患者红细胞CD3 5表达水平分别为 (14 .38± 9.96 ) %、(17.76± 14 .5 7) % ,两组的差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。相关分析显示 ,红细胞CD3 5的表达水平与RA患者的RBC计数、RF呈正相关 (r值分别为 0 .30 1、0 .5 5 5 ,P值分别为 0 .0 4 2、0 .0 0 1) ,而与年龄、病程、IgG、IgA、IgM、C3、C4、RF、α 1 AGP、CRP、ESR的相关性无显著意义 (P >0 .0 5 )。结论　类风湿关节炎患者内源性补体活性调节蛋白水平降低是其发病的重要环节之一 ,可作为反映RA病情的一个相对独立的观察指标 ,其机理还有待进一步研究     

胃肠道间质瘤石蜡组织DNA倍体及CD117流式细胞术分析

目的 研究流式细胞术(FCM)检测DNA倍体和CD117对胃肠道间质瘤(GIST)的诊断价值.方法 对52例GIST和10例食管平滑肌瘤组织的石蜡包埋块切片经过脱蜡水化,酶消化处理,制成单细胞悬液.同时,制备8例健康体检者外周血单细胞悬液,用FCM分别检测DNA倍体和CD117表达.结果 GIST瘤组织细胞出现异倍体阳性率23.1%(12/52),其中极低度/低度危险组未出现异倍体,中度/高度危险组出现12例,两组异倍体表达阳性率差异有统计学意义(P＜0.05).52例GIST瘤组织CD117均高表达,食管平滑肌瘤CD117弱表达,两组间CD117表达荧光强度差异有统计学意义(P<0.05).GIST极低度/低度危险组CD117荧光强度与中度/高度危险组相比,CD117表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 DNA异倍体可提示GIST的中高危险度,FCM检测组织单细胞CD117表达可用于GIST的快速筛查.     

肝硬化患者红细胞CD59数量与胆碱酯酶活性变化的关系研究

[目的]研究肝硬化患者红细胞CD59数量表达的变化与胆碱酯酶活性的关系。[方法]采用细胞酶联法对132例肝硬化患者的红细胞CD59进行测定，同时采用AU5400全自动生化仪检测其胆碱酯酶（CHE）、胆红素，采用ACI200的检测凝血酶原活性（PTA）。[结果]肝硬化患者红细胞CD59数量表达显著低于正常对照，与CHE比较有显著性差异（P〈0.01），并且与病情程度积分比较差异高度显著（P〈0.01）。[结论]红细胞CD59数量变化与肝硬化患者的病情严重程度关系密切。